Abstract

Introdução

Human antígeno R (HUR) regula a estabilidade do ARNm e está associado com a proliferação celular, angiogénese, linfangiogénese e. No entanto, o significado clínico e papel patológico de Hur no cancro da bexiga permanece obscuro. O principal objectivo desta investigação foi a clarificar as relações entre a expressão Hur e significado clínico e proliferação de células cancerígenas, angiogénese, lymphangiogenesis e expressões da ciclooxigenase (COX-2) e fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) -A, -C, e -D.

Métodos

Todas as expressões foram examinadas por técnicas de imuno-histoquímica em 122 espécimes fixados em formol de pacientes com câncer de bexiga. expressão Hur foi avaliada separadamente com coloração citoplasmática e nuclear. A proliferação celular, angiogénese e linf angiogénese foi medida como a percentagem de células Ki-67-positivas (índice de proliferação, PI), os vasos corados com CD34 (densidade de microvasos, MVD), e os vasos D2-40-corados (densidade de vasos linfáticos, LVD) . As relações entre cada expressão Hur e características clínico-patológicas, prognóstico e expressões da COX-2 e VEGF foram analisadas por análise multivariada. expressão Hur também foi investigada em 10 ratos de N-butil-N- [4-hydroxybutil] nitrosamina (BBN) induzida modelo de cancro da bexiga.

Resultados

Em tecidos humanos, a alta expressão citoplasmática foi visto em 5% e 25,4% de células normais e cancerosas, respectivamente. Hur Nuclear expressão não tinha qualquer relação significativa para todas as características patológicas. No entanto, a expressão Hur citoplasmática apareceu positivamente associado com a fase pT e grau (

P Art 0,001). Em tecidos de camundongos, tendências semelhantes foram confirmados. expressão citoplasmática correlacionada com PI, MVD, e DVE, bem como a expressão do VEGF-A e -C, mas não o VEGF-D. expressão citoplasmática alta de Hur foi um preditor significativo de metástases e sobrevida específica causar, e foi identificada como um fator prognóstico correlativa para a metástase (hazard ratio, 4,75; P = 0,028). em um modelo de análise multivariada, que incluiu características patológicas

Conclusões

citoplasmática Hur parece desempenhar um papel importante na proliferação celular, progressão e sobrevivência de pacientes com câncer de bexiga. A sua expressão foi associada com a angiogénese, linfangiogénese e expressões de VEGF-A e -C

citação:. Miyata Y, Watanabe S-I, Y Sagara, Mitsunari K, Matsuo T, Ohba K, et al. (2013) Alta Expressão de Hur no citoplasma, mas não Núcleos, está associado a agressividade maligno e prognóstico no câncer de bexiga. PLoS ONE 8 (3): e59095. doi: 10.1371 /journal.pone.0059095

editor: Kaustubh Datta, University of Nebraska Medical Center, Estados Unidos da América

Recebido: 11 de julho de 2012; Aceito: 11 de fevereiro de 2013; Publicação: 13 de março de 2013

Direitos de autor: © 2013 Miyata et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Esta pesquisa foi apoiado em parte por uma Grant-in-Aid da Sociedade Japonesa para a Promoção da Ciência (No. 22.591.771). No entanto, os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito. Nenhum financiamento externo adicional foi recebida para este estudo

Conflito de interesses:. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

Regulamento do decaimento do ARNm é um mecanismo essencial. para controlar a expressão do gene. O controlo da estabilidade do ARNm depende de sequências na própria transcrição e de proteínas de ligação a ARN que se ligam de forma dinâmica a estas sequências. Humana antigénio R (Hur) é um membro da, visão anormal embrionário-letal (elav) -like família de proteínas de proteínas de ligação a ARN, e é relatada como sendo uma proteína multifuncional que tem sido implicado na regulação de vários aspectos de ARN metabolismo. Isto é, Hur está envolvido na regulação pós-transcricional do volume e a estabilidade do ARN [1].

Hur também é relatado para regular a proliferação celular e a inflamação associada ao tumor [2], [3]. Além disso, Hur foi encontrado para ser envolvido na regulação da angiogénese através da interacção com os transcritos de numerosos factores que promovem a angiogénese, e também é conhecido para correlacionar com a linfangiogénese em uma variedade de estados patológicos, incluindo o cancro [3], [4 ]. Com base nestes factos, tem sido sugerido que Hur desempenha um papel importante na carcinogénese, crescimento tumoral, metástases, e com o prognóstico em doenças malignas. Na verdade, vários relatos têm descrito expressão Hur mostrando associações positivas com agressividade maligna e servindo como um fator prognóstico para o mau resultado clínico em vários tipos de câncer [5] – [7]. Por outro lado, marcadamente diferentes achados foram relatados em pacientes com câncer de mama [8]. Os papéis patológicos e valor prognóstico da expressão Hur em pacientes com câncer, assim, permanecer controversa, e o significado clínico e valor preditivo para o prognóstico em pacientes com câncer de bexiga ainda não foi esclarecida.

Como mecanismos para essas atividades patológicas, vascular fatores de crescimento endotelial (VEGFs) e ciclooxigenase (COX-2) são os mais conhecidos fatores Hur-associados [5], [7], [9] – [11]. Estas proteínas também têm sido relatados para ser associado com a agressividade maligna e o prognóstico em pacientes com cancro da bexiga [12], [13]. No entanto, pouca informação tem sido acumulada relativamente à relação entre a expressão Hur, VEGF-A, -C, e -D, e a COX-2 em tecidos de cancro da bexiga humanos.

A localização intracelular de Hur tem sido relatada a ser predominantemente nucleares em muitos tipos de células cancerosas [14], [15]. No entanto, lançadeiras Hur a partir do núcleo para o citoplasma em resposta a vários estímulos, prolongando semi-vida de ARNm e facilitar a tradução eficiente das proteínas [15]. Perante estes factos, a investigação quanto aos papéis clínicos, patológicos e prognóstico da expressão nuclear e citoplasmática de Hur se justifica.

O principal objetivo deste estudo foi esclarecer o significado patológico e valor prognóstico da nuclear e citoplasmática expressão Hur em pacientes com câncer de bexiga. Para confirmar o significado patológico de Hur sob um dado microambiente do tecido, foi utilizado modelo de rato cancro da bexiga induzido quimicamente para experimentos adicionais. Além disso, as relações entre estes Hur expressões, angiogênese e linfangiogênese, e VEGF-A, -C, -D e COX-2 expressões foram também examinados em pacientes com câncer de bexiga.

Materiais e Métodos

Ética Aprovação

o estudo foi realizado de acordo com a declaração de Helsínquia II e foi aprovado pelo Comitê de Ética Comitê de revisão do Hospital Universitário de Nagasaki, Nagasaki, Japão.

o consentimento informado foi obtidos a partir dos pacientes envolvidos no estudo antes da sua inscrição. Animais do estudo foram tratados de acordo com as Diretrizes para a Experimentação Animal da Universidade de Nagasaki, e o Regulamento do Animal Care e do Comitê Use aprovou o protocolo do estudo.

Os pacientes

Todas as lâminas de cancro da bexiga 122 amostras obtidas de ressecção transuretral (RTU) em nosso hospital entre 1993 e 2004 foram revistos. Todos os pacientes tinham sido clinicamente diagnosticada com não-muscular câncer de bexiga invasivo (NMIBC) sem metástase. Foram excluídos os pacientes que receberam a terapia neoadjuvante. Além disso, as amostras que o número de células de câncer estava sob 500 também foram excluídos deste estudo. Por outro lado, entre os 122 pacientes, a terapia adjuvante incluindo quimioterapia sistemática, quimioterapia intravesical, e intravesical Bacillus-Calmette-Guérin foram realizadas em 14 (11,5%), 67 (54,9%), e 19 pacientes (15,6%), respectivamente . Todos os pacientes foram avaliados por radiografia de tórax, ultra-sonografia e tomografia computadorizada (TC) da bexiga urinária e no abdômen, e cistoscopia. Além disso, CT do pulmão ou do cérebro, ressonância magnética (MRI), pyelography gotejamento-infusão e cintilografia óssea foram realizadas conforme necessário. Os tumores foram encenadas de acordo com a American Joint Committee on Cancer e classificados de acordo com a Organização Mundial da Saúde e da Sociedade Internacional para sistema de classificação Urological Patologia. No presente estudo, os tumores foram agrupadas para análise estatística nos seguintes grupos: baixa (PTA + 1) e de alta fase (≥T2); ou baixo teor (graus 1 e 2) e alto grau (grau 3). Examinámos também 20 amostras de tecido de bexiga normal, obtidos a partir de áreas de aparência normal da bexiga de pacientes com carcinoma de células de transição do tracto urinário superior. Todos os pacientes de controle mostrou G1 e doença invasiva não-muscular, e eles mostraram recorrência dentro de um período de acompanhamento de 10-17 anos. A duração média do acompanhamento foi de 51 meses (variação, 2-182 meses).

animal

expressão Hur foi examinada em 10 amostras de células uroteliais normais (sem BBN), 5 de NMIBC (solução BBN por 14 semanas), e 5 de câncer músculo invasivo da bexiga (CINM) (durante 24 semanas) do modelo do rato do cancro de bexiga química induzida. Este modelo foi usado em um relatório anterior [16].

Imunohistoquímica

exames de imuno-histoquímica foram realizadas utilizando secções fixadas em formalina, embebidos em parafina. Utilizou-se anticorpo anti-Hur (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) como o anticorpo primário (soro policlonal de coelho, reactivo para ambos Hur humana e de ratinho). Cinco secções-micrômetros de espessura foram desparafinados em xileno e re-hidratadas em soluções graduadas de etanol. A recuperação de antígenos foi realizada a 100 ° C durante 15 min. em tampão de citrato de sódio 0,01 M (pH 6,0). Todas as secções foram depois imersas em peróxido de hidrogénio a 3% durante 30 minutos para bloquear a actividade da peroxidase endógena. As secções foram incubadas durante a noite com o anticorpo primário a 4 ° C, depois lavou-se em 0,05% de Tween 20 em solução salina tamponada com fosfato (PBS). Em seguida, as secções foram incubadas com peroxidase usando o método de polímero marcado com Dako EnVision + ™ Peroxidase, (Dako, Carpinteria, CA) durante 60 min. A reacção de peroxidase foi visualizada com o líquido de 3,3′-diaminobenzidina tetrahidrocloreto (DAB) estojo de substrato (Invitrogen Corporation, Carlsbad, CA). As secções foram contra utilizando hematoxilina. Outros métodos foram realizados como descrito anteriormente [13], [17], [18]. Resumidamente, também avaliamos VEGF-A, -C e -D e COX-2 expressões em amostras semelhantes, utilizando técnicas de imuno-histoquímica. Além disso, a densidade microvascular (MVD) e densidade de vasos linfáticos (LVD) foram estimados utilizando lumina CD34-positiva e lumina D2-40-positiva, respectivamente. Os detalhes dos métodos para a determinação MVD e LVD foram tal como descrito previamente [13]. Realizamos toda a avaliação de novo para este estudo. Uma variedade de amostras de cancro que tinham sido confirmada em estudos preliminares como imuno-reactivos para os antigénios estudados foram utilizados como controlos positivos para Hur (fígado), VEGF (carcinoma de célula renal), a COX-2 (cólon), D2-40 (amígdalas), e CD34 (rim). As especificidades desses espécimes como controlos positivos foram confirmados em nossos relatórios anteriores [13], [17], [18]. Uma secção consecutiva a partir de cada uma das amostras processadas sem o anticorpo primário foi usado como controlo negativo. Os controlos positivos e negativos foram criadas para cada lote de experimentos. Além disso, para confirmar a especificidade de Hur imunorreactividade, foi realizada investigação semelhante usando anticorpo policlonal de cabra (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) em amostras de origem humana (n = 40) e tecidos de ratinho (n = 20), e eles também foram incubadas com bloqueio de peptídeo para este anticorpo anti-Hur (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA).

Avaliação

expressão Hur foi avaliada pela pontuação imunorreativo conforme relatado anteriormente [19]. Resumidamente, padrões de coloração citoplasmática e nuclear foram registados com as seguintes escalas: 0, sem coloração; 1, fraca coloração e /ou focal ( 10% das células); 2, moderada ou forte coloração (10-50% de células); e 3, a coloração moderada ou forte ( 50% das células). Pontuações 0 e 1 foram julgados como baixa expressão, e marcou 2 e 3 foram julgados como alta expressão. Este método de avaliação foi utilizada para tecidos de camundongos. No que respeita a outras expressões, os resultados foram considerados positivos se a intensidade da coloração era forte, e a percentagem de células coradas positivamente cancerosas foi determinada usando uma escala contínua de acordo com relatórios anteriores [13], [17]. Resumidamente, os níveis de expressão foram avaliadas semi-quantitativamente a partir da percentagem de células de carcinoma que expressam (a partir de células de carcinoma ≥500). Estas células foram examinadas utilizando um microscópio de E-400 (Nikon, Tokyo, Japão) e as imagens foram capturadas digitais (DU100; Nikon). Além disso, utilizou-se uma imagem de sistema de análise assistida por computador (Win TELHADO versão 5.0; Mitani, Fukui, Japão) para calcular variáveis ​​estatísticas. Dois investigadores (S.W. e Y.M.), que desconheciam as características clínicas e dados de sobrevivência, realizadas de forma independente análises semi-quantitativas e interpretações imunocoloração. A taxa de discordância na análise entre os dois investigadores foi . 10% e a densidade média foi utilizada para análises estatísticas

Análise Estatística

Os dados são expressos como médias (desvio-padrão [SD] ). O teste t de Student foi utilizado para análise das variáveis ​​contínuas. O teste do qui-quadrado e exato de Fisher foram utilizados para comparações de dados categóricos. coeficiente de correlação de Spearman foi utilizado para determinar as associações entre duas variáveis ​​contínuas. Bruto e efeitos ajustados foram estimados por análise de regressão logística e descrito como odds ratio (OR) com intervalo de confiança de 95% (95% IC), em conjunto com

P

-Valores. A análise de sobrevida foi avaliada utilizando análise de Kaplan-Meier eo teste de log-rank, e as variáveis ​​que alcançaram significância estatística (

P Art 0,050) em análises univariadas foram inseridos posteriormente, em uma análise multivariada de Cox análise de riscos proporcionais ( descrito como hazard ratio [HR] com 95% CI, em conjunto com o

P

-Valores) (Modelo a). Além disso, para examinar o valor preditivo de expressão Hur em maior detalhe, a análise incluiu um modelo multivariado, incluindo todos os fatores de risco (Modelo B). Todos os testes estatísticos foram em frente e verso e significado foi definido como

P Art 0,050. Todas as análises estatísticas foram realizadas em um computador pessoal com StatView para o software Windows versão 5.0 (Abacus Concepts, Berkeley, CA).

Resultados

Localização e Expressão de Hur

urothelial células normais, fracos a expressão moderada Hur nuclear foi detectada, juntamente com ausência de expressão citoplasmática fraca (Fig. 1A). Por fim, 90% (18/20) foi julgado como apresentando elevada expressão nuclear em células uroteliais normais. Em contraste, elevada expressão citoplasmática foi observada em apenas 5% (1/20) dos tecidos normais. No que diz respeito à expressão Hur nuclear em células cancerosas, a expressão era alta em 88 amostras (72,1%; grau 2, n = 64; marcar 3, n = 24) e pobre em 34 (27,9%; marcar 0, n = 1; pontuação 1, n = 33). Por outro lado, no que diz respeito à expressão citoplasmática em células cancerosas, a expressão era alta em 31 amostras (25,4%; grau 2, n = 24; marcar 3, n = 7) e pobre em 91 (74,6%; marcar 0, N = 37; escore 1, n = 54). Exemplos representativos de alta e baixa expressão em tecido de cancro Hur são mostrados na Figura 1B e C, respectivamente.

Hur foi detectada principalmente em núcleos de ambas as células normais e cancerosas nos tecidos da bexiga. expressão citoplasmática moderada ou forte era evidente em células de cancro (C), mas era rara em células uroteliais normal (A). Algumas células cancerosas são também apresentaram expressão citoplasmática fraca apesar da expressão nuclear foi detectada (B). Além disso, mostramos figuras representativas de expressão Hur (C) e fatores relacionados aos mesmos; (D) ciclo-oxigenase-2, (E) de crescimento endotelial vascular factor A, (F) de crescimento endotelial vascular factor de C em mesma área. (Todo ampliação, x400).

Em experiências com animais, expressão nuclear elevada foi encontrada em 80% (8/10) e 70% (7/10) das células uroteliais e cancerosas normais, respectivamente. Por outro lado, a alta expressão citoplasmática em células normais foi detectada em 10% (1/10). Em células cancerosas, expressão elevada em NMIBC e MIBC foi detectada em 40% (05/02) e 80% (05/04), respectivamente. Exemplos representativos de expressão em tecidos Hur ratos foram mostrou na Figura 2A e B. Mais importante, foram obtidos resultados semelhantes utilizando um outro anticorpo anti-Hur e sua coloração foi reduzida por competição com o bloqueio péptido.

(ampliação, x 400) . A coloração padrão era perto de tecidos humanos.

significado clínico e patológico de Hur Expressão

As relações entre as características patológicas e expressão Hur no núcleo e citoplasma são apresentados na Tabela 1. Hur Nuclear expressão não mostrou relação significativa para estágio ou grau pT (

P

= 0,471 e

P

= 0,773, respectivamente). Por outro lado, a expressão Hur citoplasmática foi positivamente associado com a fase pT (

P Art 0,001) e grau (

P Art 0,001).

Como mostrado na A tabela 2, a expressão Hur citoplasmática foi positivamente associada com expressões de COX-2 (

P

= 0,011), VEGF-A (

P

= 0,021) e VEGF-C (

P

= 0,004), mas não com a expressão de VEGF-D (

P

= 0,134). Além disso, a expressão Hur citoplasmática também apresentou correlações positivas com MVD (

P

= 0,010) e LVD (

P

= 0,023). Por outro lado, a expressão nuclear de Hur mostrou nenhuma correlação significativa com qualquer uma destas expressões ou variáveis ​​(Tabela 2). Assim, exemplos representativos para essas moléculas importantes são apresentados no alto amostra expressão Hur (Figura 1D-F).

Relações entre moléculas relacionadas-Hur e angiogênese ou Linfangiogênese

Em nosso população do estudo, MVD foi intimamente associada com VEGF-A (r = 0,40,

P Art 0,001), VEGF-C (r = 0,41,

P Art 0,001), e COX -2 expressão (r = 0,31,

P

0,001), mas não com o VEGF-D (r = 0,17, P = 0,652). Da mesma forma, LVD também foi associada com VEGF-A (R = 0,39,

P

0,001), o VEGF-C (r = 0,58,

P

0,001), e VEGF D (r = 0,53, P 0,001), mas não com a expressão de COX-2 (R = 0,15,

P

= 0,103). O esquema de tais correlações foi showen na Figura 3.

MVD, densidade de microvasos; LVD, a densidade lymphvessel; VEGF, factor de crescimento endotelial vascular; COX, ciclooxigenase.

Para esclarecer o significado das expressões de VEGF-A, VEGF-C, e COX-2 para MVD e LVD em maior detalhe, a análise multivariada foi realizada com modelos, incluindo esses fatores, fase pT, e grau. No que diz respeito a MVD, embora VEGF-C e COX-2 foram associados com MVD (OR = 1,05, IC 95% = 1,02-1,08,

P = 0,002

e OR = 1,05, IC 95% = 1.00- 1,11,

P

= 0,043, respectivamente), VEGF-a expressão mostrou a mais forte associação (OR = 1,05, 95% CI = 1,03-1,11,

P Art 0,001). análise semelhante mostrou que VEGF-C foi mais associado com LVD (OR = 1,05, 95% CI = 1,01-1,08,

P

= 0,001), enquanto o VEGF-A expressão também foi associado (OR = 1,05, IC95% = 1,01-1,08,

P

= 0,011).

as análises de sobrevivência

expressão Hur Nuclear não foi identificada como um preditor significativo de reincidência no trato urinário, metástase, ou a sobrevivência específica causar (log-rank

P

= 0,156,

P

= 0,058, e

P

= 0,940, respectivamente). Por outro lado, a alta expressão citoplasmática Hur foi um predictor significativo para cada um destes parâmetros (Fig. 4 A-C). Para mostrar valores mais detalhada dos factores preditivos, análises semelhantes também foram realizadas para características patológicas e terapia adjuvante. Além disso, mostramos modelos de análise multivariada incluindo todos estes fatores (modelo A) e expressão Hur citoplasmática e características patológicas (Modelo B) são apresentados na Tabela 3. Em ambos os modelos, expressão Hur foi identificado como um fator prognóstico para a metástase, mas não para a recorrência no trato urinário (HR = 2,00, 95% CI = 0,98-4,11,

P

= 0,057 no modelo a e HR = 1,82, 95% CI = 0,90-3,72,

P

= 0,094 no Modelo B) e por causa específica sobrevida (HR = 5,42, 95% CI = 0,29-6,71,

P

= 0,688 no modelo a e HR = 1,26, 95% CI = 0,42-3,75,

P

= 0,683 no Modelo B).

Discussão

O presente estudo demonstrou que a expressão Hur citoplasmática estava intimamente associado com potencial de malignidade, a progressão do tumor

, e os resultados para pacientes com câncer de bexiga. Por outro lado, nenhuma foi encontrada significância para a expressão nuclear de Hur. Estudos anteriores detectada acumulação citoplásmica em vários cancros, mostrando que a translocação de nucleocitoplasmático Hur era essencial para a estabilidade do RNA [20], [21]. Os resultados suportam um papel semelhante em tecidos de câncer de bexiga humanos.

Este é o primeiro relatório sobre as relações entre a expressão Hur e características patológicas, recorrência e sobrevida em pacientes com carcinoma urotelial do cancro da bexiga urinária. No que diz respeito ao significado patológico e papéis prognósticos de Hur, vários estudos anteriores relataram que a sobre-expressão está associada à malignidade de alto grau, estágio avançado, e baixa sobrevida em pacientes com câncer de cólon [6], o cancro [5] mama, e carcinoma de células renais [7]. No entanto, a expressão Hur não parece estar associado com o estado patológico em pacientes com câncer de mama, com alta expressão de Hur prevendo um melhor prognóstico [8]. Os resultados suportam situação anterior em pacientes com câncer de bexiga. Como um mecanismo subjacente a estas actividades patológicas de Hur, regulação da angiogénese tem sido sugerido em vários cancros [3], [4]. Foi dada especial atenção às relações entre expressão Hur, potencial de malignidade e características patológicas porque a estimulação da angiogénese tem sido associada ao crescimento e progressão tumoral em doentes com várias doenças malignas, incluindo cancro da bexiga [13], [22]. Finalmente, nossos resultados mostraram a possibilidade de que a expressão citoplasmática de Hur foi positivamente associado com comportamento maligno e os resultados em pacientes com câncer de bexiga. Além disso, existe a possibilidade de que essa agressividade maligna está associada com a angiogênese relacionada-Hur.

Uma das conclusões mais interessantes deste estudo foi que a expressão Hur citoplasmática correlacionada positivamente com lymphangiogenesis em tecidos de cancro da bexiga. Para o melhor de nosso conhecimento, este estudo é o primeiro a relatar uma relação entre a expressão Hur e linfangiogênese em pacientes com câncer de bexiga, embora achados similares foram detectados em câncer de pulmão em relatórios anteriores [4]. Além disso, curiosamente, tanto que o relatório eo presente estudo mostraram que a expressão Hur citoplasmática correlacionada com a presença de angiogênese e linfangiogênese. Tendo em conta estes resultados, a hipótese de que co-factores que podem influenciar tanto a angiogênese e linfangiogênese pode associar-se com tal achado em tecidos de câncer.

mecanismos regulatórios detalhados de angiogênese e linfangiogênese por Hur em tecidos de câncer humanos ainda não são totalmente compreendidos . Várias moléculas foram relatados para ser Hur-relacionados, tais como VEGF-A [10], o VEGF-C, e a COX-2 [7], [9]. Esses fatores são conhecidos por estarem associados com MVD e LVD no cancro da bexiga. No entanto, as relações entre a expressão Hur e estas moléculas angiogenesis- e relacionadas com a linfangiogênese em tecidos de câncer de bexiga humanos ainda não são claras. Nossos resultados mostraram que a expressão Hur citoplasmática correlacionou positivamente com expressões de VEGF-A e -C, mas não VEGF-D. Temos relatado anteriormente que o VEGF-A e -C foram significativamente associados com MVD e LVD em tecidos de câncer de bexiga humanos [13]. Além disso, tais relações significativas não foram detectados para a expressão nuclear Hur. Tendo em conta estes resultados, nós especulamos que a translocação do núcleo para o citoplasma é um processo importante para estimular angiogênese e linfangiogênese. Além disso, aumento da regulação do VEGF-A e expressões -C pode ser associado com tal fenômeno no cancro da bexiga.

Um resultado importante adicional no presente estudo foi o fato de que a expressão Hur citoplasmática foi um preditor útil de prognóstico em doentes com cancro da bexiga que se submeteram TUR. Em particular, a expressão foi intimamente associado com a metástase de pós-operatório. Muitos investigadores identificaram aumento MVD e LVD como fortes preditores de resultados em doentes com cancro da bexiga [13], [23], [24]. Com base nestes resultados, nós pensamos que tais papéis prognósticos de MVD e LVD eram razoáveis. Por outro lado, a expressão citoplasmática de Hur foi identificada como um preditor significativo de sobrevida causa específica na análise univariada, mas não como um preditor independente na análise multivariada. Não temos certeza por que tais diferenças foram encontradas neste estudo. No entanto, a sobrevivência pós-operatória foi influenciada por inúmeros fatores. Nós, portanto, especulou que citoplasmática Hur pode desempenhar vários papéis na sobrevida do paciente, enquanto vários outros fatores e moléculas podem ter efeitos mais fortes na determinação dos resultados para os pacientes com câncer de bexiga.

Neste estudo, nós mostramos que as expressões Hur citoplasmáticos em células cancerosas da bexiga foram mais elevados do que aqueles em células epiteliais normais. As funções biológicas de Hur em humano e de ratinho foram relatados para ser semelhante no relatório anterior [25]. No entanto, a validação de especificidade do alvo Hur não é ainda completamente clara. Além disso, a função patológica recentemente e detalhada de Hur em células cancerosas estão a tornar-se mais claramente no últimos anos [26]. Assim, estudos adicionais com respeito mecanismo e biologia celular molecular experimentos são necessários para entender os papéis patológicos mais detalhados de Hur em câncer de bexiga.

Em conclusão, nossos resultados mostraram que a expressão Hur citoplasmática foi significativamente associada com a agressividade maligno e cancro da bexiga os resultados dos pacientes, enquanto que a expressão HUR nuclear não era. Além disso, a expressão citoplasmática Hur está associado com a angiogénese, linfangiogénese e moléculas relacionadas com estes, incluindo VEGF-A, VEGF-C, e a COX-2. Nossos resultados sugerem que a expressão Hur citoplasmática foi útil como um marcador preditivo de metástases após TUR em pacientes com câncer de bexiga. Para obter uma visão mais mecanicista, ainda mais

in vivo

e

in vitro

estudos em câncer de bexiga são necessárias.

Reconhecimentos

Estamos gratos ao Sr. Takumi Shimogama e Sra Miho M. Kuninaka pelo apoio excepcional.