Sumário

Um dos recentes avanços na pesquisa sobre o câncer é a identificação de mutações ativadoras em vários receptor tirosina quinase (RTK) vias em muitos tipos de câncer, incluindo câncer colorretal (CRC). Nossa hipótese é que, alternativa a mutações, a superexpressão de várias RTKs oncogênicos também pode apoiar CRC patogênese, e diferente RTK podem acoplar com vias de sinalização a jusante distintos em diferentes subtipos de CRC humano. Por imuno-histoquímica, mostramos aqui que os membros RTK ErbB2, ErbB3 e c-Met estavam em obras diferencialmente sobre-expressos em amostras colorectal paciente com câncer que levam à ativação constitutiva de vias de sinalização RTK. Usando ErbB2 inibidor específico lapatinib e c-Met inibidor específico de PHA-665752, que também demonstraram que esta activação constitutiva de sinalização RTK é necessária para a sobrevivência de células de cancro colorrectal. Além disso, mostramos que a sobre-expressão padrão RTK dita a utilização de AKT a jusante e /ou vias de MAPK. Nossos dados são adições importantes aos modelos de mutação oncogénica atuais e explicar melhor a variação clínica nas respostas terapêuticas do cancro colo-rectal. Nossas descobertas defender para a terapia mais personalizada sob medida para pacientes individuais com base no seu tipo de expressão RTK, além de seu estado de mutação

Citation:. Yao YL, Shao J, Zhang C, Wu JH, Zhang QH, Wang JJ , et ai. (2013) Proliferação de câncer colorretal é promovido por dois Sinalização Transdução de padrões de expressão: ErbB2 /ErbB3 /AKT e MET /ErbB3 /MAPK. PLoS ONE 8 (10): e78086. doi: 10.1371 /journal.pone.0078086

editor: Jin Q. Cheng, H.Lee Moffitt Cancer Center Research Institute, Estados Unidos da América

Recebido: 14 de junho de 2013; Aceito: 07 de setembro de 2013; Publicação: 30 de outubro de 2013

Direitos de autor: © 2013 Yao et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado pela Fundação para o Desenvolvimento social do Kunshan (no. KS1130) e da Fundação de Investigação Científica da Universidade de Jiangsu (no. 11JGD0090). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer colorretal é uma neoplasia epitelial ocorrendo no cólon ou reto. Mais de 1 milhão de pessoas são diagnosticadas com cancro colorectal anualmente no mundo, resultando em cerca de 0,5 milhões de mortes. Em 2008, foi a segunda causa mais comum de morte associada ao tumor em mulheres eo terceiro mais comum em homens. É mais comum em países desenvolvidos do que nos países em desenvolvimento [1] – [3]. A quimioterapia pode ser usado como terapêutica adjuvante em adição à cirurgia em quase todos os pacientes com cancro colo-rectal [4] – [6]. Com ou sem metástase linfonodal, a quimioterapia é considerado para aumentar a expectativa de vida e reduzir a possibilidade de recorrência. Quimioterapia drogas são concebidas para actuar através de uma variedade de mecanismos e podem incluir combinações de agentes, tais como fluorouracilo, capecitabina, UFT, leucovorina, irinotecan, ou oxaliplatina [7] – [9]. No entanto, por várias razões, a quimioterapia pode causar outros problemas para os pacientes, principalmente devido ao seu ataque não específico e os efeitos colaterais relacionados, tais como náuseas, vómitos, perda de cabelo, fadiga, anemia e infecção entre outros. Portanto, a terapia do cancro orientada emergiu que foi desenvolvido com base no conhecimento da sinalização celular. terapia do cancro Targeted depende principalmente de drogas de pequenas moléculas e anticorpos monoclonais, que causam muito menos efeitos colaterais em comparação com a quimioterapia tradicional.

sinais exógenos, tais como o factor de crescimento epidérmico (EGF) e factor de crescimento de hepatócitos (HGF) foi previamente relatada para ser vital para manter o crescimento sustentado de células tumorais através da ligação aos seus receptores. Estes receptores pertencem à família de receptores tirosina-quinases (RTKs) e alvos ideais na terapia do cancro como demonstrado em vários estudos. Depois de perfil sistêmico de genomas do câncer usando a próxima geração seqüenciamento, sabemos agora que a aquisição de mutações ativadoras em RTKs ou moléculas de sinalização a jusante é um dos principais mecanismos oncogênicos. No entanto, apenas um pequeno subconjunto de pacientes possuem estas mutações, sugerindo que outros mecanismos alternativos estão em jogo. Um destes mecanismos alternativos podia ser a sobre-expressão de pró-proliferação e sobrevivência pró-RTK, e /ou diferencial utilização de vias de sinalização a jusante. Com uma análise mais aprofundada dos genomas do câncer, estamos agora a começar a entender as diferenças individuais que significam biologia doença única e exigência de manejo clínico.

A família do receptor do factor de crescimento epidérmico (EGFR) e c-Met são RTKs que têm sido frequentemente relatados na progressão do carcinoma colorretal e metástases. A activação destes RTKs podem estimular um número de vias específicas que afectam directamente a migração de células tumorais, sobrevivência e proliferação. A regulação aberrante das RTKs é frequentemente observado no CRC avançado. Em comparação com o EGFR, outros membros da família de EGFR, c-Met, ErbB2, ErbB3, e as suas vias de sinalização relacionados são relativamente desconhecida [10]. Portanto, no presente estudo, foi investigada a expressão diferencial das RTK c-met, ErbB2, ErbB3, e as moléculas de transmissão de sinalização primários em amostras de doentes com cancro colorectal, bem como em linhas celulares de cancro colo-rectais humanos representativos.

h2> Materiais e Métodos

os pacientes

Um total de 105 amostras de cancro colorectal foram investigados neste estudo e foram obtidas de pacientes no momento da ressecção cirúrgica e endoscopia. tecidos colorretais normais foram obtidos de 40 pacientes chineses com doenças não-tumorais, como colorectal tediosamente longa e malformação vascular. Todos os casos foram tratados no Hospital das primeiras pessoas de Kunshan, China entre janeiro de 2010 e agosto de 2011, e todas as amostras foram coletadas de acordo com os princípios expressos na Declaração de Helsinki. Consentimento informado por escrito documentado para a expressão do gene análises de todos os tecidos foram obtidos a partir de todos os doentes antes da cirurgia ou exame endoscópico. Este estudo e do processo de aprovação foram aprovados pelo comitê de ética local do Hospital das primeiras pessoas de Kunshan, China. O diagnóstico e estadiamento do câncer colorretal foi avaliada de acordo com o sistema de estadiamento AJCC (TNM).

Cultura de Células e Reagentes

LoVo, SW948 e linhas de células SW480 foram obtidas de ATCC. EGF foi de Sigma (Milão, Itália), HRG1-β1 e IGF-1, de R D Systems, (Minneapolis, MN). LY294002 foi da Calbiochem, U0126 da Promega, PHA-665752 a partir de Tocris Bioscience, e de Gefitinib de Sequoia Research Products. Todas as linhas celulares foram cultivadas em DMEM suplementado com 10% de FBS, penicilina (100 U /ml) e estreptomicina (100 ug /mL) a 37 ° C em 5% de CO

2.

Western Blotting

As proteínas foram extraídas a partir de tecidos humanos e linhas celulares, e quantificada utilizando um ensaio de proteína (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). As amostras de proteína (30 ug) foram fraccionadas por SDS-PAGE e transferidos para uma membrana de nitrocelulose. A imunotransferência foi realizada utilizando anticorpos contra ErbB2, ErbB3, P-C-MET, C-MET, p-MAPK, MAPK, p-AKT e AKT (Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA). Os resultados foram visualizadas utilizando um sistema de detecção quimioluminescente (Pierce sistema ECL substrato western blot detecção, Thermo Scientific, Rockford, IL) e exposição a filme de autorradiografia (película Kodak XAR).

imuno-histoquímica (IHQ)

Todos os tecidos foram removidos e fixados em paraformaldeído a 4% durante a noite a 4 ° C, e depois processada e seccionados a 5 um de espessura. lâminas seccionadas foram coradas imuno-histoquimicamente para ErbB2, ErbB3 e c-met (Santa Cruz Biotechnology, Inc.) seguido por incubação com um anticorpo secundário, a 37 ° C durante 30 min e a reacção com o reagente DAB durante 5-10 min. As lâminas foram montadas com goma de neutro para exame microscópico. As células com grânulos intracelulares castanhos (citoplasma ou núcleo) foram consideradas ser coradas positivamente.

Viabilidade Celular

As células em cultura foram colocadas em placas a uma densidade de 6 x 10

3 células /cavidade em uma placa de 96 poços e tratadas com vários agentes. A viabilidade celular foi avaliada por um ensaio de MTS. CellTiter 96® Aqueous One Solution Reagent (Promega, Madison, WI) foi adicionado a cada poço de acordo com as instruções do fabricante, e as placas voltaram para a incubadora. Após 4 horas, a viabilidade celular foi determinada medindo a absorvância a 490 nm utilizando um computador controlado leitor de placas.

Análise estatística

Os dados são expressos como média ± desvio padrão (DP). As comparações entre os dois grupos foram realizadas pelo teste t de Student ou o teste de Mann-Whitney, conforme apropriado. Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando o software estatístico SPSS (versão 13.0), e de duas caudas t-testes foram aplicados a todos os dados, a menos que especificado em contrário. Um valor de

P

inferior a 0,05 foi considerado estatisticamente significativo.

Resultados

expressão diferencial de ErbB3, ErbB2 e c-MET no câncer colorretal humano

a fim de investigar a expressão de um conjunto de genes do receptor de tirosina cinase (RTK) em cancro colo-rectal humano, foram recolhidos blocos embebidos em parafina, que continham amostras de 105 casos de cancro colo-rectal. Em primeiro lugar, a expressão do heterodímero ErbB2 importante oncogénico /ErbB3 foi determinada por IHQ. Como mostrado na Figura 1A, ErbB3 foi significativamente sobre-expressa em tecido de cancro colo-rectal humano, com expressão distribuídas principalmente na membrana de células cancerosas. O parceiro de ErbB3 no heterodímero, ErbB2, também foi localizado principalmente na membrana de células cancerosas e foi semelhante sobre-expresso em cancro colo-rectal humano (Figura 1B). Outra tirosina-quinase de receptor, o proto-oncogene C-MET, também foi detectado por IHC, na membrana de células de cancro, na maioria dos casos (Figura 1C). Finalmente, a análise quantitativa da expressão das três proteínas foi realizada utilizando o software de análise de imagem da imagem-Pro Plus. As áreas IHC-positivos de cinco campos aleatórios de cada seção IHC-coradas foram avaliadas como densidade óptica integrada (IOD). Todas as três proteínas foram significativamente sobre-expressos em tecidos colo-rectais humanos. (ErbB3: tecidos de câncer 3264 ± 1032 vs. tecidos colorretais normais 1038 ± 354,

P = 0,0074

, ErbB2: tecidos de câncer 2616 ± 2019 vs. tecidos colorretais normais 338 ± 154,

P

= 0,016, c-MET: tecidos de câncer 3812 ± 739 vs. tecidos colorretais normais 978 ± 313,

P

= 0,0057 pelo teste Mann-Whitney U)

(A, B, C. ) a expressão de ErbB3, ErbB2 e c-MET no cancro colorectal humano. Espécimes de 105 tecidos com cancro colorectal embebidos em parafina foram analisados ​​por IHC para ErbB3, ErbB2 e c-MET, e figuras representativas mostrar forte e coloração fraca /negativo para cada marcador com as respectivas amostras de controlo normais. Média densidade óptica integrada (IOD) foi obtida por análise de cinco campos para cada lâmina, avaliadas por Image-Pro Plus Software (Versão 5.0) para a IHQ coloração de ErbB3 a ErbB2 e c-met. Os dados são apresentados como média ± DP, e * P 0,05, ** P . 0,01 pelo teste de Mann-Whitney U

Os resultados de expressão de todas as três proteínas foram esperado, não só devido ao seu papel como proto-oncogenes, mas também porque estudos semelhantes anteriores indicaram resultados semelhantes. No entanto, após posterior investigação, verificou-se vários graus de variação na expressão de estas três proteínas no cancro colo-rectal humano, especialmente na expressão de ErbB2. Dos 105 casos analisados, 45 casos (42,85%) foram negativos para a coloração ErbB2, 8 casos mostraram forte coloração ErbB2, eo restante (52 casos) apresentaram coloração ErbB2 moderada ou fraca. Somente nove casos (8,5%) eram negativas para a coloração de c-met, enquanto 14 pacientes apresentaram uma coloração forte e 82 casos apresentaram coloração de c-met moderada ou fraca. Curiosamente, ErbB3 foi positivo em todos os tecidos de cancro colorrectal examinados (Figura 2A). Além disso, a expressão heterogénea destas três proteínas em quatro tecidos de cancro colorectal foi adicionalmente investigada por Western-blot (Figura 2B). A diferença na expressão entre tecidos de cancro e tecidos normais de todas as três proteínas confirmaram a fiabilidade de coloração IHC, e ainda mais indicaram que três tipos de padrões de expressão existia nos 105 casos. Todos os casos analisados ​​poderiam ser classificados como: ErbB3: câncer colorretal co-sobre-expressão de c-MET, ErbB3: ErbB2 co-sobre-expressão cancro colorectal, e ErbB3: ErbB2: c-MET co-sobre-expressão câncer colorretal (Figura 2C). Acreditamos que estes resultados são um bom exemplo de variação de tumor RTK padrão de expressão e, além disso, que os mecanismos moleculares subjacentes aos diferentes padrões são dignos de exploração.

(A) Rácio de forte /moderada /fraca /coloração negativa de ErbB3, ErbB2 e c-MET no cancro colorectal humano. (B) Detecção de ErbB3 a ErbB2 e c-Met em proteínas extraída a partir de amostras de tecido de 4 casos de cancro colo-rectal. (C) Venn diagrama mostrando co-expressão de ErbB3, ErbB2 e c-MET.

A proliferação de células de câncer colorretal é mediada por qualquer ErbB3 /ErbB2 ou ErbB3 /C-MET vias de sinalização

a fim de identificar linhas colorectal humanos adequados celulares de cancro que correspondem aos três padrões moleculares que descobertas nas amostras humanas, a expressão de ErbB2, ErbB3 e c-MET em 9 linhas celulares de cancro colorectal humanos foi analisada por western blot ( dados não mostrados). O resultado mostrou que SW480 é uma linha de células representativa de co-expressando ErbB2, ErbB3 e c-met. A linha celular LoVo única co-sobre-expressa ErbB2 e ErbB3, enquanto SW948 é uma linha de células que co-representativo sobre-expressa ErbB3 e c-met (Figura 3A). A viabilidade celular foi acessado por ensaio MTS, e os mecanismos relacionados serão discutidos. Alguns inibidores e agonistas destes três proteínas foram seleccionadas incluindo PHA-665752 (PHA) e lapatinib, que são inibidores de c-Met e o receptor do factor de crescimento epidérmico (EGFR), respectivamente. Uma vez que a sinalização de c-Met foi bloqueada por PHA, a viabilidade das células SW480 e SW948 do diminuiu significativamente (Figura 3 B e D); No entanto não houve mudança significativa na viabilidade celular ocorreu em células LoVo, talvez devido à sua baixa expressão de c-Met (Figura 3C). Por outro lado, lapatinib, um inibidor ErbB2, reduziu significativamente a viabilidade celular das células LoVo e SW480, apesar de terem quase nenhum efeito sobre as células SW948 que têm baixa expressão de ErbB2 (figura 3D). As diferenças entre as células LoVo e SW948 na sua resposta a PHA e lapatinib são possivelmente devido a diferenças no seu padrão de transdução de sinal (Figura 3 C e D). Além disso, a fim de investigar se os agonistas pode resgatar a viabilidade celular, HGF, um agonista de c-Met, e heregulina-β1 (HRG1-β1), que se liga a HER3 e induz a sua heterodimerização com os outros membros da família, foram usadas. Tanto o HGF e HRG1-β poderia parcialmente resgatar a viabilidade das células SW480 (Figura 3B); no entanto, a situação era diferente em células LoVo e SW948. estimulação de HGF causou um aumento insignificante da viabilidade das células em células LoVo LoVo em comparação com as células tratadas com PHA (Figura 3C). células SW948 respondeu mais sensibilidade para HGF, com um aumento significativo em comparação com a viabilidade celular SW480 células tratadas com PHA (Figura 3D). No entanto SW948 células responderam menos sensível às HRG1-β1 comparação com LoVo, talvez devido à sua baixa expressão de ErbB2, mas a viabilidade das células de SW948 ainda foi aumentada, possivelmente devido a outros receptores da família de EGFR, tais como EGFR e ErbB4 que pode tanto dimerizar com ErbB3. Portanto, diferentes respostas foram exploradas devido a diferentes padrões moleculares de expressão: ErbB3 /ErbB2 e ErbB3 /c-MET. A sinalização a jusante foi então investigada.

(A) Detecção de ErbB3, ErbB2 e c-MET nas linhas colorectal humanos de células de câncer LoVo, SW948 e SW480 por western-blot. (B, C, D) A viabilidade celular medida por ensaio de MTS nas linhas celulares de cancro colorrectal LoVo, SW948 e SW480 tratados como indicado na figura. Os dados são apresentados como média ± SD, e * P 0,05, ** P . 0,01 pelo teste t de Student não pareado

Diferentes padrões moleculares do câncer colorretal envolvem a ativação de MAPK a jusante ou AKT Signaling

a fim de investigar adicionalmente o mecanismo de sinalização a jusante de ambos os padrões moleculares em cancro colorrectal, os lisados ​​celulares foram utilizados para analisar a activação de AKT e MAPK de sinalização que são bem conhecidas vias de sinalização a jusante de ErbB2 /ErbB3 e ErbB3 complexos /c-met. Um sistema de siRNA inducible estava envolvido no estudo, ea expressão de ErbB3 pode ser silenciado por tratamento doxiciclina (doxa). Uma vez SW948 foi tratada com PHA ou doxy, a activação de ambos AKT e MAPK foram bloqueados. Ambas estas duas vias de sinalização pode ser reactivada por HGF, mas sem reactivação significativa foi encontrada quando ErbB3 foi silenciada mesmo com o tratamento de HGF, indicando que a activação de MAPK sinalização em SW948 dependia mais ErbB3 (Figura 4A). A activação de AKT e MAPK sinalização foi acedida de uma forma diferente nas células LoVo, devido à sua elevada expressão de ErbB2 /ErbB3. Ambos sinalização AKT e MAPK foram efetivamente bloqueado quando tratados com Doxy e lapatinib, indicando comprometimento de ambos ErbB3 e outras moléculas de EGFR que pode inativar AKT e MAPK sinalização. HRG1-β1 foi capaz de ativar fortemente tanto AKT e sinalização MAPK; No entanto o seu efeito sobre a activação AKT foi mais dependente ErbB3, enquanto o seu efeito sobre a activação de MAPK foi mais dependente de outros membros da família de EGFR (Figura 4B). Além disso, as condições de tratamento são invertidos entre estas duas células. Lapatinib tem pouco efeito na activação de células SW948, mas HRG1-β1 ainda pode induzir a activação da sinalização de AKT e MAPK embora o grau de activação é muito mais fraco do que nas células LoVo (Figura 4C). Da mesma forma, o PHA inibidor de c-MET sozinho tem quase nenhum efeito sobre AKT e MAPK sinalização e HGF mal pode ativar tanto AKT ou de sinalização MAPK provavelmente devido a sua baixa expressão de c-MET (Figura 4D). A especificidade da sinalização de crescimento através de ErbB3 /ErbB2 ou ErbB3 /c-MET foi ainda estudada utilizando inibidores específicos.

(A, B) Detecção de AKT e sinalização MAPK em células SW948 e LoVo por western-blot, com o tratamento indicado na figura. (C, D) Detecção de AKT e sinalização MAPK por Western-blot em LoVo e SW948 células com HGF ou tratamento HRG1-β1, com ou sem diferentes agonistas ou antagonistas, como indicado.

AKT e MAPK são duas vias de Administração de viabilidade celular de linhas celulares de cancro colorrectal com receptores diferentes padrões de expressão de sinalização celular

a fim de investigar mais a variação expressão RTK em linhas de células colorretal, uma série de testes de viabilidade celular e sinalização celular vias foram realizadas utilizando inibidores específicos de AKT e MAPK. Para as células LoVo, a viabilidade celular foi significativamente reduzido quando tratados com LY294002, um inibidor de sinalização de AKT. No entanto, não houve nenhum efeito significativo quando foi tratado com um inibidor de c-Met, U0126. Se LoVo foi tratada com ambos os inibidores, o efeito de salvamento de HRG1-β1 em células era muito mais forte do que o de HGF (Figura 5A), e sinalização análise de activação por western blot também implicava que a activação de ambos AKT e MAPK foi parcialmente restaurada por HRG1 -β1 mesmo quando tratada com inibidores (Figura 5B). Este resultado indicou que a viabilidade celular não foi muito dependente de ErbB3 /c-Met /MAPK sinalização, mas em vez dependia ErbB3 /sinalização ErbB2 /AKT. No entanto, a situação não é a mesma em células SW948, em que a deterioração da viabilidade das células por o inibidor de c-Met, U0126, era mais forte do que a provocada por LY294002, e o efeito restaurador era diferente do que em células LoVo quando tratados com ambos LY294002 e U0126, com o efeito restaurador do HGF de ser mais forte do que HRG1-β1, e a activação tanto de AKT e MAPK sinalização sendo mais fortemente induzida por HGF de HRG1-β1 (Figura 5C, D). Tomados em conjunto, os nossos resultados mostram que o câncer colorretal apresenta variação na RTK oncogênico devido aos diferentes padrões moleculares de expressão incluindo ErbB2 /ErbB3 /AKT e ErbB3 /c-MET /MAPK.

As diferenças na viabilidade celular em LoVo (A , b) e SW948 (C, D), as células a seguir ao tratamento com diferentes agonistas ou inibidores, como indicado. Os dados são apresentados como média ± SD, e ** P . 0,01 pelo teste t de Student não pareado

Discussão

Ativação de RTK é crítico para a proliferação e sobrevivência do normal e células malignas. Recentemente, várias mutações de activação RTK foram identificadas em um subconjunto de pacientes com cancro por sequenciação próxima geração, sugerindo que a activação constitutiva das RTK é um dos mecanismos subjacentes de desenvolvimento do cancro. No entanto, o restante da população de pacientes com câncer não possuem tais mutações implicam a existência de mecanismos RTK ativando alternativos. Aqui, mostramos um de tais mecanismos alternativos é a sobre-expressão dos membros da família RTK de c-Met, e ErbB2, ErbB3, em células de CRC assim como linhas celulares de CRC representativos.

C-MET é um dos tirosina-quinases receptoras (RTK), que estão amplamente distribuídos na superfície de células epiteliais originários-endotelial. O seu único conhecido factor de ligando, de crescimento de hepatócitos (HGF), é expresso principalmente nas células de origem mesenquimal [11]. dimeriza C-MET e autofosforila aquando da ligação do ligando, que por sua vez cria locais de ancoragem para proteínas activas que medeiam a activação de sinalização a jusante de série incluindo MAPK, PI3K-AKT, SRC e STAT. Numerosos estudos têm relatado que a c-Met é sobre-expressa numa variedade de carcinomas, incluindo os de pulmão, da mama, dos ovários, rins, colo-rectal, da tiróide, no fígado, e os carcinomas gástricos [12] – [14]. É bem sabido que a c-Met desempenha um papel importante no desenvolvimento do cancro através da sua proliferation- e os efeitos de promoção da angiogénese exercidas pelas vias oncogénicos a jusante, e o efeito de promoção da metástase que é principalmente dependente da produção de metaloproteases. Devido ao seu papel na oncogénese e progressão do cancro, c-met é considerado para ser um alvo importante na terapia anti-cancro, e alguns antagonistas biológicos ou anticorpos monoclonais de segmentação de c-met surgiram que são conhecidos como c-Met TKI [15] – [ ,,,0],18]. Certos de câncer gástrico e de células NSCLC linhas exibir requintada sensibilidade c-MET TKI, mas, células /tumores tratados com c-MET TKI eventualmente desenvolver resistência. Esta resistência ao c-Met TKI é um resultado de superar a inibição por meio de alta MAPK sustentado e a actividade de PI3K /AKT, e membros da família de EGFR pode actuar como receptores complementares para MAPK e PI3K activação /AKT enquanto c-met é bloqueada [19] – [22]. Embora a aquisição de novas mutações pode ser uma das possíveis explicações para esta resistência no tratamento clínico, mutações de activação de vários RTKs incluindo ErbB2, ErbB3 e c-Met foram descobertos em cancro colo-rectal humano e outros cancros [23] – [27]. RTK sobre-expressão e ativação do sinal dowmstream fornecer uma alternativa e um mecanismo de cortesia. No entanto, a variabilidade dos níveis de expressão RTK oncogênicos também pode sublinhar a importância da terapia do cancro individualizado.

No presente estudo, não só confirmou a sobre-expressão de c-MET, ErbB2 e ErbB3 em câncer colorretal humano , mas também revelou a variação e complementar destes receptores. Além disso, identificou-se

In vitro

modelos de linhas celulares com diferentes padrões de expressão moleculares diferentes que mostram sensibilidade para o tratamento de ambos os agonistas e antagonistas de c-met e sinalização de EGFR.

O gene ErbB2 também vulgarmente referido como HER-2 /neu, um dos receptores de factor de crescimento de células de sinalização relacionada com a proliferação celular, a adesão e o movimento [28] principais, [29]. É também um alvo quente para o desenvolvimento de fármacos com base de sinalização. Trastuzumab, um dos medicamentos relacionados segmentação ErbB2, se liga a ErbB2 e induz desacoplamento de heterodímeros HER2-HER3 independente de ligandos, inibindo assim a sinalização a jusante. No entanto, vários estudos revelaram que o tratamento com trastuzumab pode induzir resistência tanto por amplificação de sinalização através de outros receptores ErbB e por conversa cruzada com RTKs heterólogos [30] – [32]. À medida que reportar no presente estudo, c-Met também tem sido encontrado para ser regulada positivamente em células que sobre-expressam ErbB2 trastuzumab-resistentes após a exposição ao trastuzumab. Além disso, um estudo mecanicista revelado que a activação de c-Met protege as células contra o trastuzumab por revoga a indução de p27. Isto é consistente com os resultados obtidos em nosso estudo, mostrando que existem padrões moleculares diferentes no cancro colorectal humano. expressão heterogênea de ErbB2 e ErbB3 com diferentes combinações de RTKs implícitas potencialmente diferentes projectos de quimioterapia

Prevê-se que um número crescente de sinalização molecular drogas baseadas em vias vão surgir, destinado a uma variedade de alvos.; No entanto, é muito possível que nenhum dos fármacos por si só estas terão um efeito anti-tumoral dominante. A terapia combinada para o cancro é um conceito em curso e desenvolver e importante, detecção de pessoas e análise de padrão de expressão molecular de um indivíduo é indispensável para a terapia mais eficaz com menos efeitos colaterais.