Abstract

Introdução

aberrações genéticas dentro do receptor do factor de crescimento epidérmico (EGFR) via estão associadas com resultados terapêuticos dos inibidores de cinase de EGFR-tirosina (TKI) em câncer de pulmão de não pequenas células avançado (NSCLC). No entanto, o impacto de alterações sobre a quimioterapia genes relacionados-EGFR não foi definido em NSCLC. Nosso estudo tem como objetivo investigar o impacto da quimioterapia neoadjuvante (Neoadj-Chemo) sobre mutações ativadoras do EGFR e genes relacionados com a resistência EGFR-TKI associados.

Pacientes e Métodos

amostras tumorais correspondentes foram obtidos retrospectivamente de 66 pacientes com NSCLC (fases IIb-III-B) correspondente ao pré e pós-Neoadj-Chemo. mutações de EGFR foram detectadas por desnaturação cromatografia líquida de alta eficiência (DHPLC) e confirmada por tecnologia de amplificação refractária do sistema de mutação (ARMS), mutações KRAS, mutação T790M e amplificação de c-Met foram identificados utilizando Polimerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP ), braços e PCR em tempo real, respectivamente.

resultados

Antes de Neoadj-Chemo, mutações EGFR foram identificados em 33,3% (22/66) dos pacientes com NSCLC. Apenas 18,2% (12/66) dos doentes mutações de EGFR realizada após Neoadj-químico (p = 0,013). O valor de pico médio de EGFR 19 mutações exon diminuiu não significativamente após Neoadj-Chemo. KRAS taxa de mutação diminuiu de 4,6% (3/66) a 3,0% (2/66) com Neoadj-Chemo. Embora a percentagem global de doentes que apresentam amplificações c-MET (6,1% [4/66]) não se alterou com Neoadj-Chemo, dois pacientes a transição de negativo para amplificação de c-MET positivo, e dois pacientes reverteu essas mudanças pós-Neoadj- chemo. mutações T790M estavam ausentes de todas as amostras.

Conclusão

A quimioterapia neoadjuvante tende a diminuir a frequência de mutação de mutação do EGFR e genes a jusante, o que sugere que a análise de amostras em tempo real para aberrações genéticas dentro vias EGFR têm um valor importante para delinear populações específicas de pacientes e facilitar o tratamento individualizado

Citation:. Wang S, An T, Duan J, Zhang L, Wu M, Zhou Q, et al. (2013) Alterações na EGFR e Genes Relacionados seguinte Neo-adjuvante quimioterapia em pacientes chineses com Non-Small Cell Lung Cancer. PLoS ONE 8 (3): e51021. doi: 10.1371 /journal.pone.0051021

Autor: John D. Minna, Univesity of Texas Southwestern Medical Center em Dallas, Estados Unidos da América

Recebido: 11 Agosto, 2012; Aceito: 29 de outubro de 2012; Publicação: 08 de março de 2013

Direitos de autor: © 2013 Wang et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Apoiado por doações da Fundação Nacional de Ciências naturais Distinguido Jovens Pesquisadores (81025012), Programa de Ciências naturais da Fundação Geral Nacional (81.172.235), a Fundação Capital de Desenvolvimento (2007-1023), Beijing Saúde Sistemas Líder Academic (2011/02/22) e Projeto de Ciência e Tecnologia de Beijing (Z090507017709015), Nacional de Ciências naturais da Fundação China Youth Science Foundation (81.101.726). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

fator de crescimento epidérmico inibidores do receptor tirosina-quinase (EGFR-TKI) representam terapias personalizadas revolucionárias para NSCLC paciente, um subconjunto de que carregam mutações EGFR específicos que são preditivos de uma resposta clínica favorável ao EGFR-TKI [1] – [3]. Mutações somáticas nos exões 19 ou 21 constituem cerca de 90% de todas as mutações de activação do EGFR, e a identificação de tais mutações pode ser aplicado para a escolha da terapia do cancro do pulmão. Vários fase III de ensaios clínicos confirmaram que a presença de mutações de activação de EGFR é preditiva de um resultado favorável com o EGFR-TKI (isto é, gefitinib e erlotinib), em comparação com a quimioterapia dupleto, como terapia de primeira linha para NSCLC, e em ambos asiática e caucasianos pacientes com NSCLC avançado [4] – [7]. Todos acima sugerem que o estado de mutação EGFR governa o resultado de EGFR-TKI, independentemente da etnia [8].

O resultado da terapia de EGFR-TKI é determinada não só pela presença de EGFR sensibilizar mutações, mas também pela EGFR resistentes ou seu desvio ou genes a jusante relacionados aberrações. mecanismo Especificamente, EGFR T790M mutação, foi identificado de ambas adquiridas e resistência primária EGFR-TKI [9], e a amplificação do oncogene c-Met [10] são descritos como resistência adquirida, ao passo que a mutação KRAS está associado com resistência primária [11] . Estas descobertas levaram a ensaios clínicos que aplicam novas terapias direcionados para os mecanismos de resistência, bem como promissores resultados preliminares em laboratório e estudos clínicos.

A detecção de mutações EGFR atualmente é recomendado para a seleção de pacientes que poderiam se beneficiar de primeira linha terapia EGFR-TKI. No entanto, não se sabe se o estado de mutação do EGFR ea jusante genes aberrações relacionadas com a resistência (

i.

, Mutações no KRAS, T790M, ou amplificação de c-MET) são consistentes em amostras pré e pós-quimioterapia. Portanto, é necessário avaliar o impacto da quimioterapia sobre os perfis moleculares de tumores. Chin et al relataram que a exposição prévia à exposição a agentes de platina podem reduzir o benefício de tratamento subsequente com o EGFR-TKI para uma célula de NSCLC EGFR mutante sensível à erlotinib pela via de sobrevivência de fosfatidilinositol 3-quinase /AKT [12]. Nosso estudo recente investigou a influência da quimioterapia em frequências EGFR mutado usando duas coortes incluindo DNA no plasma em NSCLC avançado e amostras pré e pós-operatórios de tecidos em pacientes com NSCLC localmente avançado, e explorou o possível mecanismo de relacionado quimioterapia alteração da mutação EGFR. Os resultados sugerem que a quimioterapia pode reduzir E

frequências TFG

mutação em pacientes com NSCLC, um resultado provável de uma resposta preferencial dos sub-clones com mutações de EGFR em tumores com populações de células tumorais heterogéneas [13]. Para nosso conhecimento, poucos estudos avaliaram amostras clínicas para a influência da quimioterapia sobre os genes de resistência EGFR-TKI relacionados.

Portanto, temos a hipótese de que a quimioterapia pode influenciar a frequência de mutação de mutação ea jusante genes EGFR, portanto, podem causar impacto sobre a função destes genes úteis como marcadores selectivos no tratamento individualizado de EGFR-TKI. Como uma continuidade do nosso estudo profase, o presente estudo explorou o impacto da quimioterapia em ambos o EGFR mutações de activação, especialmente, as variações avaliadas em quantidade mutação no EGFR exão 19 e o significado clínico, e ainda mais investigados possíveis alterações de EGFR-TKI genes relacionados com a resistência , como T790M, KRAS e c-MET aberrações usando a mesma coorte de amostras de tecidos tumorais correspondentes de pré e pós-Neoadj-Chemo do estágio pacientes IIb-IIIb NSCLC.

pacientes e métodos

paciente

Os pacientes incluídos neste estudo retrospectivo foram mais de 18 anos e exibiu fase IIB-IIIB NSCLC com a doença dimensões mensuráveis ​​antes da cirurgia. Os pacientes elegíveis também tinha um status de 0-2 ECOG (Eastern Cooperative Oncology Group) desempenho e tinha recebido 2-4 ciclos de Neoadj-Chemo sem qualquer quimioterapia anterior ou biológico de tratamento /imunológica. Todos os pacientes desde combinado amostras de tecido de biópsias realizadas pré Neoadj-Chemo e de ressecções pós-Neoadj-Chemo.

Sessenta e seis pacientes que foram selecionados a partir do nosso banco de dados criado em 1999, incluindo mais de 1.900 pacientes com dados clínicos preencheram os critérios acima e foram tratados no Hospital do Câncer Pequim a partir de Setembro de 2001 a Junho de 2010 (de acordo com o pré-requisito da inscrição este é um período de 9 anos, mas a maioria das amostras foram coletadas 2005-2010). Os regimes de quimioterapia disponíveis envolvido medicamentos à base de platina (

por exemplo.

, Cisplatina ou carboplatina em combinação com gemcitabina ou taxanos). A resposta radiográfica para Neoadj-Chemo foi determinada utilizando o diretrizes [14] RECIST (Critérios de Avaliação de Resposta em Tumores Sólidos). Todos os pacientes forneceram consentimento informado por escrito para análise de biomarcador em sua hospitalização pela primeira vez. O protocolo do estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética Institucional do Hospital do Câncer Pequim.

Ética Declaração

Todos os pacientes forneceram consentimento informado por escrito para análise de biomarcador. O protocolo do estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética Institucional da Hospital do Câncer Pequim. Nós não realizar pesquisas fora do nosso país de residência. Todos os participantes fornecer seu consentimento informado por escrito para participar neste estudo. Nossos comitês de ética aprovou este processo de aprovação. O indivíduo neste manuscrito deu o seu consentimento informado por escrito a publicar estes detalhes do caso.

coleta e DNA de amostras de extração

Os tecidos tumorais obtidas antes e após os tratamentos Neoadj-Chemo foram processadas para isolamento de ADN genómico utilizando kits EZNA FFPE ADN (Omega Biotek, EUA). Para evitar a influência de necrose dos tecidos no EGFR Neoadj-quimio-induzido e genes relacionados aberrance detecções, amostras pós-operatórias foram macro-dissecados a partir de secções de tecido embebidas em parafina cirúrgicos para assegurar que apenas os tecidos de tumor foram obtidas. conteúdos de tumor foram registrados para cada amostra usando cortes de tecidos imediatamente adjacentes.

EGFR detecção de mutações por desnaturação cromatografia líquida de alta eficiência (DHPLC) e Amplification Refractory Mutation System (ARMS)

Foram analisadas todas as amostras pareadas nas mesmas condições, a fim de equalizar as condições de detecção. O EGFR exão 19 deleção ou exão 21 mutações substituídos foram detectados de acordo com o método relatado por nós anteriormente [15].

BRAÇOS, um método mais sensível, foi usada para reavaliar os casos com discrepâncias mutação do EGFR pré -. e pós-quimioterapia neoadjuvante [13]

uma análise semi-quantitativa do exão 19 abundância mutação foi realizada por meio do cálculo da proporção entre as alturas dos picos de mutante (M) e de tipo selvagem normal /(W) produtos (isto é, H /W). Esta análise não foi estendido ao exão 21 porque o M e picos W sobreposta neste exão.

PCR-RFLP para mutações KRAS

PCR-RFLP foi realizada para analisar estado de mutação KRAS acordo com a norma protocolos [16]. iniciadores de PCR foram concebidos para amplificar sequências circundantes códons 12 e 13 do exão 1 de KRAS; estes codões estão envolvidos em cerca de 85% de activação de mutações KRAS.

quantitativa PCR em tempo real para c-Met

amostras tumorais emparelhados foram analisados ​​para c-Met o número de cópias do gene utilizando em tempo real detecção por PCR de acordo com protocolos padrão. Uma amostra do tumor foi definida como a amplificação positiva se o valor da relação excedeu o seguinte: média (M) + 2 × desvio padrão (SD) [17]. HCC827 (Homo sapiens (humanos) adenocarcinoma de pulmão, o número ATCC CRL-2868) foi utilizado como controle negativo.

Amplification Refractory Mutation Sistema de detecção de EGFR T790M

Amplification Refractory Mutation System (ARMS), tecnologia foi utilizado para detectar a mutação T790M. O método de detecção e discriminação critérios foram de acordo com a manufatura (Amoy Diagnostics Co., LTD).

Estatísticas

A análise estatística

tabulação Frequência e sumárias foram fornecidos para caracterizar a distribuição de dados. O teste de McNemar foi aplicado para comparar a mudança de estado de mutação (

i.

, EGFR [incluindo T790M] mutações, mutação KRAS e amplificação de c-MET) antes e após o tratamento. teste de tendência de Cochran-Armitage foi utilizado para testar se a mudança no estado de mutação foi associada com o resultado clínico, em termos de resposta parcial, doença estável. As associações de variáveis ​​categóricas desemparelhados foram analisados ​​utilizando o teste do qui-quadrado, com exceção do teste exato que de Fisher foi usado para pequenas amostras (n 5 em qualquer célula da tabela de contingência). teste de Wilcoxon foi aplicado para comparar a abundância mutante do EGFR 19 exão entre pré e pós Neoadj-chem. A significância estatística foi fixado a um nível de 0,05. Dois Lados testes foram realizados em todas as configurações. Todos os cálculos foram realizados utilizando SAS versão 10.0 (SAS Institute, Inc., Cary, NC).

Resultados

As características dos pacientes e mutação EGFR estatuto

As características basais da população do estudo são apresentados na Tabela 1. Os 66 pacientes incluídos 50 homens e 16 mulheres com idade entre 35-78 anos (média de 60 anos). Os pacientes incluídos 35 (53,0%) casos de carcinoma de células escamosas, 27 (40,9%) casos de adenocarcinoma, e 4 casos de carcinoma adeno. Todos os pacientes receberam Neoadj-Chemo; 63 (95,5%) foram tratados com platina com paclitaxel (mediana 2 ciclos; gama 2-4 ciclos). Com base no Comité Misto 2009 americano sobre o sistema de câncer de pulmão tumor-nódulo-metástase estadiamento do Câncer, 9 pacientes foram diagnosticados como fase IIb, 35 como estágio III e 22 como IIIb estágio antes da cirurgia; e após a cirurgia, 11 como

pstage IIa, 27 como

pstageIIb, 23 como

pstage IIIa, 5 como

pstage III-B. Com o tratamento Neoadj-Chemo, 39 de 66 pacientes obtiveram uma resposta parcial (PR), 27 pacientes foram classificados como doença estável (SD), e nenhum exibiu doença progressiva (PD).

mutação EGFR variação pré e pós-Neoadj-Chemo

Entre 66 pacientes com NSCLC, o EGFR taxa de mutação pré-Neoadj-Chemo foi de 33,3% (22/66), incluindo 12 pacientes portadores de mutações no exão 19, 9 pacientes com mutações no exão 21, e um paciente com mutações em ambos os exões. Pós-Neoadj-Chemo, a taxa de mutação EGFR diminuiu para 18,2% (12/66), incluindo 7 pacientes com mutações em 19 de exão e 5 com mutações no exon 21 (teste de McNemar P = 0,013; Figura 1). A consistência de mutações EGFR em amostras pré e pós-quimioterapia foi de 78,8% (52/66). Com o tratamento Neoadj-Chemo, o status de EGFR mutante de transição para o tipo selvagem em 12 pacientes; o oposto ocorreu em 2 pacientes

Neoadj-Chemo:. A quimioterapia neoadjuvante; EGFR: mutação EGFR; KRAS: mutação KRAS; C-MET: C-MET amplificação

Em amostras pré-Neoadj-Chemo, a taxa de mutação EGFR foi de 55,6% (15/27) em adenocarcinoma, que é maior que o medido em pacientes com células escamosas carcinoma (17,1% [6/35]). No entanto, as taxas de mutação EGFR em pacientes submetidos Neoadj-Chemo caiu para 33,3% (9/27) em adenocarcinoma e 8,57% (3/35) em carcinoma de células escamosas, com uma diferença não significativa (P 0,05). Os quatro pacientes com carcinoma adeno composta muito pequena de um grupo de análise estatística (Tabela 1).

Rácio de alturas de pico DHPLC associadas com mutação do EGFR no exão 19

Para avaliar variações na quantidade de mutação , mutações no exão 19 de EGFR foram semi-quantitativamente detectados a partir de 13 pacientes portadores de mutações neste exão (Figura 2). A razão entre as alturas dos picos entre o pré e pós-Neoadj-Chemo alterada em todos os pacientes. Seguindo Neoadj-Chemo, exon 19 mutações a transição de positivo para negativo em 7 pacientes. As alturas de pico exibiu uma diminuição acentuada em três pacientes, enquanto eles se levantaram em outros três pacientes. O rácio /W médio M pré-Neoadj-Chemo foi de 0,50; a proporção caiu para 0,24 pós-Neoadj-Chemo, uma diferença não significativa (P = 0,078).

variação mutação EGFR e eficácia de Neoadj-Chemo

Todos os pacientes foram avaliados para a sua resposta após Neoadj-Chemo. 39 pacientes (59,1%) obtiveram PR, 27 pacientes (40,9%) alcançou SD, e nenhum exibiu PD (Tabela 1). Entre os 66 pacientes, estado EGFR 12 pacientes ‘mudou de mutação ao tipo selvagem após o tratamento, 2 casos tiveram marcha à ré, 52 permaneceram tipo selvagem (n = 42) ou mutação (n = 10) Status do pré e pós-neoadj- chemo. As taxas de PR nestes subgrupos foram 58,33% (7/12), 50% (02/01) e 59.6% (31/52), respectivamente. A resposta clínica não foi significativamente associada com a mudança de estado da mutação EGFR (P = 0,13, teste de tendência de Cochran-Armitage).

KRAS variação mutação pré e pós-Neoadj-Chemo

A KRAS taxa de mutação variou de 4,5% (3/66) pré-Neoadj-Chemo a 3,0% (2/66) após o tratamento (Tabela 2). A consistência de mutações KRAS pré e pós-quimioterapia foi de 95,5% (63/66). Dois pacientes mantiveram seus estados de mutação KRAS após o tratamento, ao passo que um paciente com mutação KRAS transição para o estado de vida selvagem após pós-Neoadj-Chemo.

c-MET pré-amplificação e pós-Neoadj-Chemo

O rácio global de amplificação c-MET não se alterou com o tratamento Neoadj-Chemo (6,0% [4/66]) (Tabela 2). No entanto, 4 de 66 pacientes apresentaram uma mudança no estado de amplificação do c-MET. Especificamente, dois casos a transição de amplificação de negativo para -positivo, e dois apresentaram a transição inversa. Dois pacientes que exibem amplificação de c-met pré-tratamento mantiveram o seu estado de amplificação após o tratamento. A consistência da pré-amplificação de c-MET e pós-Neoadj-Chemo foi de 93,9% (62/66). Curiosamente, dois pacientes cujos c-MET estado de amplificação mudou de positivo ao PR obtido negativa com Neoadj-Chemo. Os dois pacientes com c-MET muda de negativo para SD exibiu positiva com Neoadj-Chemo.

pré-T790M estado de mutação e pós-Neoadj-Chemo

mutações T790M estavam ausentes de todas as amostras, como determinado usando a tecnologia ARMS.

Discussão

estudos anteriores não avaliou se os perfis moleculares de tecidos tumorais mudar entre o diagnóstico inicial e pós-quimioterapia. Com base em nossos resultados do estudo prófase [13], demonstramos ainda que Neoadj-Chemo afeta não só o estado da mutação EGFR, mas também o estado de mutação aberrante de relacionados EGFR genes a jusante ou desvio em pacientes com NSCLC. Estes resultados suportam a heterogeneidade molecular quimioterapia relacionadas com preditores

mutações EGFR estão bem estabelecidos de que o resultado de primeira linha terapia EGFR-TKI [4] – [7].. No entanto, tem sido claro se a presença da mutação de EGFR detectadas utilizando amostras inicialmente de diagnóstico também prediz com precisão de segunda ou terceira linha de EGFR-TKI terapias. Actualmente, a maioria dos pacientes chineses com NSCLC avançado submetidos a EGFR-TKI apenas como terapias de segunda ou terceira linha, potencialmente devido à apólices de seguro médico. Portanto, é importante conhecer o impacto de quimioterapia de primeira linha em estado de mutação do EGFR para orientar a selecção de terapia de TKI de EGFR de segunda linha. A alta incidência de alterações no estado da mutação EGFR com quimioterapia justificaria uma segunda biópsia antes de iniciar o tratamento de EGFR-TKI-segunda ou terceira linha.

Em nosso estudo, a taxa global de mutação EGFR diminuiu significativamente no pós amostras de tecido Neoadj-Chemo em comparação com os de Neoadj-Chemo pré em pacientes com estágio inicial NSCLC. Detectamos uma taxa discordante de 18,2% (12/66), que inclui pacientes que passaram da mutação do EGFR-positivo -negativo (n = 10) e o inverso (n = 2). Não houve diferenças significativas foram identificadas em relação à incidência de mutações EGFR com o estadiamento early-to-avançado de NSCLC [18]. Por conseguinte, presume-se que as alterações relacionadas com a Neoadj-Chemo em mutação do EGFR observado em NSCLC de fase inicial pode ser análogo para alterações induzidas pela quimioterapia de primeira linha em casos avançados NSCLC. Nossos resultados sugerem que o estado de mutação EGFR avaliada antes da quimioterapia podem não refletir com precisão o estado de mutação pós-quimioterapia, que suporta um “tempo real” profiling tumor na terapia personalizada do NSCLC.

Os mecanismos contribuindo para mudanças relacionadas com a quimioterapia, em estado de mutação EGFR permanecem obscuros. mutações EGFR intra-tumoral heterogéneos e as diferentes sensibilidades do mutante EGFR e células tumorais de tipo selvagem à quimioterapia pode estar associada com alterações no estado geral de mutação EGFR após a quimioterapia [4], [19]. Yatabe et al [20] sugeriram que, em adenocarcinomas do pulmão, distribuições heterogéneas de mutações de EGFR através das células são extremamente raros. heterogeneidade No entanto, vários outros estudos têm observado na expressão do gene EGFR, mutação ou amplificação entre tumores primários e metastáticos ou entre os focos intra-tumoral, com taxa de discordância diferente [21] – [23]. Okami et al [24] relataram que os pacientes cujos tumores incluídas ambas as células com mutação EGFR e -wild tiveram sobrevida livre de progressão significativamente mais curto comprimentos após a terapia de gefitinib em comparação com pacientes cujos tumores consistia de apenas células com mutação EGFR. Zhou et al [25] mostrou que os pacientes com uma alta abundância introtumoral de mutações EGFR podem se beneficiar mais do que aqueles com baixa abundância de mutação do EGFR. Todos estes resultados sugerem que a heterogeneidade intratumoral do estado mutacional EGFR podem impactar o resultado da terapia de EGFR-TKI.

O nosso estudo anterior detectou variações no estado de mutação EGFR através microdissection de focos diferente de 85 pacientes com NSCLC avançado após a cirurgia paliativa ressecção. Os resultados mostraram que aproximadamente 30% dos espécimes contidos tanto células mutantes de EGFR de tipo selvagem e com a proporção de células mutantes de EGFR que variam de 1% a 90% [13]. Vários estudos pré-clínicos e clínicos indicaram que os mutantes de EGFR foram mais sensíveis não só ao EGFR-TKI mas também para a quimioterapia, em comparação com aqueles que transportam EGFR de tipo selvagem [4], [21], [26]. Especula-se que a quimioterapia pode matar selectivamente e inibem a clones mutantes dentro do tumor, enquanto que os clones que exibem EGFR de tipo selvagem podem proliferar abundantemente após a quimioterapia. Tal fenômeno poderia explicar por estado da mutação EGFR passou de EGFR-mutante do tipo selvagem após a quimioterapia. Enquanto as células de mutação frequentes muito baixos (1% -5%) foram encontrados apenas nas amostras microdissecadas [13], que podem ser associados com variação de EGFR de tipo selvagem a uma mutação após a quimioterapia. Estes pequenos clones de mutação EGFR podem ser selecionados e proliferaram depois de expostos à quimioterapia.

A discordância de estado da mutação EGFR entre biópsia e amostras cirurgicamente ressecados pré e pós-Neoadj-Chemo, respectivamente, também pode ser atribuída à diferenças de amostragem resultantes da heterogeneidade intra-tumoral. Especificamente, pequenas amostras de biópsia com materiais limitados podem não representar as características biológicas completa do tumor, e as proporções minúsculas de células mutantes pode ser negligenciado. No entanto, o presente estudo observou-se uma maior incidência de aberrações genéticas relacionadas com o EGFR em amostras de biópsia de pré-Neoadj-Chemo em comparação com amostras de cirurgia ressecado de pós-Neoadj-Chemo. Isto sugere que a discordância de estado da mutação EGFR observado nas amostras de pré e pós-Neoadj-Chemo não deriva de amostragem viés.

Nós demonstramos que o tratamento Neoadj-Chemo de pacientes com NSCLC impactado não só EGFR estado de mutação, mas também aberrações nos genes a jusante relacionados, incluindo KRAS e c-MET. A taxa de mutação KRAS foi de 4,6% (3/66) pré-Neoadj-Chemo e diminuiu para 3,0% (2/66) após a terapia. Embora a c-met razão de amplificação pré e pós-Neoadj-Chemo não se alterou (6,1% [4/66]), 4 pacientes apresentaram mudanças. Especificamente, dois casos a transição de amplificação de negativo para -positivo com Neoadj-Chemo, e dois pacientes apresentaram a alteração inversa. Nossos resultados sugerem que existe c-MET e KRAS aberrações genéticas em amostras de tecido não tratadas a baixas frequências; isso é consistente com estudos realizados por Turke et al [27] e Maheswaran et al [28]. Juntamente com alterações de mutação observados EGFR, estes resultados sugerem que repetir biópsias de tumores durante o curso da doença de um paciente pode orientar melhor a escolha do regime terapêutico.

Nós não podemos explicar plenamente os potenciais mecanismos que contribuem para as alterações nessas de Resistência genes relacionados durante o decurso da quimioterapia. Diversos estudos relataram recentemente alterações semelhantes em genes resistentes EGFR [27] – [30]. Sequist et al [29] realizaram uma análise longitudinal das alterações genéticas e fenotípicas em 37 pacientes com CPNPC erlotinib resistentes portadores de mutações EGFR. Usando as biópsias em série, os autores relataram que T790M e PIK3CA (, polipéptido alfa catalítica fosfoinositide-3-quinase) mutação foram perdidas na ausência de pressão selectiva contínua de inibidores de EGFR. Tais cancros podem tornar-se sensível a um segundo ciclo de tratamento com inibidores de EGFR. Para nosso conhecimento, este estudo utilizou primeira biópsias repetidas para analisar dinamicamente a mudança no genótipo e fenótipo com EGFR-TKI e quimioterapia. Chin et al relataram que a exposição prévia à exposição a agentes de platina pode afectar a resposta subsequente para erlotinib num modelo de cultura de células de uma linha de células NSCLC EGFR mutante sensível ao erlotinib [12]. Isto ocorre por meio de uma via de PI3K activada persistentemente /AKT e é facilitada por uma redução induzida por cisplatina em PTEN (fosfatase e tensina homólogo) função. Os mecanismos envolvidos nesta alteração relacionada com a quimioterapia pode ser profunda, e epigenética pode desempenhar um papel importante. Isso merece mais investigação.

Nós descobrimos que EGFR T790M mutação não foi encontrada em ambas as amostras pré e pós-Neoadj-Chemo. É inconsistente com os resultados de Maheswaran et al [28] e Rosell et al [31] relataram que a mutação que T790M podia ser detectada em espécimes de tumor pré-tratados por biópsia. Duas hipóteses existem atualmente para explicar o mecanismo de mutação T790M. A hipótese de que a resistência adquirida pretende expor a EGFR-TKI induz uma segunda mutação pontual, resultando numa alteração de treonina-para-metionina na posição 790 de EGFR. Alternativamente, a hipótese de resistência selectiva sugere que a mutação T790M podem existir em pacientes como pequenas clones antes do tratamento; estes clones resistentes podem proliferar depois expostos a gefitinib ou erlotinib. No entanto, em nosso estudo, a ausência de mutação T790M em amostras tanto pré e pós-Neoadj-Chemo foi confirmado de forma independente por Amoy Diagnostics Co., LTD. Possível razão para a inconsistência do estado T790M relatado por nós e Maheswaran et al [28] pode estar relacionado com diferenças étnicas em determinados perfis moleculares, que precisam ser validados em estudos futuros

As limitações foram que:. Este estudo é um pequeno amostras e estudo retrospectivo e os pacientes com carcinoma de células escamosas (SQC) neste estudo responderam por 53%. estudo ex mostrou a taxa de mutação de SQC em caucasianos é não mais do que 3,6% [32]. No entanto em chinês população NSCLC avançado, taxa de mutação dos pacientes SQC foi muito maior do que a de pacientes caucasianos (12-20%) [33] – [34], que foi consistente com os resultados no nosso centro (17,8%) [35]. No estudo atual, a taxa de mutação do carcinoma epidermóide de 23,5%, isto é justo em torno do nível de população chinesa.

Conclusão

Nós avaliamos variações de mutações EGFR (incluindo T790M), mutações KRAS amplificação, e c-MET tratamento pré e pós-Neoadj-Chemo. Nossas descobertas apoiado que a quimioterapia pode afetar perfis de biomarcadores moleculares e indiretamente indicam a presença de heterogeneidade tumor. Portanto, os efeitos dos tratamentos sobre a criação de perfis tumor deve ser avaliada antes de tomar decisões a respeito da linha de segunda ou terceira terapias EGFR-TKI para pacientes com NSCLC. A preparação de perfis de biomarcadores moleculares em tempo real para EGFR-TKI é sugerido para delinear populações específicas de pacientes e facilitar o tratamento individualizado.

Reconhecimentos

Agradecemos ao Dr. Keneng Chen e sua equipe, os cirurgiões de Serviço de cirurgia Torácica Pequim Hospital Instituto, para fornecer parte dos espécimes para a nossa pesquisa; Dr. Ning Wang, radiologista do Departamento de Hospital Instituto, por sua contribuição para avaliação da resposta; e Mr. Guoshuang Feng, estatístico do Centro Chinês para Controle e Prevenção de Doenças, pela sua contribuição para análises estatísticas.