chinesa

Abstract

Purpose

Xeroderma grupo pigmentsum F (XPF) desempenha um papel fundamental no nucleotídeo DNA reparação de excisão e tem sido associado ao desenvolvimento de vários cancros. Este estudo tem como objetivo avaliar a associação de

XPF

variantes genéticas com a susceptibilidade ao carcinoma epidermóide de esôfago (CEE) na população chinesa.

Métodos

Este caso de dois estágios estudo -control foi realizado em um total de 1524 pacientes com CICAc e 1524 controles. Genótipo do

XPF

-673C T e 11985A variantes G foram determinados por baseada em reação em cadeia da polimerase comprimento de fragmentos de restrição polimorfismo (PCR-RFLP). A análise de regressão logística foi realizada para estimar razões estranhas (OR) e intervalos de confiança de 95% (IC 95%).

Resultados

O nosso estudo de caso-controle mostrou que

XPF

-673TT genótipo foi associado com uma diminuição do risco de ESCC em comparação com o genótipo CC em ambos os conjuntos de caso-controle (conjunto Tangshan: OR = 0,58; IC95% = 0,34-0,99,

P

= 0,040; Beijing set: OR = 0,66; IC95% = 0,46-0,95,

P

= 0,027). análises estratificadas revelou que a interação multiplicativa entre -673C variante T e idade, sexo ou fumar estatuto foi evidente (Gene-idade: P

interação = 0,002; Gene-sexo: P

interação = 0,002; Gene-fumadores : P

interacção = 0,002). Para

XPF

11985A . Polimorfismo G, não houve diferença significativa de distribuição dos genótipos entre casos e controles CICAc

Conclusão

Estes resultados indicaram que variantes genéticas em

XPF

pode contribuir para a susceptibilidade a ESCC

Citation:. Liu Y, Cao L, Chang J, Lin J, Ele B, Rao J, et al. (2014)

XPF

-673C T Polimorfismo Efeito sobre a suscetibilidade ao câncer de esôfago na população chinesa. PLoS ONE 9 (4): e94136. doi: 10.1371 /journal.pone.0094136

editor: Xiaoping Miao, MOE chave do Laboratório de Ambiente e Saúde, Escola de Saúde Pública, Tongji Medical College, Huazhong Universidade de Ciência e Tecnologia, China

Recebido: 07 de janeiro de 2014; Aceito: 12 de março de 2014; Publicação: 07 de abril de 2014

Direitos de autor: © 2014 Liu et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este estudo foi apoiada pela National Science Foundation Natural da China (81272613 para X. Zhang), Fundo de Ciência para Ilustre Casal eruditos do Comité Científico Hebei (H2012401022 a X. Zhang) e Plano da Lavoura Líder Talent de Inovação da equipe, na província de Hebei (LJRC001 a X . Zhang). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

carcinoma epidermóide de esôfago (CEE), como um dos tumores malignos mais comuns, é uma séria ameaça para a saúde humana e saúde. Quase 50% dos casos ocorrer CICAc na China [1] .o desenvolvimento de CICAc é um processo complexo, que está relacionada com os vários factores ambientais, incluindo a dieta [2], a infecção [3], os factores de estilo de vida, em especial o fumo do tabaco e do álcool [4]. No entanto, os indivíduos, que expostos aos mesmos fatores de risco, com sensibilidade diferente para ESCC, indicando o papel essencial do fator genético no desenvolvimento de ESCC [5], [6], [7].

excisão de nucleotídeos reparação (NER) foi um dos sistemas de reparo de DNA mais versáteis. Ela remove uma grande variedade de lesões do ADN, tais como dímero de UV incluída-pirimidina, de ligações cruzadas de DNA e danos oxidativos para manter a estabilidade do ADN [8], [9]. Deficiências na capacidade de reparo do DNA têm sido associados ao aumento do risco de vários tipos de câncer [10].

grupo pigmentsum Xeroderma F (XPF), como uma das proteínas NER essenciais [10], formado um complexo apertada com reparo de excisão complementação cruz 1 (ERCC1) para excisar o ADN danificado [11], [12]. Um

in vitro

estudo demonstrou que

XPF

-673C variante T mudou a atividade transcricional do gene [13]. Estudos epidemiológicos mostraram também que

XPF

variantes genéticas contribuiu para a susceptibilidade a vários tipos de câncer, como bexiga, mama, pulmão e câncer gástrico [14], [15], [16], [17].

Considerando o papel central da

XPF

em NER, podemos supor que

XPF

polimorfismos contribuíram para o risco de desenvolver ESCC. Para verificar essa hipótese, realizamos este caso-controle em uma população chinesa.

Materiais e métodos

Estudo assunto e ética declaração

Neste estudo, dois casos independentes -control foram usados ​​conjuntos de amostras. (A) conjunto de caso-controle Tangshan: 500 pacientes com CICAc recrutados a partir de Tangshan Gongren hospitalar (Tangshan, China) entre março de 2008 e dezembro de 2012 e 500 controles sem câncer. (B) conjunto de caso-controle Pequim: 1024 pacientes CICAc recrutados Hospital do Câncer da Academia Chinesa de Ciências Médicas (Pequim, China) entre janeiro de 2009 e dezembro de 2012 e 1024 controles saudáveis. Todos os participantes eram geneticamente não relacionados chineses han. Os pacientes elegíveis foram histopatologicamente primária confirmado e não previamente tratados por radioterapia e quimioterapia. Não houve restrições idade, sexo, estágio ou histologia. Foram excluídos pacientes com malignidade anterior ou câncer metástase de outros órgãos. Os controles foram selecionados aleatoriamente de uma população livre do câncer da comunidade conduzido na mesma região durante o mesmo período em que os pacientes foram recrutados. Os critérios de selecção para os controles incluídos sem história prévia de malignidade e indivíduos controle foram frequência pareados aos pacientes por idade (± 5 anos) e gênero. No recrutamento, consentimento informado foi obtido de cada sujeito. Este estudo foi aprovado pelo Institutional Review Board de Hebei United University e da Academia Chinesa de Ciências Médicas Instituto do Câncer

XPF genotipagem

Os genótipos de

XPF

-673C . T (rs3136038) e 11985A G (rs254942) polimorfismos foram determinadas por base reação em cadeia da polimerase polimorfismo de fragmentos de restrição (PCR-RFLP).

XPF

fragmentos de PCR contendo C T ou 11985A G local foram amplificados com os iniciadores pares de XPF-673F (5 ‘- GGG AGG CAA ACA GAG GTC TGA ATT – 3′) /XPF-673R (5’-TGC GAT TAC TCC CCA TCC TTC TT-3 ‘) ou

XPF

-11985F (5′-GGA GTC AAG AAA CAG CCA ACC TAG TA-3′) /

XPF

-11985R (5′-AGG AAG ACA GGA CAG TGA CCA G-3 ‘). A PCR foi realizada numa mistura reaccional de 25 ul contendo 10 ng de ADN, 0,3 pmol de cada iniciador, e 2,5 mM de MgCl

2, dNTPs 1,25 mM, 1,5 U de Taq DNA polimerase de ADN. A reacção foi realizada com um perfil que consiste de um passo de fusão inicial de 2 min a 95 ° C, seguido de 35 ciclos de 30 s a 94 ° C, 30 s a 58 ° C, 45 s a 72 ° C, e uma última passo de alongamento a 72 ° C durante 10 min. Os produtos da PCR amplificados foram 137 pb e 129 pb para -673C T e 11985A . G, respectivamente

Para -673C T, produtos de PCR foram digeridos por EcoR

I

. O produto de restrição foi visualizada em gel de agarose a 3,5%. O alelo -673C gerado 114 pb e 23 pb duas bandas; o alelo -673T produziu uma única banda de 137 pb. Para 11985A G variante, os produtos de PCR foram digeridos por Rsa

I

e, em seguida, separado em gel de agarose a 3,5%. O alelo gerado 11985G 104 pb e 25 pb duas bandas e o alelo 11985A produziu uma única banda de 129 pb.

Os genótipos distinguidos por PCR-RFLP foram ainda confirmadas por sequenciação directa (Figura 1). A genotipagem foi realizada sem o conhecimento do estado dos sujeitos do estudo caso /controle. 10% de amostras aleatórias mascarados foram testadas por pessoas diferentes e os resultados foram todos concordantes

Figura A e C presente sequenciamento imagens de genótipos de

XPF

-673 C . T e 11985A G ; Figura B apresenta os resultados de análise de PCR-RFLP de -673C T polimorfismo para casos representativos (M: marcadores de DNA; casos 1, 3 e 5: CC genótipo; Caso 2 e 6: CT genótipo; Casos 4 e 7: genótipo TT ); Figura D apresenta os resultados da análise de PCR-RFLP de 11985A G polimorfismo para casos representativos (M: marcador de ADN; Caso 1, 4 e 6: o genótipo GG; Caso 5 e 7: AG genótipo; Caso 2 e 3: o genótipo AA) .

a análise estatística

Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando o pacote de software estatístico SPSS16.0 (versão 16.0, SPSS Inc., Chicago, IL). A χ

2 teste foi utilizado para examinar as diferenças nas variáveis ​​demográficas e as distribuições de genótipos entre casos e controles. odds ratio (OR) e intervalos de confiança de 95% (IC) foram utilizados para avaliar a associação de

XPF

variantes com o risco de ESCC pelo modelo de regressão logística incondicional ajustada por idade, sexo e tabagismo. Todos os testes estatísticos foram testes de dois lados e um

P valor

de 0,05 foi considerado significativo

Resultados

características Assunto

O genótipo. distribuições de características selecione dos participantes neste estudo foram apresentados na Tabela 1. Não houve diferenças estatisticamente entre casos e controles para conjunto de caso-controle Tangshan e de caso-controle de Pequim definido em termos de idade e distribuição por sexo (todos os

P

0,05), indicando que a correspondente frequência era adequada. No entanto, houve mais fumantes entre os pacientes em comparação com controles em ambos os conjuntos de caso-controle (set Tangshan: 61,2%

vs

29,2%,

P Art 0,001; Beijing set: 65,5%

vs

32,3%,

P

. 0,001)

XPF

variantes e risco de ESCC

O genótipo distribuições de

XPF

-673C T e 11985A polimorfismos G nos casos e controles foram resumidos na Tabela 2. A observadas freqüências genotípicas de

XPF

polimorfismo (-673C T e 11985A G) em ambos os controles foram consistentes com Hardy-Weinberg em ambos os conjuntos (Tangshan definido:

P

= 0,06 e

P

= 0,50; Beijing set:

P

= 0,40 e

P

= 0,97)

análise de regressão logística

multivariada foram utilizados para calcular a associação de XPF -673C . T ou 11985A genótipos G com o risco ESCC (Tabela 2) . Para -673 C polimorfismo T, TT genótipo foi demonstrado ser um genótipo de protecção. Em comparação com o genótipo -673CC, -673TT genótipo estava relacionado com um risco decréscimo de ESCC em Tangshan conjunto de caso-controle (OR = 0,58, 95% CI = 0,34-0,99,

P

= 0,04). Similaridade, análises de regressão logística revelou que os indivíduos com genótipo -673TT foram também teve uma diminuição do risco de ESCC com OR (IC 95%) de 0,66 (0,46-0,95), em Pequim conjunto de caso-controle. Nas análises combinadas, descobrimos que os portadores do genótipo -673TT tinha um 0,64 vezes diminuição do risco de desenvolver ESCC (IC 95% = 0,47-0,86). Para 11985 A polimorfismo G, nosso estudo não mostrou qualquer associação de genótipos de 11985A . Polimorfismo G com o risco de ESCC

O risco de ESCC associado ao -673C polimorfismo T foi ainda avaliada por estratificação por idade, sexo e tabagismo utilizando os dados combinados de dois conjuntos de caso-controle (Tabela 3). Na análise estratificada com a idade, -673TT genótipo foi significativamente associada com diminuição do risco entre os indivíduos com 60 anos ou mais jovens (OR = 0,54, 95% CI = 0,36-0,80,

P

= 0,002), mas não entre os indivíduos com idade superior a 60 anos (OR = 0,81, 95% CI = 0,51-1,28,

P

= 0,359). Não foi foi observada uma interação significativa gene-idade

(P

para interação = 0,002). Em comparação com o genótipo -673CC, uma redução significativa do risco de ESCC foi associada com genótipos TT apenas entre os homens (OR = 0,67, 95% CI = 0,48-0,93,

P

= 0,017), mas não entre as mulheres ( OR = 0,58, 95% CI = 0,28-1,21,

P

= 0,145). Houve uma interação gene-sexo significativa (

P

para interação = 0,002).

Uma vez que o fumo do tabaco é fator predisponente para ESCC, então, nós investigamos se uma interação gene-fumadores existiu entre a -673C T polimorfismo e fumo (Tabela 3). Entre os não-fumantes, em comparação com os portadores -673CC, indivíduos com genótipo TT tinha um 0,61 vezes diminuição do risco de desenvolver ESCC (IC 95% = 0,39-0,96, P = 0,031). Entre os fumantes, não foi marginalmente redução significativa do risco ESCC (OR IC = 0,66, 95% = 0,43-1,00, P = 0,050) para os indivíduos com genótipo TT em comparação com aqueles com o genótipo AA. A interação multiplicativa gene-fumantes também foi encontrado com o

P Compra de interação igualando a 0,002.

Discussão

Neste estudo, investigaram-se as associações de

XPF

-673C T e 11985A variantes genéticas G com o risco de ESCC na população chinesa. Descobrimos que os indivíduos com genótipo -673TT diminuiu o risco de ESCC comparação com portadores do genótipo -673CC em população chinesa. Para 11985A polimorfismo G, não houve diferença significativa entre casos e controles CICAc

A diferença étnica no

XPF

polimorfismos podem ter efeito significativo sobre o fenótipo da doença.. Os pesquisadores descobriram uma associação significativa da

XPF

rs1799801 no exão 11 com um risco reduzido de câncer de bexiga em população caucasiana [18], mas não na população chinesa [15]. Esta discrepância pode refletir a diferença de fundo genético entre diferentes populações de estudo. No presente estudo, as freqüências genotípicas do

XPF

-673C T em controles são 59,4% para CC, 35,0% para CT e 5,6% para o TT, que são consistentes com aqueles no estudo de Yu (55,5% para CC, 36,7% para CT, 7,8% para o TT) e aqueles no estudo de Shao (57,3% para CC, 37,4% para CT, 5,2% para o TT) [13], [16]. Para o nosso conhecimento, não há dados sobre a 11985A polimorfismos G estão disponíveis

XPF é uma proteína essencial na via NER, que é responsável pela remoção de adutos de DNA induzidos por compostos de platina com base [19].. Como uma endonuclease de ADN específico estrutura, XPF tem sido relatado para se ligar a ADN de cadeia dupla [20] e ainda mais participou em várias vias de reparação do ADN através da combinação com ERCC1 [21], [22]. Como fator limitante da taxa crucial na NER, a baixa expressão da XPF agiu como um fator de susceptibilidade genética no desenvolvimento de cancros e um fator de risco prognóstico após a quimioterapia em vários tipos de câncer, incluindo câncer de esôfago [15], [23], [ ,,,0],24], [25]. A análise funcional de

XPF

-673T C mostrou que o alelo -673T tinha uma actividade de transcrição significativamente mais elevado em comparação com o alelo -673C. Os experimentos epidemiologia também mostrou que -673TT genótipo teve uma diminuição do risco de cancro do pulmão em comparação com o genótipo -673CC [13], [16]. Estes resultados suportado ainda mais nossos resultados atuais, que mostraram as operadoras com -673TT genótipo teve uma redução significativa do risco de câncer de esôfago.

Várias evidências revelaram interação estatisticamente significativa gene-ambiente em vários tipos de câncer [26], [27 ], [28]. A maioria CICAc ocorreu também devido às interações entre fatores ambientais e genéticos [2], [4]. NER caminho é o mecanismo principal para o par de adutos de DNA distorcendo volumosos e helicoidais gerado pelo cigarro [29], [30]. O fumo do tabaco contém muitos dos agentes cancerígenos e pró-carcinogéneos, tais como benzo (a) pireno e nitrosaminas. variante genética no promotor de

XPF

pode influenciar a ativação de substratos na fumaça do cigarro e depois contribuir para a diferente susceptibilidade ao câncer. Vários estudos têm avaliado a relação entre o

XPF

-673C T polimorfismo e suscetibilidade ao câncer de pulmão pelo tabagismo. Um estudo conduzido por Shao mostrou que -673 TT ou CT genótipo aumentou significativamente o risco de câncer de pulmão em não-fumantes, mas não em fumantes [16]. No entanto, Yu e seus colegas não encontraram nenhuma interação entre -673C T polimorfismo e fumar estatuto [13] .Este é o primeiro relatório para mostrar a interação gene-tabagismo entre

XPF

genótipos e tabagismo estado risco ESCC. Nossos resultados sugerem que XPF -673TT genótipo estava relacionado com uma diminuição do risco CICAc entre os não-fumantes, mas não entre os fumantes. Como uma das principais proteínas de reparação de dano de ADN, a baixa expressão da XPF podem atrasar a reparação do ADN, e aumentar ainda mais a instabilidade do genoma e promover a tumorigénese. No entanto, uma grande montagem da exposição ao fumo do tabaco pode sobrecarregar a diferença da capacidade de reparo do DNA pelo genótipo diferente.

O nosso estudo tem a sua limitação. Este estudo é um estudo de caso-controle de base hospitalar de acesso restrito a população chinesa Han. viés de seleção pode surgir quando a amostragem não é aleatória dentro das subpopulações de câncer e indivíduos sem câncer. Os controles em nosso estudo foram pareados com os casos por sexo e idade, o que pode minimizar o viés de seleção assunto. Além disso, há várias de

XPF

polimorfismos foram descobertos e têm demonstrado estar associada com vários cancros. Mais potenciais polimorfismos XPF funcional ainda precisa ser validado por estudos maiores, com populações diversas

Em conclusão,

XPF

-673C . Polimorfismo T foi significativamente associada com um risco diminuído de ESCC. Nossa descoberta sugere que

XPF

desempenhar um papel na etiologia da ESCC.