Abstract
Fundo
SPARC é uma proteína matricellular envolvido na remodelação do tecido, migração celular e angiogênese, enquanto as funções forkhead caixa de P3 (FOXP3) proteína como um fator de transcrição envolvidos na regulação de células imunitárias . SPARC e FOXP3 pode desempenhar um papel anti-tumorigénica na progressão do cancro. O objetivo foi determinar se os níveis de expressão SPARC, FOXP3, CD8 e CD45RO estão associados com cancro colorectal (CRC) fase, a evolução da doença e sobrevida específica para o câncer a longo prazo (CSS) no estágio II e III CRC.
métodos e resultados
expressão SPARC foi inicialmente avaliada em 120 emparelhado normal e fase I-IV CRCs. Posteriormente, aproximadamente 1000 emparelhado amostras de pacientes de estágio II ou III CRCs em microarrays de tecido foram coradas para SPARC, FOXP3, CD8 ou CD45RO. modelagem de riscos proporcionais avaliadas as correlações entre estes marcadores e dados clínico-patológicas, incluindo a evolução da doença e sobrevida específica por câncer (CSS). Ambos SPARC e expressão FOXP3 foram significativamente maiores do que no CRC cólon normal (p 0,0001). a alta expressão de SPARC correlacionada com boa evolução da doença (≥60 mths sem recorrência da doença, p = 0,0039) e melhor CSS longo prazo em estágio II CRC ( 0,0001). Na fase III de CRC, de expressão elevada SPARC correlacionada com melhor CSS longo prazo (p 0,0001) e a utilização da quimioterapia adjuvante menos (p = 0,01). Alta FOXP3 correlacionada com uma boa evolução da doença, melhor CSS longo prazo e menos uso de quimioterapia adjuvante na fase II (p 0,0037, 0,0001 e p = 0,04, respectivamente), mas não no estágio III CRC. Alta CD8 e expressão CD45RO correlacionada com melhor prognóstico da doença em estágio II CRC, e melhor CSS, mas as diferenças não foram tão marcada como para SPARC e FOXP3.
Conclusões
Estes dados sugerem que a alta SPARC e FOXP3 está associada a uma melhor evolução da doença em estágio II CRC e podem ser indicadores de prognóstico da CSS. Além disso avaliar se estes marcadores prever pacientes com alto risco de recorrência com a fase II CRC e estudos funcionais destes efeitos estão em andamento
Citation: Chew A, Salama P, Robbshaw A, B Klopcic, Zeps N, Platell C , et ai. (2011) SPARC, FOXP3, CD8 e Correlação CD45 com recorrência da doença e sobrevivência a longo prazo Livre de Doença no câncer colorretal. PLoS ONE 6 (7): e22047. doi: 10.1371 /journal.pone.0022047
editor: Xin-yuan Guan, The University of Hong Kong, China
Recebido: 10 Janeiro, 2011; Aceito: 15 de junho de 2011; Publicação: 26 de julho de 2011
Direitos de autor: © 2011 Chew et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. A pesquisa foi realizado com o apoio da Fundação de Pesquisa Fremantle Hospital Medical eo Conselho de Pesquisa Saúde e Médico Nacional (NHMRC # 458755). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
o câncer colorretal (CRC) é altamente prevalente na população ocidental e uma das principais causas de morbidade e mortalidade por cancro em todo o mundo [1], [2]. Excluindo o câncer de pele não-melanoma, CRC é o câncer mais comum na Austrália e a segunda causa mais comum de morte por doença maligna [3], [4]. O Comité Misto Americana do Câncer (AJCC) desenvolveu um sistema de estadiamento comumente usado para determinar o prognóstico do paciente. Não é, no entanto, se sobrepõem nas taxas de sobrevivência de 5 anos entre as fases II e III CRC [5], [6]. Fase III cancros têm demonstrado disseminação linfática enquanto fase II cancros têm tumores localizados à mucosa intestinal. Alguns dos tumores fase II, no entanto, também pode ter micrometástases que passariam despercebidas. Em vista disso, a consideração das características biológicas do tumor, através da identificação de biomarcadores que predizem extensão da doença, pode fornecer um meio mais precisos de correlacionar o estágio do câncer com a evolução da doença e permitir a aplicação dos tratamentos mais apropriados para pacientes individuais.
tumor infiltrating linfócitos T que expressam CD8 e CD45RO foram mostrados para correlacionar com melhores resultados de CRC [7], [8], [9], [10]. A presença de uma elevada densidade de células CD8
+ células T está também associada com a ausência de invasão do tumor, numa fase precoce de doenças e melhorou a sobrevivência do paciente [11], [12]. Alta CD45RO
+ densidades de células T em linfonodo metástases e tumores de CRC também associar com menos capacidade de invasão tumoral, menor o estágio da doença e melhor sobrevida do paciente [9], [12]. Dois outros biomarcadores potenciais de interesse na patogênese e prognóstico de CRC são secretadas proteína ácida e rica em cisteína (SPARC) e caixa de forkhead P3 (FOXP3) como eles também são ambos altamente expresso em doenças malignas e ter sido demonstrada a correlação significativa com a doença resultado.
SPARC é uma glicoproteína matricellular que está envolvida na remodelação de tecido, reparação de feridas, a migração celular e angiogénese [13], [14], [15], [16]. Ela é expressa em numerosos tecidos, especialmente em tecidos danificados onde remodelação da matriz extracelular (ECM) é necessário em resposta a uma lesão [17]. expressão alta SPARC tem sido associada com crescimento do tumor, metástase e mau prognóstico da doença em várias doenças malignas incluindo melanoma, da mama e os cancros do esófago [6], [18], [19]. SPARC também tem sido implicado no desenvolvimento de pólipos do cólon e a progressão do tumor CDC por meio da regulação da ciclooxigenase-2 (COX-2) [20] e o factor de crescimento transformante beta-1 (TGFp-1) [21]. Estes estão envolvidos na regulação, e discriminação, da ECM que envolve as células tumorais. Em cancros do ovário, no entanto, os níveis de expressão elevada SPARC estão associados com um bom prognóstico [22]. Esta correlação é um resultado da capacidade da SPARC para regular negativamente o recrutamento de macrófagos para o local do tumor e a produção e a actividade de interleucina (IL) -6, prostanóides e metaloproteinases de matriz para reduzir a inflamação associada [23].
FOXP3 é também um marcador biológico de interesse e é o factor de transcrição chave controlar o desenvolvimento de células T reguladoras (Treg) e função. Treg suprimem a activação do sistema imunológico, mantendo assim a homeostase do sistema imunológico e a tolerância para auto-antígenos. Ao fazê-lo, no entanto, estas células podem suprimir a resposta imunológica anti-tumoral, reduzindo a actividade de células T citotóxicas por contacto directo célula-a-célula, ou através da libertação de citocinas [24]. A ligação directa entre a presença de Tregs ea progressão do câncer de ovário tem sido demonstrado, onde tumor FOXP3 + Tregs suprimida a imunidade específica do tumor e contribuiu para a sobrevivência reduzida [25]. No cancro da mama, um aumento na população de Treg, tanto no tecido de sangue e do tumor periférico, também foi relatado e um estudo recente demonstrou uma correlação entre a infiltração intratumoral de FOXP3 + Tregs no cancro da mama e o risco de recidiva tarde [26]. Dada a contribuição central da FOXP3 a função Treg, a expressão de FOXP3 por células tumorais podem representar um novo mecanismo pelo qual cancros suprimir o sistema imunitário para escapar à destruição.
Neste estudo, investigou SPARC e FOXP3 na fase II e tecido III CRC e comparar o seu valor prognóstico contra os conhecidos CRC marcadores prognósticos CD8 e CD45RO que são expressos por linfócitos T se infiltram no tumor. Estes têm sido mostrados para correlacionar com um melhor resultado CRC doença [7], [8], [9], [10]. A presença de uma alta densidade de
+ células T CD8 está associada com a ausência de invasão tumoral, um estágio da doença mais cedo e melhorou a sobrevida do paciente [11], [12].
Os objetivos deste estudo foram determinar se os níveis de SPARC e expressão FOXP3 estão associados a fase de CRC, a evolução da doença e sobrevida específica para o câncer a longo prazo na fase II e III CRC e comparou o valor prognóstico destes dois marcadores contra os conhecidos prognósticos marcadores CRC CD8 e CD45RO .
Materiais e Métodos
Ética declaração
a aprovação ética para esta pesquisa foi obtido a partir Comitê de Ética em pesquisa com Seres Humanos da Southern Metropolitan Area Serviços de Saúde e para o Sir Charles Gairdner Comissão de Ética do Hospital Humano Research. Todos os pacientes que fornecem tecidos para o tissue microarray assinaram um termo de consentimento antes da remoção cirúrgica do câncer intestinal para permitir essa investigação a realizar.
detalhes do paciente
As informações demográficas foram coletados retrospectivamente em todos os pacientes de registros de patologia, e informações sobre a sobrevida específica da doença foi obtido a partir do Registro de Câncer da Austrália Ocidental. Todos os pacientes tiveram um seguimento mínimo de 60 meses ou até a morte. Informações sobre o uso da quimioterapia adjuvante com regimes baseados em leucovorin fluorouracil /após a cirurgia foi obtido a partir dos prontuários hospitalares. Os pacientes foram considerados como tendo tido uma boa evolução da doença se não houve recorrência da doença dentro de 60 meses após o diagnóstico, enquanto os pacientes que tiveram recorrência da doença dentro de 60 meses após o diagnóstico, ou tinham morrido de sua doença, foram considerados como tendo tido um resultado doença pobres .
avaliação SPARC inicial Isso
níveis SPARC foram inicialmente avaliadas em cortes histológicos de AJCC fase I para o tecido IV CRC para determinar se havia uma associação com CRC e na qual as células SPARC foi expressa. Isto incluiu amostras (n = 120), coletados a partir de uma coorte de 464 pacientes diagnosticados com CRC entre 1996 e 2002.
Tissue microarray (TMA)
A construção do TMAs utilizada neste estudo tenha sido previamente descrito [27]. O TMA consistiu de cerca de 1000 casos de cada um dos estágios II e amostras de tecido de arquivo III CRC de pacientes que foram diagnosticados com CRC durante o período de 1990-1999 no Sir Charles Gairdner Hospital. Cada caso consistiu de dois núcleos de tecidos tumorais 1mm de diâmetro e um núcleo de 1mm de diâmetro complementar escolhida histologicamente mucosa do cólon normal.
Avaliação de expressão SPARC foi realizado em 233 pacientes com estágio AJCC II e 125 AJCC fase III CRCs. a análise da densidade de células T de FOXP3, CD8 e CD45RO foi derivado a partir de um grupo de pacientes maior do mesmo arquivados fase AJCC amostras II e III CRC que tenha sido previamente descrito [28].
Quatro micrómetros de espessura de parafina fixado em formalina secções embebidas de TMA teve recuperação de antigénio de alta temperatura com EDTA 1 mM (pH 8) e 10 mM de tampão de citrato (pH 6). coloração não específica foi bloqueada. Os anticorpos primários anti-SPARC (1: 200; hematológicos Technologies Inc, Vermont, EUA), anti-CD8 (clone C8 /144B, pronto a usar; DakoCytomation, Heverlee, Bélgica), CD45RO (clone UCHL1, pronto a usar; DakoCytomation) e anti-FOXP3 (1:100; Abcam, Cambridge, MA, EUA) foram utilizados com uma incubação durante a noite a 4 ° C. Após a lavagem, as secções foram incubadas com anticorpo biotinilado 1:2 soluções ligação universal e streptadvidin-HRP diluído (Universal LSAB + Kit, DakoCytomation Carpinteria, CA) durante 30 minutos cada. A cor foi desenvolvida por incubação em solução de 3,3-diaminobenzidina (DAB) (substrato cromogénio Sistema, DakoCytomation, Carpinteria, CA) e as secções foram contrastadas com Mayer haemotoxylin e lamínulas com DEPEX. A coloração sem anticorpo primário foi usado como controlo negativo. Fotos foram tiradas com uma câmera digital (Nikon DS-L1) no campo brilhante em um microscópio invertido (Nikon TE2000-U). microarrays de tecido foram digitalizados usando o scanner de slides Aperio ScanScope XT Digital (Aperio Technologies, CA) situada no Australian Microscopia Facilidade microanálise de investigação do Centro de Microscopia, Caracterização Análise, The University of Western Austrália