Abstract

Objectivo

Para investigar os efeitos da CCL21 /CCR7 na proliferação, migração e invasão de células T24 e os possíveis mecanismos associados:. expressão de MMP-2 e MMP-9, e regulação de proteínas Bcl-2 e BAX

Métodos

células T24 recebeu tratamentos correspondentes incluindo o controlo de veículo, o anticorpo (anticorpo de 20 ng /mL de CCR7 e 50 ng /ml CCL21), e 50, 100, e 200 ng CCL21 /ml. A proliferação foi avaliada por um ensaio MTT; migração e invasão celular foram ensaiados utilizando uma câmara de Transwell. apoptose celular foi induzida pela adriamicina (ADM). A taxa de apoptose da célula foi examinada por citometria de fluxo utilizando coloração de anexina V-FITC /PI. Western-blot foi utilizada para analisar as proteínas de MMP-2 e MMP-9 e Bcl-2 e BAX.

Resultados

CCL21 promoveu a proliferação de células T24 de um modo dependente da concentração com que 200 ng /mL induzida a maior quantidade de proliferação. Foram encontradas diferenças significativas de migração celular entre os grupos CCL21treatment eo grupo controle em estudos tanto a migração e invasão (P 0,001 para todos). As expressões de MMP-2 e MMP-9 proteínas foram significativamente aumentado após tratamento CCL21 (p 0,05 para todos). Expressão das proteínas Bcl-21 segue uma tendência crescente enquanto que a expressão do Bax segue uma tendência descendente como a concentração de CCL21 aumenta. Não houve diferença entre o grupo controle eo grupo de anticorpos para todas as avaliações.

Conclusão

CCL21 /CCR7 promoveu a proliferação de células T24 e reforçado a sua migração e invasão através do aumento da expressão de MMP-2 e MMP-9. CCL21 /CCR7 tinham actividades anti-apoptóticos em células T24 através da regulação das proteínas Bcl-2 e Bax. CCL21 /CCR7 pode promover o desenvolvimento do cancro de bexiga e metástase

Citation:. Mo M, Zhou M, Wang L, Qi L, Zhou K, Liu L-F, et al. (2015) CCL21 /CCR7 Melhora a proliferação, migração e invasão de cancro da bexiga humana T24 Cells. PLoS ONE 10 (3): e0119506. doi: 10.1371 /journal.pone.0119506

Editor do Academic: Rajesh Mohanraj, Faculdade de Medicina Ciências da Saúde, Emirados Árabes

Recebido: 14 de outubro de 2014; Aceito: 13 de janeiro de 2015; Publicação: 23 de março de 2015

Direitos de autor: © 2015 Mo et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão dentro do papel

financiamento:.. os autores não receberam qualquer financiamento específico para este trabalho

CONFLITO dE iNTERESSES:. os autores declaram que não há interesses concorrentes existem

Introdução

o câncer de bexiga é um dos tipos mais comuns de câncer em adultos. Só em 2008, 386.000 pacientes foram diagnosticados com câncer de bexiga que resultou em 150,200 mortes em todo o mundo com base em estatísticas globais [1]. A metástase é uma indicação não só de cancro da bexiga, mas também a causa de mortalidade [1]. No entanto, a fisiopatologia da metástase do câncer da bexiga permanece obscuro. As quimiocinas, uma superfamília de pequenos péptidos segregados caracterizadas pela sua capacidade para induzir a migração de leucócitos, juntamente com os seus receptores têm sido encontrados para ser envolvido na migração de células do sistema linfóide, assim, podem afectar o desenvolvimento e progressão [2-4] cancro. CCL21, uma importante quimiocina da família CCL, é um dos dois únicos ligandos (o outro é CCL19) para CCR7. [5] CCL21 é produzida por células reticulares fibroblásticas de área rica a de células T em humanos e vénulas endoteliais em ratinhos. [6] CCR7 é expressa por vários tipos de células, incluindo os linfócitos T reguladores células T virgens B e, grão semi e células dendriticas maduras, e [5]. Além disso, a expressão de CCR7 foi reportado para promover a metástase de células de cancro para os nódulos linfáticos em cancro do pulmão não de pequenas células [7], do cancro da mama [8], carcinoma de células escamosas de cancro da cabeça e pescoço [9], o cancro colorrectal [10] , o câncer de próstata [11], câncer de células escamosas do esôfago [12] e câncer gástrico [13]. Portanto, CCR7 e o seu ligando (s) pode participar na proliferação, progressão e metástase de células de cancro de várias origens de órgãos [7-13]. Nós também descobrimos que CCR7 foi envolvido no desenvolvimento e progressão do cancro da bexiga (dados não publicados).

Fisiologicamente, CCL21 /CCR7 desempenha um papel importante no retorno de células imunes, homing do nó de linfa e posicionamento, a imunidade e periférica tolerância, desenvolvimento e função das células T reguladoras, e autoimunidade e neogensis linfóide [5]. Vários estudos têm confirmado o papel de CCL21 /CCR7 no desenvolvimento e progressão tumoral [14-17]. Por exemplo, CCL21 /CCR7 promove a progressão fase G2 /M e previne a apoptose por meio da via da ERK em cancro humano não-pequenas do pulmão de células [15, 16], facilita a progressão do cancro do pâncreas através da indução da angiogénese e linf angiogénese [14], regula metaloproteinase de matriz-9 (MMP-9) em metástases do cancro do cólon humano [18], e regula positivamente a MMP-9 na migração das células de células B crónica e leucemia linfocítica invasão [17]. Além disso, CCL21 /CCR7 também foi encontrada para promover a migração de células de cancro em vasos microlymphatic no cancro da mama [19], tumor pancreático [20], adenocarcinoma pulmonar [21], e carcinoma de célula escamosa esofágica [22]. No entanto, o possível papel da CCL21 /CCR7 no desenvolvimento e progressão do cancro de bexiga permanece obscuro. células T24 são derivadas de carcinoma de células transicionais da bexiga urinária humana e têm sido amplamente utilizados para o estudo do cancro da bexiga [23].

Os objetivos do presente estudo foram investigar os efeitos da CCL21 /CCR7 na proliferação, migração e invasão de células T24 e os possíveis mecanismos associados:. expressão de MMP-2 e MMP-9, e regulação de proteínas Bcl-2 e BAX

Materiais e Métodos

este estudo obteve a aprovação ética do comitê de ética na Xiangya Hospital, Centro Universitário do Sul, Changsha, província de Hunan, na China.

Reagentes e linha de células

CCL21 proteína humana recombinante foi comprado de Perprotech (Rocky anticorpo hill, NJ, EUA) e anticorpo policlonal de coelho anti-CCR7 humano foi adquirido a partir de Wuhan Boster Biological Engineering Co., Ltd. (Wuhan, China). inibidor de protease fluoreto de fenilmetilsulfonilo (PMSF) foi adquirido a partir de Roche Diagnostics (Indianapolis, IN, EUA). MTT e sulfóxido de dimetilo (DMSO) foi adquirido a partir de Hufeng Chemical Co., Ltd. (Xangai, China). Anexina V-FITC kit de detecção de apoptose foi comprado de Beyotime Biotecnologia (Xangai, China).

A linha de células T24 câncer de bexiga humana foi comprada dos Institutos de Ciências Biológicas de Xangai, a Academia Chinesa de Ciências (Xangai, China ). As células foram cultivadas a 37 ° C, 5% de CO

2, em meio de DMEM (Gibco, EUA) contendo 10% de soro fetal de bovino, 100 U /mL de penicilina, e 100 U /mL de estreptomicina.

cultura celular e tratamento

T24 células foram tratadas durante 48 horas antes do ensaio de MTT, os ensaios de migração e invasão, e análise de Western blot e 24 horas antes da citometria de fluxo estudo. Para cada experiência, havia cinco grupos que consiste no grupo 1 (grupo de controle), que foi tratada com meio DMEM isento de soro, o grupo 2 (grupo de anticorpos) que primeiro recebeu o pré-tratamento com 20 ng de anticorpo CCR7 /mL de anticorpo policlonal de coelho anti-humano durante 4 h, em seguida, 50 ng /ml de CCL21, Grupo 3, que recebeu 50 ng /ml de CCL21, Grupo 4, que recebeu 100 ng /ml de CCL21, e Grupo 5, que receberam 200 ng /ml de CCL21. As experiências de ensaio de MTT, citometria de fluxo, Western blot e foram repetidas três vezes (n = 3), e a migração celular e invasão foram repetidos quatro vezes (n = 4).

ensaio MTT para a proliferação de T24 células

A proliferação de células T24 foi avaliada pelo ensaio de MTT. Em resumo, as células foram tratadas correspondentemente, em cada grupo, durante 48 horas. Após o tratamento, o meio foi removido e as células foram incubadas com 5 mg /mL de solução de MTT (20 ul). Após incubação durante 4 h a 37 ° C e 5% de CO2, o sobrenadante foi removido e formação de formazano foi medida a 490 nm com Gel Documentation conjunto Analysis System (Liuyi Factory, Beijing, China).

ensaios de migração e invasão

A migração celular e invasão foram analisadas usando uma câmara de Transwell (EMD, Millipore, EUA). Para o ensaio de invasão, uma câmara de Transwell foi colocada numa placa de 24 poços e foi revestida com 30 uL de Matrigel (Franklin Lakes, EUA) e foi incubada durante uma hora a 37 ° C. Em ambos os ensaios Transwell, células, após o tratamento correspondente de 48 horas, foram tripsinizadas e semeadas em câmaras com a densidade de 8 × 10

4 culas por po, e 500 uL de meio DMEM isento de soro foi adicionado à câmara inferior. células migradas foram fixadas com 100% de Matrigel (BD, Franklin Lakes, EUA) de metanol durante 30 min, após 24 horas, e as células que não migraram foram removidos por cotonetes. Finalmente, as células na superfície inferior da membrana foram coradas com hematoxilina e eosina para 20 min. microscópio óptico (200X, Olympus, Tóquio, Japão) foi utilizado para contar o número de células em cinco campos aleatórios de vista; o número médio de células foi calculado para cada grupo.

A citometria de fluxo para a apoptose

apoptose celular foi induzido por Adiamycin (ADM). A taxa de apoptose de células T24 foi examinado por citometria de fluxo utilizando coloração de anexina V-FITC /PI. Resumidamente, as células T24 foram tratados como acima, em cada grupo, durante 24 h; As células foram então incubadas com a ADM (0,1 mg /ml) durante mais 48 h. Em seguida, as células foram colhidas, lavadas e ressuspensas em PBS. A morte celular apoptótica foi medida por coloração dupla anexina V-FITC e PI usando o kit de detecção de apoptose FITC anexina V-(Beyotime Biotecnologia, Xangai, China) de acordo com as instruções do fabricante. A análise de citometria de fluxo foi realizada imediatamente após a coloração. aquisição e análise de dados foram realizados por citometria de fluxo utilizando o software celular Quest.

análise de Western blot

células T24 foram colocadas em frascos de cultura de 75 mL e foram incubadas a 37 ° C durante 24 h e depois tratou-se, correspondentemente, em cada grupo de incubação 48 h. As suspensões foram lavadas com PBS frio. As células foram então incubadas em RIPA arrefecido com gelo tampão [Tris 1 M (pH 7,4), 5 M de NaCl, 0,5 M de EDTA (pH 8,0), SDS a 10%, 10% DOS, e 10% de NP40] com PMSF inibidor de fresco protease sobre gelo durante 20 min. As células foram raspadas e o lisado foi recolhido num tubo de Eppendorff e centrifugadas a 10.000 rpm a 4 ° C durante 10 min, e os sobrenadantes foram recolhidos, aliquotados, e armazenados a -20 ° C para uso futuro.

foram usadas diluições de Bcl-2 /BAX (12%) e MMP-2 /MMP-9 (7,5%) para o estudo. As proteínas (20 ^ g) foram carregados em geles de 5-15% de SDS-PAGE e transferidos para uma membrana de nitrocelulose (Amersham Biosciences, EUA). As membranas foram embebidas em tampão de bloqueio (5% de leite desnatado) sob temperatura ambiente durante 2 h. As transferências foram lavadas com PBS (com 0,1% de BSA). Para sondar para a MMP-2, MMP-9, Bcl-2, Bax 2h, e β-actina, as membranas foram incubadas à temperatura ambiente com anticorpos relevantes, seguida por anticorpos secundários conjugados de HRP apropriados e detecção ECL. Documentação Análise de Sistemas set (Liuyi Factory, Beijing, China) foi utilizado para a captura de imagem e análise de valores de densidade óptica (DO) (490 nm).

A análise estatística

A análise estatística foi realizada através do SPSS 18,0 software estatístico. Os dados quantitativos foram expressos como a média ± DP. one-way análise de variância com Fishers teste LSD foi utilizado para comparações entre os grupos. O nível de significância foi fixado em p-valor menor que 0,05.

Resultados

Efeitos de CCL21 /CCR7 sobre a proliferação de células T24

Os efeitos da CCL21 /CCR7 em células T24 como representados pelos valores OD estão apresentados na Tabela 1. OD valores foram de 0,211 ± 0,013 no grupo de controlo, 0,216 ± 0,011 no grupo de anticorpos (p 0,05 como comparado com o controlo), 0,248 ± 0,006 no 50 ng /ml de CCRL21 (P 0,05 como comparado com o controlo), 0,290 ± 0,004 para 100 ng /ml de CCRL21 (P 0,01 como comparado com o controlo), e 0,341 ± 0,012 para 200 ng /mL de CCRL21 (P 0,001 quanto comparado com o controlo). CCL21 promoveu a proliferação de células T24 em forma dependente da concentração com 200 ng /mL induzida a maior quantidade de proliferação.

Efeitos de CCL21 /CCR7 na migração e invasão de células T24

os resultados de CCL21 /CCR7 sobre a migração e a invasão de células T24 são apresentados na Fig. 1. As contagens de células para os estudos de migração e invasão são as seguintes: 45,5 ± 11,6 e 28,6 ± 15,0 para o grupo controle, 42,5 ± 13,6 e 30,5 ± 15,2 para o grupo de anticorpos, 72,9 ± 22,4 e 55,5 ± 13,6 para CCRL21 100 ng /grupo mL, 115,7 ± 18,8 102,1 ± 18,0 e para CCRL21 150 ng /mL de grupo, e 178,9 ± 8,4 143,7 ± 24,4 e para CCRL21 grupo de 200 ng /mL. Foram encontradas diferenças significativas de migração celular entre qualquer um dos três grupos CCL21treatment eo grupo controle em ambos os estudos de migração e invasão (p 0,001 para todos); mas, não houve diferença entre o grupo controle eo grupo de anticorpo em qualquer estudo de migração ou o estudo invasão (P 0,05 para ambos). O efeito do tratamento CCL21 /CCR7 na migração de células T24 é com a maior concentração de CCL21 (200 ng /ml), dependente da concentração produziu o maior número de células de migração /invasão. Em geral, um número menor de células T24 foram encontrados no estudo invasão do que a do correspondente estudo de migração.

O ensaio foi realizado usando uma câmara de Transwell revestidas com 30 ul de solução de mistura de Matrigel com cinco grupos diferentes consistindo em controlo do veículo, CCR7 anticorpo 20 ng /ml mais CCL21 50 ng /ml, CCL21 50 ng /ml, CCL21 100 ng /ml, e CCL21 200 ng /ml. Os dados apresentam médias ± DP de quatro expericias independentes.

Efeitos de CCL21 /CCR7 na expressão de MMP-2 e MMP-9 em células T24

resultados de Western blot são apresentados na Fig. 2; Medições quantitativas de MMP-2 e MMP-9 são apresentados na Tabela 2. Foram encontradas diferenças significativas na expressão de MMP-2 e MMP-9 entre os cinco grupos (p 0,05). Em comparação com o grupo de controlo, as expressões de MMP-2 e MMP-9 proteínas foram significativamente aumentados após três diferentes concentrações de tratamento CCL21 (p 0,05 para todos). No entanto, nenhuma diferença foi encontrada em MMP-2 ou MMP-9 entre o grupo controle eo grupo de anticorpo (p 0,05 para ambos)

Pista 1:. Células T24 tratados com o controle do veículo; Pista 2: células T24 tratadas com anticorpo CCR7 20 ng /ml mais CCL21 50 ng /ml; Pista 3: Células T24 tratadas com 50 ng /ml CCL21; Pista 4: Células T24 tratadas com 100 CCL21 ng /ml; e pista 5: Células T24 tratadas com 200 ng CCL21 /ml. Os lisados ​​celulares foram preparados e executados em 5-15% de gel SDS-PAGE a seguir por uma análise de Western blot. Beta-actina foi utilizado como um controlo de carga. Os borrões mostrados são representativos de três experiências independentes.

Efeitos de CCL21 /CCR7 na apoptose em células T24

Efeitos de CCL21 /CCR7 sobre as expressões de Bcl-2 Bax e por transferência de Western são apresentados na Fig. 2 e os valores de OD estão apresentados na Fig. 3. Expressão das proteínas Bcl-21 segue uma tendência crescente enquanto que a expressão do Bax segue uma tendência descendente como a concentração de CCL21 aumenta. Foram encontradas diferenças significativas na expressão de Bcl-2 e Bax entre CCL21 50 ng /grupo ml e CCL21 100 grupo ng /ml (p 0,05 para ambos) e entre CCL21 50 ng /grupo ml e CCL21 200 ng /ml (p 0,05 para ambos), mas não entre CCL21 100 ng /ml e grupo CCL21 200 ng /ml (p = 0,545 para Bcl-2 e p = 0,191 para Bax). Novamente, não houve diferença entre o grupo controle eo grupo de anticorpos tanto para Bcl-2 ou Bax (p 0,05 para ambos).

células T24 foram tratados com o controle do veículo, CCR7 anticorpo 20 ng /ml mais CCL21 50 ng /ml, CCL21 50 ng /ml, CCL21 100 ng /ml, e CCL21 200 ng /ml. Os valores (OD) apresentam médias ± SD de três experiências independentes.

precoce e taxas de apoptose tardia e as taxas totais de morte celular após os tratamentos são apresentados na Tabela 3. As taxas de apoptose inicial, apoptose tardia e as taxas totais de morte celular no grupo de controlo são de 26,4 ± 5,0%, 37,5 ± 2,4% e 63,9 ± 7,1%, respectivamente; ao passo que no grupo de anticorpos é de 25,2 ± 3,8%, 35,6 ± 5,5% e 60,8 ± 9,3%, respectivamente. Não há diferença nas taxas de apoptose foi encontrada em cada fase entre os dois grupos (P 0,05 para todos). As taxas de apoptose precoce, tardia de apoptose e morte celular total caiu após tratamentos CCL21 a 50, 100, e 200 ng /ml. Comparado com o grupo controle, reduções significativas na apoptose celular total foram encontrados em grupos de tratamento CCL21 (p 0,001 para todos os três grupos de tratamento); no entanto, não houve diferença significativa entre os três grupos de tratamento CCL21 em apoptose celular total (p 0,05 para todos). Em comparação com o grupo de controlo, reduções significativas também foram encontrados em células da apoptose precoce em grupos de tratamento CCL21 (p = 0,008 para 200 ng /mL, de 0,001 a 100 ng /ml, e 0,027 para 50 ng /mL); no entanto, mais uma vez, não houve diferença significativa entre os três grupos de tratamento CCL21 em apoptose precoce (p 0,05 para todos).

Discussão

O potencial das células cancerosas de metástase depende de suas interações com fatores homeostáticos incluindo quimiocinas, que não só promovem o crescimento do câncer e sobrevivência celular, mas também a migração e invasão ou metástase. Estudos anteriores demonstraram que as quimiocinas estão envolvidos na progressão e metástase de vários tipos de cancro [2, 4, 5]. CCR7 está envolvido na metástase do câncer para os linfonodos em vários tipos de câncer [7-13]. CCL21 participa na proliferação de células T CD4 +, células mesangiais renais, e várias células cancerosas [19, 24-27]. O nosso estudo mostrou que, pela primeira CCL21 /CCR7 pode aumentar a proliferação de células T24 (Tabela 1), migração e invasão (Fig. 1).

concentração de quimiocina pode ser pelo menos parcialmente responsável pelo desenvolvimento de cancro e metástases [ ,,,0],19, 26]. Como resultado, foram utilizadas três concentrações diferentes de CCL21 no presente estudo e encontrou uma forma dependente da concentração em efeitos CCL21 sobre a proliferação celular T24, migração e invasão. CCL21 pode aumentar fortemente a migração de células T24 e invasão em altas concentrações e, assim, facilitar a metástase do câncer da bexiga. Os nossos resultados são consistentes com estes relatórios anteriores.

A interação das quimiocinas e seus receptores servem como base para a motilidade das células tumorais e migração via provocando polimerização de actina intracelular para criar pseudópodos [28, 29]. Muller et ai descobriram que CCL21 AT100 nM induziu um aumento transitório de 1,6 vezes em actina intracelular flamentous (F-actina) em células de cancro da mama humano em 20 segundos e observou formação pseudopodia distinta após 20 minutos de estimulação com CCL21 [19]. Os resultados do presente estudo com a migração de células T24 e invasão são consistent0020with esses relatórios anteriores. foi observada redução significativa no número de células T24 quando foi utilizado anticorpo de CCR7 em conjunto com CCL21 e que indica o efeito de CCL21 depende da actividade de CCR7. Por outras palavras, pode activar CCL21 CCR7 em primeiro lugar e, em seguida, afectar a migração celular e invasão T24.

moléculas como CCL21 quimioquina estão envolvidos na metástase de cancros, não só através de mediar a migração e a invasão de células cancerosas para os tecidos, mas fornecendo também os microambientes de apoio necessários. In vivo, a migração de células do cancro é muitas vezes retardado com lotes de resistências, como a membrana basal e o tecido conjuntivo circundante [29, 30]. Portanto, para imitar o real em estado vivo, utilizamos transpoço câmara revestida com matrigel como uma barreira física para o presente estudo. MMP-2 e MMP-9 são duas proteínas que estão intimamente associados com a metástase do cancro da bexiga [31-33]. invasão de células de cancro podem exigir a secreção de MMP, tais como MMP-2 e MMP-9 a degradar o Matrigel. No presente estudo, verificou-se que CCL21 poderia aumentar a expressão de MMP-2 e MMP-9 e, assim, melhorar a invasão de células (Fig. 2 e Tabela 2). As MMPs têm um papel importante na invasão de célula de cancro; mas outros factores, tais como interleucinas e E-caderina pode também contribuir para a progressão tumoral e invasão [34-37]. No entanto, CCL21 /CCR7 pode facilitar a invasão de células cancerosas através de aumentar a secreção de MMP e melhorar a motilidade celular.

Usando técnicas radiomarcados, os investigadores encontraram apenas uma pequena porção de células cancerosas radiomarcados em microcirculations tem o potencial de metástase [38] . A sobrevivência das células cancerígenas depende da sua capacidade anti-apoptóticos. Quando as células tumorais deixam seus tecidos originais, eles vão perder alguns, se não todos os fatores homeostáticos que incluem quimiocinas para adesão e apoio; assim, as células são propensas a apoptose. No presente estudo, a capacidade anti-apoptótica de células CCL21 inT24 foram investigados por citometria de fluxo de anexina V coloração-FITC /PI via ADM apoptose induzida. A fosfatidilserina (PS) pode ligar-se especificamente a anexina-V. PI, um agente de coloração nuclear, não pode atravessar da membrana celular normal. Na fase inicial da apoptose, coloração nuclear PI não pode ser detectado como a membrana celular intacta. No entanto, como célula sofre apoptose no meio de fase tardia, vesículas da membrana celular e já não está intacta; assim núcleo pode ser detectada através de coloração de PI

O resultado da citometria de fluxo pode ser dividido em quatro quadrantes:. o quadrante inferior esquerdo com células normais vivas [Anexina-V (-), PI (-)], no quadrante superior direito [Anexina-V (+), PI (+)] com apoptose tardia ou células necróticas, o quadrante inferior direito [Anexina-V (+), PI (-)] com células apoptóticas precoces, e a parte superior esquerda quadrante [Anexina-V (-), PI (+)] com pequenas porções de detritos de células devido a lesão mecânica e apoptose. Assim, a análise da apoptose depende principalmente da apoptose precoce (quadrante inferior direito) e a morte celular total (direita superior + inferiores quadrantes direita) no presente estudo. Os nossos resultados demonstraram redução significativa da apoptose e morte celular com tratamento CCL21 comparação com o controlo (p 0,01); no entanto, não foi encontrada diferença entre o anticorpo CCR7 mais o tratamento CCL21 eo controle (p 0,05). Os resultados indicam que o anticorpo CCR7 poderia antagonizar o efeito de CCL21 na apoptose e morte celular e, assim, a função anti-apoptótica confirmar de CCL21 /CCR7. No entanto, não foi detectada diferença da apoptose entre os três grupos de tratamento (p 0,05). A possível causa poderia ser que CCL21 a 50 ng /mL atingido condição saturar, assim, maiores concentrações não poderia aumentá-lo ainda mais efeito.

família Bcl-2 é encontrado para estar estreitamente relacionado com celulares da apoptose [39-41]. Bcl-2 e Bax são as duas proteínas mais importantes da família Bcl-2 com a Bcl-2 inibindo a apoptose Bax enquanto promovendo apoptose. Estas duas proteínas estão presentes em dímeros, tais como Bcl-2 /Bcl-2 e Bax /Bax. A sobre-regulação da expressão de Bcl-2 conduzirá ao adicional de Bcl-2 para se combinar com o Bax formando Bcl2 /Bax assim inibir a apoptose da célula; enquanto que com a regulação negativa da expressão de Bcl-2, a quantidade da forma combinado de Bcl-2 /Bax e diminuirá, assim, promovem a apoptose de células. No presente estudo, foi investigada a expressão de proteínas Bcl-2 e Bax em células T24 em todos os grupos experimentais, incluindo o controlo. CCL21 poderia aumentar a expressão da proteína Bcl-2, mas a expressão da proteína Bax diminuir os efeitos e exibiu um modo dependente da concentração CCL21 entre 50 ng /mL e 100 ng /ml. Curiosamente, não foi observada diferença significativa na expressão de Bcl-2 e Bax entre CCL21 a 100 ng /mL e 200 ng /ml CCL21 (Bcl-2: p = 0,545; Bax: p = 0,191); a causa pode ser alcançado CCL21 que a uma certa concentração não superior a 100 ng /mL para os máximos efeitos anti-apoptóticas (Fig. 3). O pré-tratamento de anticorpo CCR7 poderia reverter quase completamente o efeito de CCL21 sobre as expressões de Bcl-2 e Bax e apoptose (Fig. 3 e Tabela 3). Isto confirma ainda mais o papel vital de CCR7 sobre os efeitos da CCL21 em células T24

Conclusão

CCL21 /CCR7 promoveu a proliferação de células T24 em um padrão dependente da concentração e melhorou a sua migração e invasão.; estes efeitos podem estar relacionados com o aumento da expressão de MMP-2 e MMP-9. CCL21 /CCR7 tinham actividades anti-apoptóticos em células T24; estas funções podem estar relacionadas com a regulação das proteínas Bcl-2 e Bax. Nossos resultados indicam que CCL21 /CCR7 pode promover o desenvolvimento e metástase do câncer da bexiga.