Abstract

Fundo

Potee (POTE família domínio ankyrin, membro do E ) é um antigénio do cancro do testículo-recentemente identificado que foi encontrado para ser expresso numa ampla variedade de cancros humanos, incluindo os cancros do cólon, da próstata, do pulmão, da mama, dos ovários, e do pâncreas.

Objectivo

para medir os níveis séricos de Potee em pacientes com cancro do pulmão de células não pequenas (NSCLC)-e explorar o significado clínico da Potee em NSCLC

pacientes e Métodos

104. pacientes com NSCLC, 66 pacientes com doença pulmonar benignos e 80 voluntários saudáveis ​​foram incluídos neste estudo a partir de maio de 2013 a fevereiro de 2014. Os níveis séricos de Potee foram medidos utilizando um ensaio imunoenzimático (ELISA). As variáveis ​​numéricas foram registrados como média ± desvio padrão (SD) e analisados ​​por

t

testes independentes. As variáveis ​​categóricas foram calculadas como taxas e foram analisados ​​usando um χ

2 ou teste exato de Fisher. As curvas de sobrevida foram estimados e comparados pelo método de Kaplan-Meier e testes de log rank-.

Resultados

Os níveis séricos de Potee foram significativamente maiores em pacientes com NSCLC do que em pacientes com doença pulmonar benigno e controles saudáveis ​​( significa ± SD [pg /ml], 324,38 ± 13,84 vs 156,93 ± 17,38 e 139,09 ± 15,80,

P Art 0,001), e foram significativamente correlacionados com o estágio TNM. A análise de sobrevida revelou que pacientes com baixa Potee soro teve maior sobrevida livre de progressão (PFS) do que aqueles com Potee soro elevado (

P

= 0,021). Cox análise multivariada indicou que Potee foi um fator prognóstico independente de sobrevida livre de progressão (

P

= 0,009, taxa de risco, 2.440).

Conclusões

Serum nível Potee em pacientes com NSCLC está associada com o estágio TNM e é um fator prognóstico potencial

Citation:. Wang Q, Li X, Ren S, Cheng N, Zhao M, Zhang Y, et al. Níveis (2015) de soro do Câncer-Testículo Antigen Potee e seu significado clínico em Non-Small-Cell Lung Cancer. PLoS ONE 10 (4): e0122792. doi: 10.1371 /journal.pone.0122792

Editor do Academic: William B. Coleman, University of North Carolina School of Medicine, Estados Unidos

Recebido: 16 Outubro, 2014; Aceito: 15 de fevereiro de 2015; Publicação: 10 de abril de 2015

Direitos de autor: © 2015 Wang et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação

Financiamento:. Este estudo foi apoiado por subsídios da National Science Foundation Natural da China (sem 81.401.890 e 81.372.392 não..) eo projecto essencial da Ciência e Tecnologia Comissão de Shanghai Municipal (no. 11JC1411300). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o cancro do pulmão é a principal causa de mortes relacionadas ao câncer em todo o mundo, com câncer de pulmão de células não pequenas-(NSCLC), representando cerca de 80% destes casos [1, 2]. A maioria dos pacientes são diagnosticados em estágio avançado da doença [3]; eles têm pouca perspectiva de tratamento eficaz e curativo. as taxas de sobrevivência de cinco anos é inferior a 15% [4]. Um avanço promissor, com o potencial de melhorar os resultados para pacientes com NSCLC envolve a introdução de biomarcadores validados na gestão clínica. Estes biomarcadores pode ser crucial não só para o diagnóstico precoce, mas também para informar as decisões de tratamento para alcançar intervenções terapêuticas óptimas [5, 6].

testículo Câncer (CT) antígenos são um tipo de proteína que é expressa no adulto normal tecido apenas no testículo, bem como uma variedade de tumores de diferentes origens histológicos. Em vista do seu padrão de expressão e de elevada imunogenicidade, CT antigenss são considerados candidatos muito atraente como biomarcadores e vacinas de cancro [7-9]. Potee (POTE família domínio anquirina, membro E) é um antigénio de testículo cancro recentemente identificado expressa em testículos normais, ovário, e da placenta, e em muitos cancros, incluindo os da próstata, do cólon, do pulmão, da mama, dos ovários e do pâncreas [10 -12]. Nos seres humanos, POTE família de genes consiste em 13 membros altamente homólogos localizados em 8 cromossomas diferentes. Estudos anteriores demonstraram que as moléculas de POTE estão localizadas no citoplasma para a face interna da membrana celular [13]. Potee, um subtipo dominante expressa em muitos tipos de câncer e linhas celulares de cancro [11, 14]. Nosso estudo anterior revelou a expressão diferencial de Potee entre A549 cisplatina-resistente /DDP e suas células A549 parental por análise proteômica [15].

No entanto, as funções e papéis de Potee no câncer de pulmão permanecem obscuros. Neste estudo, nós preliminarmente explorou a relação entre o nível de Potee soro e características clínicas e sobrevida em pacientes com NSCLC.

Materiais e Métodos

Paciente, controles saudáveis ​​e amostras de soro

O sangue periférico foi elaborado a partir de pacientes e doadores saudáveis ​​em Shanghai pulmonar Hospital de maio de 2013 a fevereiro de 2014. Os soros foram obtidos a partir de um estudo de coorte de 250 participantes da seguinte forma: 104 pacientes com CPNPC, incluindo adenocarcinoma, o carcinoma de células escamosas, e anaplásico de grandes células carcinoma; 66 pacientes com doença pulmonar benigno; e 80 dadores saudáveis. Os critérios de inclusão para os pacientes com NSCLC foram os seguintes: (1) NSCLC patologicamente confirmada; (2) idade ≥ 18 anos de idade; (3) não tinha recebido qualquer terapia anti-tumor. O estadiamento do tumor foi determinada de acordo com o sistema de classificação de estadiamento TNM 2009. Os dados demográficos e patológicos, incluindo a idade, sexo e tabagismo, foram coletadas. Os critérios de inclusão para pacientes com doença benigna de pulmão foram as seguintes: (1) sem histórico de câncer; (2) pacientes com doenças pulmonares benignos confirmados pelo patógeno ou a detecção de patologia; (3) o diagnóstico de pacientes com doença benigna pulmonares foram bronquiectasia, doença pulmonar obstrutiva crônica, tuberculose, pneumonia, bronquite crônica e abscesso pulmonar, as características e dados demográficos desses pacientes estão incluídos no S1 Tabela; (4) idade ≥18 anos. Pacientes que não satisfazem os critérios acima mencionados foram excluídos. Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Shanghai pulmonar Ética do Hospital. O consentimento informado foi obtido a partir de cada participante no estudo.

enzyme-linked Immunosorbent Assay

Os níveis séricos de Potee foram determinados por ensaio imunossorvente ligado a enzima (ELISA) utilizando um kit de imunoensaio (Wuhan Huamei Biotech, China; Cat. no.CSB-EL740863 HU) de acordo com o protocolo do fabricante. A densidade óptica (OD) a 450 nm foi medida, e as curvas padrão foram estabelecidas com DO450 como o eixo Y; estas curvas foram usadas para determinar os níveis de expressão da proteína. Os resultados são relatados como a concentração de Potee (pg /mL) na amostra de soro.

Medição de marcadores tumorais no soro comum

marcadores tumorais séricos, incluindo antigénio carcinoeyonmbric (CEA), citoqueratina (CYFRA21 -1) e antigénio de carbohidrato 19-9 (CA19-9) foram determinadas por radioimunoensaio (RIA), utilizando CEA, CYFRA21-1 (CIS bio International) e CA19-9 (China Instituto de Energia Atómica) kits de RIA de acordo com o protocolo do fabricante . Os resultados foram adquirida por 1470 instrumentos contra Wiza RDTM.

Análise Estatística

As análises estatísticas foram realizadas utilizando SPSS 17.0 software (Chicago, IL, EUA) e GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, San Diego, CA, EUA). As variáveis ​​numéricas foram registrados como médias ± DP e analisados ​​utilizando

t

testes independentes. As variáveis ​​categóricas são apresentadas como taxas e foram analisados ​​usando χ

2 ou teste exato de Fisher. Para avaliar o potencial de diagnóstico de Potee, o receptor operando características (ROC) foi plotada usando dados produzidos por análise de regressão logística, ea área sob a curva (AUC) foi calculada. As curvas de sobrevida foram estimados e comparados pelo método de Kaplan-Meier e testes de log rank-. regressão uni Cox foi realizada em cada covariável clínico para examinar a sua influência na sobrevida dos pacientes. modelos multivariados foram baseados em adição passo a passo. A

P

valor 0,05 foi considerado estatisticamente significativo

Resultados

características demográficas dos Todos os participantes do estudo

O nosso estudo de coorte de 250 participantes composto 104. pacientes com NSCLC, 66 pacientes com doença pulmonar benigno, e 80 indivíduos saudáveis. A média de idade foi de 61,3 ± 9,5 anos no grupo de pacientes com NSCLC, 58,5 ± 11,5 anos no grupo de pacientes com doença pulmonar benigno, e 57,9 ± 13,6 anos no grupo de controle saudável (

P Art 0,05). As características básicas de 104 pacientes com NSCLC, 66 pacientes com doença pulmonar benigno, e 80 indivíduos de controle saudáveis ​​estão resumidos na Tabela 1.

Os níveis séricos de Potee em NSCLC pacientes, benignas doença pulmonar Pacientes e Controle Saudável assuntos

Os níveis séricos de Potee foram significativamente maiores em pacientes com NSCLC do que em pacientes com doença pulmonar benignos e controle de indivíduos saudáveis. O nível médio Potee soro foi 324.38 ± 13,84 pg /ml para o grupo de pacientes NSCLC, 156,93 ± 17,38 pg /ml para o grupo doença pulmonar benigno, e 139,09 ± 15,80 pg /ml para o grupo controle saudável (

P

0,001) (Figura 1A). O nível médio Potee soro em pacientes com NSCLC também foi significativamente maior do que a média de 147,15 ± 6,58 pg /ml para todos os participantes não-NSCLC (

P Art 0,001). (Fig 1B)

1A. Os níveis séricos de Potee em pacientes com NSCLC, doença benigna e controlos saudáveis. Nível médio Potee foi 324,38 ± 13,84 pg /ml no grupo NSCLC, 156,93 ± 17,38 pg /ml no grupo doença pulmonar benigno, e 139,09 ± 15,8 no grupo controle (

P Art 0,001). 1B. Os níveis séricos de Potee em pacientes com NSCLC e controles. Nível médio Potee foi 324.38 ± 13,84 pg /ml no grupo NSCLC e 139,09 ± 15,8 pg /ml no grupo controle (

P Art 0,001).

O Potencial de Potee como um biomarcador Tumor sorológico em NSCLC

a análise da curva ROC foi realizado para avaliar o valor de Potee no diagnóstico NSCLC. A curva ROC é reflectir a sensibilidade e especificidade do índice global variável contínua, a área sob a curva maior será a precisão mais elevada é o diagnóstico. A AUC foi 0,793 (95% intervalo de confiança [IC], 0,7-0,9). Nós escolhemos o ponto com maior sensibilidade e especificidade, 205,27 pg /ml, como o valor de corte. Com o valor de corte, o qual foi definido como o valor normal com base no valor médio (mais dois desvios padrão) obtidas a partir de controlos saudáveis, Potee soro alcançada uma sensibilidade de diagnóstico de 68,3% e uma especificidade de 82,9% (figura 2A). Nós também detectados os níveis séricos dos marcadores vulgarmente utilizados sorológicos tumorais (TM), incluindo antigénio carcinoeyonmbric (CEA), antigénio de carbohidrato 19-9 (CA19-9), e citoqueratina (CYFRA21-1) no grupo de NSCLC. As sensibilidades foram 51,0% (CEA), 56,3% (CA19-9), e 60,4% (CYFRA21-1), a especificidade foi de 95,2% (CEA), 94,5% (CA19-9), e 93,8% (CYFRA21-1 ), e a precisão foi de 77,7% (CEA), 79,3% (CA19-9), e 80,6% (CYFRA21-1) (Figura 2B). Entre os 104 doentes com NSCLC, a sensibilidade de detecção combinada de CEA, CA19-9, CYFRA21-1, e Potee foi de 89,3%, que foi obviamente maior do que a sensibilidade de uma única detecção (

P

0,05) .

2A. curva ROC de Potee como um marcador tumoral sorológico em NSCLC. Usando um valor de corte 205.27 pg /ml, a análise ROC revelou uma área sob a curva (AUC) de 0,793 (P

Art 0,01) controles, indicando uma alta sensibilidade e especificidade para diferenciar benigna grupo doença pulmonar e saudáveis a partir de doentes com NSCLC. Figura 2B. valores de diagnóstico da CEA, Cyfra 21-1, CA 19-9 e Potee em N SCLC. CEA, CYEFRA 21-1, CA 19-9 e Potee sensibilidade foram 51,0%, 56,3%, 60,4% e 68,3%, a especificidade foram de 95,2%, 94,5%, 93,8% e 82,9%.

Relação de Potee soro para Características clínicopatológicos

Como mostrado na Tabela 2, o nível Potee soro foi significativamente correlacionada com o estádio TNM. Pacientes em estágios avançados TNM tinham níveis Potee mais elevados do que aqueles com estágios iniciais de câncer de pulmão (

P

= 0,036). No entanto, não foi observada correlação significativa entre o nível Potee soro e outros parâmetros clínico-patológicas, incluindo idade, sexo, história de tabagismo, patologia, ou história familiar.

Associação entre os níveis séricos Potee Nível e eficácia de Platinum-Based quimioterapia

Foram analisados ​​se o nível Potee soro está relacionada com a resposta do tumor à quimioterapia. Entre os 104 pacientes com NSCLC, 76 pacientes estavam em TNM fase III-B-IV e recebeu gibão quimioterapia. Entre os 76 pacientes, 33 pacientes tinham sido tratados com gemcitabina e cisplatina, 23 tinham sido tratados com vinorelbina mais cisplatina, 11 tinham sido tratados com paclitaxel e cisplatina e 9 tinham sido tratados com vinorelbina mais carboplatina. O valor de corte nível sérico Potee de 205,27 pg /ml, com maior sensibilidade e especificidade foi selecionado para categorizar pacientes tão elevado Potee (n = 43) e (n = 33) grupos de baixo Potee. Foram analisadas as respostas dos pacientes à quimioterapia à base de platina (Tabela 3). Para os pacientes com expressão alta Potee (≥205.27 pg /ml), taxa de resposta objectiva (ORR) e taxa de controle da doença (DCR) foram significativamente menores do que para aqueles com baixa expressão Potee ( 205,27 pg /ml) (

P

= 0,023;

P

= 0,043). expressão Potee soro foi fortemente correlacionada negativamente com a resposta dos pacientes à quimioterapia à base de platina.

Associação entre soro Potee Nível e Sobrevivência

Na análise da curva de sobrevida de Kaplan-Meier, o grupo de pacientes com baixa expressão Potee tiveram uma sobrevida significativamente mais longa mediana livre de progressão (PFS; 6,3 meses; 95% CI, 5,494-7,172) do que o grupo com expressão alta Potee (PFS, 4,8 meses; 95% CI, 3,870-5,756 ) (

P

= 0,021) (Fig 3). Como mostrado na Tabela 4, uma análise de riscos proporcionais de Cox foi utilizado para avaliar ainda o potencial de nível de expressão Potee soro como um biomarcador de prognóstico. A análise univariada mostrou que o nível de expressão Potee soro foi associada com o prognóstico (HR, 1.913;

P

= 0,040). No Cox análise de risco proporcional multivariada, nível de expressão Potee baixo foi significativamente associada com mais PFS (HR, 2.440;

P

= 0,009). Como esperado, o estágio da doença foi fortemente associado com PFS mais curtos em ambas as análises univariada e multivariada (

P Art 0,05).

As curvas de sobrevida foram analisadas pelo método de Kaplan-Meier e teste log-rank . Pacientes com níveis elevados Potee tiveram uma sobrevida significativamente mais pobres do que aqueles com níveis baixos Potee (

P

= 0,021).

Discussão

Para o nosso conhecimento este estudo é o primeiro a avaliar a expressão Potee no soro por ELISA para examinar o seu significado clínico em NSCLC. Observou-se que a expressão de Potee no soro foi significativamente maior em pacientes com NSCLC em comparação com pacientes com doença pulmonar benigno e voluntários saudáveis. Além disso, preliminarmente analisados ​​o significado clínico da Potee em pacientes com NSCLC. Níveis de Potee soro foram significativamente correlacionados com o estágio TNM. A análise de sobrevida revelou que os pacientes com níveis séricos baixos Potee teve maior sobrevida livre de progressão (PFS) do que aqueles com níveis elevados Potee. Os níveis de expressão alta Potee foram associados com má resposta à quimioterapia em pacientes com NSCLC. Além disso, a análise multivariada mostrou também que a alta expressão Potee era um fator independente para pior sobrevida em pacientes com NSCLC. Estes resultados sugerem que a expressão Potee pode estar associada com o prognóstico de pacientes com NSCLC e poderia servir como um potencial biomarcador.

Até o momento, poucos estudos anteriores relataram uma associação entre Potee e prognóstico do câncer porque Potee é um CT recém-identificado antigénio. O POTE família de genes é classificada em três grupos: o grupo 1 inclui apenas POTE 8; grupo 2 inclui POTE15, -18, e -21; e grupo 3 inclui POTE2, -14 e -22 [16, 17]. Nos estudos iniciais, as proteínas POTE foram pensados ​​para ser localizado no interior da membrana plasmática e foram classificados como antigénios CT porque são expressos em muitos cancros e alguns tecidos reprodutores normais [16, 17]. Vários estudos anteriores têm relatado papéis Pote em ambas as condições fisiológicas e patológicas, incluindo a estrutura do citoesqueleto [8], vias apoptóticas [11], regulação epigenética da progressão do tumor [18], e diferenciação de linhagem específica de células embrionárias [19]. No entanto, a função de POTE em cancro continua a ser desconhecido. Refield et ai. estudou a distribuição subcelular de todas as proteínas Pote e sua associação com a progressão e metástase de tumores malignos. Eles descobriram que as proteínas POTE bem correlacionados com a progressão maligna e metástase em uma variedade de tecidos e que POTEG e /ou POTEH são cruciais para as células cancerosas de crescer e sobreviver [20]. Liu et al. descobriu que a expressão transiente de Potee POTEF ou induz a apoptose em células HeLa. Estes resultados indicam que a família do gene POTE codifica uma família de proteínas pró-apoptóticas [21]. Yi-Hsiang Huang et al. modificação determinado péptido pode melhorar a imunogenicidade de epitopos POTE para induzir as células T que matam as células de cancro humanas, este resultado sugere que POTE também pode ser um alvo molecular para a imunoterapia do cancro [22].

Nos últimos anos, o pesquisas para antígeno CT fizeram alguns progressos. O padrão de expressão única de antigénio CT faz a tornarem-se candidatos para utilização no diagnóstico precoce e como um marcador de prognóstico. O antigénio MAGE CT foi encontrado em 85% dos casos de NSCLC, 75% de múltiplos casos de mieloma início, e 35% dos casos de cancro da mama precoce [23]. O CT antigénio NY-ESO-1 foi também identificado em 32% dos casos de NSCLC início, 29% dos casos de cancro do esófago, e 23% dos casos carcinoma de células transicionais precoce [23]. Estes antigénios CT podem ser utilizados como biomarcadores para o diagnóstico precoce de tumores. Importante, MAGE pode ser detectado no sangue periférico de pacientes de carcinoma hepotocellular, e os seus níveis de expressão estão intimamente relacionadas com o estado metástases e o prognóstico em doentes com carcinoma hepatocelular [24-26]. Além disso, MAGE, BAGE e GAGE ​​CT antigénio pode ser detectado nas ascites de doentes com cancro do ovário e no fluido cerebrospinal de pacientes com metástases cerebrais de melanoma. Assim, os antigénios CT podem ser utilizados como biomarcadores de metástase de tumor e o prognóstico [27, 28]. Por causa de seu padrão de expressão, antigénios CT são candidatos muito atraentes para terapias imune à base de câncer, e muitos ensaios clínicos estão a testar a sua utilização em pacientes com câncer [9, 29, 30].

No presente estudo , tinha alguns limites. Nosso tamanho estudo de coorte era pequeno; para estabelecer a utilidade clínica de Potee no soro, estudos adicionais deverão ser realizados com grupos maiores. A fim de melhorar a especificidade da curva Potee ROC, consideramos o seguinte vários trabalhos aspecto precisa ser feito: (1) para ampliar o tamanho da amostra para otimizar ainda mais o valor de corte e confirmar nossos resultados; (2) Além disso, o estudo perspectiva deve ser realizada; (3) para tentar a combinação disponível de biomarcadores tumorais séricos. Além disso, também precisamos investigar os mecanismos funcionais de Potee em NSCLC.

Em conclusão, os nossos resultados mostram que Potee é sobre-expresso em NSCLC e que nível Potee no soro é associado com estágio TNM eo prognóstico em pacientes com NSCLC.

Informações de Apoio

Tabela S1. Características e Demografia da benignos doença pulmonar Pacientes

doi: 10.1371. /Journal.pone.0122792.s001

(DOC)

Reconhecimentos

Agradecemos aos nossos voluntários para doação de sangue e nossos colaboradores para a recolha de amostras de sangue e de dados participante.