Abstract

Fundo

seleção adequada do paciente é necessário para terapias específicas que são eficazes apenas em pacientes com alterações genéticas específicas. Nosso objetivo foi definir subgrupos de pacientes com genes motorista candidato em pacientes com cancro do pulmão de células não pequenas.

Métodos

Os pacientes com câncer de pulmão primário submetidos a testes genéticos clínicos em Guangdong Hospital Geral foram inscritos . genes do piloto foram detectados por sequenciação, análise de fusão de alta resolução, qPCR, ou múltiplo PCR e métodos de corrida.

Resultados

524 pacientes foram incluídos neste estudo, e as diferenças em alterações genéticas motorista entre os subgrupos foram analisados ​​com base na histologia e tabagismo. Num subgrupo dos não fumadores com adenocarcinoma, o EGFR foi o gene mais frequentemente alteradas, com uma taxa de mutação de 49,8%, seguido por EML4-ALK (9,3%), PTEN (9,1%), PIK3CA (5,2%), C- Met (4,8%), KRAS (4,5%), STK11 (2,7%), e BRAF (1,9%). Os três genes mais freqüentemente alterada em um subgrupo de fumantes com adenocarcinoma foram EGFR (22,0%), STK11 (19,0%) e KRAS (12,0%). Nós só encontrado EGFR (8,0%), c-Met (2,8%), e PIK3CA (2,6%) alterações no não-fumante com carcinoma de células escamosas (SCC) subgrupo. PTEN (16,1%), STK11 (8,3%), e PIK3CA (7,2%) foram os três genes mais frequentemente enriquecidos em tabagistas com SCC. DDR2 e FGFR2 só apresentou em fumantes com SCC (4,4% e 2,2%, respectivamente). Entre estes quatro subgrupos, as diferenças de EGFR, mutações KRAS e PTEN foram estatisticamente significativas.

Conclusão

As características distintas de alterações no gene do driver em diferentes subgrupos com base no status de histologia e tabagismo foram úteis na definição de pacientes para futuros ensaios clínicos que têm como alvo esses genes. Este estudo também sugere que podemos considerar pacientes com alterações pouco frequentes de genes motorista como tendo doenças raras ou órfãs que devem ser geridos com terapias especiais molecularmente direcionados

Citation:. Um SJ, Chen ZH, Su J, Zhang XC , Zhong WZ, Yang JJ, et al. (2012) Identificação do condutor Enriched Gene alterações em subgrupos de células não pequenas do pulmão pacientes com câncer Baseado em Histologia e tabagismo. PLoS ONE 7 (6): e40109. doi: 10.1371 /journal.pone.0040109

editor: Ming You, Medical College of Wisconsin, Estados Unidos da América

Recebido: 11 de dezembro de 2011; Aceito: 01 de junho de 2012; Publicado: 29 Junho 2012 |

Direitos de autor: © 2012 Uma et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiada por doações do National Natural Science Foundation da China (Nos. 30772531, 81071699, 30871126, 81172090, 81001031 e 81101549), Fundação de Ciência Guangdong Departamento de Tecnologia (2006B60101010 e 2007A032000002), e da Fundação de Pesquisa do Câncer chinês Lung. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o cancro do pulmão é a principal causa de morte por câncer em homens e mulheres nos Estados Unidos e em todo o mundo. Embora vários agentes quimioterápicos foram desenvolvidos no final dos anos 1980 e 1990, os tratamentos como a terapia de platina gibão parecem ter atingido um patamar terapêutico, com uma taxa de resposta objectiva de 30-40% e um tempo médio de sobrevivência de aproximadamente um ano para pacientes com estágio IIIB ou estágio IV da doença [1]. Para melhorar ainda mais os resultados do tratamento, novas estratégias de segmentação anormalidades genómicas moleculares estão sob investigação intensiva.

Várias alterações moleculares são conhecidos por ocorrer em genes que codificam proteínas sinalizadoras críticos para a proliferação celular e sobrevivência. Estes genes foram definidos como genes “driver”. Em adenocarcinoma do pulmão, tais genes do controlador incluem o receptor do factor de crescimento epidérmico (EGFR), KRAS, BRAF, PIK3CA, e EML4-ALK. As mutações nestes genes são responsáveis ​​tanto para a iniciação e manutenção de malignidade [2], [3]. Outros genes de driver foram mais recentemente definida, incluindo STL11 (também conhecido como LKB1), PTEN, DDR2, FGFR2 e [4] – [8]. Ao compreender as funções destes genes motorista, pode ser possível desenvolver terapias específicas para doenças malignas com mutações no gene conhecido de controlador.

inibidores da tirosina quinase (TKI) alvejando EGFR, incluindo gefitinib e erlotinib, tornaram-se o padrão de primeira linha terapêutica para pacientes com câncer de pulmão não-pequenas células avançado (CPNPC) que abrigam mutações EGFR activação [9], [10]. No entanto, quase todos os pacientes, eventualmente, desenvolver resistência a TKI EGFR. Uma série de mecanismos de resistência, incluindo mutação KRAS, EGFR exão 20 mutação T790M e amplificação do gene MET, têm sido relatados. Assim, um perfil molecular abrangente é necessária para entender a sensibilidade e resistência à terapia alvo molecular para câncer de pulmão [11].

Dada a importância da selecção biomarcador para terapias direcionadas, nosso grupo iniciou o Hospital Geral de Guangdong Projeto Lung Cancer Mutation (GGHLCMP). O objetivo deste projeto é explorar o impacto do consumo de tabaco e tipo histológico sobre a incidência de mutações no gene do condutor e para definir subgrupos de pacientes nos quais alterações genéticas motorista candidato são enriquecidos. Aqui nós relatamos em um espectro de genes condutor, incluindo EGFR, KRAS, c-Met, PIK3CA, BRAF, STK11, PTEN, gene de fusão EML4-ALK, DDR2 e FGFR2 em uma população de pacientes chineses com cancro do pulmão primário.

Métodos

h3> Declaração

Um total de 1800 pacientes foram referidos Guangdong general Hospital (GGH) para estudos genômicos entre janeiro de 2007 e dezembro de 2009 (Figura 1). Os critérios de elegibilidade incluíram o seguinte: diagnóstico histológico de câncer de pulmão primário; disponibilidade de dados demográficos, incluindo idade, sexo, tabagismo, histologia e estágio da doença; disponibilidade de dados de sobrevivência; disponibilidade de amostras de tumores para análises genómicas; e prestação de consentimento informado. diagnóstico de câncer de pulmão foi confirmada por um patologista independente. Os dados clínicos foram coletados a partir dos relatos de casos de pacientes do hospital. Não-fumantes foram definidos como pacientes que fumaram 100 cigarros em sua vida; fumantes incluiu antigos e actuais fumadores. Foram excluídos pacientes com outras doenças malignas ou tumores benignos do pulmão. O estudo foi aprovado pelo comitê de ética de Guangdong Hospital Geral. Todos os pacientes forneceram consentimento informado por escrito.

Gene Alterações Detecção

tecidos tumorais biópsias foram congelados em nitrogênio líquido e armazenadas a -70 ° C até análise. Foram avaliados os tecidos antes de detecção genética utilizando coloração HE. As amostras com células tumorais ≥50% foram recrutados para este estudo. 357 As amostras foram obtidas a partir de amostras de tumores ressecados e 167 amostras eram de biópsias. DNA e RNA foram extraídos pelo Aqua-SPIN de tecido /células gDNA Isolamento Mini Kit (Biowatson, Xangai, China) e RNeasy Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA), respectivamente. A integridade e quantidade de ARN e ADN foram avaliados por electroforese em gel e análise termo Manodrap 1000 (Thermo, MA, EUA). ADNc foi sintetizado utilizando um ABI alta capacidade de ADNc reverso Kit de Transcrição com RNase Inhibitor (ABI, CA, EUA). As mutações no EGFR e KRAS foram detectados por sequenciação com base em PCR [12]. mutações PIK3CA e BRAF foram detectados por análise de DNA de fusão de alta resolução [13]. mutações EML4-ALK foram analisados ​​por múltiplos PCR e RACE em cDNA [14]. amplificação de c-Met foi determinada por qPCR no ADN [15]. PTEN (ADNc), STK11 (ADNc), DDR2, e FGFR2 (ADN) mutações foram detectados por sequenciação com base em PCR (Tabela S1). Todos os procedimentos de teste foram previamente descritos nas referências.

Análise Estatística

Alterações entre os diferentes subgrupos estratificados por estado de histologia e tabagismo foram analisados ​​pelo teste exato de Fisher quando apropriado Qui-quadrado e. A análise de sobrevida foi realizada por análise de Kaplan-Meier com um teste de log-rank. análises multivariadas foram realizadas usando o modelo de riscos proporcionais de Cox (Forward: Wald; P = 0,05, entrada; P = 0,10, remoção). Todos os valores de p foram em frente e verso, e P . 0,05 foi assumida como significativa

Resultados

características do paciente

Um total de 524 pacientes elegíveis foram inscritos; as características dos doentes estão resumidos na Tabela 1. O rácio entre homens e mulheres era 2.2:1. A idade média dos pacientes foi de 59,3 anos, variando de 23 a 88 anos de idade. Um total de 292 pacientes foram nunca fumaram (55,7%) Houve mais pacientes com adenocarcinoma (67,6%) do que o carcinoma espinocelular (27,5%). câncer de pulmão operável fase inicial foi responsável por 41% da população do estudo. dados sobre resultados de sobrevivência foram cortadas em 1 de agosto de 2011, e um total de 138 eventos de morte ocorreu.

Incidência de Genes do piloto

As mutações nos exons 18-21 para EGFR, exons 9 e 20 para PIK3CA, exons 11 e 15 para BRAF, exons 1-9 para de PTEN, códons 12, 13, 59, e 60 para KRAS, exons 6, 9,14, 16 e 18 para DDR2, exons 6, 7 e 14 para FGFR2, exões 1-5, para STK11 e variações de fusão EML4-ALK foram detectados (gráficos representativos são indicados nas Figuras S1, S2, S3, S4, S5 e). O ponto de corte para c-Met amplificações de alto nível foi definido como a média + 5SD do grupo de controlo como descrito anteriormente [15].

Como mais de 23 testes foram realizados para os genes neste estudo , algumas amostras não estavam disponíveis em quantidades suficientes para todos os ensaios a serem realizados. Os detalhes de cada gene em cada subgrupo pode ser encontrado na tabela de frequência de alterações no gene condutor. As taxas de alteração dos genes nos subgrupos foram calculados como amostras positivas /detectados. A taxa de mutação do EGFR em NSCLC foi de 28,4% (147/517), PTEN foi de 9,5% (21/220), STK11 foi de 7,9% (8/101), EML4-ALK foi de 6,3% (15/239), KRAS foi 5,4% (27/498), c-Met foi de 4,5% (20/448), PIK3CA foi de 4,4% (20/452), BRAF foi de 1,5% (7/452), DDR2 foi de 1,2% (2/166), e FGFR2 foi de 0,6% (1/165), respectivamente. As características da mutação destes genes foram mostrados na Tabela 2. Foram encontrados 5 pacientes com concomitante EGFR exão 21 L858R e exão 20 mutação, e 3 pacientes com concomitante EGFR exão 21 L858R e exão 19 deleção (Figura 2).

exão 20 + 21, as mutações do exão 20 e 21 do exão apresentado simultaneamente nos mesmos pacientes; Exon19 + 21, as mutações de exon 19 e exon 21 concomitantemente apresentados nos mesmos pacientes.

Um número de pacientes foram encontrados para ter múltiplas alterações genéticas driver (Tabela 3). Um total de 23 pacientes com mutações EGFR teve amplificações c-MET ou mutações de STK11, PIK3CA, BRAF ou PTEN. De particular interesse, um paciente com fusão EML4-ALK tinha uma mutação EGFR ativação, e outro paciente tinha uma mutação PTEN. Outras mutações duplas comuns ocorreram em pacientes com BRAF e KRAS ou BRAF e PIK3CA mutações. Apenas um paciente teve uma mutação tripla de EGFR, PIK3CA e BRAF. EGFR e KRAS, PTEN e KRAS, PIK3CA e PTEN são mutuamente exclusivas neste estudo.

Status tabagismo está associado com motorista Gene Alterações

Foram analisadas as relações entre genes motorista e tabagismo (Tabela 4). taxas de mutação EGFR foram significativamente maiores em não-fumantes do que fumantes [40,9% (119/291) vs. 12,4% (28/226),

X

2

= 50,791,

P

0,0005, teste do qui-quadrado, 2-sided]. taxas de mutação KRAS foram significativamente menores nos não-fumantes do que fumantes [3,6% (10/279) vs. 7,8% (17/219),

X

2

= 4.177,

P

= 0,041]. mutações STK11 e PTEN em não-fumantes foram menores do que em fumantes, mas a diferença era de importância marginal [2,1% (1/48) e 6,3% (7/112) vs. 13,2% (7/53) e 13,0% ( 14/108),

X

2

= 4,274 e 2,87,

P

= 0,062 e 0,09, respectivamente]. mutações DDR2 e FGFR2 foram encontrados para estar presente apenas em fumantes, mas não foram encontradas diferenças significativas. c-Met, PIK3CA, BRAF, e ALK mutações não foram encontrados para ser relacionado a tabagismo.

Diferentes tipos histológicos estão associados a diferentes genes do piloto

Nós analisadas diferenças de motorista mutações genéticas entre os diferentes subtipos histológicos (Tabela 4). As taxas de mutações de EGFR em adenocarcinoma (AC), o carcinoma de células escamosas (SCC), e carcinoma de células grandes (LCC) eram de 40,3% (140/347), 4,4% (6/144), e 3,8% (1/26) , respectivamente (

X

2

= 73,595,

P Art 0,0005, teste do qui-quadrado, 2-sided). taxas de mutação KRAS em AC, SCC, e LCC foram de 7,1% (24/340), 1,5% (2/132) e 3,8% (1/26), respectivamente (

X

2

= 6.124,

P

= 0,039, teste exato de Fisher,). taxas de mutação PTEN em AC, SCC, e LCC foram de 7,0% (8/115), 10,6% (10/94) e 27,3% (3/11), respectivamente (

X

2

= 4.642,

P

= 0,084, teste exato de Fisher). mutações BRAF foram encontrados apenas na AC; DDR2 e FGFR2 mutações só apresentou na SCC, mas não foram encontradas diferenças significativas. As diferenças de c-Met amplificações de alto nível, mutações PIK3CA e STK11, e fusões EML4-ALK em pacientes com diferentes tipos histológicos não atingiu significância estatística. Sobreposições destas alterações apresentadas, principalmente em pacientes com AC, e apenas 2 pacientes com carcinoma epidermóide e 2 pacientes com LCC.

doenças distintas, classificadas por genes driver baseado na histologia combinado com tabagismo.

análises realizadas ainda mais a estratificação com base nos tipos histológicos (AC e SCC) e tabagismo juntos. Os pacientes foram classificados em quatro subgrupos (Figura 3, Tabela 4). No não-fumante AC subgrupo, o EGFR foi o gene mais frequentemente alteradas (49.8%, 114/229), seguido por EML4-ALK de fusão (9,3%, 8/86), em seguida, a mutação de PTEN (9,1%, 7/77) , mutação PIK3CA (5,2%, 11/210), a amplificação de c-Met (4,8%, 10/207), a mutação KRAS (4,5%, 10/223), a mutação STK11 (2,7%, 1/37), mutação BRAF ( 1,9%, 4/210), a mutação DDR2 (0%, 0/71), e mutação FGFR2 (0%, 0/70). No subgrupo fumante AC, o gene mais enriquecido também foi mutação do EGFR (22,0%, 26/118), seguido por mutação STK11 (19,0%, 4/21), então a mutação KRAS (12,0%, 14/117), EML4- fusão ALK (4,5%, 2/44), amplificação de c-Met (4,0%, 4/101), a mutação BRAF (3,1%, 3/97), mutação PTEN (2,6%, 1/38), e PIK3CA (2.1 %, 2/97). Nós só encontrado EGFR (8,0%, 4/50), c-Met (2,8%, 1/36), e PIK3CA (2,6%, 1/38) alterações no não-fumante com o subgrupo SCC. No grupo fumante com SCC, os genes mais frequentemente enriquecidos foram PTEN mutações (16,1%, 10/62), seguida por mutação STK11 (8,3%, 2/24), então a mutação PIK3CA (7,2%, 6/83), EML4 fusão -alq (6,5%, 4/62), amplificação de c-Met (6,3%, 5/80), mutação DDR2 (4,4%, 2/45), mutação KRAS (2,3%, 2/88), mutação FRFR2 ( 2,2%, 1/45), a mutação do EGFR (2,1%, 2/94), e BRAF (0%, 0/94). Entre estes quatro subgrupos, as diferenças de EGFR, KRAS e PTEN mutações foram estatisticamente significativas (X

2 = 92,991, 11,951, 8,628. P = 0,0005, 0,005, e 0,023, respectivamente, teste do qui-quadrado ou teste exato de Fisher quando for apropriado). mutações DDR2 e FGFR2 só apresentou no subgrupo fumante SCC. A taxa de variação desconhecida dos pacientes no SCC subgrupo não-fumante foi aproximadamente de 86,6, o que foi a mais elevada destas quatro subgrupos. A análise de sobrevivência com base nos quatro subgrupos não revelaram quaisquer diferenças entre os subgrupos (Figura 3).

(a), Survival análise de subgrupos, (b) Taxas de variações genéticas motorista de subgrupos. NS com AC: Os pacientes com adenocarcinoma em não-fumantes, S com AC: pacientes com adenocarcinoma em fumantes, NS com SCC: pacientes com carcinoma de células escamosas em não-fumantes, S com SCC:. Pacientes com carcinoma de células escamosas em fumantes

análise de sobrevida de pacientes com Diferentes Gene Recursos do driver

com base em mutações EGFR, classificamos os pacientes em dois subgrupos para a análise de sobrevivência; mutação EGFR grupo positivo e negativo. Não houve diferença no tempo de sobrevivência entre os dois subgrupos para a mutação total de EGFR detectadas população de doentes (

X

2

= 0,957,

P

= 0,328. Figura 4). A análise multivariada de Cox de regressão incluindo a mutação EGFR, estágio, histologia, sexo, tabagismo e idade indicou que apenas o palco foi o fator prognóstico independente dos pacientes (

X

2

= 16,607,

P Art 0,0005, Forward: Wald;

P

= 0,05, entrada;

P

= 0,10, remoção). Foi realizada uma análise mais aprofundada de estratificação com base nos estágios clínicos dos pacientes. Para pacientes em estágio 1, os pacientes com a mutação EGFR positiva teve tempo de sobrevivência mais longa do que os pacientes com negativo EGFR (

X

2

= 3,947,

P

= 0,047, Figura 4).

(a), a análise da sobrevivência de todos os EGFR detectadas pacientes; (B), análise de sobrevida dos pacientes com estadio I. NR:. Não chegou a

Discussão

Para o nosso conhecimento, este é o primeiro estudo a investigar um perfil inteiro de ambos os mais conhecidos, bem como novos genes motorista, tais como PTEN , DDR2 e FGFR2, em pacientes com NSCLC, tendo em conta os diferentes tipos histológicos e tabagismo em pacientes com câncer de pulmão chineses. Diferentes estudos sobre genes motorista pode obter resultados diferentes devido à etnia ou informações clínicas dos pacientes [16] – [22]. O tamanho da amostra grande e complexo a composição da nossa população de pacientes nos permitiu comparar as diferenças entre os subgrupos de pacientes. A maioria dos estudos publicados anteriormente investigando genes motorista só focada em um subgrupo específico de pacientes com CA ou não-fumantes [3], [15], [21]. O Cancer Mutation Consortium Lung patrocinada pela NCI também está interessado em pacientes com adenocarcinoma [23]. A gestão das NSCLC está movendo-se de um padrão de cuidados baseado em palco e performance status para terapias mais individualizadas com base na clínica, histológica e fatores moleculares [24]. Dessa forma, nosso estudo fornece a primeira imagem clara de como os genes motorista em uma população NSCLC pode variar de acordo com a histologia do tumor e tabagismo e encontra subgrupos de pacientes nos quais alterações nesses genes candidatos são mais enriquecidos; estes genes podem, portanto, ser alvo para terapias individualizadas. Além disso, analisamos o impacto das alterações genéticas motorista na sobrevida global dos pacientes.

As características específicas de genes de driver associados a cada subgrupo sugerem que estes subgrupos pode ser de fato doenças diferentes que irão, no futuro, requerem diferentes terapias direcionadas. características epidemiológicas, moleculares e clínico-patológicos demonstraram que NSCLC em nunca fumantes é uma entidade distinta [25]. Nossa análise de subgrupo de NSCLC com base no status histologia e fumar mostrou que a histologia e tabagismo pode influenciar significativamente alterações de genes motorista, especialmente para EGFR, KRAS, STK11 e PTEN. mutações EGFR foram enriquecidos em pacientes não-fumante com AC, KRAS em fumantes com AC, e STK11 e PTEN em fumantes. Apesar de um subtipo de pacientes não-tabagistas com AC tem sido intensamente investigado devido à sua sensibilidade ao EGFR-TKI, subtipos de pacientes tabagistas com AC raramente são estudados. Nosso estudo revelou que as mutações do KRAS e BRAF em fumador pacientes AC foram as mais altas entre estes subtipos. Este estudo também indica que os pacientes não-fumante com CEC tiveram as maiores alterações desconhecidos entre os quatro subgrupos. Nenhuma alteração de KRAS, BRAF, PTEN, ALK, DDR2 e FGFR2 foram encontrados em pacientes não-fumantes com subgrupo SCC. As taxas de alteração de EGFR, c-Met, e PIK3CA foram ligeiramente menor entre estes subtipos. Isso demonstra que os pacientes não-fumantes com SCC pode ter mecanismos patogénicos que diferentes de alterações genéticas motorista conhecidos. Este estudo também revelou que um subtipo de fumantes com SCC teve características especiais como DDR2 e FGFR2 só apresentou neste subgrupo. Com a excepção de BRAF, o que só apresentado em AC, todos os outros genes pode ser encontrado em um subtipo dos fumadores com SCC. mutações PIK3CA e taxas de amplificação c-Met em tabagistas com SCC subtipo foram as mais altas entre este subtipo. Embora o tamanho da amostra foi pequeno LCC, descobrimos que a taxa de mutação PTEN (27,3%) em LCC foi a maior entre todos os subtipos. Emergentes dados revelam que a histologia do tumor pode estar relacionada com os benefícios de quimioterapias específicos ou regimes de terapia-alvo [24]. Estas relações também podem ser parcialmente associadas com as diferenças de genes condutor. A composição destes genes em diferentes subtipos podem, portanto, ser útil para definir variações específicas de genes de driver que poderia aperfeiçoar consideravelmente o tratamento de NSCLC [26].

Os nossos resultados indicam que todos os outros genes são pouco alteradas ( 10%) em doentes com NSCLC chinês, excepto mutações de EGFR (28,4%). mutações do piloto ocorrem em genes que codificam para proteínas de sinalização que são críticas para a proliferação celular e sobrevivência [1]. Juntamente com os nossos resultados, isto implica que um novo método de classificação para pacientes com NSCLC pode ser proposta com base nos biomarcadores moleculares. Pacientes com alterações pouco frequentes de genes do controlador poderia ser considerado como tendo doenças raras ou órfãos e deve ser considerado de forma diferente, a partir de um ponto de vista da investigação e terapia individualizada e no futuro. Uma análise de subgrupo destes genes motorista em nosso estudo foi muito útil para a definição de pacientes com diferentes alterações genéticas motorista para novos ensaios clínicos.

A alteração de alguns genes motorista ter uma pequena diferença de estudos publicados, que pode devido a a população diferente estudados [20], [21]. O estudo relatado que mutações em EGFR e KRAS foram observadas em sete (7%) e 36 (38%) pacientes, respectivamente [22]. Outros relataram que as mutações KRAS foram detectados em 75 dos 395 (19%) e 40 de 233 (17%) pacientes com NSCLC, respectivamente [16], [17]. Curiosamente, embora a taxa de mutação KRAS é diferente, mas a preferência dos pacientes é o mesmo, que é a mutação parece ser mais freqüente em fumantes e AC, os fumantes atuais ou antigos tinham uma elevada frequência de mutações KRAS do que nunca fumaram [18], [19].

Sobreposição mutações de genes motorista revelou a complexidade da terapia individualizada no câncer de pulmão no futuro. EGFR e KRAS foram os dois genes mais importantes estudados por muitos pesquisadores. Nosso estudo descobriu mutação EGFR poderia coincidir com os outros genes detectados exceto KRAS, DDR2 e FGFR2. RAS e vários dos seus efectores a jusante, incluindo BRAF, uma vez que foram mostrados para serem comummente mutado na ampla gama de cancros humanos e estudos biológicos confirmaram que a activação da via RAS promove a iniciação do tumor, progressão e metástase em muitos contextos [28]. Embora em nosso estudo BRAF taxa de mutação em NSCLC é pouco frequente 1,5% (7/452), 2 dos 7 pacientes abrigava EGFR concorrente e mutações BRAF. Isto é diferente do relatado que mutações BRAF são mutuamente exclusivas para EGFR e KRAS mutações [29], [30]. ALK foi encontrado em um paciente com CA para ser concorrente apresentados com mutação EGFR. Isso é diferente com o anterior relataram resultados que as fusões EML4-ALK eram mutuamente exclusivas com mutações no gene EGFR [31], [32]. Acreditamos que mais e mais sobreposições de genes motorista será relatado no futuro, de modo que a prática clínica não só terá de considerar a mutação sensível, mas também precisa considerar a mutação de resistência nos mesmos pacientes para a mesma terapia-alvo ou combinados terapia.

Sobreposição mutações de genes motorista revelou a complexidade da terapia individualizada no câncer de pulmão no futuro. EGFR e KRAS foram os dois genes mais importantes estudados por muitos pesquisadores. Nosso estudo descobriu mutação EGFR poderia coincidir com os outros genes detectados exceto KRAS, DDR2 e FGFR2. RAS e vários dos seus efectores a jusante, incluindo BRAF, uma vez que foram mostrados para serem comummente mutado na ampla gama de cancros humanos e estudos biológicos confirmaram que a activação da via RAS promove a iniciação do tumor, progressão e metástase em muitos contextos [27]. Embora em nosso estudo BRAF taxa de mutação em NSCLC é pouco frequente 1,5% (7/452), 2 dos 7 pacientes abrigava EGFR concorrente e mutações BRAF. Isto é diferente do relatado que mutações BRAF são mutuamente exclusivas para EGFR e KRAS mutações [28], [29]. ALK foi encontrado em um paciente com CA para ser concorrente apresentados com mutação EGFR. Isso é diferente com o anterior relataram resultados que as fusões EML4-ALK eram mutuamente exclusivas com mutações no gene EGFR [30], [31]. Acreditamos que mais e mais sobreposições de genes motorista será relatado no futuro, de modo que a prática clínica não só terá de considerar a mutação sensível, mas também precisa considerar a mutação de resistência nos mesmos pacientes para a mesma terapia-alvo ou combinados terapia.

Analisamos o significado prognóstico destes subgrupos e alterações genéticas motorista. Nós não encontrou qualquer diferença na sobrevida global entre estes subgrupos com base no status de histologia e tabagismo. Nosso estudo e outro estudo indicou que a mutação EGFR em fase pacientes I pode ser um biomarcador prognóstico favorável [32]. Estes genes motorista pode, portanto, ser usados ​​como biomarcadores preditivos se compostos especiais atingir estes genes são encontrados.

Nossos resultados podem ser ligeiramente distorcida devido à muito baixa taxa de variação da maioria dos genes examinados, o pequeno tamanho da amostra de alguns subgrupos, os diferentes métodos de detecção, os diferentes tamanhos de amostra de diferentes genes, e as análises repetidas das mesmas amostras para diferentes genes. Como todas as amostras de pacientes são verdadeiramente precioso, um método de alto rendimento para a detecção de alterações genéticas motorista precisa ser estabelecido o mais rapidamente possível.

Em resumo, nosso estudo demonstra que os subtipos de NSCLC definidos pelo estatuto histologia e tabagismo parecem como entidades patológicas distintas, com alterações genéticas driver específico e pode ser considerado doenças diferentes. Pacientes com alterações pouco frequentes de genes motorista a entender que estas são doenças raras ou órfãs que devem ser tratados de um ponto de vista diferente no futuro. Características de subgrupos caracterizados pode ajudar a selecionar pacientes com alterações específicas de genes motorista para futuros ensaios clínicos e estudos de terapia individualizada.

Informações de Apoio

Figura S1.

gráficos mutação representativos de BRAF e PIK3CA.

doi: 10.1371 /journal.pone.0040109.s001

(TIF)

Figura S2.

mutação gráficos representativos de EGFR.

doi: 10.1371 /journal.pone.0040109.s002

(TIF)

Figura S3.

gráficos mutação representativos de KRAS e FGFR2.

doi: 10.1371 /journal.pone.0040109.s003

(TIF)

Figura S4.

gráficos mutação representativos de DDR2.

doi: 10.1371 /journal.pone.0040109.s004

(TIF)

Figura S5.

gráficos mutação representativos de STK11 e PTEN.

doi: 10.1371 /journal.pone.0040109.s005

(TIF)

Tabela S1. sequência

Primer utilizado no estudo

doi:. 10.1371 /journal.pone.0040109.s006

(DOC)

Reconhecimentos

Queremos agradecer Drs. Hong-Yan Tang, de Hong-Sui Wu, Wei-bang Guo e Shi-Liang Chen por sua assistência com recolha de amostras e de DNA e extração de RNA.