Abstract

Aim

Para examinar expressão LMP10 e seu possível impacto sobre o resultado clínico em papilomavírus humano (HPV) tonsilar positivo e HPV-negativos e base de carcinoma de células escamosas de língua (TSCC e BOTSCC).

Fundo

Resultado é melhor em TSCC HPV-positivos e BOTSCC comparação com correspondentes tumores HPV-negativos, com cerca de 80% vs. 40% de sobrevida livre de doença em 5 anos (DFS ) com o tratamento menos agressivo do que chemoradiotherapy de hoje. Uma vez que o tratamento actual muitas vezes resulta em efeitos secundários nocivos, menos terapia intensiva, com a sobrevivência prolongada paciente seria uma alternativa atraente. No entanto, outros marcadores em conjunto com o estatuto de HPV são necessárias para selecionar os pacientes e para esta expressão finalidade LMP10 é investigado aqui, em paralelo ao status de HPV e o resultado clínico.

Materiais e Métodos

De 385 pacientes diagnosticados entre 2000 e 2007 no Hospital Universitário Karolinska, 278 formalina parafina TSCC fixa e biópsias BOTSCC, com o estatuto de DNA HPV conhecidos, foram testados para LMP10 expressão nuclear e citoplasmática (fração de células positivas e intensidade de coloração). Os dados foram então correlacionados com o resultado clínico.

Resultados

Um ausentes /baixo em comparação com a alta fração nuclear moderada /LMP10 de células positivas foi correlacionada a uma melhor de 3 anos DFS na HPV -positivo grupo de pacientes (log-rank p = 0,005), mas não no grupo de HPV-negativo. No grupo de HPV-negativos de pacientes, em contraste com o grupo de HPV-positivo, /fracção citoplasmática alta LMP10 moderado e fraco moderado /elevado LMP10 intensidade citoplasmática e /ou correlacionados com um melhor de 3 anos DFS (p = 0,003 e p = 0,001) e sobrevivência de 3 anos global (p = 0,001 e 0,009).

expressão nuclear Conclusão

LMP10 no grupo de HPV-positivo e expressão citoplasmática LMP10 no grupo de HPV-negativos de pacientes correlacionada com melhor resultado clínico

Citation:. Tertipis N, Haeggblom L, Nordfors C, Grün N, Näsman A, Vlastos A, et al. (2014) Correlação de LMP10 Expressão e o resultado clínico em Papilomavírus Humano (HPV) positivo e HPV-negativo tonsilar e da Base de câncer de língua. PLoS ONE 9 (4): e95624. doi: 10.1371 /journal.pone.0095624

editor: Anthony WI. Lo, da Universidade Chinesa de Hong Kong, Hong Kong

Recebido: 07 de fevereiro de 2014; Aceito: 27 de março de 2014; Publicação: 21 de abril de 2014

Direitos de autor: © 2014 Tertipis et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. O sueco Fundação do câncer 120.417; O Swedish Medical Research Council K2011-56X-15282-07-06; O cancro do Stockholm Fundação 121043; Henning e Ida Perssons Foundation; Karolinska Institutet 2013fobi37387; O Conselho de Estocolmo County 520.007; O Fundo Jubileu Rei Gustaf V; A Fundação do Câncer e Alergia. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

Conflito de interesses:. Co-autor Torbjörn Ramqvist é membro do Conselho Editorial PLOS ONE. Isto não altera a nossa adesão a PLOS ONE políticas e critérios editoriais.

Introdução

Em 2007, a Agência Internacional para Pesquisa do Câncer (IARC) reconheceu o vírus do papiloma humano (HPV) como um fator de risco para O carcinoma de células escamosas da orofaringe (OPSCC) com base nos dados por outros nós e [1], [2], [3], [4]. Além disso, OPSCC HPV-positivos, com tonsilar e base de câncer de células escamosas de língua (TSCC e BOTSCC) representando 80% dos casos, tem um prognóstico melhor em comparação com os tumores HPV-negativos correspondentes (80% vs. 40% -60 % 3 anos de sobrevida livre de doença (DFS) [1], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12]. em paralelo com um aumento recente na incidência de HPV-positivos CCEO em muitos países, terapia curativa para a cabeça e carcinoma de células escamosas do pescoço (CECP), incluindo OPSCC, tornou-se mais agressivo, com por exemplo quimio-radioterapia resultando em mais efeitos adversos graves [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22], [23], [24] . o tratamento menos agressivo provavelmente seria suficiente para a maioria dos pacientes com TSCC HPV-positivo e BOTSCC, em que o HPV é mais vulgarmente encontrados e em que o HPV tem o maior impacto na sobrevivência [25]. no entanto, antes da redução gradual do tratamento, outros marcadores em combinação com o HPV estatuto seria de uso para selecionar pacientes com TSCC HPV-positivos e BOTSCC com uma resposta favorável muito provável que a terapia [26], [27], [28], [29], [30], [31], [32] . Estudos recentes identificaram alguns marcadores, por exemplo, ausentes /baixa HLA de classe I ou CD44 expressão intensidade, ou alta CD8 + tumor infiltrando linfócitos (TIL) conta em TSCC HPV-positivos e BOTSCC, que todos mostraram-se fatores prognósticos favoráveis ​​e indicam uma probabilidade de 95-100% de doença em 5 anos sobrevida específica [26], [27], [28], [29], [30], [31], [32]. Infelizmente, os biomarcadores acima reconhecem apenas uma fração de todos os pacientes com uma boa probabilidade de reagir bem ao tratamento e para que os biomarcadores adicionais para os acima são necessários.

LMP10 (proteína de baixo peso molecular 10) é um beta subunidade de proteassoma 20S, identificado como uma unidade indutível terceiro IFN-g por Nandi et al 2006 [33]. Juntamente com LMP2 e LMP7, LMP10 construir o chamado atuação immunoproteasome na resposta imune intensificada. Como um componente da maquinaria de processamento de antigénios (APM), LMP10 está implicada na via de péptido de corte durante a apresentação do péptido pelas moléculas HLA. Defeitos em diferentes componentes APM têm sido encontrados em muitos tumores e demonstraram correlação com os resultados clínicos dos pacientes [34], [35], [36], [37].

Neste estudo, foi, por conseguinte, examinado para expressão LMP10 em TSCC HPV-positivos e HPV-negativo e BOTSCC, em 278 pacientes diagnosticados entre 2000-2007 no Hospital Universitário Karolinska, e qualquer correlação de expressão LMP10 para a sobrevivência.

pacientes, Materiais e Métodos

Ética Declaração

o estudo foi realizado de acordo com as permissões éticas 2005 /431-31 /4, 2005 /1330-32 e 2009 /1278-31 /4 do Comitê de Ética Regional no Instituto Karolinska, Estocolmo, Suécia. consentimento informado por escrito foi obtido de todos os participantes no estudo

Pacientes e biópsias

Durante 2000-2007, 385 pacientes diagnosticados com TSCC e BOTSCC (definidos como códigos CID-10:. C09, C01 0,9 respectivamente) no Hospital Universitário Karolinska, foram identificados através do Registro de Câncer Sueco. Destes, 278 pacientes, com biópsias pré-tratamento de diagnóstico, previamente testados para DNA de HPV e com material suficiente, foram incluídos neste estudo [27]. Os 258 pacientes tratados com finalidade curativa foram então compreendida na análise de sobrevivência. A radioterapia convencional (RT) (2,0 Gy /dia, para 6,5-7 semanas, a dose total: 68 Gy) ou acelerada RT (1,1 + 2,0 Gy /dia durante 4,5 semanas, a dose total: 68 Gy) foi dada a 192/258 ( 74,4%) dos pacientes, enquanto 66/258 (25,6%) pacientes também tinha a quimioterapia de indução e concomitante RT. radiação intersticial (Braquiterapia) também foi dada a alguns pacientes (78 Gy totalmente). Pacientes com doença nodal foram submetidos a esvaziamento cervical 6-8 semanas após o término da RT. Os pacientes foram acompanhados a cada 3 meses para os primeiros 2 anos, e a cada 6 meses durante o 3º ano, e seus dados de sobrevivência foram obtidas a partir dos prontuários dos pacientes. O estudo foi realizado de acordo com as permissões éticas 2005 /431-31 /4,.

Análise HPV 2005 /1330-32 e 2009 /1278-31 /4 do Comitê de Ética Regional no Instituto Karolinska, de Estocolmo, Suécia

ADN de HPV de tipos de HPV 27 e beta-globina foi ensaiada por um ensaio multiplex baseadas em esferas num instrumento Magpix (Luminex Corporation) como anteriormente descrito [30].

a imuno-histoquímica

em breve parafina fixadas com formalina, embebidos (FFPE) lâminas da biópsia do tumor (4 uM) foram de-parafinado em xileno e re-hidratadas em etanol de concentrações decrescentes. Em seguida foram aquecidos em tampão de citrato (pH 6,0) para a recuperação de antigénio. Locais não específicos foram bloqueados com soro de cavalo a 1,5% diluído em solução salina tamponada com fosfato (PBS). As secções de parafina foram incubadas durante a noite a + 8 ° C com o anticorpo primário, MECL-1 C-2 (anticorpo anti-LMP10 da Santa Cruz Biotechnology), numa câmara húmida, seguido pela aplicação de anticorpo secundário e um kit padrão ABC-HRP para a detecção de antigénio . O cromogénio-3′-diaminobenzydine (DAB) foi usado para visualização. Hematoxilina foi aplicado para contracoloração seguido por desidratação em etanol de concentrações crescentes e xileno.

Avaliação da imuno-histoquímica Coloração

LMP10 coloração citoplasmática e nuclear, incluindo os controlos positivos e negativos (Figura 1), foi avaliada por dois investigadores independentes, cegos para os dados e os resultados clínicos, que semelhante ao descrito anteriormente [32]. A fracção de células coradas para LMP10 malignas no núcleo e no citoplasma foi avaliada semi-quantitativamente separadamente em 4 classes de percentagens de células de tumor coradas: 0 (0%), 1 (1-25%), 2 (26-75% ) ou 3 (76-100%). A intensidade da coloração foi classificada separadamente e avaliados como coloração ausente, fraco, moderado, e forte. A intensidade de coloração foi definida através da comparação da intensidade da coloração nas células malignas, com a coloração de controlos internos (tecido linfóide normal) por lote. No minoria de casos em que a coloração dentro da mesma amostra não foi ainda, a intensidade da maioria das células foi utilizada na análise. A coloração e avaliação de antigénios HLA classe I foram realizados nas mesmas amostras de tumor em dois estudos anteriores como descrito noutro local [27], [28]

(A):. Expressão citoplasmática fraca /moderada de LMP10; (B): expressão moderada /alta nuclear e ausente citoplasmática de LMP10; (C): nuclear LMP10 Ausente ou indetectável e expressão citoplasmática; (D): nuclear moderado e expressão citoplasmática de LMP10. Ampliação 400X.

Análise Estatística

Ambas as características do paciente e dados categóricos foram analisados ​​utilizando a praça-teste Chi ou, para a comparação dos valores médios, o teste t de Student. Foram relatados dois de cauda valores p (nível de significância de 5%) para todas as análises. A sobrevivência foi medido em dias de diagnóstico até que um evento ocorreu, ou até 3 anos após o diagnóstico, quando os pacientes foram censurados. Morte devido a qualquer causa (evento) foi incluída na definição de sobrevida global (OS), enquanto apenas a recorrência da doença (TSCC ou BOTSCC) foi utilizado para o cálculo da sobrevida livre de doença (DFS). Notavelmente, a morte de pacientes sem qualquer recorrência antes foi censurado no dia 0 no cálculo DFS. Kaplan-Meier foi utilizado para DFS e OS, e as diferenças na sobrevivência dos pacientes foram testados pelo teste de log-rank. O modelo de riscos proporcionais de Cox foi utilizado para o cálculo das taxas de risco ajustadas e não ajustadas (horas). Todos os cálculos e análises foram realizadas utilizando IBM Corp., SPSS Statistics, versão 21.0

Resultados

Pacientes, Tumor Características e HPV

As características dos 278 pacientes, 195. (70%) com TSCC e 83 (30%) com BOTSCC e os seus tumores são mostrados na Tabela 1. no total, 207/278 (74%) dos tumores eram HPV-positivo. Os pacientes com tumores HPV-positivos eram mais jovens (média e mediana de 60 anos de idade) do que aqueles com tumores HPV-negativo (média e mediana de idade de 64 e 62 anos, respectivamente) (P 0,001) (Tabela 1, e dados não mostrados). No total, 258/278 (92,8%) pacientes receberam tratamento com finalidade curativa (Tabela 1), 199/207 (96%) dos pacientes com tumores HPV-positivos (idade média de 60 anos), e 59/71 (83%) daqueles com tumores HPV-negativos (idade mediana de 62 anos). Apenas os 258 pacientes tratados com intenção curativa foram incluídos na análise de 3 anos DFS e OS.

LMP10 Expressão e HPV em TSCC e BOTSCC

LMP10 expressão nuclear e citoplasmática foi avaliada para todos os 278 pacientes, e é exemplificado na Figura 1. LMP10 expressão nuclear não mostraram qualquer diferença significativa entre os grupos e TSCC BOTSCC, nem no que diz respeito à fracção de células positivas nem com a intensidade da coloração (P = 0,115 e P = 0,313, respectivamente, Tabela 2). No entanto, a fracção de células positivas citoplasmáticos LMP10 era relativamente mais elevada no HPV-positiva, em comparação com o grupo de HPV-negativo (p = 0,033), ao passo que não houve diferença significativa em LMP10 coloração intensidade citoplasmática entre os grupos (p = 0,211, tabela 2).

LMP10 nuclear coloração e Estado HPV em correlação com a evolução clínica

LMP10 expressão nuclear foi avaliada tanto para a fração de células positivas no núcleo, e pela intensidade de coloração nuclear, e foi correlacionada com a sobrevivência dos 258 pacientes tratados com intenção curativa (ilustrado como curvas de Kaplan-Meier nas Figuras 2 e 3, respectivamente)

a e D:. DFS (a) e oS (D ) para TSCC e BOTSCC independentemente do estatuto de HPV do tumor. B e E: DFS (B) e OS (E) de pacientes com TSCC HPV-positivo e BOTSCC. C e F:. DFS (C) e OS (F) de pacientes com TSCC HPV-negativo e BOTSCC

A e D: DFS (A) e OS (D) para a TSCC e BOTSCC independentemente do estatuto de HPV do tumor. B e E: DFS (B) e OS (E) de pacientes com TSCC HPV-positivo e BOTSCC. C e F:. DFS (C) e OS (F) de pacientes com TSCC HPV-negativo e BOTSCC

Um ausentes /baixo (≤25%), em comparação com uma moderada /alta ( 26-100%), fração de LMP10 células positivas nucleares correlacionados com uma melhor de 3 anos DFS em todo o grupo de pacientes, e para pacientes com tumores HPV-positivos, mas não entre os pacientes com tumores HPV-negativos (teste log-rank , p = 0,002, p = 0,005 e p = 0,688, respectivamente) (Figura 2 A-C). Houve no entanto não houve diferença significativa em SO 3 anos, quando se comparam os parâmetros semelhantes, para todo o grupo, o HPV-positivo e os grupos de HPV-negativo (teste log-rank, p = 0,115, p = 0,158 e 0,561, respectivamente) ( Figura 2 D-F).

um ausente, em comparação com fraca /moderada /forte (presente), LMP10 coloração nuclear intensidade foi correlacionada com uma melhor de 3 anos DFS para a totalidade do grupo (P = 0,01) e o grupo de HPV-positiva (p = 0,037), mas não no grupo de HPV-negativo (p = 0,473) (Figura 3A-C). Para OS 3 anos isto só foi observada para todo o grupo de pacientes (p = 0,014) (Figura 3 D).

A possível influência de expressão nuclear LMP10 bem como LMP10 coloração nuclear foi prosseguido intensidade separadamente para os grupos HPV-positivos e HPV-negativos.

a análise de Cox-regressão multivariada foi realizada para pacientes com HPV-positivos e HPV-negativos tumores separadamente, incluindo a fração de LMP10 células positivas nucleares ou LMP10 intensidade nuclear, idade e fase do tumor, no que diz respeito ao DFS-3 anos e OS 3-ano. Para o grupo de HPV-positiva uma fracção ausente /baixo, em comparação com uma alta fracção moderada /de células positivas LMP10 era ainda um determinante de uma melhor de 3 anos DFS (p = 0,027) (Tabela 3), mas não a idade ou estágio, (p = 0,079 e p = 0,744) (dados não mostrados). Além disso, nenhum destes parâmetros foram determinantes de SO 3 anos, com excepção para a idade (p = 0,006, dados não apresentados) (Tabela 3). LMP10 intensidade nuclear coloração não atingiu significância estatística para qualquer DFS de 3 anos ou OS 3 anos (Tabela 3). A análise correspondente para o grupo de HPV-negativo sugeriu que a expressão LMP10 nuclear não tiveram impacto no resultado clínico neste grupo (de 3 anos DFS e 3 anos OS) (Tabela 3).

LMP10 citoplasmática coloração e HPV Estado em correlação com a evolução clínica

LMP10 expressão citoplasmática foi avaliada tanto para a fração de células positivas e intensidade da coloração e foi correlacionada com a sobrevivência para os 258 pacientes tratados com intenção curativa (ilustrado como Kaplan-Meier curvas nas Figuras 4 e 5, respectivamente)

a e D:. DFS (a) e oS (D) para a TSCC e BOTSCC independentemente do estatuto HPV do tumor. B e E: DFS (B) e OS (E) de pacientes com TSCC HPV-positivo e BOTSCC. C e F:. DFS (C) e OS (F) de pacientes com TSCC HPV-negativo e BOTSCC

A e D: DFS (A) e OS (D) para a TSCC e BOTSCC independentemente do estatuto de HPV do tumor. B e E: DFS (B) e OS (E) de pacientes com TSCC HPV-positivo e BOTSCC. C e F:. DFS (C) e OS (F) de pacientes com TSCC HPV-negativo e BOTSCC

A médio /alto em comparação com um ausente /baixa fração de células positivas citoplasmáticos LMP10 correlacionados para uma melhor de 3 anos DFS para pacientes com tumores HPV-negativa, mas não para todo o grupo de pacientes, nem para os doentes com tumores HPV-positivo, (-log rank de teste, p = 0,003, p = 0,488 e p = 0,086 , respectivamente (Figura 4 a-C). para a 3 anos oS o correlação correspondente foi significativo tanto para HPV-negativo e todo o grupo, mas não para o grupo de HPV-positivo (teste log-rank, p = 0,001, p . 0,001 e p = 0,159, respectivamente), (Figura 4 D-F)

fraca /moderada /alta (presente) LMP10 coloração intensidade citoplasmática, em comparação com coloração LMP10 ausente foi correlacionada a uma melhor de 3 anos DFS para pacientes com tumores HPV-negativa, mas não para a totalidade do grupo ou para pacientes com tumores HPV-positivos (-log Rank p = 0,001, p = 0,219 e 0,368, respectivamente) (Figura 5 a-C). para 3-ano oS o correlação correspondente foi significativo tanto para HPV-negativo e todo o grupo, mas não para o grupo de HPV-positivo (-log Rank p = 0,009, p = 0,01 e p = 0,334, respectivamente (Figura 5 D -F).

a possível influência de expressão citoplasmática LMP10 foi perseguido separadamente para os grupos HPV-negativos HPV-positivos e (Tabela 3). Para que uma análise de regressão de Cox-multivariada foi realizada em pacientes com tumores HPV-positivos e HPV-negativas, incluindo a fracção de células positivas LMP10 citoplasmáticos, idade e estado, no que diz respeito a 3-ano DFS e OS 3-ano. A análise foi realizada por correspondentes LMP10 intensidade citoplasmática. Para pacientes com tumores HPV-negativo, tanto uma fracção elevada moderada /de células positivas citoplasmáticos LMP10, e a presença de coloração citoplasmática LMP10 foi correlacionada com uma melhor de 3 anos DFS (P = 0,014 e P = 0,006, respectivamente) (Tabela 3 ). Os valores correspondentes para 3 anos OS foram p = 0,010 e p = 0,051, respectivamente (Tabela 3). Idade e fase não atingiu significância estatística na análise para os pacientes com tumores HPV-negativo (dados não mostrados).

A análise correspondente para o grupo de HPV-positivo sugeriu que a expressão citoplasmática LMP10 não teve nenhum impacto sobre os resultados clínicos (3 anos DFS e 3 anos OS) (Tabela 3).

Expression LMP10, HLA Classe I Expressão e Estado HPV em correlação com a evolução clínica

em estudos recentes que demonstram que expressão ausente ou baixo HLA de classe I foi correlacionada a uma melhor sobrevida em pacientes com TSCC HPV-positivos e BOTSCC, enquanto o oposto foi o caso de pacientes com TSCC HPV-negativo e BOTSCC [27], [28]. Para investigar se a correlação de expressão LMP10 prevê sobrevivência independente da expressão do HLA de classe I ou não, analisa dois multivariada de Cox-regressão em relação à 3-ano DFS foram realizados, com dados de classe I de HLA obtidos a partir de Näsman et al [27].

na primeira análise, TSCC HPV-positivos e BOTSCC foram examinados e a análise incluiu a fração de LMP10 células positivas nucleares, idade, estágio e de HLA de classe I expressão ensaiada como intensidade da HCA2-coloração. Conforme apresentado na Tabela 4, tanto LMP10 e intensidade HCA2 foram preditores independentes de 3 anos DFS.

Na segunda análise, TSCC HPV-negativo e BOTSCC foram estudadas e a análise contida a fração de LMP10 células positivas citoplasmáticos, idade, fase e a fracção de células positivas para HLA de classe I ensaiado por HCA2-coloração. Conforme apresentado na Tabela 4, tanto a fração de LMP10 e células positivas HCA2 foram preditores independentes de 3 anos DFS.

Discussão

O presente estudo investigou a expressão LMP10 tanto nos compartimentos nucleares e citoplasmáticos , em relação ao status de HPV e o resultado clínico em 195 TSCC e 83 casos BOTSCC. expressão nuclear e citoplasmática da LMP10, incluindo tanto a fracção de células positivas e a intensidade de coloração foi semelhante em tumores HPV-positivos e HPV-negativos, excepto para a maior fracção de células positivas LMP10 citoplasmáticos do grupo de HPV-positivo.

além disso, uma baixa fracção ausente /de células positivas LMP10 no núcleo, bem como ausente intensidade da coloração nuclear correlacionados com um melhor de 3 anos DFS para pacientes com tumores HPV-positivos, mas não para aqueles com tumores HPV-negativo . O inverso foi encontrado para a coloração LMP10 citoplasmático, em que uma fracção elevada moderada /de células positivas e fraca /moderada alta intensidade /foi correlacionada com melhor de 3 anos DFS e o sistema operativo no HPV-negativa, mas não no grupo de HPV-positivo.

a razão para a diferença em relação à coloração LMP10 nuclear e citoplasmática e sobrevivência para os grupos de HPV-positivos e HPV-negativas não é óbvia. Em estudos anteriores LMP10 expressão citoplasmática foi avaliada em bexiga e cancro esofágico, tanto para a fracção de células positivas e a intensidade da coloração, mas não foi mostrado para ter qualquer impacto prognóstico [34], [35], [37]. No entanto, nestes estudos, não houve análise separada de expressão nuclear e citoplasmática. Neste estudo, avaliação e análise de coloração nuclear e citoplasmática forneceu informações adicionais.

Para o nosso conhecimento não há estudos anteriores sobre a expressão LMP10 em relação à sobrevida para CECP. Meissner

et al.

Demonstrou uma correlação com a sobrevivência em HNSCC tanto para LMP2 e LMP7 [38] e em um estudo recente, a expressão de LMP7 também foi correlacionada com a sobrevivência no cancro salivar [39]. No entanto, os tumores não foram analisados ​​quanto à presença de HPV em qualquer um destes estudos.

A verificação de que uma expressão baixa LMP10 nuclear correlacionados com um melhor de 3 anos DFS no grupo de HPV-positivos, enquanto que um correspondente alta expressão LMP10 citoplasmática correlacionados com uma melhor de 3 anos DFS no grupo de HPV-negativos sugere várias implicações. Em primeiro lugar, o nosso estudo sugere que LMP10 poderia ser usado como um marcador de prognóstico para pacientes com tumores tanto HPV-positivo ou HPV-negativos. Temos anteriormente sido capazes de mostrar que um biomarcador, na mesma via, a expressão de HLA de classe I, pode ser usado de uma forma diferencial para prever o resultado clínico em tumores HPV-positivos e HPV-negativos. Assim, uma molécula de HLA de classe baixa eu expressão ausente /é um factor de prognóstico positivo para doentes com tumores HPV-positivos, enquanto que o oposto é verdadeiro para pacientes com tumores HPV-negativo, onde uma elevada HLA de classe I de expressão é de benefício [27]. Assim, tanto no que diz respeito ao HLA de classe I e de expressão LMP10 em relação à sobrevida, houve diferenças entre os tumores HPV-positivos e HPV-negativos, embora estes foram mais pronunciados para HLA de classe I. Notavelmente, como demonstrado pela análise multivariada na Tabela 4, expressão de LMP10 e HLA de classe I foram preditores independentes de sobrevivência para ambos os tumores HPV-positivos e HPV-negativos. Os mecanismos subjacentes à regulação da LMP10 e HLA de classe I expressão nestes tumores deve, assim, pelo menos em parte, ser separada.

Não é conhecido se a presença do HPV pode influenciar a expressão LMP10 directamente, e mesmo que esta é o caso, o mecanismo por trás desta regulação não é conhecido. Tem sido demonstrado que o HPV E5 tem o potencial para regular negativamente a expressão de HLA de classe I [40]. Se E5 também afeta a expressão de LMP10 tem, a nosso conhecimento, não foi investigada. Tem sido demonstrado que os papilomavírus humanos têm a capacidade de regular a HLA de classe I de cadeia pesada, bem como alguns dos componentes de processamento do antigénio máquinas no nível transcricional [41]. No entanto, a regulação da transcrição de, por exemplo o promotor LMP2 verificou-se ser dependente da proteína E7 de HPV 18 e o HPV 6b baixo risco, mas não pela E7 de HPV16. Isto sugere que existe uma diferença de potencial nos efeitos celulares causados ​​pela proteína E7 de HPV16 e HPV18. Digno de nota, a maioria dos casos TSCC e BOTSCC são positivos para HPV16. Se a expressão de LMP10 pode ser regulada pelo E7 tem, a nosso conhecimento, não foi investigada. Digno de nota, no presente estudo, a fracção de células positivas LMP10 citoplasmáticos foi maior no HPV-positiva, em comparação com o grupo de HPV-negativo. No entanto, não houve diferença significativa na intensidade de coloração citoplasmática LMP10 entre os grupos. Isso indica a possibilidade de alguns, mas não uma forte regulação por HPV nestas células tumorais.

Há algumas limitações em nosso estudo. Principalmente o estudo é retrospectivo, mas isso não pode afetar os resultados. Além disso, houve menos casos HPV-negativos, que é uma representação direta da alta prevalência de HPV em CCEO em pacientes da Suécia hoje.

Em conclusão, este estudo mostra que a expressão LMP10 em TSCC e BOTSCC está correlacionada a sobrevivência livre de doença em ambos os pacientes com tumores HPV-positivos e HPV-negativo e tem o potencial de ser utilizado num cenário clínico. No entanto, uma vez que a expressão LMP10 nuclear prediz sobrevida para pacientes com tumores HPV-positivos, enquanto que a expressão LMP10 citoplasmática correlaciona para a sobrevivência de tumores HPV-negativos, expressão LMP10 precisaria ser analisado em relação ao status de HPV tumor.

Agradecimentos

Agradecemos Caitrin Jane Crudden para ler cuidadosamente o manuscrito.