Abstract

Fundo

Tumor-infiltrando células T estão associados com a sobrevivência em câncer epitelial de ovário (EOC), mas o seu estado funcional é mal compreendida, especialmente em relação às diferentes categorias de risco e subtipos histológicos do EOC.

Metodologia /principais conclusões

Tissue microarrays que contêm alto grau serosa, endometrioid, mucinoso e tumores de células claras foram analisadas por imunohistoquímica para a presença de linfócitos, células dendríticas, neutrófilos, macrófagos, MHC de classe I e II, e vários marcadores de activação e inflamação. Em tumores serosos de alta qualidade a partir de pacientes optimamente debulked, associações positivas foram observadas entre as células intra-epiteliais que expressam CD3, CD4, CD8, CD45RO, CD25, TIA-1, granzima B, FoxP3, CD20, e CD68, assim como a expressão de MHC de classe I e II pelas células tumorais. sobrevida específica da doença foi positivamente associado com os marcadores CD8, CD3, FoxP3, TIA-1, CD20, MHC Classe I e Classe II. Em outros subtipos histológicos, infiltrados imunes foram menos prevalentes, e os únicos marcadores associados à sobrevida foram MHC classe II (associação positiva em casos endometrióides) e mieloperoxidase (associação negativa nos casos de células claras).

Conclusões /Significado

Hospedar respostas imunes a EOC variam muito de acordo com o tipo histológico e a extensão da doença residual. TIA-1, FoxP3 e CD20 emergir como novos fatores prognósticos positivos em EOC seroso de alto grau de pacientes otimamente debulked

Citation:. Milne K, Köbel M, Kalloger SE, Barnes RO, Gao D, Gilks ​​CB, et ai. (2009) Análise Sistemática da imunitário Infiltrados na High Grade-câncer de ovário seroso revela CD20, FoxP3 e TIA-1 como fatores prognósticos positiva. PLoS ONE 4 (7): e6412. doi: 10.1371 /journal.pone.0006412

editor: Derya Unutmaz, Faculdade de Medicina da Universidade de Nova Iorque, Estados Unidos da América

Recebido: 19 de maio de 2009; Aceito: 26 de junho de 2009; Publicação: 29 de julho de 2009

Direitos de autor: © 2009 Milne et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. O estudo foi financiado por doações da Fundação British Columbia Cancer, Hospital Fundação Vancouver Geral e US Dept. of Defense (OC000018). Nenhum dos patrocinadores tido qualquer papel na concepção e realização do estudo, na coleta, análise e interpretação dos dados, ou na preparação, revisão ou aprovação do manuscrito

Conflito de interesses.: os autores declararam que não existem interesses conflitantes.

Introdução

o câncer de ovário é o câncer ginecológico mais mortal, afetando mais de 190.000 mulheres por ano no mundo (Agência Internacional para Pesquisa em câncer). O diagnóstico tardio ea presença de conta de doença amplamente divulgados para a alta mortalidade associada com a doença. Além disso, enquanto que uma grande percentagem de doentes que inicialmente respondem bem a cirurgia citorredutora e quimioterapia padrão, a doença geralmente se repete dentro de 2-5 anos como células tumorais residuais desenvolver resistência à quimioterapia [1], [2]. Embora o prognóstico é muitas vezes deficiente, numerosos indicadores prognósticos favoráveis ​​têm sido descritas, incluindo estágio inicial, de baixa qualidade e debulking cirúrgico ideal [3], [4].

Vários estudos recentes têm analisado a influência da imunidade do hospedeiro sobre a doença prognóstico. As células T CD3 + que se infiltram no tumor são fortemente associado com prognóstico favorável, especificamente quando as células CD3 + estão localizados dentro do epitélio do tumor [5] – [9]. Estes resultados foram estendidos para o subconjunto de células T CD8 +, em particular, [10] – [17], sugerindo que linfócitos T citotóxicos (CTLs) desempenham um importante papel na resposta imune anti-tumor. Deste modo, outros factores associados a respostas de CTL também estão associados positivamente com a sobrevivência, incluindo interferão-γ (IFN-γ) [18], [19], o receptor de IFN-γ [20], factor regulador de interferão (IRF) -1 [ ,,,0],21], IL-18 [22], o TNF-α [23], MHC de classe I [24] – [26], e antigénio MHC de classe I máquinas para fabrico [17]

Em contraste com T CD8 +. células, vários estudos têm indicado que as células CD25 + FoxP3 + T infiltrantes tumorais (referidas células T como reguladoras ou Tregs) estão associados com a diminuição da sobrevivência [10], [27] – [29]. Tregs têm a capacidade de suprimir a proliferação, produção de citoquinas e actividade citolítica das células T CD4 + e células T CD8 + por meio de mecanismos que envolvem o contacto célula-a-célula e a libertação de citoquinas tais como TGF-β [30], [31]. Tregs também pode induzir um fenótipo imunossupressor em outros tipos de células tais como macrófagos [32]. Embora Tregs têm sido associados com prognóstico pobre em muitos cancros, várias excepções foram recentemente relatado. Leffers et. ai. descobriu que FoxP3 + infiltra no EOC fase avançada foram associados com o aumento da sobrevida [14]. Achados semelhantes foram relatados no câncer colorretal [33] e linfoma [34] – [36]. Além disso, em modelos murinos, células FoxP3 + pode desempenhar um papel positivo no anti-tumoral e imunidade anti-virais [37], [38]. O papel preciso das células T reguladoras em resultados do cancro garante uma análise mais aprofundada, uma vez que vários grupos estão tentando aumentar a imunidade do tumor, esgotando FoxP3 + Tregs de pacientes com câncer [39] – [44], incluindo pacientes EOC [45]

Além de Tregs, outros tipos de células supostamente desempenham um papel imunossupressor em EOC. Por exemplo, as células dendríticas plasmocitoides contribuem para a imunossupressão, promovendo o desenvolvimento ou o recrutamento de interleucina-10 produtoras de células CD4 + e CD8 + T reguladoras [46], [47]. as células dendríticas mielóides (MDCs) prejudicar a imunidade de células T através da expressão de B7-H1, um ligando para o receptor inibitório de DP-1 encontrado nas células T [48]. Os monócitos e macrófagos no microambiente EOC pode ser polarizada para uma assim chamada fenótipo M2, que é caracterizado pela expressão de IL-10, receptores scavenger, TGF-b e e é pensado para promover a progressão tumoral [49], [50], [51]. Sob a influência de IL-6 e IL-10, em macrófagos EOC pode também expressar B7-H4, que inibe a proliferação de células T [52]. Os macrófagos também produzem CCL22, que promove o recrutamento de Treg para o ambiente tumoral [32]. Finalmente, a expressão do mediador inflamatório da COX-2 no epitélio do tumor tem sido associado com a infiltração de linfócitos reduzida e prognóstico pobre em EOC [13], [53].

Com o advento da tecnologia de microarray de tecido tumoral (TMA) , um grande número de estudos retrospectivos têm investigado a relação entre as células imunológicas infiltrantes tumorais e prognóstico em EOC e outros cânceres. No entanto, a maioria dos estudos se concentrar em um ou alguns marcadores, de modo que as associações entre diferentes fatores imunológicos podem ser desperdiçada. Além disso a maioria dos estudos não conseguem resolver os diferentes subtipos histológicos do EOC, que agora são reconhecidos a comportar-se como enfermidades distintas [54]. Como resultado, há inconsistências e questões não resolvidas na literatura sobre o significado prognóstico de diferentes infiltrados de células imunes. Para resolver isso, analisamos várias grandes séries de tumores EOC, incluindo alto grau serosa, endometrioid, de células claras e subtipos de mucina, a presença de vários infiltrados de células imunes e marcadores inflamatórios. Os nossos resultados revelam que os tumores serosos de alto grau têm um perfil imunológico distinto que está fortemente associada à sobrevida do paciente.

Resultados

células Intraepithelial T e marcadores funcionais associados em alto grau EOC serosa

inicialmente investigou a relação entre infiltrados imunes e sobrevivência em uma coorte de 199 pacientes EOC seroso de alto grau. Nós escolhemos a primeira concentrar em casos graves de alta qualidade, como os outros subtipos histológicos apresentam propriedades biológicas e clínicas distintas que são potencialmente de confusão [54], [55]. Esta coorte inicial foi restrita a pacientes que se submeteram a citorredução ótima (ou seja, sem evidência de doença residual macroscópica). As características dos pacientes são mostradas na Tabela 1.

Os tumores nesta coorte inicial tinha sido anteriormente avaliados por imuno-histoquímica (IHC) para uma variedade de marcadores, incluindo linfócitos CD3, CD4, CD8, CD20 e granzima B [12]. linfócitos intra-epiteliais (isto é, linfócitos dentro do componente epitelial do tumor) foram pontuados como presente (isto é, quer um ou mais de linfócitos intra-epiteliais presentes em pelo menos um dos dois núcleos de 0,6 mm) ou ausente. Nós re-analisados ​​esses dados centrados exclusivamente nos casos graves de alto grau. Verificou-se que 83,2% (163/196) dos tumores serosos de alto grau avaliáveis ​​foram positivos para intraepitelial células T CD3 +, enquanto que células CD4 + e CD8 + intra-epiteliais foram encontrados em 53,4% (103/193) e 84,0% (163/194) de tumores avaliáveis, respectivamente (Fig 1A . B e dados não mostrados). CD4 + e CD8 + infiltrados celulares mostraram uma forte associação positiva (p 0,0001). A Tabela 2 mostra as associações estatísticas relativas a estes e todos os outros marcadores estudados neste coorte inicial.

(A), CD4, (B), CD8, (C) CD45RO, (D) OX40, (E) a CD25, (F ) TIA-1, (L) A granzima B, e (H) FoxP3. 40X objetiva.

Embora os marcadores acima indicam que subconjuntos de linfócitos estão presentes em tumores, eles não revelam o seu estado de ativação. Para abordar esta questão, analisamos os tumores de expressão de CD45RO, OX40 e CD25, que são expressos pelas células T ativadas [56], [57]. Utilizando o mesmo critério de pontuação como acima, 70,6% (132/187) dos tumores foram positivos para células CD45RO + intra-epiteliais, e 49,7% (96/193) foram positivos para células CD25 + intra-epitelial (Figura 1C . E). Por contraste, apenas 7,0% (11/158) dos tumores foram positivos para células intraepitelial OX40 + (Fig. 1D). Em comparações de pares, CD45RO, CD25 e OX40 foram associados positivamente todos (Tabela 2). Além disso, CD45RO e CD25 foram ambos associados com a presença de células CD3 +, CD4 + e CD8 +. OX40 mostraram uma tendência semelhante, mas esta não atingiu significância estatística, provavelmente devido ao baixo número de casos positivos.

Para investigar o estado de diferenciação das células T se infiltram no tumor, os tecidos foram analisados ​​para as células intra-epitelial que expressam TIA -1 e granzima B, que são marcadores de células T citotóxicas CD8 + e células NK [58] – [60]. A maioria dos tumores (66,5%, 127/191) foram positivas para intraepitelial TIA-1 + células (Fig. 1F), e cerca de metade dos tumores (45,6%, 88/193) foram positivas para intraepitelial granzima B + células (Fig. 1G). Houve uma associação altamente significativa entre as células TIA-1 + e granzima B + (p 0,0001). Além disso, em comparações de pares, TIA-1 + e células granzima B + foram, cada um associado com os marcadores de activação de CD45RO, CD25 e OX40. Finalmente, TIA-1 + e A granzima B + células foram, cada um associado com a presença de células CD3 +, CD4 + e CD8 + (Tabela 2). Para examinar se a expressão TIA-1 e granzima B pode ser devido à presença de células NK ou NKT, examinámos tumores para os marcadores celulares CD56 e CD57 NK. Para ambos os marcadores, não foram ou poucos ou nenhuns infiltrados em tudo dentro do epitélio do tumor (dados não mostrados), indicando que o TIA-1 + e A granzima B + infiltrados eram células T mais prováveis.

Finalmente, os tumores eram analisada para a presença de células que expressam intraepitelial FoxP3, que em humanos é um marcador de células T reguladoras e células T activadas [61], [62]. Cerca de metade dos tumores (52,9%, 100/189) foram positivas para FoxP3 + intra-epitelial de células (Fig. 1H). Houve uma forte associação entre FoxP3 + e CD25 + (p 0,0001), e FoxP3 + e CD25 + células foram cada fortemente associado com células T CD4 + (p 0,0001 para ambos marcadores). Assim, de acordo com relatórios anteriores [10], [14], [27], [28], uma proporção significativa de tumores continham infiltrado intra-epitelial com marcadores característicos de Tregs (CD4 +, CD25 +, e FoxP3 +).

de MHC de classe I e II, em alto grau serosa EOC

analisadas células tumorais para a expressão de MHC de classe I e II, utilizando uma escala de quatro pontos (negativo, focal [ 10%], desigual [10- 50%] ou difusa [ 50%]). Todos os tumores avaliáveis ​​(185/185) expressa MHC Classe I em algum grau (ou seja, focal, segmentado ou difuso), indicando que podiam teoricamente presente antígeno às células T CD8 +. Para as análises estatísticas, apenas a mais alta categoria (difusas, 50%) foi considerado positivo (Fig 2A . B). Usando este limiar, 85,4% (158/185) dos tumores foram positivas para MHC Classe I. MHC classe I foi positivamente associado com todos os três subconjuntos de células T (CD3, CD4, e CD8), os marcadores de ativação CD45RO e CD25, ea marcadores de diferenciação TIA-1, granzima B e FoxP3 (Tabela 2).

40X objetiva.

A grande maioria dos tumores (86,5%, 166/192) expressa MHC classe II em algum grau (isto é, focal, irregular ou difusa), indicando que poderia, teoricamente, apresentam o antigénio às células T CD4 +. Tal como acontece com MHC de classe I, somente a categoria mais elevada (difuso, 50%) foi considerado positivo para análises estatísticas (fig 2 C . D). Usando este limiar, 41,1% (79/192) dos tumores foram positivas para MHC de classe II. MHC classe II foi fortemente associado com MHC classe I (p 0,0001). Por conseguinte, de MHC de classe II foi positivamente associados com todos os três sub-grupos de células T (CD3, CD4, CD8), e os marcadores de activação CD25 e CD45RO, e os marcadores de diferenciação TIA-1, granzima B e FoxP3 (Tabela 2). De forma semelhante aos resultados para MHC de classe I, a expressão de MHC de classe II no epitélio do tumor foi positivamente associados com vários marcadores de células T, incluindo o CD3, CD4, CD8, CD45RO, TIA-1, granzima B, CD25 e FoxP3 (Tabela 2) .

células Intraepithelial B em alto grau serosa EOC

os tecidos foram coradas com um anticorpo para CD20, que é expresso pelas células B do ingênuo estágios de memória de diferenciação [63]. Intra-epitelial de CD20 + células foram encontrados em 41,9% (83/198) dos tumores avaliáveis ​​(Fig. 3a). + infiltrados CD20 foram fortemente associada com todas as três subpopulações de células T (CD3, CD4, e CD8); a activação de marcadores de CD45RO e CD25; a diferenciação marcadores TIA-1, granzima B e FoxP3; e ambos MHC de classe I e II (Tabela 2).

objetiva de 40x.

células dendríticas intra-epiteliais, granulócitos e macrófagos em alto grau serosa EOC

Os tumores foram analisadas para a presença de células dendríticas imaturas e maduras por coloração para CD1a e CD208, respectivamente. Uma minoria de tumores (13,4%, 23/172) continha CD1a + intra-epitelial de células (Fig. 3B). Não houve associação significativa com qualquer dos marcadores intra-epitelial de linfócitos (CD3, CD8 ou CD20), marcadores de activação (CD45RO ou CD25), marcadores de diferenciação (TIA-1, granzima B ou FoxP3) ou MHC de classe I ou II (Tabela 2) foi visto , potencialmente devido ao baixo número de células CD1a +. Em contraste com CD1a, nenhum dos tumores resultados positivos para células intraepitelial CD208 +. análise paralela de tecido tonsilar revelou a presença de muitas células CD208 +, validando assim o procedimento IHC.

Cerca de metade dos tumores (54,7%, 87/159) continham células intra-epitelial que expressam o CD68 marcador de macrófagos (Fig. 3D) . CD68 foi positivamente associado com marcadores de vários linfócitos (CD3, CD8 e CD20), marcadores de ativação (CD45RO e CD25), marcadores de diferenciação (TIA-1, granzima B e FoxP3) e MHC classe I (Tabela 2). Para avaliar a presença de granulócitos, o TMA foi manchado por mieloperoxidase. Vinte e quatro por cento (37/154) dos tumores continham células que expressam mieloperoxidase (Fig. 3C), no entanto estes não mostraram associação significativa com outros marcadores, com a excepção de células CD4 (p = 0,034).

A COX -2 enzima tem sido associada com a sobrevivência inferior em EOC quando expressas no componente epitelial do tumor [53]. Portanto, os tumores foram pontuados para a expressão de COX-2 no componente epitelial utilizando uma escala de quatro pontos (negativo, equívoca [0-1%], desigual [1-50%] ou difusa [ 50%]) (Fig . 2E F). Dois terços dos tumores (66,5%, 111/167) foram positivos para a COX-2 (isto é, coloração irregular ou difusa). Em contraste com relatos em ovário, colo do útero e outros cancros, [13], [64], [65], a expressão de COX-2 não foi significativamente associado com qualquer um dos infiltrados imunes estudadas (Tabela 2).

Associações entre infiltrados imunes e sobrevida do paciente em alto grau EOC serosa

análise

Kaplan-Meier foi realizada para avaliar a associação entre vários infiltrados imunes e sobrevivência específica da doença (DSS). Consistente com relatórios anteriores [5] – [7], [10] – [17], células T CD3 + e CD8 + intra-epiteliais foram associados com o aumento da DSS (p = 0,0009 e 0,0008, respectivamente) (Figura 4A B.). células intraepitelial CD4 + mostrou uma tendência para o aumento da DSS, mas esta não foi estatisticamente significativa (Fig. 4C). O NK marcadores de células CD56 e CD57 mostraram nenhuma associação com DSS (dados não mostrados).

curvas de Kaplan-Meier que mostra a sobrevivência de doenças específicas de pacientes classificados como positivos ou negativos para (A) CD3, (B), CD8 , (C) CD4, (D) FoxP3, (e) CD20, (F) CD68, (G), TIA-1, (H) A granzima B, (I) de MHC de classe I e (J) de MHC de Classe II. Os dados foram obtidos a partir de pacientes otimamente debulked com EOC seroso de alto grau.

Curiosamente, as células CD20 + intra-epitelial foram associados com o aumento da DSS (p = 0,0033) (Fig. 4E). Além disso, a combinação de células T CD8 + e CD20 + infiltrados foi associado com um aumento significativo DSS sobre tumores que continham infiltrado CD8 + mas não o CD20 + infiltrados (mediana 4432 dias vs. 2279 dias, p = 0,0115) (dados não mostrados).

em contraste com linfócitos marcadores, o CD1a marcador de células dendríticas não mostrou associação com DSS, possivelmente devido ao baixo número de tumores que contêm células CD1a +. Da mesma forma, os marcadores CD68, COX-2 e mieloperoxidase não mostrou associação com DSS (Fig. 4F e dados não mostrados).

Dada a associação entre as células T CD8 + e DSS, avaliamos outras características canônicas de CTL ativa respostas. DSS foi positivamente associado com intraepitelial TIA-1 + células (p = 0,0003), bem como a expressão de MHC de classe I e II pelas células tumorais (p = 0,0014 e 0,0026, respectivamente) (Fig 4G, I, . J). Os tumores que continham tanto de CD8 +, TIA-1 + infiltrados foram associados com o aumento da DSS em comparação com os tumores de CD8 + TIA-1-negativos (p = 0,0025). Vários outros marcadores de células T, incluindo a granzima B, CD45RO, CD25, mostrou tendências para o aumento da DSS, mas não alcançaram significância estatística (Fig. 4H e dados não mostrados). OX-40 mostrou nenhuma tendência aparente ou associação com DSS, possivelmente devido ao baixo número de casos positivos (dados não mostrados).

Em aparente contraste com relatos de que as células T reguladoras são associados a um mau prognóstico, a presença de células intraepitelial FoxP3 + foi associada com o aumento DSS (p = 0,010) (Fig. 4D). Além disso, os tumores que foram triplamente positivo para intraepitelial CD4 +, FoxP3 + e CD25 + mostrou uma tendência para o aumento da sobrevida, embora este ficou aquém de significância estatística (p = 0,059). Da mesma forma, os tumores positivos para ambas as células T CD8 + e FoxP3 + intra-epitelial mostrou uma tendência para o aumento da DSS em comparação com tumores que eram positivos para as células CD8 + mas negativa para células FoxP3 +; no entanto, esta tendência não atingiu significância estatística (p = 0,052). Assim, por várias análises, as células FoxP3 +-se infiltram no tumor mostrou uma tendência ou associação estatisticamente significativa com o aumento da DSS.

A associação entre infiltrados imunes e sobrevivência depende da extensão da doença residual

T infiltrados celulares são declaradamente mais prevalente em pacientes com óptima relação citorredução subótima [5], [66]. Para investigar se isso era verdade para outros marcadores de linfócitos, analisamos um conjunto adicional de casos serosa 220 de alto grau de pacientes conhecidos para ter a doença residual macroscópica após a cirurgia cytoreductive primário. Nós focada em CD8 + infiltra-se, bem como os três novos marcadores de prognóstico da análise precedente (isto é, FoxP3, TIA-1 e CD20). Em comparação com o grupo de pacientes optimamente debulked, pacientes com doença residual macroscópica tinha uma prevalência significativamente menor de CD8 + (58,5%), FoxP3 + (20,2%), TIA-1 + (39,5%) e infiltrados CD20 + (16,3%) (p 0,0001 para todos os marcadores). Na análise de Kaplan-Meier destes quatro marcadores, apenas CD8 + infiltrados teve uma associação significativa com a sobrevida (p = 0,0044) em pacientes com doença residual macroscópica (dados não mostrados).

A associação entre infiltrados imunes e sobrevivência é dependentes subtipo histológico

Os resultados anteriores foram baseadas exclusivamente em casos EOC seroso de alto grau. Para avaliar a associação entre infiltrados imunes e DSS em outros subtipos histológicos do EOC, realizamos as mesmas análises usando um adicional de 288 tumores EOC dos seguintes subtipos histológicos: mucinoso (n = 31), endometrioid (n = 125) e de células claras ( n = 132). Estes espécimes de tumor adicionais eram de uma coorte de pacientes anteriormente descrito optimamente debulked [12].

De um modo geral, infiltrados imunes foram menos prevalecentes nos outros subtipos histológicos em comparação com os casos graves de alto grau discutidos anteriormente. Isto era verdade para todos os marcadores estudados linfócitos (isto é, CD3, CD8, CD4, CD45RO, CD25, FoxP3, TIA-1, granzima B, e CD20) (Fig. 5). A diferença foi mais notável para os marcadores FoxP3, CD25 e CD20. Depois dos casos graves de alta qualidade, a próxima mais alta frequência de infiltrados imunes foi visto no subtipo endometrióide (Fig. 5).

As barras indicam a percentagem de tumores positivos para marcar células que expressam intrapithelial CD3, CD8, CD4 , CD45RO, CD25, FoxP3, TIA-1, granzima B, CD20 e CD68. A expressão de MHC de classe I e II por epitélio do tumor também é mostrada. Os dados foram obtidos a partir de pacientes otimamente debulked

Foi examinada a associação entre infiltrados imunes e DSS no endometrioid e subtipos de células claras.; o número de casos de mucina era muito pequeno para realizar uma análise estatística robusta. Para os casos endometrióides, a única associação significativa foi encontrada entre a expressão de MHC classe II e aumentou DSS (p = 0,039) (dados não mostrados). Para os casos de células claras, a única associação significativa encontrada foi entre a presença de infiltrados de mieloperoxidase-positiva e diminuiu DSS (p = 0,040, dados não mostrados). Assim, a relação entre infiltrados imunes e sobrevivência difere muito entre os subtipos histológicos do EOC.

Discussão

Nós sistematicamente examinou a relação entre infiltrados imunes e sobrevida do paciente em três grandes séries EOC. De acordo com Clarke et al. [12], verificou-se que os tumores serosos de alta qualidade tem um perfil imunológico distinta em comparação com a endometrióide, de células claras e subtipos de mucina. Além disso, verificou-se que infiltrados imunes foram geralmente mais prevalentes em tumores de doentes com citorredução óptima. FoxP3, TIA-1 e CD20 emergiram como novos marcadores imunológicos associados com o aumento da sobrevida dos pacientes. Nossos resultados destacam a importância do subtipo histológico na Imunobiológicos da EOC, que pode ter implicações importantes para a imunoterapia desta família de doenças.

linfócitos intra-epiteliais (isto é, células que expressam CD3, CD4, CD8, FoxP3 ou CD20 ) foram mais prevalentes em casos seroso de alto grau, seguido de casos endometrióides. Além disso, os linfócitos intra-epiteliais foram mais prevalentes em tumores de doentes de forma óptima debulked em comparação com pacientes com doença residual macroscópica. Um número de características biológicas dos tumores parecem influenciar a densidade do infiltrado linfocítico. (A) infiltrados de células T estão associados positivamente com a expressão de MHC de classe I e II pelas células de tumor (Tabela 2), bem como MHC de classe I antigénio máquinas para fabrico [15] – [17], [67], sugerindo que a apresentação de antigénio pode ser um importante determinante da infiltração de células T. (B) De acordo com esta noção, tumores com perda ou mutação dos genes BRCA1 e p53 tem uma maior densidade de células T que se infiltram no tumor [12], [66]. Isto sugere que a reparação do ADN danificado e a instabilidade genómica que se seguiu em tumores pode levar à geração de neo-antigénios que desencadeiam respostas de células T do hospedeiro. (C) moléculas de sinalização também desempenhar um papel, como a densidade de células T que se infiltram no tumor está associada de forma negativa com a expressão de VEGF, B7-H1 /PD-L1 e o receptor de endotelina B por tumores [5], [11], [68 ] e positivamente associada com a expressão do quimiocinas CXCL9, CCL21, CCL22, CCL2 e CCL5 [5], [28], [69]. (D) Os perfis de expressão de gene Finalmente, dois grupos relataram que se correlacionam com a presença de células T que se infiltram no tumor em EOC [12], [70]. Estes últimos estudos confirmar algumas das associações acima (por exemplo, MHC de classe I e II, beta-2 microglobulina, TAP1 e 2) e identificar novos factores associados com infiltrados de células T (por exemplo, induzidas por interferão IL-15, IL-32 e numerosos genes). Presumivelmente, um ou mais dos factores acima mencionados contribui para a enriquecimento observada de linfócitos que se infiltram no tumor em casos graves e optimamente cytoreduced de alto grau.

Embora a associação entre as células T CD8 + intra-epiteliais e aumento da sobrevivência em EOC é altamente achado reprodutível [10] – [17], relativamente pouco se sabe sobre o fenótipo funcional destas células T CD8 +. Diversas linhas de evidência sugerem uma resposta citolítica clássico subjaz resultados favoráveis. Por exemplo, outros relataram associação positiva entre a sobrevivência e expressão intratumoral de IFN-γ [18], [19], o receptor de IFN-γ [20], bem como vários genes do interferão-responsivas, tais como MHC de classe I [24] – [26], MHC classe I antígeno máquinas de transformação [17], [15] [16] MHC classe II, e IRF-1 [21]. IL-18 [22] e TNF-α [23] também parecem ser importantes componentes da resposta das células T, como ambas as citocinas estão associados positivamente com a sobrevivência. Foram examinados dois componentes de grânulos citolíticos, granzima B e TIA-1, os quais mostraram uma associação com infiltrados de células T CD8 +. Destes dois marcadores, apenas a TIA-1 mostrou associação estatisticamente significativa com a sobrevida em casos seroso de alto grau (Fig. 4). células TIA-1 + foram também descritas no cancro da mama medular [71], [72] e melanoma [73], onde eles estão associados com características favoráveis ​​de prognóstico. Em contraste, as células TIA-1 + infiltrantes tumorais estão associados com a diminuição da sobrevivência no linfoma [74] – [78]. Curiosamente, TIA-1 não é simplesmente um marcador de grânulos citolíticos; é uma proteína de ligação a ARN envolvidas na regulação de ARNm de pós-transcricional [79]. Resta determinar se a associação entre intraepitelial TIA-1 + células e sobrevivência em EOC é devido ao papel desta proteína na função de grânulos citolítica ou regulamento mRNA.

infiltrados Treg ter sido anteriormente associada com a sobrevivência diminuiu no ovário EOC [10], [27], [28]. No entanto, no presente estudo e um outro relatório recente [14], FoxP3 + infiltrados foram associados com o aumento da sobrevivência. Estas conclusões aparentemente contraditórias pode ser atribuída a vários fatores. Em primeiro lugar, nem todos os estudos de ter em consideração os subtipos histológicos de EOC, ou a extensão da doença residual; no presente estudo, as células FoxP3 + só foram associados com a sobrevivência nos tumores seroso de alto grau de pacientes otimamente debulked. Em segundo lugar, uma variedade de anticorpos têm sido usados ​​para detectar FoxP3, o que pode conduzir a resultados discordantes [80]. pode ser usado terceiros, critérios de pontuação diferentes. Por exemplo, a localização intratumoral precisa de Tregs é um determinante importante do prognóstico no câncer gástrico [81]. Em quarto lugar, os marcadores moleculares utilizados para definir Tregs diferem entre estudos. Embora FoxP3 ainda é considerado como o marcador mais fiável de Tregs no cancro humano [82], [83], que pode também ser expressa por células epiteliais tumorais [84] – [86] e

In vitro

CD4 + activadas e células T CD8 + [87] – [95]. Por estas razões, alguns estudos incluem CD25 como um segundo marcador de Tregs [10], [28]. No entanto, como FoxP3, CD25 é potencialmente expresso por células T efectoras, por isso, não é claro que a coloração dupla de Foxp3 e CD25 identifica de forma mais precisa Tregs [89], [96]. Outras características de Tregs incluem alta expressão do GITR e CTLA-4 e baixa expressão de CD127 e CD49d e [97], [98], no entanto estes marcadores são tecnicamente difíceis de avaliar em TMAs embebido em parafina.

Estes considerações técnicas, não obstante, não há evidências de que as células FoxP3 + infiltrantes de tumor estão associados a um prognóstico favorável na EOC, câncer colorretal, câncer de cabeça e pescoço, e linfoma [14,33, -36,99-102]. Como pode células Foxp3 + promover resultados favoráveis? No presente estudo, as células FoxP3 + foram fortemente associada com outras células T efectoras, e resultados semelhantes foram relatados em pacientes com melanoma [103]. Assim, as células FoxP3 + pode simplesmente ser um indicador de uma resposta de células T CD8 + forte, o qual pode compensar quaisquer efeitos imunossupressores de FoxP3 + células. Alternativamente, os subconjuntos de células T humanas FoxP3 + foram recentemente mostrado para ter um pró-inflamatória,-IL-17 produzindo fenótipo [104] – [106]. Com efeito, as células T CD4 + pode ser desviada para esta assim chamada fenótipo Th17 por exposição a TGF-β em combinação com IL-6, IL-1 ou IL-23 [107] – [109]. Estes factores estão presentes no ambiente tumoral EOC [8], e, por conseguinte, as células Th17 têm sido relatados em EOC [110] – [112]. Assim, a associação entre FoxP3 + células e aumento da sobrevida poderia refletir uma resposta anti-tumoral Th17-like subjacente. Claramente, mais trabalho é necessário para determinar a extensão na qual as células FoxP3 + T em EOC representam Tregs contra Th17 ou outras células T efetoras.

A observação de que CD20 intraepitelial + infiltrados estão associados ao aumento DSS é um novo achado no EOC . Dong et. ai. relatado que as células B em ascite foram associados com menor sobrevida em EOC [113], porém o seu estudo se concentrou em células B em derrames pleurais e peritoniais recolhidos após a quimioterapia, que por definição constitui um mau coorte resultado. De fato, no presente estudo, as células CD20 + B intra-epitelial não mostrou associação com a sobrevivência em pacientes com alto risco, doença subótimamente debulked. células infiltrantes tumorais B CD20 + são uma marca do cancro da mama medular e foram propostas para mediar um prognóstico favorável [114], [115]. Além disso, a presença de uma assinatura de transcrição de células B no cancro da mama nó-negativo está associada com o aumento da sobrevida [116]. célula B se infiltra no câncer de mama representam populações clonal expandidas, expressam moléculas de IgG somaticamente hipermutada, e reconhecer antígenos alvo, tais como D3 gangliósido e actina translocado-superfície [114], [115], [117] – [120]. Não está claro como as células infiltrantes tumorais B promover resultados favoráveis ​​em câncer.