Abstract

Fundo

O gene da proteína 1a família domínio associação RAS (

RASSF1A

) é um dos genes supressores de tumores (

TSG

). Inactivação de

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é crítica para a patogênese do câncer. Aberrante

TSG

metilação foi considerada um importante mecanismo de silenciamento epigenético na progressão do câncer de ovário. Uma série de estudos têm discutido associação entre

metilação RASSF1A

promotor e câncer de ovário. No entanto, eles foram em sua maioria baseados em um pequeno número de amostras e mostraram resultados inconsist, Por isso, realizamos uma meta-análise para identificar melhor a associação.

Métodos

Estudos elegíveis foram identificados através de pesquisa o PubMed, Embase, web of Science, e bases de dados CNKI usando uma estratégia sistemática de pesquisa. Nós reunidas a razão de chances (RUP) a partir de estudos individuais usando um modelo de efeitos fixos. Foi realizada heterogeneidade e análise de viés de publicação em simultâneo.

Resultados

Treze estudos, com 763 pacientes com câncer ovariano e 438 controles foram incluídos na meta-análise. As frequências de

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metilação do promotor variou de 30% a 58% (média é de 48%) no grupo de cancro e de 0 a 21% (mediana é 0) no grupo de controlo. As frequências de

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metilação do promotor no grupo de câncer foram significativamente maiores do que aqueles no grupo de controle. O odds ratio foi de 11,17 (IC 95% = 7,51-16,61) no grupo de câncer versus o grupo de controlo correspondente sob o modelo de efeitos fixos.

Conclusão

Os resultados sugerem que

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metilação do promotor teve uma forte associação com o câncer de ovário

Citation:. Shi H, Li Y, Wang X, Lu C, Yang L, Gu C, et al. (2013) Associação entre

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metilação do promotor e do cancro do ovário: A Meta-Analysis. PLoS ONE 8 (10): e76787. doi: 10.1371 /journal.pone.0076787

editor: J.Christopher Unidos, Universidade de Louisville, Estados Unidos da América

Recebido: 13 de junho de 2013; Aceito: 03 de setembro de 2013; Publicação: 08 de outubro de 2013

Direitos de autor: © 2013 Shi et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Os autores não têm apoio ou financiamento para relatar

Conflito de interesses:. os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer de ovário é a quinta causa mais comum de câncer. mortes de mulheres e contas para a maior mortalidade associada ao tumor de malignidades ginecológicas. Aproximadamente 1,5% das mulheres sofrem de cancro do ovário e a maioria dos casos são diagnosticados numa fase final, devido à falta de métodos eficazes de detecção precoce [1], [2]. Mais de 80% dos pacientes com cancro do ovário avançado recaída [3]. Enquanto a taxa de sobrevida em 5 anos é de cerca de 30% [4].

hipermetilação do gene supressor de tumor (

TSG

) promotor pode levar a inativação do gene, o que é fundamental para a patogênese dos cancros, e ocorre sempre na fase inicial de desenvolvimento de câncer em muitos tipos de câncer, incluindo câncer de ovário [5], [6]. Alguns estudos também mostraram que a metilação de

TSG

foi detectado no tecido do tumor e foi associado com características clínicas [7], [8]. A associação de proteínas da família do RAS domínio 1A (

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) é um gene supressor de tumor putativa localizada em 3 de p21 abrangendo 11.000 pb, contendo oito exões e dois promotores diferentes [9]. epigenética inactivação do gene resultou frequentemente a partir da metilação de ilhas CpG em promotores de [5]. Um estudo in vitro mostraram que a metilação aberrante foi frequentemente observada em linhas de células do cancro do ovário [10]. Estes estudos mostraram que a metilação do

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promotor pode desempenhar um papel importante no desenvolvimento do câncer de ovário.

Alguns estudos têm relatado diferenças nas frequências de metilação de

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entre os tecidos de câncer e tecidos não cancerosos. No entanto, eles foram baseados principalmente em um pequeno número de amostras e mostrou resultados inconsist. Por isso, foi realizada uma meta-análise para identificar melhor a associação entre o

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metilação do promotor e do ovário.

Materiais e Métodos

Estratégia de Pesquisa e Estudo de seleção

online bases de dados eletrônicas (PubMed, Embase, web of Science, e da China Knowledge Nacional de Infra-estrutura (CNKI)) foram pesquisados ​​estudos publicados até 1 de junho de 2013. O seguinte estratégia de busca foi realizada no PubMed: (ovários ou ovário) E (câncer ou carcinoma ou tumor) e (

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metilação). A estratégia de pesquisa semelhante foi usada em outras bases de dados. A busca foi limitada a estudos em humanos, sem restrições de linguagem. Um estudo incluídos na meta-análise teve que seguir os seguintes critérios: 1) estudos que avaliaram a associação de

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metilação com cancro do ovário, 2) um estudo de caso-controle ou uma incluindo caso e controle populações, 3) um estudo relatando a

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frequência de metilação no caso e controle grupos, 4) tipo de amostra limitada aos tecidos. Primeiro, o título e resumo de estudos a partir da pesquisa inicial foram avaliados de acordo com os critérios de inclusão. Em seguida, todos os estudos potencialmente relevantes foram avaliadas como documentos de texto completo. Se um estudo foi publicado mais de uma vez, apenas o mais completo e up-to-date informações foram incluídos na meta-análise. A Figura 1 apresenta informações detalhadas sobre o processo de seleção do estudo. Finalmente, um total de 13 estudos (PubMed 7, Web of Science 1, e CNKI 5), com 763 casos e 438 controles foram incluídos em nossa meta-análise.

Extração de dados e avaliação da qualidade

Três revisores (Shi Hao, Ya Li, e Changmei Gu) revisou de forma independente os estudos selecionados. As informações a seguir foi extraído a partir desses estudos: o primeiro nome do autor, ano de publicação, população do estudo, tamanho da amostra, a idade das mulheres no grupo de casos, tipo de controle, o status dos indivíduos do grupo controle, o número de indivíduos no grupos caso e controle, os métodos de medição de metilação e frequências de modulação de

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nos grupos de estudo e controle. Toda a informação detalhada nos estudos incluídos foi verificada por quatro revisores (Meixia Lu, Shixuan Wang, Wang Xiaozhong, e Yangxin Huang) como prescrito pela Cochrane Handbook para revisões sistemáticas.

A qualidade dos estudos foi avaliada de acordo com a Escala de Newcastle Ottawa (NOS) (https://www.ohri.ca/programs/clinical_epidemiology/oxford.asp). A NOS tem um máximo de nove ‘estrelas’ em itens relacionados com a selecção dos grupos de estudo (quatro estrelas), a comparabilidade dos grupos (duas estrelas) e a apuração do resultado de juros (três estrelas). Os estudos foram independentemente avaliados com base nas NOS por três revisores (Cheng Lu, Lilan Yang, e Jiaqiang Xiong). Estudos com índices de qualidade iguais ou superiores a 5 foram incluídos.

Análise Estatística

Para avaliar a força da associação entre o

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de metilação e de ovário as odds ratio agrupados (RUP) e seus intervalos de confiança de 95% (IC) foram calculados. O

x

2-baseado no teste e Estatística de Cochran Q

I

2 estatísticas foram utilizadas para testar a heterogeneidade entre os estudos incluídos [11]. Foram considerados os estudos selecionados para ter uma heterogeneidade grave quando o

2 foi superior a 50%. Quando

P Art 0,05 para a estatística Q, a heterogeneidade foi considerada significativa e um modelo de efeitos aleatórios (a estimativa DerSimonian-Laird) foi usado para calcular as RUP sejam combinadas. Caso contrário, foi aplicado um modelo de efeitos fixos (o método de Mantel-Haenszel). Uma meta-regressão (restrito método estimador de máxima verossimilhança) foi empregado para explorar a fonte de heterogeneidade. Além disso, uma análise de subgrupo foi realizada para avaliar a fonte de heterogeneidade. A contribuição de cada estudo com os resultados finais da meta-análise foi avaliada de acordo com a análise de sensibilidade. Nós também utilizado o teste Peters, o método de correlação de Begg [12] e um lote de funil para o teste de Egger [13] para avaliar o viés de publicação. O número de falhas [14] também foi empregado para avaliar o viés de publicação. Em nosso estudo, todos os

P valores

dois lados com um nível significativo de 0,05. Quando os estudos individuais têm células com contagens zero, o padrão é adicionar 0,5 a todas as contagens zero no pacote de Meta. Todas as análises estatísticas foram realizadas com o pacote de Meta [15] (versão 2.2-1) em R (versão 3.00; https://www.r-project.org/).

Resultados

Características de estudos e Avaliação da Qualidade

Um total de treze estudos com 763 casos e 438 controles foi incluído na meta-análise. 115 estudos foram inicialmente identificados através de pesquisa as bases de dados electrónicas. 84 estudos potencialmente relevantes foram recuperados para uma avaliação mais aprofundada após a remoção de 31 artigos duplicados. Com base em seus títulos e resumos, foram excluídos 61 estudos (5 comentários ou reunião revisões, 2 linhas de células, 6 teses, 40 artigos irrelevantes, e 8 trabalhos que não tenham versões texto completo). Quatro estudos sem um grupo de controle e seis estudos sem

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dados de metilação foram excluídos da revisão de texto completo. Os estudos foram publicados entre 2001 e 2012, e coberta de 20 a 110 casos. Finalmente, 13 estudos foram incluídos na nossa meta-análise. Oito estudos foram de assuntos asiáticos e cinco estudos eram de indivíduos caucasianos. Seis estudos analisados ​​metilação do

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promotor ilhas CpG [16] – [21] e sete estudos analisados ​​

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metilação do promotor [22] – [28]. O grupo caso consistia em tecidos de câncer de formar pacientes com câncer ovariano. O grupo controle incluiu tecidos adjacentes (AT) de pacientes com câncer de ovário, tecido ovariano de pacientes com doença de ovário benignos (BOT) e tecido ovariano normal a partir de pacientes livres de câncer ou pessoas saudáveis ​​(NT). Entre os 13 estudos incluídos, 11 estudos utilizados reação em cadeia da polimerase específicas de metilação (MSP), 1 estudo utilizou metilação específicas de multiplex dependente da ligação da sonda de amplificação (MS-MLPA) e 1 estudo utilizou seqüenciamento bissulfito PCR (BSP) para explorar

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metilação no câncer de ovário e controle. Características dos 13 estudos são apresentados na Tabela 1.

Os resultados da NOS mostrou que a maioria dos estudos tinha um controlo de hospital excepto para Li [26] e tinha não corresponde ao controlo de acordo com o confundidor potencial excepto para Ibanez [20]. A pontuação dos estudos variou de 5 a 8, com uma pontuação média de 7. Informações Detalhe da NOS foi apresentada na Tabela 2.

Meta-análise

O

x

2-baseado no teste e estatística de Cochran Q

I

2 estatísticas não detectou uma heterogeneidade significativa entre os estudos incluídos (

I

2

= 29,0%, Q = 16,9,

P =

0,15). Em seguida, usamos um modelo de efeitos fixos para avaliar a associação entre o

metilação RASSF1A

promotor e do cancro do ovário. Na meta-análise,

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frequência metilação do promotor foi significativamente associada com o câncer de ovário (resumo ou foi 11,17, IC 95% = 7,51-16,61) (Fig. 2).

meta-regressão e análise de subgrupo

Embora os testes não encontrou um heterogeneidade significativa entre os estudos, realizamos primeira meta-regressão para explorar potenciais fontes de heterogeneidade. Com base em estudos anteriores, assumimos que a heterogeneidade pode vir do subgrupo populacional, tamanho e controle de exemplo tipo de amostra. Realizou-se um modelo de regressão múltipla com três variáveis ​​(ou seja, a população subgrupos, ano de publicação, eo tamanho da amostra caso). No final, nenhuma fonte de heterogeneidade significativa foi observada (Tabela 3). Foi realizada uma análise de subgrupo para avaliar mais detalhadamente a origem da heterogeneidade de acordo com a população, tamanho da amostra caso e tipo de controle.

Na análise de subgrupo, o OR entre o

promotor RASSF1A

metilação e câncer de ovário foi 14,76 (IC 95% = 5,73-38,01) em asiáticos e 6,85 (IC 95% = 3,46-13,58) em caucasianos sob o modelo de efeitos fixos. Da mesma forma, o para o subgrupo tamanho da amostra caso OR foi 8,93 (IC 95% = 4,43-18,42) na 50 grupo caso sob o modelo de efeitos fixos, e 11,19 (IC 95% = 4,83-25,96) na ≥50 grupo caso sob o modelo de efeitos aleatórios. Na análise de subgrupo do tipo de controlo, o OR foi 8,43 (IC 95% = 4,03-17,63) no grupo BAT incluindo tecidos de ovário benignos e os tecidos adjacentes sob o modelo de efeitos aleatórios e 16,50 (IC 95% = 6,82-39,88) em o grupo NT sob o modelo de efeitos fixos (Tabela 4).

análise de sensibilidade

de acordo com a análise de sensibilidade a odds ratio variou de 9,16 (IC 95% = 6,07-13,81) para 12,99 (IC 95% = 8,40-20,08), omitindo um único estudo sob o modelo de efeito aleatório (Fig. 3). Nenhum estudo foi encontrado para afetar o pool ou como indicado por análise de sensibilidade.

viés de publicação

O estudo de Peters [29] mostraram que as taxas de erro tipo I para o teste de Egger [13] são mais elevados do que aqueles para o teste de regressão alternativa quando as estimativas de síntese são lnORs. Portanto, correlação de postos de Begg, um gráfico de funil e o teste Peters foram empregadas para avaliar o viés de publicação da literatura. A forma do gráfico de funil do Begg na Figura 4 mostrou uma possível assimetria, mas o teste Peters não detectou viés de publicação (

P =

0,48) do eo Begg de correlação também não detectar viés de publicação (

P =

0,14). O número de falhas (

Z

= 48,23, N

fs0.05 = 851,98, N

fs0.01 = 415,53) também sugeriu que o estudo teve um pequeno grau de viés de publicação.

Discussão

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modula apoptótica múltipla, dinâmica de tubulina e os caminhos de checkpoint do ciclo celular. Alguns estudos descobriram que a sobre-expressão de

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promove a apoptose celular e interrupção do ciclo em linhas celulares de cancro [9], [30].

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pode ser inactivado por mutação do gene e metilação do promotor e o último foi responsável pela grande maioria dos casos [9].

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metilação do promotor é um dos eventos de inativação epigenética mais frequentemente detectadas nos câncer humano e conduz ao silenciamento de

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expressão [31]. Perda de

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expressão tem sido relatada em pulmão, mama, bexiga, gástrico, colangiocarcinoma e tumores carcinoma de células primárias sqaumous esofágicas [32] – [36].

A presente meta-análise incluiu treze artigos com 763 casos e 438 controlos. O

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nível de metilação do grupo com câncer foi significativamente maior do que o grupo controle. O odds ratio sob o modelo de efeito fixo foi de 11,17 (IC 95% = 7,51-16,61) nos casos de câncer em comparação com os controles. O resultado demonstrou que

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metilação do promotor foi associada com o câncer de ovário, que foi consistente com estudos anteriores [22], [23].

O resumo OR foi 14,76 (IC 95% = 5,73 -38,01) em asiáticos e 6,85 (IC 95% = 3,46-13,58) em caucasianos. A associação entre o

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metilação do promotor e de ovário em asiáticos foi mais forte do que em caucasianos. Da mesma forma, o estudo observou divergência de Fraser de metilação do DNA entre Africano e da população europeia, que pode ser devido a SNPs associado à metilação (mSNPs) e epistasis complexa ou gene × interacções entre o ambiente [37].

Por tamanho da amostra, resumo ou foi 8,93 (IC 95% = 4,43-18,42) no grupo de 50 casos e 11,19 (IC 95% = 4,83-25,96) na ≥50 grupo caso. Em outro subgrupo o resumo ou alterado um pouco entre grupo 50 grupo caso e ≥50 caso. Os OR para os diferentes subgrupos de controlo foram de 8,43 (IC de 95% = 4,03-17,63) para o grupo BAT e 16.50 (IC 95% = 6,82-39,88) para o grupo NT. Este resultado mostrou que a diferença de frequência de

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metilação do promotor entre o grupo de caso e do grupo NT foi maior do que entre o grupo de caso e do grupo BAT. O resultado indica que os tecidos de ovário benignos e os tecidos adjacentes apresentaram maior frequência de

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metilação do promotor de tecido ovariano normal, que também sugeriu que

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metilação do promotor pode desempenhar um papel importante na patogênese de carcinoma de ovário [23], [38].

Houve algumas limitações no estudo. A primeira limitação é potencial fator de confusão. Porque houve uma falta de informação sobre as variáveis ​​no grupo de controle, que só considera três variáveis ​​(população, tamanho da amostra caso, e tipo de controle) na análise de subgrupo. Outro possíveis fatores de confusão poderia existir na meta-análise. A segunda limitação é viés de publicação. Embora nenhum viés de publicação significativa foi encontrada de acordo com o teste de Peter, estudos negativos e inéditos pode levar a algum viés.

Em conclusão, hipermetilação do

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promotor foi encontrado para ser associado com câncer de ovário de acordo com a meta-análise, que sugeriu que a metilação do promotor de

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é um biomarcador potencialmente úteis no processo cancerígeno de câncer de ovário. O presente estudo requer confirmação através de bem desenhados estudos prospectivos.

Informações de Apoio

Checklist S1.

PRISMA Checklist

doi:.. 10.1371 /journal.pone.0076787.s001

(DOCX)

Agradecimentos

Os autores agradecem Helen Neumann para editar o artigo