Abstract
Fundo
O cancro do pulmão está emergindo rapidamente como a principal causa de morte em pacientes com câncer chineses. Os fatores causais para o desenvolvimento do cancro do pulmão chinesa permanecem em grande parte obscura. Aqui nós empregamos uma tela de perda de função com base em biblioteca shRNA de forma todo o genoma e imparcial para interrogar potenciais candidatos supressores de tumor no imortalizado linha de células epiteliais do pulmão humano BEAS-2B.
Métodos /Resultados
os ensaios de agar mole foram realizados por triagem de células BEAS-2B infectadas com a biblioteca de shRNA retroviral com a característica adquirida de crescimento independente de ancoragem, grandes ( 0,5 mm de diâmetro) e colónias bem separados foram isolados para a proliferação . Os PCRs foram realizados para amplificar o fragmento de shRNA integrada a partir de ADN genómico indivíduo extraídas de cada colónia, e cada produto de PCR for submetido a sequenciação do ADN para revelar o shRNA integrado e do seu gene alvo. Um total de supressores de transformação 6 candidatos, incluindo INPP4B, Sesn2, TIAR, CDCA, Nup210, LMTK3 foram identificados. Nós validado Sesn2 como o candidato do supressor de tumor de câncer de pulmão. Knockdown de Sesn2 por um shRNA alvo 3 ‘UTR de Sesn2 transcrição potente estimulou a proliferação e transformação maligna do pulmão brônquica células epiteliais BEAS-2B através da ativação da sinalização da Akt-mTOR-p70S6K, enquanto que a expressão ectópica de Sens2 re-suprimiu a transformação maligna provocada pelo Sesn2 shRNA. Além disso, knockdown de Sesn2 em células BEAS-2B promoveu o crescimento tumoral BEAS-2B transplantado com células de xenoenxerto em ratinhos nus. Por último, sequenciamento de DNA indicaram mutações do gene Sesn2 são raros, os níveis de proteína de Sesn2 de 77 pacientes com câncer de pulmão chineses varia muito em comparação com seus tecidos normais adjacentes, eo nível de baixa expressão de Sesn2 associados com os pobres sobrevida destes pacientes examinados por Kaplan Meier.
Conclusões
Nossa tela baseada em shRNA demonstrou Sesn2 é um potencial supressor de tumor em células epiteliais do pulmão. O nível de Sesn2 expressão pode servir como um marcador de prognóstico para pacientes com câncer de pulmão chineses na clínica
Citation:. Xu H, Sun H, Zhang H, Liu J, Fan F, Li Y, et al. (2015) Um shRNA tela genética com base Identificado Sesn2 como um supressor de tumor potencial em câncer de pulmão através de Repressão da Akt-mTOR-p70S6K Sinalização. PLoS ONE 10 (5): e0124033. doi: 10.1371 /journal.pone.0124033
Editor do Academic: Max Costa, Faculdade de Medicina da Universidade de Nova York, United States