Abstract
Fundo
O câncer de pâncreas é a quarta principal causa de morte por câncer nos países ocidentais, com a menor taxa de sobrevivência de 1 ano entre os cânceres comumente diagnosticadas. biomarcadores confiáveis para o diagnóstico do câncer de pâncreas são escassos e são urgentemente necessários para permitir a cirurgia curativa. Como microRNA (miRNA) recentemente emergiu como biomarcadores candidatos para esta doença, nós exploramos no presente estudo piloto as diferenças nos perfis de microRNA salivares entre os pacientes com tumores pancreáticos que não são elegíveis para a cirurgia, lesões pré-cancerosas, doenças inflamatórias ou livre do câncer pacientes como um potencial ferramenta de diagnóstico precoce.
Métodos
amostras de saliva de pacientes com câncer de pâncreas (n = 7), pancreatite (n = 4), IPMN (n = 2), ou controles saudáveis (n = 4) foram obtidos durante o exame endoscópico. Após o isolamento de RNA total, a expressão de 94 miRNAs candidatos foi rastreada por q (RT) PCR usando Biomark Fluidgm. pancreáticas células cancerosas de origem humana foram xenoenxerto em ratinhos atímicos como modelo experimental de câncer pancreático.
Resultados
Foram identificados hsa-miR-21, hsa-miR-23a, hsa-miR- 23b e miR-29c como sendo significativamente regulada positivamente em saliva de pacientes com cancro pancreático, comparativamente ao controlo, mostrando a sensibilidade de 71,4%, 85,7%, 85,7% e 57%, respectivamente, e excelente especificidade (100%). Curiosamente, hsa-miR-23a e HSA-miR23b são sobre-expressos na saliva de pacientes com lesões precursoras do câncer do pâncreas. Descobrimos que HSA-miR-210 e deixou-7c são sobre-expressos na saliva de pacientes com pancreatite em comparação com o grupo de controlo, com uma sensibilidade de 100% e 75%, e especificidade de 100% e 80%, respectivamente. Última HSA-miR-216 foi regulada positivamente em doentes com cancro, em comparação com os pacientes diagnosticados com pancreatite, com uma sensibilidade de 50% e uma especificidade de 100%. Em modelos experimentais de PDAC, a detecção de microRNA salivar precede a detecção sistêmica das células cancerosas marcadores.
Conclusões
As nossas novas descobertas indicam que a salivar miRNA são discriminatórias em pacientes com câncer pancreático que não são elegíveis para a cirurgia. Além disso, nós demonstramos em modelos experimentais que salivares detecção de miRNA precede a detecção sistêmica das células cancerosas marcadores. Este estudo hastes para o uso de saliva miRNA como biomarcador para o diagnóstico precoce de pacientes com câncer pancreático irressecável
Citation:. Humeau M, Vignolle-Vidoni A, Sicard F, Martins F, Bournet B, Buscail L, et ai. (2015) salivar MicroRNA no pâncreas pacientes com câncer. PLoS ONE 10 (6): e0130996. doi: 10.1371 /journal.pone.0130996
editor: Kandiah Jeyaseelan, Universidade Nacional de Cingapura, Cingapura
Recebido: 10 de dezembro de 2014; Aceito: 27 de maio de 2015; Publicação: 29 de junho de 2015
Direitos de autor: © 2015 Humeau et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação
financiamento:.. Esses autores não têm apoio ou financiamento para relatar
Competir interesses: os autores entraram com uma patente sobre o “uso de microRNA salivar para o diagnóstico de câncer de pâncreas “. Um rascunho foi escrito em colaboração com o nosso departamento de IP (INSERM Transfert), e depositados sob a # EP15305020.8, mas ainda não está disponível on-line. No entanto, isso não altera a adesão dos autores para todos os PLOS ONE políticas de dados e materiais de compartilhamento. Os autores não têm outras declarações relevantes em matéria de emprego, consultoria, patentes, produtos em desenvolvimento ou produtos modificados.
Introdução
pâncreas adenocarcinoma ductal (câncer de pâncreas, PDAC) é a quarta principal causa de morte por câncer nos países ocidentais, com os cinco anos mais baixas em relação [1] e 1 ano de sobrevivência [2] taxas entre os tipos de câncer comumente diagnosticadas. câncer de pâncreas é antecipada para passar para a segunda principal causa de morte por câncer em todo o mundo até 2020, na ausência de melhorias no tratamento [3]. Atualmente não há meios para o diagnóstico confiável de estágios iniciais de câncer de pâncreas. Por conseguinte, a grande maioria dos doentes (85%) exibem uma doença avançada que resulta numa taxa de ressecção baixo (15% dos pacientes) que conduz a uma sobrevivência mediana global sombrio de 4 a 6 meses. Assim, descobrir biomarcadores para o diagnóstico precoce do câncer de pâncreas pode favorecer tratamento e prognóstico início dos pacientes.
Os microRNAs (miRNAs) surgiram recentemente como uma nova classe de biomarcadores robustas para diagnóstico de câncer, incluindo PDAC [4]. Estes reguladores potentes de expressão genética pode ser cuidadosamente quantificados em diversos tecidos e fluidos, devido à sua elevada estabilidade inerente, em comparação com proteínas e RNAs mensageiros. De importância, miARN pode ser quantificada em quantidades muito baixas de materiais, incluindo micro-biópsias, e em amostras degradadas. Relatórios recentes amplamente demonstrado que os perfis de miARN pode discriminar com sucesso normal a partir de tecido pancreático cancerosas, e pode também prever o prognóstico da doença ou resposta ao tratamento [4]. A estabilidade dos miRNAs foi mais uma vez sublinhada como miRNA perfil no plasma foi recentemente demonstrado para diferenciar pacientes PDAC de controles saudáveis [4]. Tais achados pavimentar o caminho para o uso de circulação de miRNAs como biomarcadores PDAC minimamente invasiva.
Vários outros fluidos corporais como urina, sêmen e saliva foram recentemente consideradas como repositórios para diagnóstico de câncer [5,6]. Saliva tem a vantagem superior como coleta de amostras é simples, não invasivo, causa pouca ansiedade por parte dos pacientes e pode ser repetido. A saliva foi demonstrado que contêm proteínas /péptidos, ácidos nucleicos, electrólitos, hormonas e que se originam a partir de ambas as fontes locais e sistémicas e estudos recentes levaram interesse em utilizar saliva como uma fonte de biomarcadores. Consequentemente, a utilização de saliva para a detecção de doenças orais tem sido extensivamente demonstrada [7], e saliva recentemente surgiu como uma fonte rica de miARN, tal como tem-miR-31, para o diagnóstico do cancro oral [8-11]. Por outro lado, o uso de saliva para a doença sistémica é largamente claro. Nos últimos anos, metabólica [12], transcriptomic [13] e microbiota [14] perfis salivares foram demonstrados possuir poder discriminatório para a detecção de PDAC, com alta especificidade e sensibilidade.
Para o nosso conhecimento, o uso de miRNAs salivares para o diagnóstico de câncer pancreático irressecável não foi relatado à data. Consequentemente, o objetivo deste estudo foi explorar a evidência científica e proporcionar uma base racional para o uso de saliva para detecção do PDAC irressecável que representa a grande maioria dos pacientes diagnosticados com este câncer. Neste estudo piloto, descobrimos que quatro miRNAs salivares (HSA-miR-21, hsa-miR-23a, hsa-miR-23b e hsa-miR-29c) pacientes PDAC segregadas com sucesso de doadores livre de câncer, enquanto hsa-miR -210 e deixe-7c indicam pancreatite e hsa-miR-216 discrimina pancreatite de câncer. Além disso, nós demonstramos aqui em modelos experimentais de PDAC que salivar detecção de miRNA precede a detecção de células cancerosas marcadores sistêmicos. Tomados em conjunto, apresentamos dados preliminares que mostra diferenças significativas nos perfis de miRNA entre saliva de pacientes com PDAC e saliva de pacientes que são livres de tumor. Os biomarcadores salivares descobertos possuem potencial discriminatório inerente para uma ferramenta de diagnóstico não invasivo para PDAC, em pacientes que não são elegíveis para a cirurgia.
Materiais e Métodos
Os pacientes
Este protocolo foi aprovado pela Comissão de Ética (
Comité de Protecção des Personnes Sud-Ouest et Outre Mer N ° 1