Abstract

Fundo

O insucesso do tratamento do carcinoma oral de células escamosas (CCE), levando à recidiva local (s) e as metástases se deve principalmente à resistência aos medicamentos. cancro de células estaminais (CSCs) são pensados ​​ser responsável pelo desenvolvimento de resistência ao fármaco. No entanto, as correlações entre CSCs, resistência a drogas, e nova estratégia contra a resistência aos medicamentos em CCEO ainda imperceptíveis.

Métodos

Uma esfera resistente aos medicamentos modelo (DRSP) foi gerada usando uma cultura não adesivo sistema para induzir as células resistentes aos medicamentos a partir de células de câncer bucal SCC25. Uma análise comparativa foi realizada entre as células controle pai e DRSPs com uma estratégia de tratamento relacionado com foco na expressão de transição epitelial-mesenquimal (EMT) -associated marcadores, genes de resistência a drogas relacionadas e propriedades CSC

in vitro

, bem como tumorigenicidade eo regime para regressão do tumor

in vivo

.

resultados

Nossos dados evidenciam a presença de um fenómeno de EMT com a transição gradual de um celular epithelioid à morfologia esferóide mesenquimais-like durante a indução da resistência aos medicamentos. A caracterização do DRSPs revelou a regulação positiva dos genes de resistência a drogas relacionadas

ABCG2

e

MDR-1 Comprar e de marcadores CSC-representativos, sugerindo que DRSPs têm maior resistência à cisplatina (Cis) e mais fortes propriedades CSC em comparação com o controlo. Além disso, observou-se a sobre-expressão da proteína de choque térmico 27 ​​fosforilado (p-Hsp27) através da activação de sinalização de p38 MAPK em DRSPs. Knockdown de Hsp27 diminuição da resistência Cis e apoptose induzida em DRSPs. Além disso, um inibidor de Hsp27, a quercetina (Qu), suprimiu a expressão de p-Hsp27, com alterações da assinatura EMT, que conduz à promoção de apoptose em DRSPs. Um estudo xenographic também confirmou o aumento de oncogenicidade nos DRSPs. A combinação de Qu e Cis pode reduzir o crescimento do tumor e diminuir a resistência à droga em CCEO.

Conclusões

O p38 MAPK eixo-Hsp27 desempenha um papel importante na resistência aos medicamentos CSCs mediada em CCEO. Segmentação este eixo, utilizando Qu combinado com Cis pode ser uma estratégia de tratamento para melhorar o prognóstico em pacientes com CEB

citação:. Chen S-F, Nieh S, Jao S-W, Liu C-G, Wu C-H, Chang Y-C, et ai. Spheres (2012) A quercetina Suprime resistentes aos medicamentos via p38 MAPK-Hsp27 apoptose via em células Oral câncer. PLoS ONE 7 (11): e49275. doi: 10.1371 /journal.pone.0049275

editor: Vladimir N. Uversky, University of South Florida College of Medicine, Estados Unidos da América

Recebido: 20 de julho de 2012; Aceito: 08 de outubro de 2012; Publicação: 12 de novembro de 2012

Direitos de autor: © 2012 Chen et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este estudo foi parcialmente apoiado pela Tri-Service general Hospital e National Defense Medical Centre: Grant No. TSGH-C101-076; Departamento de Higiene Dental, China Medical University: Grant No. CMU99-N1-04-1; Conselho Nacional de Ciência, República da China (Taiwan): Concede No. NSC-98-2314-B-016-019-MY3, NSC 99-2320-B-039-028-MY3 e NSC 100-2320-B-016- 009; Departamento de Saúde, Executive Yuan, República da China (Taiwan): DOH100-TD-PB-111-TM007-22. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

carcinoma de células escamosas oral (CCEO) é uma das neoplasias mais comuns e letais de cabeça e pescoço em Taiwan e em todo o mundo [1], [2]. Os tratamentos atuais para o câncer bucal são de eficácia limitada na prevenção da recorrência e progressão tumoral, e uma proporção significativa dos pacientes desenvolvem invasão e metástases locais [3]. O prognóstico dos pacientes com câncer oral é relativamente pobre apesar dos recentes avanços terapêuticos [4]. Cisplatina (Cis) à base de quimioterapia é o principal tratamento para pacientes com câncer bucal avançada e é usado pelo menos para fins paliativos. No entanto, a eficácia da quimioterapia é limitada por causa da

de novo

resistência a drogas. Portanto, é importante para elucidar os mecanismos subjacentes a mediação de chemoresistance e para desenvolver uma nova estratégia para o tratamento da CEB.

O conceito de células-tronco cancerosas (CSCs) foi proposto há décadas com base nas semelhanças entre células cancerosas e células estaminais normais [5]. A existência de CSCs foi caracterizado pela primeira vez no âmbito da leucemia [6]. A hipótese CSC sugere que tumores compreendem uma pequena população de células que possuem capacidade de auto-renovação e formando-tumoral [7]. evidências acumuladas demonstrado que CSCs pode não só conduzir a recidiva e metástase do cancro, mas que também contribuem para a resistência dos tumores à quimioterapia [8].

ABCG2 é o gene mais bem conhecido e é expressa numa grande variedade de células estaminais que foi servido como um marcador para as células estaminais a partir de várias fontes [9], [10]. expressão MDR1 foi também relatado em vários tipos de fenótipos tumorais quimiorresistentes [11], [12]. Vários mecanismos têm sido propostos para a resistência à cisplatina recentemente [13], [14], com base no facto de que a cisplatina age como um múltiplos alvos celulares representativas de diversas vias de transdução de sinal [13]. Um dos outros do que a regulamentação da

ABCG2

mecanismos mais importantes e

MDR-1

em associação com resistência a cisplatina é reduzida acumulação intracelular devido à ingestão de drogas prejudicada envolvendo na manutenção da homeostase de cobre tal como transportador de cobre humana 1 e os dois transportadores de efluxo de cobre e ATP7A ATP7B que regulam o efluxo de cisplatina [15] – [17]

Apesar da relação entre a indução de CSCs em células tumorais e a aquisição de resistência ao fármaco. e a recorrência de tumores, o mecanismo subjacente a estes fenómenos permanece em grande parte desconhecida.

proteínas de choque térmico (HSPs) são geralmente induzida por stress e como função chaperonas moleculares, que são responsáveis ​​pela manutenção da conformação correcta de outras proteínas ambiental . HSPs são classificados em alto peso molecular HSPs, tais como a Hsp90 e Hsp70, e peso molecular baixo hsp, incluindo Hsp27 [18]. Em adição à sua função como uma chaperona convencional, Hsp27 tem sido relatada a ser sobre-expresso em cancros da mama, do ovário, da cabeça e pescoço e [19] – [21]. A expressão de Hsp27 tem sido associado com prognósticos pobres e as taxas de sobrevivência em pacientes com diferentes tipos de câncer. Além disso, Hsp27 foi demonstrada estar associada com a indução e quimiorresistência de células de cancro de rolamento propriedades de células-tronco-como no cancro da mama e muitas outras malignidades. No entanto, os relatórios do envolvimento da Hsp27 na resistência a drogas em e prognóstico de, CEB são limitadas. Quercetina (Qu) é o principal composto flavonóide (3,30,40,5,7-penta-hidroxi-flavanona) comumente extraído de arandos, mirtilos, maçãs e cebolas. Possui um largo espectro de propriedades bio-farmacológicos [22] e podem oferecer novas opções promissoras para o desenvolvimento de quimiopreventivo mais eficaz e estratégias quimioterapêuticos, devido à sua potente antioxidante e propriedades de radical livre de remoção de [23]. Um relatório anterior também revelou que Qu desempenha um papel como um inibidor da síntese de Hsp e possui efeitos protectores na lesão do fígado do rato para a homeostase celular [24]. No entanto, os detalhes da relação entre Qu e Hsp27 sobre o seu envolvimento na resistência aos medicamentos em câncer necessitam de mais pesquisas.

O nosso grupo previamente estabelecido um novo sistema de esfera cultura não adesivo que nos permitiu purificar e enriquecer uma população de CCEO células com propriedades de células-tronco semelhantes [25]. Aqui, nós levou vantagem deste sistema de cultura bem estabelecida para investigar a resistência do câncer bucal para Cis e seu mecanismo molecular subjacente. Com base no estabelecimento de esferas resistentes aos medicamentos (DRSPs), o objetivo do presente estudo foi validar o possível papel da Hsp27 e sua via de sinalização associada na modulação da apoptose. Além disso, nós escolhemos a combinação de Qu e Cis como um potencial agente terapêutico para explorar como Qu interage com Hsp27 e o mecanismo subjacente a supressão Qu mediada eficaz de crescimento chemoresistance e tumor na CEB. Este estudo pode fornecer uma visão sobre estratégias de resistência a drogas e novos tratamentos contra a resistência aos medicamentos, que poderiam ser utilizados para melhorar o prognóstico ea sobrevida em pacientes com CEB.

Métodos

Celular e Sphere Cultura

a linha de células de cancro da língua humana SCC25, foi obtido a partir do ATCC (ATCC número: CRL-1628) cultivadas em meio RPMI suplementado com 10% de soro fetal de bovino (FBS) a 37 ° C na presença de 5% de CO

2. A célula foi cultivada em mercadorias plásticos de cultura com a superfície não adesiva. Placa de 10 cm são feitos de não adesivas para células por revestimento com filmes finos de agarose. As células foram colocadas em placas a uma densidade de 5 x 10

4 vivo células /placa de 10 cm, e o meio de cultura foi mudado a cada dois dias até que a formação de esfera, como pode ser visto na nossa anterior relatada [25].

indução de células Resistência de droga

SCC25 células parentais foram plaqueadas a uma densidade de 5 x 10

4 vivo células /placa de 10 cm, com tratamento continuado Cis foram adicionados às concentrações finais (1, 5, 10, 20, e 30 uM) para três meses, consequentemente. Depois de células de tratamento foram colhidas e manutenção de baixa concentração Cis (0,5 M) meio de cultura e o meio de cultura foi trocado a cada dois dias.

celular Análise de Viabilidade

Os Cis foi adicionado a uma taxa de dose de (5, 10, 20, e 30 uM). As células foram semeadas em placas de 6 poços a uma densidade de 2 × 10

4 por poço em meio de, após o tratamento com cis durante 48 h, e analisadas pelo ensaio de MTT (Sigma-Aldrich).

RNA Interferência

Os oligos siRNA de Hsp27 consistiu de três alvos siRNAs específicos destinados a knockdown expressão do gene. A sequência de três metas foram mostrou-se abaixo: sc-29350A: sentido: 5’GAGUGGUCGCAGUGGUUAGtt -3 ‘; anti-sentido: 5’-CUAACCACUGCGACCACUCtt-3 ‘); sc-29350B: sentido: GACGAGCUGACGGUCAAGAtt; antisense: UCUUGACCGUCAGCUCGUCtt; sc-29350C: Sentido: CCACGCAGUCCAACGAGAUtt; Anti-sentido: AUCUCGUUGGACUGCGUGGtt ou oligos siRNA de controlo negativo foi adquirido de Santa Cruz Biotechnologies, Inc. 2 × 10

6 células foram transfectadas com uma concentração final (100 nM) de Hsp27 siRNA utilizando Lipofectamina 2000 durante 48 h para detectar o nível de proteína. As células que foram transfectadas com ARNsi não específica (MOCK grupo) foram paralelismo demonstrada.

Análise Western Blot

lisados ​​celulares totais foram separadas por electroforese em 12% SDS-PAGE e transferidos para fluoreto de polivinilideno membrana. As membranas foram bloqueadas com leite magro a 5% à temperatura ambiente durante 1 h. Foram utilizados os anticorpos primários: Hsp27 (Santa Cruz; SC-1049; 1:1000) GAPDH (ab9482; 1:5000 diluição) (Abcam, Cambridge, MA, EUA), oct-3/4 (sc-8630; 1: 1000), NANOG (SC-81961; 1:1000), SOX2 (SC-17320; 1:500) (Santa Cruz Biotechnology), ATP-vinculativo cassete sub-membro da família G 2 (ABCG2) (sc-8630; 1: 1000), MDR-1 (SC-8630; 1:1000), p38MAPK (SC-8630; 1:1000), pp38MAPK (SC-8630; 1:1000), Capase-3 (SC-8630; 1:1000) e PARP (SC-81961; 1:1000) em tampão TBST contendo 3% de leite desnatado a 4 ° C durante a noite e subsequentemente com o anti-ratinho e o anticorpo secundário de coelho anti-cabra conjugado com peroxidase (1:1000) (Santa Cruz Biotechnology) a 25 ° C durante 1 h. Os imunotransfer�cias foram desenvolvidos usando um sistema de quimioluminescência aumentada, e a luminescência foi visualizado em filme de raios-X.

In vivo

Oncogenia Ensaio

O

In vivo

estudo tumorigenicidade foi realizada seguindo orientações do comitê de ética local que tinham acreditação total concedido pela Associação de Avaliação e acreditação do Laboratório animal Care no Centro Médico da Defesa Nacional. Os ratinhos foram mantidos a 18-26 ° C, 30-70% de humidade, e independentemente são climatizados sob um /12 h ciclo de luz escuro de 12 horas por 7 dias antes da injecção de xenoenxerto. As células parentais e esferas CEs foram injectados no BALB /c ratos pelados (6 semanas). A suspensão de células (100 ml) foi injectada subcutaneamente em cada ratinho com números diferentes de células a partir de 1 × 10

6, 1 × 10

5, e 1 × 10

4 células. Os tumores foram formados em 7 dias após a injecção. Os tamanhos dos tumores foram medidos semanalmente e monitorizada de acordo com a fórmula (comprimento x largura

2) /2. Aos 30 dias após a inoculação ou ortotópico, os ratos foram sacrificados sob anestesia. Todos os animais foram conformados e aprovado pelo Comitê de Cuidado e Uso Institucional animal no Centro Médico Nacional de Defesa (IACUC-11-064).

Imunohistoquímica

As secções de tecido ou bloco de células foram de- encerado em xileno e re-hidratadas em álcool. A recuperação de antígenos foi realizada por incubação em 10 mM de tampão de citrato (pH 6,0) a 95 ° C durante 40 min. A peroxidase endógena foi bloqueada com 0,3% de peróxido de hidrogénio durante 10 min e depois incubadas com soro normal de cavalo a 5% em solução salina tamponada com fosfato (PBS) durante 60 min à temperatura ambiente para bloquear a reacção não específica de anticorpos. Depois de uma lavagem com Tris-tamponada salina mais 0,1% de Tween 20 (TBST), as lâminas foram incubadas durante a noite a 4 ° C com os anticorpos primários, a E-caderina (SC-8426; 1:800) e fibronectina (SC-18825; 1: 500) (Santa Cruz Biotechnology, Inc., CA, EUA). Depois de ser lavado em TBST, as lâminas foram incubadas durante 30 min à temperatura ambiente com anticorpo secundário biotinilado seguido de estreptavidina-biotinilado-complexo enzimático (kit streptABComplexes; Dako, Glostrup, Dinamarca). Posteriormente, eles foram coradas com 0,003% 3, tetracloridrato 3-diaminobenzidina, contrastadas com hematoxilina de Mayer, desidratado, e montado.

Análise Estatística

O teste t de Student independente ou ANOVA foi utilizado para comparar as variáveis ​​contínuas entre os grupos, ao passo que o Χ

2 teste foi aplicado para a comparação da variável dicotômica. O nível de significância estatística foi fixado em 0,05 para todos os testes. Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando o programa SPSS versão

Resultados

Caracterização de DRSPs em células de CCEO

Droga resistente a 12.0 (SPSS, Inc., Chicago, IL, EUA).

células (DRCS), induzido a partir da linha celular SCC25 foram estabelecidas primeiro através de tratamentos de várias etapas Cis a várias concentrações (0, 5, 10, 20, e 30 uM). Apenas uma pequena proporção de DRCs (20%) foram mantidos a longo prazo após o tratamento Cis em 25 uM (Figura 1A). DRCs foram adicionalmente cultivadas utilizando um sistema de cultura não adesivo, tal como descrito no nosso relatório anterior. Cultura durante 7 dias produziu um fenótipo esferóide denominado uma esfera resistente a medicamentos (DRSP). Uma alteração gradual morfológica de DRCs de um epitelióide, aparência poligonal para, uma configuração de fuso mesenquimais semelhante, que é representativo do fenómeno EMT, foi observado durante a indução das células-mãe para CEs DRCs (Figura 1B). Após o tratamento com 25 uM Cis durante 48 h, DRSPs eram muito mais resistentes a cis do que as células de controlo foram CEs (Figura 1C). Para além das alterações morfológicas sugestivos do fenómeno EMT durante a indução, DRSPs foram caracterizados por capacidades aumentadas migração e invasão em comparação com células de controlo (Figura 1D). A caracterização do DRSPs usando análise de Western blot mostrou que a regulação positiva dos genes de resistência a drogas relacionadas

ABCG2

e

MDR-1 Comprar e de marcadores CSC-representativos, incluindo OCT4, NANOG, e Sox2 , sugerindo que DRSPs têm maior resistência à Cis e mais fortes propriedades CSC em comparação com células de controlo. Uma análise comparativa revelou alterações de marcadores EMT-associados, incluindo a diminuição da expressão de E-caderina, o aumento da expressão de fibronectina e Twist-1, e aumentou significativamente a expressão de MMP-2 e MMP-9 em DRSPs em comparação com células de controlo (Figura 1E) .

(a) As células resistentes a fármacos CEs (DRCS) foram estabelecidas através de várias etapas de tratamento Cis em várias concentrações. Apenas uma pequena proporção de DRCs foram mantidos a longo prazo após o tratamento cis. (B) DRCs foram ainda cultivadas utilizando um sistema de cultura não adesiva, que produziu um fenótipo esferóide denominado esferas resistentes a drogas (DRSPs). alterações morfológicas graduais de DRCs que eram indicativos do fenômeno EMT foram observadas durante a indução. (C) Após o tratamento com Cis, as células DRSP foram mais resistentes à Cis que eram células controle CEs. (D) DRSPs foram ainda caracterizados pelo aumento de capacidades migração e invasão em comparação com células de controlo. (E) Comparações de EMT- e marcadores associados a invasão, produtos de genes relacionados com o fármaco-resistência, e marcadores CSC-representativos revelou alterações da expressão de marcadores de EMT-associados e regulação positiva significativa de MMP-2 e MMP-9, droga marcadores de resistência relacionada com produtos de genes, e CSC-representativos em DRSPs em comparação com células de controlo.

o envolvimento do p38 MAPK-Hsp27 antiapoptóticas Caminho na resistência a drogas em CCEO

a expressão de p-Hsp27 foi dependente da dose correlacionado com o tratamento com cis com CEB células (Figura 2A). P-Hsp27 foi sobre-expressa através da activação de sinalização a montante de p38 MAPK em DRSPs. Um estudo adicional através de siARN da Hsp27 induzida inversamente a regulação positiva de CI-caspase 3 e PARP-IC, resultando na promoção de apoptose em DRSPs. No entanto, não houve qualquer efeito sobre a expressão de p38 MAPK (Figura 2B). A evidência a partir da análise de Western blot mostrou que o knockdown de p38 MAPK directamente regulada negativamente p-Hsp27, indicando a presença da via anti-apoptótica de p38 MAPK-Hsp27 em DRSPs (Figura 2C).

(A) A expressão de p- Hsp27 foi dose-dependente correlacionada com o tratamento Cis em células de CCEO. P-Hsp27 foi correspondentemente sobre-expresso através da activação de sinalização de p38 MAPK a montante em DRSPs. (B) Queda de Hsp27 induzida inversamente a regulação positiva de CI-caspase 3 e PARP-IC, resultando num aumento da apoptose em DRSPs. No entanto, não houve nenhuma alteração de p38 MAPK a montante. (C) Knockdown de p38 MAPK diretamente subregulado p-Hsp27, indicando a presença da via anti-apoptótica p38 MAPK-Hsp27 em DRSPs.

Qu mediada efeito inibitório sobre a p-Hsp27 Resultando em Reforço da apoptose actividade em DRSPs

um ensaio de MTT demonstraram que o tratamento com 100 uM Qu combinada com 10 uM Cis reduziu o crescimento de DRSP e chemosensitized significativamente DRSPs cis, tal como evidenciado por uma diminuição na sobrevivência das células após tratamento Cis em DRSPs (

P

0,01). Qu inibiu os produtos dos genes de resistência a drogas in

ABCG2

a uma dose de 500 uM e também gradualmente atenuado

MDR-1

de uma forma dependente da dose.

MDR-1 foi

mais vulnerável ao tratamento Qu do que era

ABCG2

(Figura 3A). O knockdown de Hsp27 ou a utilização de Qu combinado com Cis produziu efeitos apoptóticos semelhantes, que conduz a regulação negativa da p-Hsp27 e supra-regulação de CI-caspase 3 e CI-PARP, mas não teve nenhum efeito sobre a p38 MAPK em DRSPs (Figura 3B). Os ensaios de migração e invasão mostraram que o tratamento com Qu combinado com Cis marcadamente diminuída capacidades migração e invasão em DRSPs (Figura 3C). O tratamento com Qu Cis combinado com reverteu a expressão de marcadores de EMT-associadas, dando origem a regulação positiva de E-caderina e a regulação negativa da vimentina, Twist-1, e fascina-1 (Figura 3D).

(a) um MTT ensaio demonstrou que o tratamento Qu a uma dose de 100 uM combinado com Cis pode suprimir DRSPs. Qu atenuou a expressão dos produtos dos genes de resistência a drogas relacionadas

ABCG2

e

MDR-1

de uma forma dependente da dose. (B) Tanto o knockdown de Hsp27 eo uso de Qu combinado com efeitos apoptóticos semelhantes Cis induzidas efetivamente que levaram à diminuição de pHsp27 e regulação positiva da CI-caspase 3 e CI-PARP em DRSPs. (C) O tratamento com Qu combinado com Cis diminui acentuadamente as habilidades migração e invasão em DRSPs. (D) O tratamento com Qu combinado com Cis reverteu a expressão de marcadores de EMT-associados e induziu o fenômeno EMT.

A inibição do crescimento do tumor e Atenuação de Resistência Cis por Qu

in vivo

para confirmar as capacidades de iniciação do tumor de esferas

in vivo

, ambas as células parentais e esferas foram injetadas em ratos nu masculina para uma análise da tumorigenicidade transplantado. Os resultados deste estudo demonstram uma capacidade mais elevada para tumorigenicidade em DRSPs em comparação com células de controlo. DRSPs deu origem a tumores após a injeção de 1 × 10

4 células em camundongos (dois dos três ratos). Em contraste, foram necessários mais células de controlo para gerar tumores (injecção de 1 × 10

6 células em ratinhos; três dos três ratos), o que sugere que DRSPs são enriquecidas para as células de iniciação do tumor de, pelo menos, 20 vezes em comparação com as células de controlo (Figura 4A). O tamanho e o volume dos tumores induzidos por DRSP foram significativamente maiores do que os dos tumores induzidos por células de controlo. diferenças de crescimento dos tumores gerados foram gradualmente observada de um modo dependente do tempo após injecção de células de controlo versus DRSPs (

P

0,05) (Figura 4B). Os ratinhos tratados com Qu combinado com cis exibiu uma inibição significativa do crescimento do tumor comparada com o grupo tratado com Cis sozinho e o grupo de controlo (Figura 4C). Uma análise comparativa dos correspondentes resultados de imuno-histoquímica para p-Hsp27 e os marcadores associados a EMT retiradas dos nódulos tumorais dos ratos após o tratamento com Qu combinado com Cis revelou uma regulação baixa acentuada da p-Hsp27, vimentina, Twist-1, e fascin- 1 e regulação positiva da e-caderina em DRSPs em comparação com o grupo que não recebeu tratamento (Figura 4D).

(a) Uma maior capacidade de tumorigenicidade foi mostrado em DRSPs comparação com células de controlo. (B) O tamanho e o volume dos tumores induzidos por DRSP foram significativamente maiores do que os dos tumores induzidos por células de controlo. Foram observadas diferenças de crescimento dos tumores gerados de um modo dependente do tempo em DRSPs versus as células de controlo (

P

0,05). (C) bruta aparência de um tumor representativas formadas através da inoculação de células parentais e dissociado DRSPs em ratinhos NOD /SCID (n = 3, em cada grupo). Os ratinhos tratados com Qu Cis combinada com a inibição do crescimento divulgados estatisticamente significativo em comparação com o grupo tratado com Cis sozinho e o grupo de controlo (

P

0,05). (D) Uma análise comparativa dos correspondentes resultados de imuno-histoquímica para a p-Hsp27 e marcadores EMT-associados retiradas dos nódulos tumorais dos ratos NOD /SCID após o tratamento com Qu combinado com Cis revelou uma regulação baixa acentuada da p-Hsp27, vimentina, Twist 1, e fascina-1 e regulação positiva da e-caderina em DRSPs (ampliação, 100 ×).

quimioterapia à base de Cis Discussão

é amplamente utilizado para o tratamento clínico de avançada Câncer. Além disso, melhora a taxa de prognóstico e sobrevida em pacientes com CEB. O desenvolvimento de resistência Cis tem sido considerada como uma causa de reincidência do tumor, conduzindo à falha de tratamento clínico. O papel das CSCs dentro de tumores na indução de quimioresistência durante a quimioterapia é conhecido [26]. Portanto, a identificação dos mecanismos moleculares que medeia quimiorresistência parece ser crucial para a verificação da correlação entre a recorrência, resistência Cis, e em CSCs CEB. A este respeito, foi utilizado um sistema de cultura esfera não adesiva para isolar células com as propriedades de células-tronco entre células resistentes-Cis e DRSPs gerados. Durante a indução de DRSPs, percebemos um fenômeno interessante e especial EMT, como evidenciado pela alteração morfológica gradual a partir de células de CCEO pai para DRCs. Isto implica que DRCs possuem a propriedade de resistência aos fármacos através EMT. Estudos anteriores mostraram que EMT é o mecanismo fundamental de agressividade do cancro e mostrou correlacionar-se com o desenvolvimento de quimioresistência [27] – [29]. Estes DRCs bem formadas com um fenótipo mesenquimal semelhante podem ser submetidas a formação de esfera em um sistema de cultura esfera não adesiva. A adversidade atendidas por esferas em uma condição não adesivo, suspenso não só pode ser estimulada por EMT mas também incentivar a inscrição do potencial de propriedades CSC, como descrito em nosso estudo anterior e outros [25], [30].

com base no nosso estudo, para além das alterações morfológicas juntamente com as alterações na expressão de marcadores de EMT-associados, DRSPs foram caracterizadas pela regulação positiva de

ABCG2

e

MDR-1