Abstract

Fundo

Tafazzin (TAZ), uma transmembrana proteína contribui de modificações estruturais e funcionais mitocondriais através de remodelação cardiolipina. TAZ mutações estão associadas com várias doenças, mas os estudos sobre o papel da proteína TAZ na carcinogénese e radioterapia (RT) de resposta é inexistente. Por isso, investigamos a expressão TAZ no cancro rectal, e sua correlação com RT, variáveis ​​clínicas e biológicas nos pacientes que participaram de um ensaio clínico de RT pré-operatório.

Métodos

140 pacientes com câncer retal foram incluídos neste estudo, dos quais 65 receberam RT antes da cirurgia e o restante foi submetido a cirurgia por si só. expressão TAZ foi determinada por imuno-histoquímica em câncer primário, distante, mucosa normal adjacente e metástases em linfonodos.

In-silico

análise da interação proteína-proteína foi realizada para estudar a interação funcional preditivo da TAZ com outras oncoproteínas.

Resultados

TAZ mostraram expressão mais forte em câncer primário e da linfa metástase em comparação com mucosa normal distante ou adjacente em ambos os pacientes não-RT e RT. expressão TAZ forte foi significativamente maior nos estágios I-III e câncer não-mucinious de pacientes não-RT. Em pacientes RT, expressão TAZ forte na biópsia foi relacionada com a recorrência distante, independente do sexo, idade, estágios e grau (p = 0,043, HR, 6.160, 95% CI, 1,063-35,704).

In silico

estudo de interação proteína-proteína demonstraram que a TAZ foi positivamente relacionada com oncoproteínas, vivendo, MAC30 e FXYD-3.

Conclusões

forte expressão de proteína TAZ parece estar relacionado ao desenvolvimento de câncer retal e resposta RT, pode ser um biomarcador preditivo de recorrência distante em pacientes com pré-operatório RT

Citation:. Pathak S, Meng WJ, Zhang H, Gnosa S, Nandy SK, Adell G , et ai. (2014) Tafazzin Protein Expression está associado com Tumorigênese e Radiação Response no câncer de reto: Um Estudo do ensaio clínico sueco sobre pré-operatório radioterapia. PLoS ONE 9 (5): e98317. doi: 10.1371 /journal.pone.0098317

editor: Anthony W. I. Lo, da Universidade Chinesa de Hong Kong, Hong Kong

Recebido: 11 de fevereiro de 2014; Aceito: 30 de abril de 2014; Publicado: 23 de maio de 2014

Direitos de autor: © 2014 Pathak et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este estudo foi financiado por doações da Fundação do Câncer Sueco, Conselho de Pesquisa sueco e do Conselho de Pesquisa de Saúde no Sudeste da Suécia. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

Tafazzin proteína (TAZ) é codificada pelo gene funções TAZ como um fosfolípido-transacilase lisofosfolípido. TAZ mutações estão associados com uma série de desordens clínicas incluindo o síndrome de Barth, cardiomiopatia dilatada e fibroelastose endocárdica [1], [2]. TAZ é responsável pela remodelação de cardiolipina [3] que estabiliza a montagem dos complexos da cadeia respiratória e medeia passos-chave na apoptose nas mitocôndrias. A ligação causal entre a disfunção mitocondrial e desordens patológicas tem sido observado em diferentes modelos de doenças. Por exemplo, demonstrou-se que a disfunção mitocondrial, também desempenha um papel importante no desenvolvimento da inflamação. Acehan D

et. al

. [4], salientou que a expressão TAZ anormal relacionado disfunção mitocondrial promove a inflamação. Wilson LD

et. al.

[5] relataram que a expressão TAZ anormal foi relacionada à maior expressão IL6 e aumentou as respostas inflamatórias. Comumente inflamação considerado como um fator de predisposição para o câncer, especialmente câncer colorretal (CRC). No entanto, o papel da expressão TAZ nos processos oncogénicos permaneça pouco clara. disfunção mitocondrial resultando em alterações de transdução de sinal celular pode ser considerado como eventuais caminhos-alvo em fazer avançar o tratamento do câncer no futuro. CRC é o terceiro tipo mais comum [6] e segundo mais morte relacionada ao câncer no mundo ocidental [7]. Mesmo admitindo que a cirurgia continua a ser a modalidade curativa para a CRC, e radioterapia pré-operatória (RT) mostrou uma vantagem de sobrevivência em comparação com a cirurgia sozinha, ainda o valor de RT pré-operatória permanece controverso [8], [9], [10]. Estes resultados aumentou ainda mais a questão sobre se pré-operatório RT tem de ser dada de forma mais seletiva ou não. Agora o principal objectivo clínico é a busca de indicadores de previsão, a fim de identificar os pacientes mais adequados para RT pré-operatório. Em geral, os potenciais biomarcadores preditivos incluem, por exemplo, a expressão de oncogenes e genes supressores de tumor, marcadores de proliferação, a angiogénese, a inflamação e a adesão de células, bem como a regulação de genes envolvidos na resposta à TA e quimioterapia. Extensos estudos estão sendo feitos para melhorar o método de previsão, incluindo a identificação de um novo marcador biológico e molecular. Para identificar novas moléculas preditivas para RT pré-operatório e elucidar o papel de envolvimento proteína TAZ em pacientes com câncer retal, investigou, pela primeira vez, a expressão da proteína TAZ no câncer retal e sua relação com a resposta RT e variáveis ​​clinicopatológicas ou biológicas no pacientes que participaram de um ensaio clínico de RT pré-operatório. Além disso, apresentam destaques de investigação para a primeira vez que a interação funcional da TAZ com outras oncoproteínas de

in silico

análise da interação proteína-proteína.

Materiais e Métodos

pacientes com câncer retal “seleção

o presente estudo incluiu cortes de tecidos de 140 pacientes primários retal câncer, 119 amostras de mucosa normal distantes (109 espécimes correspondido ao câncer retal primário), 79 amostras de mucosa normal adjacente (70 espécimes correspondido ao rectal primário cancro), 48 metástases de linfonodo (44 espécimes correspondido ao câncer retal primário), e 101 biópsias dos pacientes com câncer retal primários (91 biópsias correspondido ao cirúrgica câncer retal primário) (Figura S1).

Todos pacientes com câncer retal eram da região Sudeste Swedish Health Care incluindo hospitais em Linköping, Norrköping, Jönköping, Motala, Eksjö, Varnamo e Vastervik, e eles participaram no ensaio clínico sueco do cancro retal de pré-operatório radioterapia entre 1987 e 1990. Inicialmente, havia 171 câncer pacientes. No entanto, quatro pacientes foram excluídos devido a (doença avançada) cirurgicamente irressecável, e 27 pacientes não tinha amostra de tecido disponíveis para este estudo. mucosa normal distante foi feita a partir proximal ou distai margem (4-35 cm a partir do tumor primário) do recto ressecado, e na mucosa normal adjacente foi feita a partir da mucosa adjacente ao tumor primário, a ambos eram histologicamente livre de tumor. Localmente ressecção curativa foi realizada em todos os pacientes.

O delineamento experimental

Entre 140 pacientes com câncer retal primário, 75 pacientes receberam a cirurgia sozinha, e 65 receberam pré-operatório RT seguido por cirurgia. RT foi dada em um total de 25Gy em 5 frações antes da cirurgia através de uma mediana de 6 dias (5-12 dias) fornecidos com 6-10 MV de fótons. A cirurgia foi então levada a cabo em uma mediana de 3 dias (intervalo de 1-13 dias) após a RT. Nenhum dos pacientes recebeu quimioterapia adjuvante antes ou após a cirurgia e todos os pacientes tinham adenocarcinoma rectal localmente ressecável. A média de idade dos pacientes no momento do diagnóstico foi de 67 anos (intervalo 36-86 anos). Não houve diferença estatística entre o grupo de não-RT e RT a respeito das características dos pacientes e tumores, incluindo sexo, idade, estágio, diferenciação, tipo de cirurgia e margem de ressecção (p 0,05; Tabela 1)

declaração Ética

Todos os pacientes eram da região Sudeste Health Care sueco e participaram de um ensaio randomizado câncer sueco rectal de RT pré-operatório entre 1987 e 1990. Cada paciente foi fornecido com informações detalhadas sobre o estudo objetiva e protocolo, e deram o seu consentimento informado por escrito antes da inscrição. O acompanhamento foi realizado até 2004. O período médio de acompanhamento foi de 75 meses (variação, 0-193 meses). O estudo foi aprovado pelo Institutional Review Board da Universidade de Linköping, na Suécia.

Tissue preparação micro-array de slides

Todos os espécimes, incluindo mucosa normal, cânceres primários e metástases linfáticas foram embebidas em parafina para tissue microarray. Três regiões morfologicamente representativos foram escolhidos em cada bloco e 3 amostras de tecido núcleo cilíndrico (0,6 mm de diâmetro) foram tomadas a partir dessas áreas, inserido em um bloco de parafina receptor.

Imunohistoquímica

secções de tecido microarray foram incubadas a 60 ° C durante a noite, desparafinadas e hidratadas. A actividade de peroxidase endógena foi bloqueada em 3% H

2O

2 em metanol. secções coloração de fundo não específica foram imersos em PBS contendo 1% de BSA e incubadas com solução de bloco de proteína (Primavera Bioscience, Pleasanton, CA) durante 10 minutos. As secções foram então incubadas com a TAZ anti-anticorpo policlonal de coelho primário (HPA039557, Sigma-Aldrich Co, St. Louis, MO) a uma diluição de 1:10 em diluente de anticorpo (DAKO, Cytomation, Glostrup, Dinamarca) e incubados a 4 ° C durante a noite. Após lavagem com PBS, um anticorpo secundio anti-coelho secundário biotinilado (Dako, lote 00082892) a uma diluição de 1:2000 foi adicionado. Após 30 minutos, as secções foram enxaguadas com PBS e incubados em reagente enzima AB (ABC Sistema de Coloração, Santa Cruz Biotechnology, CA) contendo avidina e de peroxidase de rábano biotinilada. As lâminas foram lavadas em PBS e incubadas durante 10 minutos em substrato de peroxidase contendo 3, 3-diaminobenzidina chromogène (DAB) e contrastadas com hematoxilina. Em todas as corridas, controles negativos foram incluídos.

imuno-histoquímica de pontuação

A marcação foi marcado por dois observadores independentes com base na intensidade da expressão da proteína sem o conhecimento de informações clínico-patológico e biológica. No caso de discrepância nas notas individuais, ambos os investigadores reavaliou os slides juntos e chegaram a um consenso antes de combinar as pontuações individuais. Para evitar um efeito artificial, as células nas margens das secções e em áreas com pouca morfologia não foram contados. A intensidade da coloração foi classificada como coloração negativa, fraca, moderada e forte. Para as análises estatísticas, casos manchadas negativos, fracas ou moderadas foram considerados como grupo expressão baixa, enquanto os casos fortes foram considerados grupo expressão tão elevada. A expressão de meningioma activated protein (MAC30) [11], FXYD-3 [12] e de Livin [13] em cancros rectais determinado por imuno-histoquímica foram tomadas a partir de estudos anteriores de nosso laboratório realizados com o mesmo material de pacientes utilizados no presente estudo.

In silico

estudos de interação proteína-proteína

sequências de aminoácidos, com excepção da região peptídeo sinal, de TAZ, de Livin (isoforma 1 2), FXYD-3 ( isoformas 1) e MAC30 [UniProt IDs: Q16635, Q96CA5, Q14802 e Q5BJF2 respectivamente] e sua gerais e seqüência anotações foram coletadas de UniProt

Todas as sequências de aminoácidos

seleção de modelo e construção de modelos. foram submetidos a NCBI PSI-BLAST (Posição iteração Básico local Alignment ferramenta específica Search) (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) contra o PDB (Protein Data Bank) (http: //www .rcsb.org /PDB /home /home.do) proteínas com parâmetros predefinidos para selecionar a proteína modelo e, em seguida, os modelos foram baixados da APO. modelos de homologia tridimensionais refinados foram gerados usando um programa de modelação MODELLER comparativa [14] de Descoberta Estúdio (DS), com base no alinhamento dado modelo-alvo e estrutura do modelo seleccionado. Cinco estruturas foram gerados por proteínas e modelo com menor valor da energia de proteína otimizada discreta normalizada foi escolhido como o melhor modelo. Devido à indisponibilidade de estrutura modelo com E-value melhor do limiar, TAZ e MAC30 foi modelada por método de reconhecimento de vezes a partir do servidor I-TASSER [15]. Todos os modelos foram submetidas a 2000 minimização de energia na etapa DS inteligente Minimizer, a fim de aliviar os confrontos estéricos. Além disso, a estereoquímica e conformações das estruturas modeladas foram validadas por meio de Análise Estrutural e verificação do servidor (SALVAR) no https://nihserver.mbi.ucla.edu/SAVES/e também com Atomic não-local Avaliação Ambiental (ANOLEA) [16], prosa [17] e MolProbity [18] servidores.

estudos de docking molecular

Para considerar a interação proteína-proteína de Viver, FXYD-3 e MAC30 com TAZ, todas as três proteínas foram atracado com TAZ usando de corpo rígido algoritmo de encaixe ZDOCK [19], em DS 2,5. Únicas regiões citoplasmáticos de FXYD-3 e MAC30 foram considerados para estudos de interacção. Um total de 2000 acoplado posturas foram gerados para cada um dos complexos TAZ que foram classificados por pontuação ZDOCK acordo com a forma de complementaridade, a electrostática e energia dessolvatação e, ainda, as posturas foram re-classificados por ZRANK [19], método rescoring empregando uma energia ponderada função. Os 30 melhores poses de acordo com a pontuação ZRANK foram submetidos a RDOCK [19] – um CHARMm (https://www.charmm.org/) procedimento baseado em requinte e pontuação. otimizações posição destes 30 poses, foram realizados com campo de força CHARMm, Momany-Rone [20] cargas parciais usando DS inteligente Minimizer. percentagem relativa de acessibilidade do solvente, ligação de hidrogênio (HB) e vinculativo energias livres de complexos TAZ, também foram determinadas a força iónica fisiológica usando Generalized Nascido aproximação com a integração Volume Molecular [21] no DS 2.5.

A análise estatística

qui-quadrado ou teste de McNemar foi aplicado para examinar a significância das diferenças na expressão TAZ na mucosa normal distantes ou adjacentes, cancro primário e metástases em linfonodos, bem como a correlação de expressão TAZ com variáveis ​​clínico-patológicas ou biológicas. expressão TAZ com a doença sobrevida livre ou sobrevida global e recorrência à distância foi testada por meio de análise de Kaplan-Meier e análise de regressão de riscos proporcionais de Cox. As curvas de sobrevida foram calculadas de acordo com o método de Kaplan-Meier. Todos os testes foram dois valor p lados e de 0,05 foi considerado estatisticamente significativo

Resultados

TAZ mostrou maior expressão no câncer primário e metástases linfonodais

expressão TAZ. foi analisada por imuno-histoquímica (Figura 1, a-C) na mucosa normal distante, mucosa normal adjacente, câncer primário e metástases em linfonodos a partir de amostras de ressecção cirúrgica e biópsia (correspondente ao câncer primário cirúrgico). No grupo não-RT (Figura 1D), TAZ mostraram maior expressão no cancro primário (P 0,001 e p 0,001, respectivamente) e metástases nos linfonodos (p 0,001 e p = 0,006, respectivamente), em comparação com distante e normal adjacente mucosa. Tal como mostrado na Figura 1D, apenas 2% das 63 amostras de mucosa normal distantes, e 7% dos 42 espécimes de mucosa normais adjacentes tinha forte expressão TAZ, ao passo que 73% dos 75 cancros primários e 37% de 27 metástases apresentou um forte expressão TAZ. No grupo de RT (Figura 1E), a expressão TAZ foi aumentada no cancro primário (P 0,001, P 0,001) e linfa metástases (p = 0,130, p = 0,220), em comparação com a mucosa normal distante e adjacente. Como mostrado na Figura 1E, a forte expressão TAZ foi encontrada em 7% das 56 amostras de mucosa normal distantes, em 8% de 37 amostras de mucosa normais adjacentes, em 43% dos 65 cancros primários e em 19% das 21 metástases. Contudo, a expressão forte TAZ marginalmente diminuída de cancro primário para metástases (p = 0,003, p = 0,040) tanto em não-RT e grupo RT. Na biópsia, o padrão de expressão TAZ foi em linha com o câncer primário cirúrgico.

expressão da proteína TAZ foi mostrado em (A) mucosa rectal normal (expressão negativa), (B) câncer primário (expressão forte) e (C) metástase ganglionar (expressão fraca) (A-C, 400X). No grupo não-expressão de RT (D) TAZ foi significativamente mais elevada em cancro primário em relação à mucosa distante normais (p 0,001), a mucosa adjacente (p 0,001). A expressão na expressão TAZ linfonodo metástases também foi significativamente mais elevada comparada com a expressão em mucosa normal distante (p 0,001), a mucosa adjacente (p = 0,006). No entanto, em comparação com câncer primário de expressão TAZ na metástase linfonodal foi significativamente menor (p = 0,003). O grupo RT (E) mostrou significativamente maior expressão TAZ no câncer primário em comparação com a mucosa normal distante e adjacente (p 0,001 e p 0,001, respectivamente). No metástase linfática expressão TAZ forte foi significativamente menor em comparação com a expressão no câncer primário (p = 0,040). Apenas os valores de p 0,05 são apresentadas. Em câncer primário forte expressão TAZ foi significativamente menor (p = 0,001) em relação ao grupo (F).

expressão TAZ diminuição no câncer de reto principal após RT

não-RT comparação com grupo não-RT, TAZ expressão em amostras de cancro primário submetido a RT foi significativamente reduzida (p = 0,001). expressão TAZ apresentaram maior frequência em 73% dos pacientes no grupo não-RT, enquanto que no grupo RT diminuiu para 43% (Figura 1F). expressão TAZ forte na metástase também diminuiu no grupo RT comparar ao grupo não-RT embora a diferença não foi estatisticamente significativa (p = 0,173).

expressão TAZ em relação às variáveis ​​clínico-patológicas nos pacientes

No grupo não-RT, expressão TAZ foi significativamente relacionada com a fase (p = 0,031) e tipo histológico não mucinoso (p = 0,004). Ele mostrou que 75% dos pacientes com expressão TAZ forte eram estágios I-III Considerando que 25% estavam em estágio IV. Além disso 79% dos pacientes com expressão TAZ forte eram carcinomas não-mucinoso enquanto 21% eram carcinoma mucinoso (Tabela 2). No grupo RT, não houve tal relação (Tabela 2). recorrência distante foi encontrada em 57 pacientes (41%) de 140 pacientes com câncer retal primários.

expressão TAZ em relação às variáveis ​​biológicas nos pacientes

Em tumores primários, expressão TAZ foi positivamente correlacionada com a expressão MAC30 (p = 0,022) no grupo de RT (Tabela 3). Além disso, em ambos os grupos forte expressão TAZ não-RT e RT foi positivamente correlacionada com FXYD-3 (P = 0,003 e P = 0,008, respectivamente), bem como com a expressão de Livin (P = 0,041 e P = 0,013, respectivamente, Tabela 3).

significância preditiva de expressão TAZ no câncer de reto para pré-operatória RT

em biópsias, forte expressão TAZ foi relacionada com a recorrência distante no grupo RT,

ou seja

expressão forte TAZ aumentou a probabilidade de recorrência à distância (p = 0,010, Figura 2A). Além disso análise multivariada confirmou a correlação foi independente do sexo, idade, estágio e diferenciação (Tabela 4). No grupo não-RT, essa relação não foi encontrado (Figura 2B). No entanto, a expressão TAZ não foi significativamente relacionado à sobrevida livre de doença e sobrevida global em pacientes quer no RT ou grupo não-RT (figura S2).

No grupo RT, os pacientes com expressão TAZ forte tinha um risco significativamente maior de desenvolver recorrência à distância (A) (p = 0,010). No grupo não-RT, a expressão TAZ não foi significativamente relacionada com a probabilidade de recorrência à distância (B). Somente os valores de p 0,05 são apresentados

In silico

estudos de interação proteína-proteína

Seleção de Modelo

Com excepção.. FXYD-3, PSI-BLAST não reconheceu qualquer modelo com a cobertura de pesquisa de 100%, tanto individualmente ou em combinação; e foi homologia modelada usando a estrutura solução NMR PDB ID 2JO1 [Modelo 1, Cadeia A, 37,7% de identidade, cobrindo comprimento sequência 22-87]. Por outro lado, os domínios funcionais de Vivendo, que pertencem à superfamília BIR e um anel, foram bem representados por estruturas cristalográficas PDB ID 3F7G [Cadeia B, resolução 2,30 Å, cobrindo comprimento de sequência de 71-169 isoforma 2] e PDB ID 4AUQ [cadeia B, resolução 2,18 Å, cobrindo comprimento da sequência 242-298 da isoforma 1]. O melhor modelo do servidor I-TASSER foi levado para o TAZ (C-score = -0,28, TM-score = 0,68 ± 0,12) e MAC30 (C-score = -2,93, TM-score = 0,38 ± 0,13).

estudos de docking molecular.

as propriedades físicas de interface de proteína-proteína de todos os complexos ancorados (Figura 3A-D) foram analisados ​​e listados na Tabela 5. os complexos foram caracterizados principalmente por interfaces polares, que indicam para a natureza não-obrigatório possível dos complexos. Adequada área de ligação de superfície, energia livre reconhecível e sua estabilização correspondente por interações não-ligado, dizem ligações de hidrogênio e interações hidrofóbicas indicam direção possível interação entre TAZ e as proteínas do nosso interesse.

TAZ é representada em verde, outra proteínas em ciano. A: TAZ-de Livin (TAZ-BIR) complexa; B: TAZ-de Livin (TAZ-RING) complexa; C: TAZ-FXYD-3 complexa; D:. Complexo TAZ-MAC30

Discussão

proteína TAZ está envolvido na manutenção dos níveis de cardiolipina que é essencial para a produção de energia na mitocôndria. As mutações no gene TAZ alterar a estrutura da proteína TAZ e impedi-lo de exercer o seu papel normal nas mitocôndrias. Foi proposto pela primeira vez por Otto Heinrich Warburg [22] que o câncer originado de lesão irreversível na respiração mitocondrial, mas a base estrutural para esta lesão permaneceu uma incógnita. Recentemente, um estudo [23] revela anomalias importantes no conteúdo cardiolipina em todos os tumores e a sobre-expressão do gene TAZ no carcinoma da tiróide [24]. No entanto, a anormalidade na expressão TAZ no câncer não foi investigado exaustivamente até a data. No presente estudo, nós demonstramos pela primeira vez que a expressão TAZ no câncer primário aumentou em comparação com mucosa normal distante ou adjacente, e, em seguida, diminuiu em linfonodo metástases. Descobrimos também que no grupo não-RT, expressão TAZ foi significativamente maior nos estágios tumores I-III em comparação com estágio IV tumores, e em tumores não-mucinoso comparação com tumor mucinoso. Uma vez que a fase IV é considerada como doença metastática distante, e cancro mucinoso é mais propenso a desenvolver metástase e agressividade, deste modo sugerindo que a expressão TAZ pode desempenhar um papel importante no desenvolvimento da fase diferente e tipos histológicos de cancro rectal.

Além disso, a forte expressão TAZ foi positivamente correlacionada com FXYD-3 e de Livin expressão no grupo não-RT. Sugere-se que FXYD-3 é sobre-regulada no início do processo de transformação maligna [25]. Do mesmo modo, a expressão regulada de Vivendo tem sido implicada na tumorigénese e na metástase de tumores epiteliais, tais como o cancro colorrectal [26]. Desde correlações significativas entre a expressão TAZ com Vivendo, MAC30 e FXYD-3 foram encontrados no mesmo grupo de pacientes, fizemos

in silico

análise de interações proteína-proteína entre TAZ-vivendo, TAZ-MAC30 e TAZ-FXYD -3. estudos de docking molecular, viz. previu energia livre de ligação, a ligação superfície etc., das melhores poses bem como os seus valores médios para todos os trinta top coloca de cada complexo também aponta para possível interação funcional TAZ com as oncoproteínas mencionados. Além disso, Makaryan

et. al

. [27] observaram aumento da resposta apoptótica após TAZ knock-down. Assim, a sobre-expressão TAZ possivelmente está relacionada com a anti-apoptose e crescimento anormal de células. Durante o ciclo celular, os genes para as enzimas glicolíticas, são sobre-expressos no momento da síntese de ADN activa [28]. Da mesma forma, vários oncogenes (c-myc, HIF1α, Akt) ou supressores de tumor (p53) estão envolvidos na transactivação de enzimas glicolíticas [29]. A activação destes genes em correlação com TAZ sobre-expressão pode também envolver a desregulação mitocondrial. Assim, nossos resultados indicam que a expressão forte TAZ em associação com outras oncoproteínas pode estar directamente relacionada com o processo de desenvolvimento de câncer retal. Novos estudos para elucidar a relação entre a TAZ e estes oncoproteínas iria melhorar a nossa compreensão da função TAZ na carcinogênese retal.

Apesar de radioterapia em conjunto com a cirurgia têm aumentado a sobrevida, ainda existe uma grande proporção de pacientes recebendo RT sem quaisquer benefícios, mas sofrendo os efeitos colaterais. Os avanços na biologia molecular têm proporcionado uma oportunidade para selecionar os pacientes adequados para a terapia e determinar o prognóstico. No entanto, até agora, nenhum método único veio para o uso clínico neste contexto,

i

., Ainda há uma grande diferença entre as descobertas de laboratório e prática clínica. Interessadamente, descobrimos que a expressão TAZ forte em biópsias de grupo RT pré-operatório foi significativamente correlacionada com a recorrência distante, independente do sexo, idade, estágios de tumor e grau. Portanto, o presente estudo sugere que, TAZ, pode ser considerado como um factor para a selecção de grupos de doentes com cancro rectal para RT pré-operatório.

Desde expressão TAZ foi relacionada com progressão tumoral, que ainda investigado se estava relacionada com TAZ a resposta à TA. Curiosamente, descobrimos que RT reduzido significativamente a expressão TAZ no cancro rectal primário. Em metástases linfonodais, o efeito da RT não foi significativa. Estes resultados sugerem que o efeito da RT diminui expressão TAZ dos cancros rectais só foi confinado aos pacientes com não-metastáticos cancros rectais localmente avançados, mas os cânceres não metastáticos. Nossos resultados apontaram que a expressão TAZ forte nos pacientes aqueles que foram submetidos a pré-operatória RT foi positivamente correlacionada com FXYD-3, Vivendo e expressão MAC30, e mais TAZ funcionalmente interagiu com estas proteínas indicando assim que TAZ pode atuar em conjunto com FXYD-3, Vivendo e MAC30 em resposta a radiação.

em conclusão, a expressão forte de TAZ foi envolvida no desenvolvimento do cancro rectal e radiação parecia diminuir a expressão TAZ dos cancros rectais primárias. Além disso, TAZ foi um marcador preditivo independente de recorrência distante em pacientes com câncer retal com RT pré-operatório, Assim, a seleção de pacientes para RT pré-operatório e também a segmentação proteína TAZ usando antagonista TAZ juntamente com RT pré-operatória pode ser uma opção melhor tratamento para o cancro rectal.

Informações de Apoio

Figura S1.

Perfis dos pacientes com câncer retal incluindo biópsias (tomadas antes da cirurgia) e amostras cirúrgicas de distante normal (DN), adjacente normal (AN), tumor primário (PT) e linfonodo de tumor metastático (MT).

doi : 10.1371 /journal.pone.0098317.s001

(TIF)

Figura S2.

relação entre a expressão TAZ e em geral (A, C) ou sobrevida livre de doença (B, D) em pacientes cancros rectais. A e C representa o grupo RT, B e D no grupo de não-RT

doi:. 10.1371 /journal.pone.0098317.s002

(TIF)

Reconhecimentos

os autores também agradecem ao Dr. Veronika Brodin Patcha (Departamento de Oncologia da Universidade de Linköping, Suécia) para ajudar-nos para a revisão linguística do manuscrito.