Abstract

Fundo

Recentemente, mostrou que IGFBP2 é overexpressed em tecidos de câncer de pulmão primários. Este estudo visa determinar se IGFBP2 é elevada em amostras de sangue de pacientes com câncer de pulmão e se o seu nível está associado com resultados clínicos.

Metodologia /Principais Achados

Os níveis plasmáticos de IGFBP2 foram determinados cegamente pela enzima -ligada ensaio imunoenzimático em 80 pacientes com câncer de pulmão e 80 controles saudáveis ​​caso-pareado para comparação. Foram analisadas amostras de sangue para níveis IGFBP2 de um adicional de 84 pacientes com câncer de pulmão e, em seguida, testado para as associações entre os níveis IGFBP2 sangue e parâmetros clínicos em todos os 164 pacientes com câncer de pulmão. Todos os testes estatísticos foram bilaterais e as diferenças com p 0,05 foram considerados significativos. A concentração plasmática média da IGFBP2 em pacientes com câncer de pulmão foi significativamente maior do que nos controles saudáveis ​​(388,12 ± 261,00 ng /ml vs 219,30 ± 172,84 ng /ml, p 0,001). IGFBP2 foi aumentado em todos os tipos de câncer de pulmão, incluindo adenocarcinoma, cancro de células escamosas e câncer de pequenas células, independentemente da idade, sexo ou estado de tabagismo dos pacientes. níveis IGFBP2 foram ligeiramente mas significativamente associada com o tamanho do tumor e foram significativamente maiores no estágio IV de estágio I ou III da doença. A análise multivariada mostrou que os pacientes com cancro do pulmão cujos IGFBP2 sangue foi maior do que 160,9 ng /ml tiveram um resultado sobrevivência pobre, com uma taxa de risco de 8,76 (IC 95% 1,12-68,34, p = 0,038 após o ajuste para o tamanho do tumor, patologia e etapa). O tempo médio de sobrevivência para pacientes com IGFBP2 sangue 160,9 ng /ml é 15,1 meses; enquanto a sobrevida mediana do tempo foi 128,2 meses para os pacientes cujo sangue foi IGFBP2 ≤160.9 ng /ml (p = 0,0002).

Conclusões /Significado

IGFBP2 sangue é aumentado significativamente em pacientes com câncer de pulmão. Um nível elevado de circulação de IGFBP2 está significativamente associada a menor sobrevida, o que sugere que os níveis de IGFBP2 sangue pode ser um biomarcador de prognóstico para o câncer de pulmão

Citation:. Guo C, Lu H, Gao W, Wang L, Lu K, Wu S, et ai. Fator de Crescimento (2013) Insulin-Like Binding Protein-2 nível é aumentado no sangue de pacientes com câncer de pulmão e associada à pior sobrevida. PLoS ONE 8 (9): e74973. doi: 10.1371 /journal.pone.0074973

editor: Arun Rishi, Wayne State University, Estados Unidos da América

Recebido: 19 Março, 2013; Aceito: 12 de agosto de 2013; Publicação: 17 de setembro de 2013

Direitos de autor: © 2013 guo et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado em parte pelos Institutos Nacionais de Saúde, através R01 CA092481 e R01 CA124951 a B. fang, especializada Programa de Investigação Excellence (SPORE) Grant CA070907, da Universidade do Texas MD Anderson Cancer Center, Suporte Grant CA-016672, Programa de pulmão, Análise de DNA e citometria de fluxo, e Celular imagem Núcleo Facility, e do Fundo de Homer flor terapia genética Research, o Fundo Gene Therapy Charles Rogers, o Flora Stuart Fundo de Investigação Mason Lung Cancer, o Fundo Memorial Charles B. Swank para esofágico Cancer Research, o Fundo Sweeney O. George para esofágico Cancer Research, o Fundo Phalan Thoracic Gene Therapy, e do Fundo Endowed MW Elkins para Thoracic Oncologia Cirúrgica e Chapman Fundação. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

Apesar do advento de novos agentes anticancerígenos, o cancro do pulmão continua a ser a principal causa de mortalidade por câncer nos Estados Unidos e em todo o mundo [1]. Um estudo recente mostrou que o diagnóstico precoce por rastreio de baixa dose helicoidal tomografia computadorizada (TC) pode reduzir significativamente a taxa de mortalidade de 6,7% para pacientes com câncer de pulmão [2], o que demonstra que o diagnóstico precoce é a chave para melhorar a sobrevida dos pacientes. No entanto, o diagnóstico precoce do cancro do pulmão é um desafio porque a triagem de baixa dose CT é muito caro e não é provável a preços acessíveis para a população em geral [3]. Além disso, os biomarcadores preditivos de resposta ao tratamento e prognóstico são necessários em clínicas para orientar decisões terapêuticas em várias opções de [4,5]. Biomarkers que identificam subgrupos de pacientes com prognóstico diferente significativo pode fornecer informações úteis sobre as estratégias de tratamento para esses subgrupos, como se uma terapia adjuvante agressiva é necessária para os pacientes com mau prognóstico. Infelizmente, muito poucos marcadores serológicos que podem ser utilizados para o diagnóstico precoce ou prognóstico de cancro do pulmão são clinicamente disponíveis; Portanto, a identificação de tais biomarcadores é altamente desejável.

factor de crescimento semelhante à insulina (IGF), proteínas de ligação (IGFBP) são uma família de proteínas (seis em humanos) que se ligam e servir como transportadores de IGFs, prolongando o IGF meia-vida na circulação e que modulam as concentrações de IGF locais e actividades [6]. Estas proteínas partilham uma estrutura de três domínio conservado, que consiste em dois domínios ricos em cisteína conservados em N- e C-terminais que são requeridas para ligação a IGF e um domínio central não-conservados que os separa [7]. Nos seres humanos, IGFBP3 é o mais abundante e IGFBP2 é a segunda a IGFBP mais abundante na circulação. Ao contrário de IGFBP3, que induz actividade anti-tumoral em vários tipos de cancros [8,9], IGFBP2 foi mostrado para promover a tumorigénese [10], a invasão de células do cancro [11], metástase [12], a expansão de células estaminais do cancro [13], e tumor angiogênese [12,14] em vários tipos de cânceres. Com efeito, IGFBP2 é sobre-expresso em tecidos de tumor de glioma de [15], o cancro da mama [16,17], cancro do ovário [18], o cancro da próstata [19], cancro colorrectal [20], o cancro gástrico [21], o cancro do pulmão [ ,,,0],22], leucemia [23], e astrocitoma [24]. Além disso, níveis de soro ou de plasma IGFBP2 elevados foram observados nos pacientes com glioma de [25], o cancro da próstata [26,27], cancro do ovário [28], e o cancro do cólon [29,30]. A expressão aumentada de IGFBP2 está implicada em qualquer um curto tempo de sobrevivência global [28,29,31] ou resistência à quimioterapia [23,32]. Juntos, esses resultados sugerem que IGFBP2 poderia ser uma proteína oncogénica comum para vários tipos de cânceres.

Para identificar possíveis biomarcadores para câncer de pulmão, que determinou recentemente a expressão diferencial de proteínas em tecidos tumorais de pulmão primários e tecidos pulmonares normais a partir dos mesmos pacientes, utilizando um ensaio de proteína de matriz de fase reversa. IGFBP2 é uma das proteínas que se encontram a ser significativamente aumentada em tecidos de tumor primário de cancros do pulmão de não-pequenas células, incluindo adenocarcinoma e carcinoma de células escamosas [22]. Porque IGFBP2 é uma proteína de secreção, a sua expressão aumentada em tecidos de tumor pode ser reflectida nas suas concentrações no sangue. Para determinar se isso é verdade, foram analisados ​​os níveis IGFBP2 no plasma de pacientes com câncer de pulmão e os controles de casos combinado saudáveis. Nossos resultados mostraram que a concentração sanguínea de IGFBP2 foi significativamente aumentada em pacientes com câncer de pulmão e que uma alta concentração de IGFBP2 no sangue dos pacientes foi associado à sobrevida global curta.

Resultados

As características clínicas dos pacientes com câncer de pulmão

as informações clínicas para os 164 pacientes de câncer de pulmão em nosso estudo está resumido na Tabela 1. os pacientes (71 homens e 93 mulheres) foram 42-86 anos de idade, com uma idade média de 52. Adenocarcinoma e carcinoma de células escamosas responsável por 54% e 21% de diagnóstico histológico, respectivamente. Havia 33 pacientes com doença em estádio I, 13 pacientes com doença em estágio II, 40 pacientes com doença em estágio III, e 67 pacientes com doença em estágio IV. Havia 138 pacientes (84%) que tinham um histórico de uso de tabaco /fumo. Os pacientes que receberam a cirurgia, quimioterapia, radioterapia ou terapia de várias modalidades foram de 61 (37,2%), 105 (64,02%), 46 (28,05%), e 78 (46,34%), respectivamente. Seis pacientes (0,37%) não receberam qualquer terapia. Havia 62 pacientes (37,8%) apresentaram metástases ao diagnóstico, e 37 pacientes (22,56%) tiveram recorrência local durante o follow-up. O tempo médio de acompanhamento foi de 37,5 meses. Os dados de sobrevivência estavam disponíveis para 152 pacientes, entre os quais 83 (54,61%) ainda estavam vivos no momento da análise dos dados. As amostras controles saudáveis ​​foram pareados com a idade, sexo, raça e tabagismo dos primeiros 80 casos de câncer de pulmão.

Paciente variável (N)

IGFBP2 ng /ml

P Valor

SexMale71382 0,4 ± 248.8Female93303.6 ± 209.70.024Age 52 years77300.3 ± 183.3≥52 years87370.8 ± 261.40.129Smoking statusNever26306.3 ± 216.0Current carcinoma34313.5 Ever138343.6 ± 233.00.349Tumor HistologyAdenocarcinoma87334.8 ± 227.4Squamous de células ± carcinoma16310.7-pequenas células 251.7Non ± carcinoma24389.7 de células 143.1Small ± 222.3≥0.099

** Desconhecido /faltando data3Disease StageStage I

* 33.259,4 ± 187.40.001

* Fase II13402.3 ± 282.6Stage III # 40.324,3 ± 245.30.029 # Stage IV

* # 67.383,6 ± 226.4≥0.07

** Desconhecido /faltando data11MetastasisNo92305 0,7 ± 229.8Yes62381.1 ± 227.00.047Unknown /faltando Data10Table 1. As características dos pacientes e níveis IGFBP2 plasma (média ± SD)

* valor P para a fase I versus estágio IV.; # Para o estágio III contra estágio IV;

** para outros grupos na mesma categoria CSV Baixar CSV

Os níveis plasmáticos de IGFBP2 em pacientes com câncer de pulmão e em controles pareados

Para testar se há uma diferença nos níveis circulantes de IGFBP2 entre pacientes com câncer de pulmão e controles saudáveis, obtivemos amostras de plasma de pacientes com câncer de pulmão 80 e 80 amostras saudáveis ​​caso de correspondência a partir do banco de sangue mantido a departamento de epidemiologia da nossa instituição. Os níveis IGFBP2 plasma foram determinadas por ELISA cegamente, sem o investigador de saber alguma informação clínica. valores IGFBP2 para cada amostra codificada foram então analisados ​​estatisticamente para a associação e correlação com a informação clínica. Os resultados mostraram que a concentração plasmática média de IGFBP2 em pacientes com cancro do pulmão (388,12 ± 261,00 ng /mL) foi significativamente mais elevado do que em controlos saudáveis ​​(219,30 ± 172,84 ng /ml,

P

= 2,4 x 10

-7) (Figura 1A). Quando os dados foram analisados ​​com base em sexo, idade e tabagismo, os valores IGFBP2 permaneceu significativamente maior em pacientes com câncer de pulmão do que nos controles dentro de cada subgrupo (Figura 1B). Dentro dos controles saudáveis, o nível IGFBP2 sangue foi significativamente maior naqueles 52 anos ou mais idade do que aqueles com menos de 52 (média de 255,2 ng /ml vs 183,4 ng /ml,

P

= 0,036). Este resultado demonstrou que circulam valores IGFBP2 foram significativamente maiores em pacientes com câncer de pulmão, independentemente da sua idade, sexo e tabagismo.

A) Os diagramas de caixa mostrar média (linha dentro da caixa) ± 1 SD (caixa de ) e ± 2 SD (a barra de erro). A diferença entre os valores médios para os dois grupos é significativa (

P

= 2,4 x 10

-7). B) Comparação de pacientes com câncer de pulmão e os controles saudáveis ​​com base em sexo, idade e tabagismo. Em cada grupo, os valores IGFBP2 em pacientes com câncer de pulmão significa foram significativamente maiores do que os controles saudáveis ​​(

P Art 0,01). C) A curva ROC (ROC) para o diagnóstico de câncer de pulmão com os valores IGFBP2 plasma.

A especificidade e sensibilidade de usar IGFBP2 de sangue para diagnóstico de câncer de pulmão

Em seguida, determinou o especificidade e sensibilidade de utilizar níveis IGFBP2 plasma para diagnóstico de câncer de pulmão. Os resultados mostraram que o receptor operando trama characteristic (ROC) tinha uma área sob a curva de cerca de 0,70 (Figura 1C). A um valor de corte de 160,9 ng /ml, a especificidade e sensibilidade de utilizar sozinho IGFBP2 para diferenciar o cancro e grupos saudáveis ​​foram 76,92% e 75,61%, respectivamente. Fisher análise exata mostrou que a diferença entre os dois grupos foi significativa (

P

= 6,01 x 10

-8). A diferença entre os dois grupos continuou a ser significativa quando a especificidade aumentada para 90% com um valor de corte de 437ng /ml, em que a sensibilidade ponto era cerca de 30%. Quando a especificidade aumentada para 95% (ponto de corte de 450ng /ml), contudo, a sensibilidade foi de apenas cerca de 13,8%, e a diferença entre os dois grupos não era mais significativo (

P

= 0,058). Este resultado sugeriu que os valores IGFBP2 sangue sozinho pode não ser suficiente para o diagnóstico de câncer de pulmão, porque os valores de sensibilidade e especificidade globais óptimas foram cerca de 70%. No entanto, IGFBP2 pode ser significativamente aumentada em um subgrupo de pacientes com câncer de pulmão.

Circulação IGFBP2 em subgrupos de pacientes de câncer de pulmão

A fim de determinar qual subgrupo de pacientes de pulmão pode ter aumentado os níveis IGFBP2 sangue , determinou-se os níveis de IGFBP2 em outros 84 pacientes com câncer de pulmão e, em seguida, analisadas as diferenças de IGFBP2 sangue entre os pacientes com câncer de pulmão, com base em diagnóstico histológico, estadiamento clínico e tamanho do tumor. Os resultados mostraram que os níveis médios IGFBP2 em pacientes do sexo masculino (382,38 ± 248.81ng /ml) foram significativamente maiores do que aqueles em pacientes do sexo feminino (303.58 ± 209.73ng /ml,

P

= 0,024). Houve uma tendência para IGFBP2 aumentar à medida que o estágio da doença progrediu de fase I para a fase IV. A diferença de valores IGFBP2 entre os subgrupos de pacientes com estágios I e doença em estágio IV foi significativa (fase I: 259,42 ± 187,38 ng /ml, Estágio IV: 383,6 ± 226.36ng /ml;

P

= 0,001; Tabela 1), sugerindo que IGFBP2 é aumentada quando a doença é progrediu para o estágio avançado. O valor IGFBP2 sangue foi levemente mas também significativamente correlacionada com o tamanho do tumor (R = 0,21,

P

= 0,023) (Figura 2A). Para determinar se os níveis IGFBP2 sangue refletem expressões IGFBP2 em tumores primários dos pacientes, analisamos expressões IGFBP2 em dois tecidos de tumor primário de pacientes com qualquer IGFBP2 alta ou baixa em suas amostras de sangue. A análise imuno-histoquímica mostrou que a expressão IGFBP2 não era detectável no tumor primário de um paciente com baixo nível de IGFBP2 sangue, mas foi marcadamente elevados no tumor de um paciente com IGFBP2 arterial elevada (Figura 2B), o que sugere que os níveis de IGFBP2 sangue pode reflectir a expressão IGFBP2 nos tumores. No entanto, a investigação em um conjunto maior de amostras de pacientes com amostras de sangue e tecidos emparelhados serão necessários para determinar as correlações entre os níveis IGFBP2 sanguíneos e tumorais.

A) Correlação entre os valores IGFBP2 sangue e tamanho do tumor (R = 0,21 ,

P

= 0,023). B) expressão IGFBP2 em tumores primários de pacientes com baixa ou alta IGFBP2 plasma. Os níveis de IGFBP2 no plasma foram apresentado no canto superior do painel.

No entanto, a diferença entre os subgrupos definidos por histologia do tumor não foi significativa, embora o valor médio em casos de cancro de células pequenas foi relativamente maior do que para outros histologia (câncer de pulmão de pequenas células: 389,7 ± 222,28 ng /mL, cancro do pulmão de não pequenas células: 310.69 ± 143.09ng /ml, adenocarcinoma: 334.82 ± 227.39ng /ml, carcinoma de células escamosas: 315,47 ± 251,71 ng /ml,

P

= 0,099). Não houve diferença significativa na IGFBP2 plasma quando os pacientes foram agrupados por idade mediana da população de pacientes (idade 52 anos: 300.29 ± 183,29 ng /ml, ≥52 anos: 370,8 ± 261.35ng /ml,

P

= 0,12), ou tabagismo (nunca fumar: 306,33 ± 215,95 ng /ml, nunca fumar:. 370,8 ± 261.35ng /ml,

P

= 0,34)

Associação de IGFBP2 circulantes com resultados clínicos

em seguida, determinar se o aumento IGFBP2 sangue foi associado com a sobrevida do paciente. A análise univariada mostrou que a sobrevivência é significativamente correlacionada com histopathologies, fases da doença, tamanhos tumorais, e os níveis de IGFBP2 sangue (valor de corte de 160,9 ng /ml, o que tem a maior área sob a curva ROC) (Tabela 2). A análise multivariada mostrou que pacientes com câncer de pulmão com IGFBP2 sangue 160,9 ng /ml teve um resultado de sobrevivência pobre (taxa de risco = 8,76, IC 95% 1,12-68,34, p = 0,038 após o ajuste para o tamanho do tumor, patologia, e fase) (Tabela 2). O tempo médio de sobrevivência para pacientes com níveis IGFBP2 160,9 ng /ml foi significativamente menor do que para os pacientes com um nível IGFBP2 ≤160.9ng /ml (tempo médio de sobrevivência de 15,1 meses versus 128,16 meses,

P

= 0,0002, Figura 3A). Nós também apreciado a existência de uma diferença de sobrevivência quando os pacientes foram divididos em 4 grupos, com base em seus níveis de IGFBP2 sangue. A taxa de risco para a sobrevivência pobres aumentou à medida que o nível IGFBP2 aumentou de quartil 1 a quartil 4 (Figura 3B). Cada quartil tem 38 pacientes. O tempo médio de sobrevivência para o 1

st, 2

nd, 3

rd e 4

th quartis foram 128,16, 21,81, 11,11 e 10,92 meses, respectivamente (

P

= 0,033). Estes resultados indicam que os níveis de IGFBP2 sangue pode ser um parâmetro útil para prever os resultados dos pacientes.

Variável Alive, N (%)

Morto, N (%)

Taxa de Risco

95% valor CI

P

SexMale35 (52,24) 32 (47,76) 1Female48 (56,47) 37 (43,53) estatuto 0.790.49-1.270.325Age1.000.98-1.030.944Smoking Never14 (56,00) 11 (44,00) 1Former19 (50,00 ) 19 (50,00) 1.050.50-2.230.891Current50 (56,18) 39 (43,82) 1.150.59-2.260.681Tumor histologia Adenocarcinoma50 (60,02) 33 (39,75) carcinoma22 de células 1Squamous (68,75) 10 (31,25) 0.580.28- carcinoma7-pequenas células 1.180.132Non (46.67) 8 carcinoma4 (53,33) 1.090.50-2.370.835Small de célula (18,18) 18 (81,82) 2.671.45-4.900.002Disease Palco I29 (87,8) 4 (12,12) 1Stage II10 (76,92) 3 (23,08) 3.070.62-15.260.169Stage III22 (56,41) 17 (63,59) 7.012.03-24.230.002Stage IV 22 (32,84) 45 (67,16) 12.443.81-40.650.000Tumor Size1.191.05- 1.350.005Metastasis No61 (66,30) 31 (33,70) 1 Yes22 (36,67) 38 (63,33) 1.560.88-2.770.130IGFBP2 ≤160.929 (87,88) 4 (12,2) 1 160,954 (45,38) 65 (54,62) 5.582.03 -15,34 0.001Multivariate (IGFBP2)

* ≤160.929 (87,88) 4 (12,2) 1 160,954 (45,38) 65 (54,62) 8.761.12-68.340.038Table 2. univariada e multivariada sobre os rácios de sobrevivência de perigo

* Ajustado pela histologia, palco e tamanho do tumor CSV Baixar CSV

a) as curvas de sobrevivência de Kaplan-Meier para pacientes com câncer de pulmão agrupados no valor de corte IGFBP2 sangue de 160.9ng /ml. O tempo médio de sobrevida para pacientes com níveis mais elevados IGFBP2 (N = 120) foi significativamente menor do que para os pacientes com um nível IGFBP2 inferior (N = 32,

P

= 0,0002). B) As curvas de sobrevivência de Kaplan-Meier para os pacientes com cancro do pulmão subdivididos em quatro grupos com base no seu nível de IGFBP2 sangue. Cada quartitle tem 38 pacientes. O tempo médio de sobrevivência para o 1

st, 2

nd, 3

rd e 4

th quartis foram 128,16, 21,81, 11,11 e 10,92 meses, respectivamente (

P

= 0,033).

Discussão

Nossos resultados mostraram que os níveis de IGFBP2 sangue foram significativamente maiores em pacientes com câncer de pulmão do que nos controles saudáveis, que são consistentes com um estudo recente sobre IGFBP2 soro níveis em 98 pacientes com câncer de pulmão, 17 doença pulmonar benigno e 23 controles normais na China, em que os níveis IGFBP2 soro e seus auto-anticorpos foram significativamente elevados em pacientes com câncer de pulmão [33]. No entanto, outro estudo recente em 163 pacientes com diferentes tipos de cancros, incluindo 34 pacientes com câncer de pulmão, e 13 controles saudáveis ​​na Alemanha mostraram que os níveis IGFBP2 soro só foram significativamente elevados em tumores de cabeça e pescoço, mas não em outros tipos de cancro, incluindo o de pulmão câncer [34]. Não é claro se a discrepância com o estudo alemão é devido ao tamanho da amostra ou populações de pacientes. No entanto, nosso estudo mostrou que o aumento da IGFBP2 sangue foi associado com progressão da doença e pior prognóstico após o ajuste para outros parâmetros clínicos, sugerindo que o nível IGFPB2 sangue pode ser um parâmetro útil para prever os resultados clínicos.

O nosso estudo indica que apenas a nível IGFBP2 sangue pode não ser específica ou sensível o suficiente para o diagnóstico de câncer de pulmão, porque ambos especificidade e sensibilidade eram cerca de 75%. Não é claro se a combinação do nível IGFBP2 com outros biomarcadores ou rastreio abordagens iria aumentar a sua especificidade e sensibilidade. Com efeito, embora um número de biomarcadores de sangue foram identificados e avaliados em pacientes com cancro do pulmão, nenhuma tem por si só mostraram a especificidade global e sensibilidade suficientes para o diagnóstico de cancro do pulmão [35-37]. Como o câncer de pulmão é uma doença heterogênea, ele pode não ser realista esperar que qualquer molécula única a ser uniformemente elevada em todos os pacientes com câncer de pulmão. Especula-se que esses marcadores podem ser usados ​​em conjunto para aumentar a especificidade e sensibilidade de ensaios de rastreio ou de ser utilizado em conjunto com outros métodos de rastreio para aumentar a sua especificidade. Por exemplo, uma dose baixa de tomografia computadorizada foi encontrado para ser útil para o diagnóstico precoce do cancro do pulmão, embora a taxa de falsos positivos é de cerca de 96% [2]. marcadores de sangue pode fornecer uma forma não invasiva para detectar verdadeiros positivos em pacientes com câncer de pulmão suspeita de CT.

Encontramos cerca de 10% dos controles saudáveis ​​tinham um nível IGFBP2 sangue de 437ng /ml ou mais. Não está claro se esses indivíduos eram variantes normais ou tiveram a doença diagnosticada. Uma limitação deste trabalho é que follow-up informação clínica não estava disponível para resolver esta questão. Porque IGFPB2 sangue foi relatada a ser inversamente associado com a massa corporal em pessoas saudáveis ​​[38], nós suspeitamos que IGFBP2 sangue pode ser elevada em algumas pessoas saudáveis ​​com muito baixo de massa corporal. Embora as concentrações IGFBP2 plasma em humanos adultos saudáveis ​​tiveram flutuações mínimas em um período de 48 horas de amostragem e não se alterou significativamente pós-prandialmente ou depois de uma infusão de glicose, IGFBP2 plasma sofreu um aumento de cerca de 1,7 vezes em doentes com deficiência de extrema insulina ou após 9 dias de jejum [39].

Nosso estudo proteômica recente sobre tecidos tumorais NSCLC primária mostrou que um subconjunto de pacientes com câncer de pulmão apresentaram um aumento dramático de IGFBP2 em seu tecido do tumor primário [22]. No entanto, porque as amostras eram de diferentes conjuntos de pacientes, não era claro se o aumento IGFBP2 sangue foi associado com um aumento da expressão IGFBP2 em tecidos de tumor, apesar de tal correlação foi observada em duas amostras emparelhadas. No entanto, consistente com a observação em tecidos tumorais primário, IGFBP2 sangue foi também aumentado em um subgrupo de pacientes com câncer de pulmão do nosso estudo. Será de interesse investigar se o aumento IGFBP2 no sangue ou tumor primário representa mudanças específicas na transdução de sinal, metabolismo ou funções biológicas em cancro de pulmão, como foi relatado no glioma; em que o cancro, o aumento IGFBP2 pode servir como um biomarcador para o status de PTEN e PI3K activação /AKT [40] ou o estado INK4a-Arf [41].

A associação do aumento IGFBP2 sangue com a sobrevida global mais curto relatado aqui em cancro do pulmão pacientes e por outros em câncer de ovário, câncer colorretal e de próstata [28,29,31] sugere que IGFBP2 pode contribuir para a evolução maligna e progressão. Na verdade, o IGFBP2 /integrina /ILK /rede NF-kB foi recentemente relatado para ser um jogador-chave na progressão glioma e pobres resultados [42]. A expressão aumentada de IGFBP2 causado pela perda de miR-126 foi encontrada para promover a metástase de células do cancro da mama por meio do recrutamento de células endoteliais no sítio do cancro através de up-regulação do receptor de factor de crescimento semelhante à insulina 1 (IGF1R) via [12] sinalização. Tal como uma molécula capaz de se ligar a IGFs, as integrinas, e matriz extracelular [6], IGFBP2 provavelmente desempenha um papel importante na transdução de sinal e homeostase metabólica em tumores, incluindo exercendo um efeito autócrino em células cancerosas e os efeitos parácrinos sobre as células endoteliais e outras células mesenquimais . Caracterização de vias mediadas por IGFBP2 em células de câncer de pulmão pode fornecer informações moleculares para a progressão do câncer de pulmão e potenciais alvos terapêuticos para pacientes com câncer de pulmão com aumento IGFBP2.

Materiais e Métodos

Amostras de Pacientes

Eu emparelhei amostras de sangue de 80 pacientes com câncer de pulmão e 80 controles saudáveis ​​para idade, sexo, raça e história de tabagismo. Obtivemos essas amostras do banco de amostra de sangue mantido no Departamento de Epidemiologia em nossa instituição. Amostras de sangue de outros pacientes com câncer de pulmão 84 foram ou semelhante obtidas ou coletadas de pacientes que tiveram a cirurgia da Universidade do Texas MD Anderson Cancer Center entre 2007 e 2011. As amostras de sangue foram coletadas com heparina ou ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) como agentes de anticoagulação . O plasma foi isolado por centrifugação das amostras a 1500 g durante 5 min à temperatura ambiente. Um estudo piloto em três controles saudáveis, não houve diferença significativa nos níveis de IGFBP2 no soro ou plasma obtidos com heparina ou EDTA da mesma pessoa. Todos os pacientes com câncer de pulmão e em voluntários saudáveis ​​tinham assinado o termo de consentimento informado para coleta de amostras. Este estudo foi aprovado pelo comitê de ética da Universidade do Texas M D Anderson Cancer Center. As amostras de plasma foram congeladas e mantidas a -80 ° C até que os ensaios foram realizados.

-ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA)

IGFBP2 plasma foi medido por um ensaio imunoabsorvente ligado a enzima (ELISA ) Ciências kit (Cell, Canton, MA, EUA), seguindo as instruções do fabricante. Resumidamente, as amostras de plasma foram diluídas a 1: 200 com tampão de diluição. Cem microlitros de amostras e padrões diluídos IGFBP2 diluídas em série foram adicionadas em duplicado em cada poço de uma placa de 96 poços pré-revestidos com anticorpo de captura IGFBP2. Após incubação a 4 ° C durante a noite, as placas foram lavadas com solução salina tamponada com fosfato contendo 0,05% de Tween 20 e incubadas com anticorpo de detecção IGFBP2 anti-humano biotinilado e estreptavidina de rábano silvestre conjugado com peroxidase. A actividade enzimática de peroxidase de rábano foi determinada com o seu substrato de 3,3 ‘, 5,5’-tetrametilbenzidina, medindo a absorvância a 450 nm utilizando um leitor de placas de 96 poços (Dynatech Internacional, Chantilly, VA, EUA). concentração IGFBP2 foi calculada a partir da curva padrão.

imuno coloração

coloração imuno-histoquímica foi realizada no Núcleo Histologia Laboratório de nossa instituição com o Laboratório de Visão Autostainer 360 (Thermo Scientific). secções fixadas com formalina e embebidas em parafina de tecido (5-m de espessura) foram desparafinadas, hidratadas, e aqueceu-se num vapor para recuperação de antigénios. As lâminas foram então incubadas com anticorpo de coelho anti-humano IGFBP2 (Cell Signaling Technology). IgG anti-humana de coelho foram utilizados como controlo negativo para o anticorpo primário. A peroxidase de rábano conjugado anticorpo secundário foi fornecido pelo Núcleo de Laboratório Histologia.

A análise estatística

Foi utilizado software estatístico Stata 10.1 para Windows (StataCorp LP, College Station, TX, EUA) para realizar todas as análises estatísticas. Valores de IGFBP2 são expressos como média ± desvio padrão (SD). Foram analisados ​​dados demográficos com o teste do qui-quadrado e os dados contínuos, em comparação com um teste t-Student amostra independente. Foram comparadas as diferenças nos níveis plasmáticos de IGFBP2 entre casos e controles usando o teste não paramétrico de Mann-Whitney U e avaliou a relação entre os níveis IGFBP2 e parâmetros clínicos por análise de regressão linear univariada. Construímos curvas de sobrevida de acordo com os níveis plasmáticos de IGFBP2 utilizando o método de Kaplan-Meier e tempo de sobrevida mediana comparadas pelo teste de log-rank. taxas de risco e intervalos de confiança de 95% para a sobrevivência foram estimadas por análise de regressão de risco multivariada Cox proporcional, o ajuste para o tamanho do tumor, estágio da doença, e histologia tumor. Todos

valores

P foram bicaudais com 0,05 especificado como o limiar para significância estatística.

Reconhecimentos

Gostaríamos de agradecer Luanne Jorewicz para sua revisão editorial deste manuscrito .