Abstract
Recentemente, gene relacionado com o ETS (
ERG
) rearranjos do gene, homólogo fosfatase angiotensina (
PTEN
) supressões e
EGFR
família aberrações foram caracterizados como potenciais biomarcadores para o câncer de próstata (PCA) manejo do paciente. Embora
ERG
rearranjo de genes foi identificado em aproximadamente 50% dos casos de câncer de próstata localizado em países ocidentais, o significado prognóstico deste evento molecular crítica permanece desconhecida em pacientes chineses. Usando hibridização fluorescente in situ (FISH) e imuno-histoquímica, avaliamos
ERG
,
PTEN
e
EGFR
aberrações da família em uma coorte de 224 pacientes com câncer de próstata chineses diagnosticada em transuretral ressecção da próstata (TUR-P). No geral,
ERG
rearranjo foi detectado em 23,2% (44/190) dos casos, dos quais 54,5% (24/44) apresentaram deleção do extremo 5 ‘do
ERG
.
PTEN
eliminação foi identificada em 10,8% (19/176) dos casos. A amplificação do
EGFR
e
HER2
genes estava presente em 1,1% (2/178) e 5,8% (10/173) dos casos, respectivamente. correlação significativa entre o
ERG
rearranjo e
PTEN
eliminação foi identificado nesta coorte.
EGFR e
HER2
aberrações ocorreram mais frequentemente em PCAS sem
ERG
rearranjo do que naqueles com
ERG
rearranjo, embora esta não atingiu significância estatística . No geral,
ERG
rearranjo foi associada com valores pré-operatórios de PSA (P = 0,038) e morte relacionada ao câncer (P = 0,02), mas não com a idade, estágio T clínico, escore Gleason, ou Ki- 67 índice de marcação (LI). Notavelmente, a análise multivariada incluindo marcadores prognósticos conhecidos revelados
ERG
rearranjo foi um fator prognóstico independente (P = 0,022). Além disso,
ERG
estado de rearranjo foi útil para identificar pacientes com mau prognóstico do grupo APC com baixo Ki-67 LI. Em resumo, informamos que
ERG
rearranjo foi associada a morte relacionada ao câncer em pacientes CaP chineses. Determinação do
ERG
estado de rearranjo permite a estratificação dos pacientes CaP em diferentes categorias de sobrevivência
Citation:. Qi M, Yang X, Zhang F, Lin T, Sun X, Li Y, et al. (2014)
ERG
Rearranjo é associada à morte do cancro da próstata-relacionados no chinês da próstata pacientes com câncer. PLoS ONE 9 (2): e84959. doi: 10.1371 /journal.pone.0084959
editor: Jindan Yu, da Universidade Northwestern, Estados Unidos da América
Recebido: 15 Agosto, 2013; Aceito: 20 de novembro de 2013; Publicação: 07 de fevereiro de 2014
Direitos de autor: © 2014 Qi et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Esta pesquisa foi apoiada pela National Science Foundation Natural da China (números de subvenção 81072110 e 81171951); Fundação de Pesquisa do Departamento de Shandong Saúde (número de concessão 2011HZ037). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
O câncer de próstata (PCA) é uma doença heterogênea, com uma história natural variável [1], [2]. Estima-se que apenas uma pequena fracção dos pacientes sofre de doença com risco de vida potencial que requer tratamento agressivo. Atualmente, os fatores prognósticos estabelecidos (pontuação de Gleason, estágio patológico e soro antigénio específico da próstata (PSA)) não pode distinguir precisamente PCAS clinicamente agressivo desde aqueles clinicamente indolente [3], [4]. Assim, novos biomarcadores de prognóstico são urgentemente necessárias para gerenciamento de pacientes CaP.
Recentemente, fusões de genes recorrentes envolvendo a família ETS de fatores de transcrição,
ERG
,
ETV1
,
ETV4
,
ETV5
e
ELK4
, fundido ao gene regulado por andrógeno
TMPRSS2
ou outros parceiros a montante, foram identificados na maioria dos PCAs no oeste países [5] – [8]. Entre estas aberrações,
ERG
rearranjo, que em sua maioria resulta de
TMPRSS2-ERG
de fusão, é a mais prevalente e ocorre em aproximadamente 50% dos PCAs localizadas [8]. Como
TMPRSS2
e
ERG
estão localizados ~ 3 Mb apart no cromossomo 21, o rearranjo entre eles ocorre tanto através da inserção ou por uma deleção intersticial (EDEL) [6].
TMPRSS2-ERG
fusão leva à sobre-expressão de ERG, que pode desempenhar um papel crítico no desenvolvimento de CaP [8]. Até à data, o significado prognóstico da
ERG
rearranjo na CaP permanece controverso. Embora vários estudos têm indicado que
ERG
rearranjo confere um pior prognóstico [9] – [12], outros encontraram qualquer associação prognóstico favorável [13] – [17] ou nenhuma associação com a evolução clínica [18] – [20]. De nota, a maioria destes dados são de pacientes caucasianos nos países ocidentais. Embora os dados emergentes sugeriu a prevalência distinta de
ERG
rearranjo na APC entre os diferentes grupos étnicos [21], [22], análise de sobrevivência de
ERG
aberrações é rara em populações asiáticas.
PTEN
(fosfatase e homólogo angiotensina excluída no cromossomo 10) é um gene supressor de tumor chave em ACP [23]. Supressão do
PTEN
ocorre em 20-70% dos PCAs e tem sido associada à progressão rápida do tumor e recidiva precoce [24]. Anteriormente, nós e outros relataram a associação significativa entre
PTEN
exclusão e
ERG
rearranjo tanto em localizado e metastático APC [25]. Dados clínicos recentes têm sugerido que
PTEN
exclusão e
ERG
rearranjo poderia ser usado para estratificação prognóstica de pacientes CaP [26].
O receptor do factor de crescimento epidérmico (
EGFR
) e
HER2
pertencem ao
EGFR
família e são conhecidos por regular a proliferação celular, diferenciação, angiogênese e sobrevivência. Amplificação e sobre-expressão de
EGFR
e
HER2
foram descritos em APC e associada com a progressão do câncer, mau prognóstico ou desenvolvimento de independência de andrógeno [27]. No entanto, até agora, a ligação entre o
ERG
rearranjo e aberrações genéticas de
EGFR
e
HER2
permanece obscuro.
O Ki-67 LI é um marcador clássica proliferação e foi encontrado para ser um preditor de desfecho para os pacientes CaP tratados com prostatectomia radical [28], [29] ou radioterapia. Ki-67 tem emergido como um dos marcadores preditivos globais de resultado do tratamento em pacientes APC.
O objetivo do estudo foi investigar se
ERG
rearranjo foi associada com um fenótipo mais agressivo do CaP. Aqui, nós caracterizamos sistematicamente a frequência e significado prognóstico da
ERG
rearranjo em uma grande coorte de pacientes CaP chineses (n 200). Nós ainda determinado se o
ERG
rearranjo pode ser utilizado como um indicador de prognóstico e fornecer valor adicional na análise do prognóstico. Além disso, a relação de
ERG
rearranjo de genes com outros marcadores moleculares, incluindo
PTEN
supressão e genéticos aberrações da
EGFR
e
HER2,
também foi investigada.
Materiais e Métodos
Os pacientes
Um total de 224 pacientes CaP que foram submetidos a ressecção do tumor por cirurgia de ressecção transuretral da próstata (TUR-P) foram incluídos em nosso estudo. As amostras de tumor foram obtidos a partir Qilu Hospital da Universidade de Shandong (Jinan, China), o Hospital Afiliado da Universidade de Qingdao (Qingdao, China) e Liaocheng Hospital Geral (Liaocheng, China) entre 2003 e 2011. Todos estes pacientes foram hospitalizados devido a sintomas de obstrução do trato urinário inferior. Oitenta e cinco pacientes APC no presente estudo teve ultra-sonografia transretal
–
guiado biópsia da próstata e 63,5% (54/85) dos casos tinha câncer zona periférica, que se estendia em zona de transição. Nenhum dos pacientes receberam radiação pré-operatória ou terapia de privação de andrógeno. terapia flutamida anti-andrógeno foi seguido após a cirurgia e dados de acompanhamento estavam disponíveis para 190 pacientes, variando de 3 a 147 meses (média de 47 meses). Como o número de mortes não-PCA (n = 17) foi limitado nesta coorte, a morte relacionada com cancro da próstata se aproximou da mortalidade por qualquer causa. As características clínicas e patológicas de 190 casos APC no nosso coorte estão resumidos na Tabela 1. Três microarrays de tecido (TMAs) foram montados usando um arrayer tecido manual; para cada caso, dois cilindros (1,0 mm de diâmetro) foram tomadas a partir de cada foco de tumor representativo e morfologia foi verificada por meio de três patologistas (M.Q., B.H. e X.Y.). Uma forma seção de 4 mm de cada TMA foi corada com H E para verificar a presença de tumor em casos APC. perfil clínico e patológico detalhada foram obtidas a partir dos prontuários e mantidos em um banco de dados relacional seguro com dados TMA. Autorização por escrito informados foram obtidos dos pacientes APC e este estudo foi aprovado pelo Institutional Review Board na escola de medicina da Universidade de Shandong e de ética local.
fluorescência
in situ
Hibridização (FISH)
Um ensaio de quebra-apart FISH de duas cores interfase anteriormente descrito foi realizado para detectar
ERG
rearranjo [25]. Bacterianas cromossomos artificiais (BACs) foram obtidos a partir do Centro de Recursos BacPac (Oakland, CA), e sondas RP11-95I21 (5 ‘para
ERG
) e RP11-476D17 (3′
ERG
) foram preparados como anteriormente descrito [25]. A integridade e localização correta de todas as sondas foram verificadas por hibridização dos spreads metafase de linfócitos periféricos normais. Para detectar
PTEN
exclusão, as sondas de DNA comercialmente disponíveis para cytoband 10q23 (Spectrum Laranja
PTEN
sonda específica para um local) e região 10p11.1-Q11.1 (Spectrum centrômero verde do cromossomo 10 sonda) (
PTEN
/CEP 10 LSI; Vysis Inc. Des Plaines, IL, EUA) para identificação de cromossomas foram utilizados. O
PTEN
sonda genómica abrange 368 kb e 166 kb começa a partir da extremidade 5 ‘do gene e estende-se 98 kb últimos extremidade 3’ do gene. Avaliação da
EGFR
e
HER2
aberrações genéticas foi realizada utilizando o GLP
EGFR
/CSP 7 sonda e GLP
HER2
/CSP17, respectivamente (GP Medical Technologies, Pequim, China).
Interphase FISH foi realizada como descrito anteriormente [25], [30]. As lâminas foram examinadas utilizando um microscópio ImagingZ1 (Carl Zeiss, Oberkochen, Alemanha). sinais de FISH foram classificados manualmente (100 × de imersão de óleo) em núcleos morfologicamente intactos e não sobrepostos por dois patologistas (B.H., e M.Q.), e um mínimo de 50 células de cancro a partir de cada local foram registados. locais de câncer com muito fraca ou sem sinais foram registados como insuficientemente hibridizada. Foram excluídos os casos que faltam tecido tumoral em todos os dois núcleos.
Para validar a exclusão de
PTEN
e amplificação de
EGFR
e
HER2
, utilizamos um método previamente documentado com pequena modificação [25], [31]. Em resumo, com base em hibridação em cinco núcleos de controlo (dados não mostrados), a deleção de hemizigótico
gene PTEN
foi denominado como 50% de núcleos (média ± 3 desvios padrão em controlos não neoplásicas) que contém quer um sinal da sonda lócus e ≥ 2 sinais de sonda de referência (supressão absoluta), ou dois sinais de sonda lócus e ≥4 sinais de sonda de referência (supressão relativa). deleção homozigótica de
PTEN
foi exibido pela concomitante falta dos dois
PTEN
sinais do locus e a presença de sinais de controlo em 30% das células. As amostras foram consideradas amplificada para
EGFR
quando o 10% das células tumorais apresentados ou
EGFR
: CEP 7 rácio 2 ou inúmeros conjuntos apertados de sinais da sonda lócus (3-5copies ).
EGFR
copiar ganho número foi definida como um aumento de número de cópias baixo devido ao cromossomo 7 polissomia. Da mesma forma, os espécimes foram considerados amplificada para
HER2
quando o 10% das células tumorais apresentados ou
HER2
: CEP 17 rácio 2 ou incontáveis grupos apertados de sinais da sonda lócus (3 -5copies).
HER2
ganhos no número de cópias foram definidas como um aumento de número de cópias baixo devido ao cromossoma 17 polissomia. imagens PEIXES representante da
ERG
rearranjo foram mostrados na Figura 1. Figura 2A e 2B demonstrou casos representativos com
PTEN
exclusão, bem como
HER2
amplificação.
(A) mapa esquemático de ‘
TMPRSS2
‘ e ‘
ERG
‘ posição sobre 21q22.2-22.3. T e C orientação em direção às regiões teloméricas e centroméricas, respectivamente. BACs localizados 5 ‘e 3’ para
ERG
foram utilizados como sondas para FISH de interfase. coordenadas cromossômicas são da compilação do genoma humano usando o navegador UCSC Genome Março de 2006. O
TMPRSS2
e
ERG
loci estão separados por aproximadamente 3 Mb. (B) FISH foi realizado utilizando BACs conforme indicado com o marcador fluorescente correspondente em secções de tecido embebidos em parafina fixadas em formalina para peixes quebra-apart do gene
ERG
. (B E),
ERG
rearranjo caso negativo, como indicado por dois pares de sinais verdes e vermelhas co-localizado. (C F),
ERG
rearranjo positivo (translocação) caso mostrou um par de separação 5 ‘e 3’ sinais. (D G),
ERG
rearranjo positiva (com supressão) caso mostrou perda de um verde com a indicação sonda 5 ‘para
ERG
(A1. -A3) imagens de peixes da undeleted, hemizygous e homozigoto
PTEN
deleção em CaP. A1,
PTEN
caso negativo supressão mostrou ambos os sinais vermelhos emparelhados (10q23 /
PTEN
de locus) e sinais verdes em células tumorais. A2, caso representativo com
PTEN
eliminação hemizygous mostrou um sinais vermelhos e pares de sinais verdes em células tumorais. A3, caso representativo com
PTEN
deleção homozigótica mostrou ausência de sinais vermelhos, mas manteve pares de sinais verdes. Para todos os ensaios, foram avaliados pelo menos 50 núcleos de células de cancro. (B1-B3) A detecção da expressão de HER2 por IHC e peixes em CaP. B1, análise de FISH de caso representativo sem
HER2
amplificação. B2, análise de FISH de caso com
HER2
amplificação. B3, HER2 coloração IHC apresenta a reactividade membranosa completa de forte intensidade (3+) em células tumorais (ampliação original, 200x). (C1-C3) O Ki-67 por coloração IHC em células APC. C1, n coloração (0) de Ki-67 em células tumorais. C2, Low Ki-67 (Li 10%) positividade nuclear em células tumorais. C3, alta Ki-67 (LI≥10%) positividade nuclear nas células tumorais.
Imunohistoquímica
A imuno-histoquímica (IHQ) para PTEN, EGFR e HER2 foi realizada utilizando um polymer- método baseado (EnvisionTM + dual link System-HRP). Fontes e diluições de anticorpos primários foram como se segue: anti-PTEN (sinalização celular, 1:100), anti-EGFR (DAKO, 1:500), anti-HER2 (DAKO, 1:500) e anticorpo anti-Ki67 (Dako , 1:100). Secções de TMA (4 uM) foram desparafinadas e preparado por sucessivas passagens através de xileno e grau de concentração de etanol como um procedimento de rotina e, em seguida foram recuperados por antigénios panela de pressão usando um tampão de citrato (0,01 M), durante 8 minutos a 120 ° C. A actividade da peroxidase endógena foi bloqueada por incubação com uma solução de peróxido de hidrogénio a 0,3% durante 15 min. As secções de tecido foram incubadas durante a noite a 4 ° C com os anticorpos primários. Depois de uma lavagem em PBS, as secções foram tratadas com o reagente EnvisionTM + Dual Link System-HRP à temperatura ambiente durante 30 min. 3, 3′-diaminobenzidina tetracloridrato foi usado como o cromogénio durante 3 minutos, e as secções de tecido foram contrastadas com hematoxilina.
A imunocoloração de EGFR e HER2 foi semiquantitativamente avaliada com base na intensidade da reactividade da membrana a seguir o original DAKO Herceptest critérios com um limiar de células imunopositivas 10%. O sistema de pontuação foi descrito em outro lugar [27]. Avaliação de PTEN foi baseado na intensidade da coloração citoplasmática; os tumores foram divididos em três categorias como previamente descrito [25]. Grau 2 mostraram um aumento da intensidade de coloração ou igual comparados com o tecido normal correspondente; grau 1 diminuiu a intensidade da coloração, e grau 0 demonstrado completa ausência de coloração. O Ki-67 O índice de marcação (LI) foi definida como a fracção de células de tumor que apresentem qualquer nuclear Ki-67 e a imunorreactividade foi considerada elevada se 10% ou mais dos núcleos tumorais foram coradas. Para este efeito, 100-200 células tumorais foram analisados para cada caso. imagens de imuno-histoquímica representativas de Ki-67 foram apresentados na Figura 2C.
Análise Estatística
As análises estatísticas foram realizadas utilizando o programa Statistical Package for Social Sciences, versão 19.0 (SPSS), com um nível de significância de 0,05 (probabilidade de duas caudas). foi utilizado o teste χ2 de Pearson eo teste exato de Fisher para avaliar as associações entre
ERG
rearranjo e variáveis clínico-patológico, bem como outras aberrações moleculares. A análise de Kaplan-Meier foi utilizado para avaliar o valor prognóstico da
ERG
rearranjo em pacientes APC. O valor prognóstico da
ERG
rearranjo foi ainda determinada em análise univariada e multivariada, incluindo os valores de PSA no momento do diagnóstico, a pontuação de Gleason, estágio do tumor clínica, metástases à distância, Ki-67 LI e
EGFR
família aberrações genéticas.
Resultados
Frequência de
ERG
Rearranjo,
PTEN
Supressão e
EGFR
aberrações Família
no geral,
ERG
foi reajustada em 23,2% (44/190) dos pacientes chineses APC, dos quais 54,5% (24/44) demonstrou supressão da extremidade 5 ‘do
ERG
. Curiosamente, dois destes 24 casos demonstraram duas cópias do 3 ‘-
ERG
sinais, sugerindo a duplicação de
ERG
rearranjo.
PTEN
eliminação foi identificada em 10,8% (19/176) dos casos, com hemizygous e deleções presentes em 12 dos 19 (63,2%) e 7 de 19 (36,8%) casos, respectivamente. A amplificação do
HER2
foi identificado em 10 de 173 (5,8%) tumores e polissomia do cromossoma 17 foi observado em 41 dos 173 (23,8%) casos. Em contrapartida, apenas 2 de 178 (1,1%) casos apresentaram amplificação de
EGFR
com polissomia do cromossomo 7 estando presente em 18 de 178 (10,1%) tumores.
Relações entre
ERG
rearranjo e variáveis clínico-patológicas
ERG
rearranjo de genes foi significativamente associada com níveis de PSA pré-operatório em pacientes CaP (P = 0,038) (Tabela 2). A incidência de
ERG
rearranjo foi significativamente menor nos pacientes com baixo nível de PSA ( 4 ng /ml) em comparação com aqueles com níveis médio ou alto de PSA. No entanto, nenhuma correlação significativa foi identificada entre
ERG
rearranjo e idade, escore de Gleason, estádio clínico, ou metástases à distância no momento do diagnóstico.
Associação de
ERG
rearranjo com outros marcadores moleculares
Como a exclusão de
PTEN Comprar e amplificações de
EGFR
e
HER2 Quais são as aberrações cromossômicas relevantes no APC, que explorou a próxima associação de
ERG
rearranjo com esses eventos moleculares em nossa coorte. Como mostrado na Tabela 2, o
ERG
rearranjo estava presente em cerca de 63,2% (12/19) dos pacientes APC com o
PTEN
deleção (hemizygous ou homozigoto). Da mesma forma,
PTEN
eliminação ocorreram mais frequentemente em casos que abrigavam
ERG
rearranjo (30,8%, 12/39) em comparação com os
ERG
rearranjo casos negativos (5,1% , 7/137). No geral, uma associação significativa entre
PTEN
exclusão e
ERG
rearranjo foi observada em coorte CaP Chinês (P = 0,0008). De nota, casos 46/182 (25,2%) CaP revelou diminuição da expressão da proteína PTEN por imuno-histoquímica. A concordância entre
PTEN
status de exclusão e expressão da proteína PTEN também foi identificada em nossa coorte (dados não mostrados).
A amplificação do
EGFR
foi identificado apenas em dois casos APC, ambos os quais foram negativas para
ERG
rearranjo. Da mesma forma, 9 em cada 10 (90,0%) casos APC com o
HER2
amplificação estiveram ausentes em
ERG
rearranjo.
ERG
rearranjo foi mais frequentemente presente em casos de CaP sem
HER2
amplificação (34/163, 20,9%) do que no
tumores HER2 -amplified
(1/10, 10,0 %) (P = 0,149).
foram identificados overexpressions imuno-histoquímica de EGFR e HER2 em 17,6% (31/176) e 6,0% (11/181) dos casos, respectivamente. HER2 superexpressão da proteína foi significativamente correlacionada com a amplificação de
HER2
(P 0,01). No entanto, não houve correlação entre a expressão da proteína EGFR e amplificação de genes (dados não mostrados).
ERG
rearranjo foi nem associado a EGFR, nem a expressão da proteína HER2.
Survival Análise do
ERG
Rearranjo em Relação à relacionada ao câncer Morte
Para determinar se a presença de
ERG
rearranjo foi um fator prognóstico para a APC, nós comparamos as taxas de morte por câncer entre os pacientes com ou sem
ERG
rearranjo. Com base nas estimativas de sobrevivência de Kaplan-Meier, o grupo de pacientes com
ERG
rearranjo teve uma muito maior taxa de mortalidade do que os doentes que não tinham o rearranjo de genes (P = 0,02) (Figura 3).
as taxas de sobrevida relacionada ao câncer foram comparados entre pacientes com e sem
ERG
rearranjo utilizando o teste de log-rank.
ERG
estado de rearranjo foi demonstrado ser um indicador significativo prognóstico de sobrevivência relacionados com o cancro da próstata [RH (IC 95%): 3,368 (1,261-8,955), P = 0,015] em análise univariada (Tabela 3). os valores de PSA no momento do diagnóstico (p = 0,009), escore de Gleason (P 0,001), estágio do tumor clínica (P = 0,011), metástases à distância (P = 0,006), Ki-67 LI (P = 0,002),
EGFR
amplificação (P = 0,023), e
HER2
amplificação (P = 0,001) foram também significativamente relacionada à sobrevida relacionada ao câncer na análise univariada. Notavelmente, em uma análise multivariada que incluiu conhecido marcadores prognósticos,
ERG
estado de rearranjo permaneceu um preditor significativo (P = 0,022), com uma razão de risco de 2,099 (IC 95%: 1,112-3,962) (Tabela 3).
Relevância prognóstico da
ERG
Rearranjo e Ki-67 LI
A seguir, determinou se os marcadores combinando melhorada valor prognóstico. Desde Ki-67 é um forte prognosticador conhecido na APC e tem um valor preditivo independente para sobrevida relacionada ao câncer em nossa coorte, nós diretamente comparados os efeitos prognósticos de
ERG
rearranjo e Ki-67 LI em combinação. Para esta análise, agrupamos todos os cânceres de acordo com a
ERG
status de sua (não rearranjado vs. rearranjado) eo status do índice da etiqueta Ki-67 (LI 10% vs LI 10%). Análises de regressão de Cox foram, portanto, realizada utilizando o grupo com baixa Ki-67 LI e nenhum
ERG
aberração como referência. Como mostrado na Figura 4, o maior grupo, que incluía aqueles que não tinham
ERG
rearranjo e baixa Ki-67 LI, tiveram uma sobrevida relacionada ao câncer maior quando comparado com os outros três grupos. Notavelmente, o subgrupo de pacientes com
ERG
rearranjo e alta Ki-67 LI tinha a pior sobrevida relacionada ao câncer.
Os pacientes foram estratificados por
ERG
rearranjo e Ki foi realizada -67 LI em combinação e teste log-rank.
Nós ainda determinado se
Status rearranjo ERG
poderiam ser utilizados para melhorar a estratificação de risco dos pacientes APC com baixo Ki-67 LI. De Kaplan-Meier mostraram que a análise
ERG
estado rearranjo era um factor de prognóstico no grupo de pacientes com baixo Ki-67 LI (P = 0,019) (Figura 5A). A sobrevida média dos pacientes APC com e sem
ERG
rearranjo foi de 69 e 89 meses, respectivamente. No entanto,
ERG
estado de rearranjo perdeu o seu valor preditivo do resultado naqueles com alta Ki-67 LI (Figura 5B). Por outro lado,
ERG
estado de rearranjo não foi útil na identificação de pacientes com CaP de alto risco com baixa pontuação de Gleason (dados não mostrados)
(A) baixo ki-67 LI ( 10. %) subgrupo, (B) de alta ki-67 LI (≥10%) subgrupo
Discussão
Esta é uma das maiores séries de pacientes PCA (n . 200) relatados até agora na China análise
ERG
rearranjo. Nossa coorte compreende homens tratados com TUR-P e todos os pacientes do estudo apresentavam sintomas de obstrução do trato urinário inferior, portanto, representa um subgrupo selecionado de PCAs clinicamente reconhecido. Os pacientes com PCAS incidentais foram excluídos do estudo. Embora mais e mais pacientes CaP PSA-betonilha foram identificados em países ocidentais, existem dados limitados sobre o fenótipo clínico ou história natural do CaP. De nota, nossa coorte incluiu um subgrupo de pacientes com alto grau APC. Este diferia da maioria dos pacientes ocidentais que foram encontrados para ter CaP devido ao rastreio PSA e foram muitas vezes tratados com prostatectomia radical.
No geral, a frequência de
ERG
rearranjo foi de 23,2% em nossa coorte e este foi comparável com o relatado anteriormente por Mao et al [21] e Ren et al [32] em pacientes chineses APC. Em consonância com estas conclusões, Kimura et al [17] e Lee et al [33] informou a prevalência de
TMPRSS2-ERG
gene de fusão foi de 16,3% (15/92) em japonês e 20,9% (53 /254) em pacientes CaP coreano, respectivamente. Anteriormente, Mosquera et al [34] detectado
TMPRSS2-ERG
de fusão em 100 caucasianos e pacientes CaP não-caucasianos submetidos a biópsia da próstata. Eles relataram que a incidência foi significativamente diferente em caucasianos (44/85, 52%) e em não-caucasianos (2/15, 13%). Mais recentemente, usando um ensaio FISH multicolor, Magi-Galluzzi et al [35] descobriu que
TMPRSS2 Restaurant –
ERG
fusão do gene estava presente em 50% (21/42) dos caucasianos, 31,3 % (20/64) dos afro-americanos e 15,9% (7/44) dos japoneses (P = 0,003). Colectivamente, estes estudos destacou a baixa prevalência de
TMPRSS2-ERG
fusões de genes em pacientes CaP na Ásia em comparação com os países ocidentais e esta disparidade, pelo menos parcialmente resultou de fundo genético diferente, em vez de os efeitos do estilo de vida ou dieta. De nota, a diferença também pode refletir descobertas anteriores de que a fusão é menos comum em tumores zona de transição (a partir do qual a maioria dos tumores encontrados em amostras TUR-P) do que em tumores da zona periférica [17], [36], [37]. Além disso, design de coorte e consideração de multifocalidade pode ter impactos sobre o
ERG
frequência rearranjo [38].
Até agora, o significado prognóstico da
ERG
rearranjo na CaP permanece contraditório. Uma série de estudos retrospectivos que procuraram uma associação entre
TMPRSS2-ERG
eo resultado seguinte PSA triagem prostatectomia radical deu resultados mistos. Vários estudos publicados têm demonstrado que pacientes APC com o
TMPRSS2-ERG
fusão do gene confere um maior risco de recorrência, enquanto outros relataram uma associação significativa com um prognóstico favorável ou um relacionamento nulo com o resultado clínico. Entre os pacientes administrados com a espera vigilante,
TMPRSS2-ERG
parecia estar associada a piores resultados. Em uma meta-análise com 227 homens diagnosticados com TUR-P, homens com tumores de fusão-positivo foram 1,37 (95% CI, 0.53-3.51) vezes mais probabilidade de sofrer metástases distantes ou morrem de CaP como os negativos para a fusão [18 ]. Discrepâncias no significado prognóstico relatado de
ERG
rearranjos pode ser devido ao desenho de coorte (multifocalidade e origem zonal do tumor), técnica de detecção de fusão, e são também responsáveis para o ponto final primário do estudo (isto é, recorrência bioquímica, sobrevida global). Portanto, mais estudos padronizados são necessários para abordar esta questão. No presente estudo, verificou-se que
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rearranjo foi significativamente associada com morte relacionada ao câncer de próstata em pacientes CaP chineses. Mais importante,
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rearranjo foi sugerido para ser um preditor independente de sobrevida global em análises multivariadas. É notável que recorrência bioquímica é um preditor imprecisa de morte por câncer de próstata. Embora PSA pode servir como um desfecho substituto para a sobrevida global, a maioria dos homens com falha bioquímica PSA vai morrer de outras causas. Ward et al descobriram que, em uma população de 3897 pacientes de prostatectomia radical, apenas 8,3% dos homens com falha bioquímica PSA morreu de CaP [39]. morte, portanto, relacionada com o câncer de próstata como o ponto final primário pode ser mais confiável para análise do prognóstico. No total, os nossos dados apoiaram o conceito de que, se não tratada ou a falta de terapia inicial,
TMPRSS2-ERG
APC executar um curso clínico mais agressivo do que o câncer de fusão-negativo.
Até o momento, Ki-67 tem sido amplamente utilizada como um biomarcador prognóstico em malignidade incluindo CaP. Seu valor preditivo independente para CaP sobrevida relacionada foi confirmado em nosso estudo. De acordo com o relatório do Antonarakis [40], não houve associação significativa entre a
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rearranjo e estado Ki-67 LI foi identificado. Uma explicação é que
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rearranjo tem efeitos diferentes sobre a proliferação e invasão
in vitro
, respectivamente, Ki-67 é um marcador de proliferação bem conhecido [41] – [43]. Por outro lado, em 2008, Tomlins et al relataram que a alternância de
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expressão do gene afetam significativamente a invasão
in vitro
mas não tem efeito sobre a proliferação celular [41]. No entanto, quando a estratificação para o status de Ki-67,
ERG
rearranjo foi um fator prognóstico para a sobrevivência relacionada Câncer apenas em pacientes APC com baixo Ki-67 LI. Um importante desafio clínico na gestão PCA é a incapacidade de distinguir prontamente indolente de tumores agressivos em pacientes que se apresentam com baixo grau de Gleason, baixo volume de tumor ou baixa Ki-67 LI. Nossos dados sugerem que a determinação do
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estado de rearranjo poderia ser útil na estratificação de pacientes APC com baixo Ki-67 LI em diferentes categorias de sobrevivência.
Apesar de fusão do gene é um evento molecular chave na CaP desenvolvimento e
TMPRSS2-ERG
fusão pode induzir neoplasia prostática de alto grau (HGPIN), não é suficiente para gerar um fenótipo totalmente transformado
in vitro
e
in vivo
[ ,,,0],41], [44]. Vários grupos independentes sugeriram
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pode cooperar com outras aberrações genéticas para promover o desenvolvimento CaP e progressão, como
PTEN
haploinsuficiência, receptor de andrógeno reforçada (AR) de sinalização, superexpressão de SOX9 e fosfoinositídeo aberrante 3-quinase (PI3K) [45] – [47]. Mais recentemente,
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foi mostrado para mediar epiteliais para mesenquimais transição (EMT) através da indução da via de sinalização Wnt através FZD4 bem como eixo ZEB1 /ZEB2 [48], [49]. Anteriormente, nós e outros têm sugerido a associação significativa entre
PTEN
exclusão e
ERG
rearranjo tanto em localizado e metastático PCAS nos países ocidentais.