Abstract

Fundo

Como uma parte fundamental da via PI3K /Akt /mTOR , alvo da rapamicina em mamíferos (mTOR) foi demonstrada para aumentar em células gástricas cancerosas e tumores. Nossa pesquisa explorou a relação entre polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) rs2295080 no

mTOR e região promotor e o risco de câncer gástrico (GC).

Métodos

setecentos e cinqüenta -Três (753) pacientes de adenocarcinoma gástrico e 854 indivíduos saudáveis ​​pareados foram recrutados no estudo de associação do câncer e 60 tecidos foram usados ​​para testar a expressão de

mTOR

. regressão logística incondicional foi selecionado para avaliar a associação entre o rs2295080 T G polimorfismo eo risco GC. Em seguida, examinaram a funcionalidade deste promotor variante genética por ensaio luciferase e EMSA.

Resultados

Indivíduos com alelo G tinha um 23% menor risco de GC, em comparação com os portadores do alelo T (ajustado OR = 0,77, IC 95% = 0,65-0,92). Este efeito protetor do alelo G destacou-se melhor no grupo masculino. Enquanto isso, os pacientes GC transportando TG /genótipo GG também apresentou um nível de mRNA diminuiu de

mTOR

(

P

= 0,004). No ensaio de luciferase, t alelo tendem a aumentar a actividade transcricional de

mTOR

com um 0,5 vezes em relação aproximada alelo G. Além disso, os testes da EMSA explicou que diferentes alelos de rs2295080 exibido afinidades diferentes a algum fator de transcrição.

Conclusão

O

mTOR

rs2295080 polimorfismo do promotor foi significativamente associada com o risco de GC. Este SNP, o que efetivamente influenciado a expressão de

mTOR

, pode ser um novo biomarcador de diagnóstico precoce do câncer gástrico e um indicador adequado da utilização de inibidor de mTOR para o tratamento de GC

Citation:. Xu M, Tao G, Kang M, Gao Y, Zhu H, Gong W, et al. (2013) Um polimorfismo (rs2295080) no

mTOR

Promotor Região e sua associação com câncer gástrico na população chinesa. PLoS ONE 8 (3): e60080. doi: 10.1371 /journal.pone.0060080

editor: Paolo Peterlongo, IFOM, Fondazione Istituto FIRC di Oncologia Molecolare, Itália |

Recebido: 26 de novembro de 2012; Aceito: 21 de fevereiro de 2013; Publicação: 29 de março de 2013

Direitos de autor: © 2013 Xu et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este estudo foi parcialmente financiado pela National Natural Science Foundation da China (81230068, 30972444, 81001274 e 81102089), o Programa de Key of Natural Science Foundation da província de Jiangsu (BK2010080), Natural Science Foundation da província de Jiangsu (BK2011773 e BK2012842), o Programa chave de Pesquisa básica de Jiangsu Departamento Provincial da Educação (11KJB330002 e 12KJA330002), o Projeto Qing-Lan de Jiangsu Departamento Provincial da Educação, ea prioridade Academic Programa de Desenvolvimento das Instituições de Ensino Superior Jiangsu (Saúde Pública e Medicina preventiva). Também gostaríamos de agradecer Luo Y (Nanjing Cruz Vermelha Centro de Sangue) por sua assistência com experiências funcionais. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

Conflito de interesses:. Os autores declararam não haver conflitos de interesse

Introdução

o câncer gástrico (CG) é o câncer mais frequente em todo o mundo entre os homens com 640.556 e mulheres com 349,042 novos casos e mortes relacionadas 738,069 em 2008 [1]. Em consideração da eficiência terapêutica, a ressecção cirúrgica pode ser tratamento curativo primário para a fase anterior de pacientes GC [2]. Infelizmente, a maioria dos pacientes com câncer gástrico são detectados em estágio avançado, período durante o qual o tumor é ressecável mais. Além disso, a recidiva após a cirurgia é um outro evento terrível para uma taxa de sobrevida em 5 anos pobres. Considerando os pacientes com câncer gástrico avançado ou recorrente, não é nenhuma dúvida de que a descoberta de biomarcadores e sua aplicação acompanhada com o diagnóstico tradicional pode ser uma indicação valiosa e uma extensa ajuda a formular a estratégia de prevenção e tratamento.

alvo Mammalian de rapamicina (mTOR) consiste de 2,549 aminoácidos dispostos no domínio altamente conservado [3]. Estruturalmente, a mTOR contém um domínio de ligação de rapamicina na sua parte central e um domínio cinase e [4] C-terminal. Como um componente chave da via PI3K /Akt /mTOR, mTOR é intimamente relevantes para os processos celulares de capital, como o crescimento celular, a proliferação, o metabolismo, a migração, angiogénese, e a apoptose [5] – [7]. Até agora,

mTOR

produtos considerados como dois complexos distintos (isto é, mTORC1 e mTORC2) com sensibilidade diferente [8], [9]. mTORC1 é um complexo rapamicina-sensível que inclui mTOR mais proteína de ligação FK506 de 12 kDa (FKBP12), LST8 de mamífero (mLST8), e a proteína reguladora associada de mTOR (rapina). Em contraste, mTORC2 consiste com SIN1, mLST8, e companheiro rapamicina-insensitive de mTOR (rictor) [10] – [12]. Desregulação do

mTOR

muitas vezes aparece em vários tipos de cânceres durante a carcinogênese e deterioração. No entanto, as razões para este fenômeno aberrante ainda estão saturados com debates.

Uma série de estudos têm investigado o papel dos polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) do

gene mTOR

na etiologia dos cânceres em vários órgãos, incluindo câncer de esôfago [13], o cancro do pulmão [14], o cancro da bexiga [15], câncer de cólon, câncer retal [16], e leucemia linfoblástica aguda [17]. A maioria destas SNPs localizar nos exões ou intrões funcionais com efeitos desconhecidos. Recentemente, um número cada vez maior de estudos têm-se centrado sobre o assento SNPs na região promotora do gene, que está provado para influenciar a capacidade de ligação com alguns factores de transcrição (TFS) e o impacto a seguinte transcrição do gene. Neste estudo, a hipótese de que

mTOR

rs2295080 T G polimorfismo na região do promotor pode influenciar a susceptibilidade à GC. Para testar esta hipótese, genotipados a frequência de

mTOR

rs2295080 para testar a sua importância no risco GC no nosso, estudo em curso, hospital de base caso-controle em uma população chinesa. Consequentemente, foram detectados os

mTOR

níveis de mRNA com diferentes genótipos em tecidos de pacientes com câncer gástrico. Além disso, caracteriza-se ainda mais a funcionalidade desta variante genética no

mTOR

transcrição promotor por ensaio luciferase e EMSA.

Materiais e Métodos

Os sujeitos do estudo

O estudo incluiu 753 pacientes com adenocarcinoma gástrico confirmado histologicamente e 854 controles sem câncer. Todos os pacientes foram recrutados na Clínica Base de Pesquisa do Câncer da Universidade Médica de Nanjing entre março de 2006 e janeiro de 2010. E todas as informações demográficas e clínicas, incluindo idade, sexo, tamanho do tumor, localização do tumor, tipo histológico, a profundidade da invasão, metástase linfonodal, metástases à distância, e estágio TNM, foram obtidas utilizando um pequeno questionário e os registros médicos clínicos.

os controles pareados por freqüência para estes casos por idade (± 5 anos) e sexo foram coletados no mesmo período e regiões relação genética não relacionados com a doença gástrica e tumores do sistema digestivo. Cada participante assinou um consentimento informado por escrito e doou 5 ml de sangue venoso para extração de DNA genômico. O protocolo de pesquisa foi aprovado pelo conselho de revisão institucional da Universidade Médica de Nanjing.

Extração de DNA e genotipagem SNP

DNA genômico foi extraído de amostras de sangue, como descrito anteriormente [18]. A genotipagem foi completada por TaqMan SNP Genotyping Assay utilizando ABI 7900HT em tempo real, PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA) e Sequence Detection System versão 2.4 (SDS a 2,4). As sequências dos iniciadores e sondas estavam disponíveis a pedido, e os controles foram contidos para cada placa para garantir a precisão da genotipagem. O ensaio de genotipagem foi realizada por duas pessoas independentemente de uma forma cega. Mais de 10% das amostras foram seleccionados aleatoriamente para confirmação, e os resultados foram de 100% concordante. Primers e sondas foram listadas na Tabela S1.

Cultura de Células e Construção de Promotor Reporter Plasmids

Uma linha celular gástrica mucosa epitelial normal (GES-1) e três linhas celulares de cancro gástrico diferentes (BGC -823, MGC-803, e SGC-7901) foram adoptadas para este estudo. Todas as células foram cultivadas em meio de cultura de Dulbecco Modificado Egale médio /alto teor de glucose com FBS a 10%, HEPES 10 mM, 2 mM de L-glutamina, 1 mM de piruvato de sódio, 100 U /ml de penicilina, e 100 ug /ml de estreptomicina a 37 ° C numa atmosfera humidificada contendo 95% de ar e 5% de CO

2. A maioria dos reagentes foram obtidos da GIBCO (Burlington, Ontario, Canada):

plasmídeos repórter da luciferase, o humano

mTOR

sequências de promotor com diferentes alelos para rs2295080 T . Polimorfismo G foram sintetizados e construído no vector pGL3-basic (Promega, Madison, WI, EUA) por Generay Company (Xangai, China). Todos os plasmídeos foram confirmadas por sequenciação de ADN. Iniciadores envolvidos no teste foram listadas na Tabela S2.

Transient transfecção e ensaio de luciferase

GES-1, BGC-823, MGC-803, e as células SGC-7901 foram transfectadas por Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA) com 0,8 ug de cada vector construído, quer com o alelo T ou com alelo G. Simultaneamente, 10 ng PRL-SV40 por poço também foi transfectado como um controlo interno para corrigir a eficiência de transfecção. Antes de isso, as células foram semeadas em placas de 24 poços durante a noite para assegurar 90% -95% de confluência no momento da transfecção. Vinte e quatro horas após a transfecção, a actividade da luciferase foi medida pela Dual-Luciferase Reporter Assay System (Promega, Madison, WI, EUA) e expressa como a razão de luciferase do pirilampo para Renilla actividades de luciferase. Todas as células foram feitas em triplicado com as mesmas condições

eletroforética Mobilidade Mudança Assay (EMSA)

O sentido sequências de sonda foram os seguintes: sonda T rs2295080, 5′-AGGGTTCCCATCCCTGAGGAC-3 ‘;. sonda G rs2295080, 5’-AGGGTTCCCAGCCCTGAGGAC-3 ‘. proteínas nucleares foram extraídas com NE-PERTM Citoplasmáticas de extracção Reagentes (Pierce, Rock-ford, IL, EUA) e Nucleares. As sondas de ADN foram preparadas com o DNA Labeling Kit Biotina extremidade 3 ‘(Pierce, Rocha-ford, IL, EUA). teste de desvio de mobilidade eletroforética (EMSA) foi realizada com um Kit LightShift Quimioluminescentes EMSA (Pierce, Rock-ford, IL, EUA). As reacções de ligação foram realizados como se segue: extractos nucleares (8 ug de proteína) e o tampão de ligação 1 × com 2,5% de glicerol, MgCl 5 mM de

2, 50 ng /poli ul (dl-dC), 0,05% de NP-40, e 20 fmol de sondas G T /rs2295080 rs2295080 marcados com biotina foram incubadas em gelo durante 30 minutos num volume de 20 ul. Para estudos de competição, os extractos nucleares foram incubadas com o oligonucleótido não marcado, durante 30 min antes da adição do oligonucleótido marcado.

Os níveis de expressão de

mTOR

ARNm.

O ARN total a partir de 60 gástrica tecidos de cancro, incluído em 753 casos, com diferentes genótipos foram extraídos utilizando Trizol Reagent (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA). O ARNm foi medido por quantitativa PCR em tempo real (ABI 7300) após transcrição reversa. GAPDH foi usada como um controlo interno quantitativa para cada amostra. Os iniciadores utilizados para a amplificação foram mTOR F: 5′-TTGCTTGAGGTGCTACTG-3 ‘e R: 5′-CTGACTTGACTTGGATTCTG-3′; os iniciadores para GAPDH foram F: 5’-AAGGTGAAGGTCGGAGTCAAC-3 ‘e R: 5′-GGGGTCATTGATGGCAACAATA-3’. quantificação relativa de

mTOR

mRNA foi calculado usando o método 2-ΔΔCt. Dobram mudanças foram normalizados em relação ao GAPDH, e cada ensaio foi feito em triplicado.

A análise estatística.

Hardy-Weinberg (HWE) foi avaliada pela bondade do qui-quadrado de teste de ajuste para comparar as freqüências genotípicas observadas com o esperado entre os controles. As associações entre genótipos e risco de câncer gástrico foram estimados por razões de computação odds (OR) e intervalos de confiança de 95% (IC) de análises de regressão logística com ajuste para idade e sexo. Frente e verso χ

2 testes de significância estatística foi realizada usando o software SAS (versão 9.1.3; SAS Institute, Inc., Cary, NC, EUA) e

P Art 0,05 foi considerado estatisticamente importância.

resultados

características dos sujeitos do estudo

as características selecionadas desses casos e controles estão resumidos na Tabela 1. os casos e controles parecia ser adequadamente emparelhadas no idade (

P

= 0,424) e sexo (

P

= 0,406). Entre os 753 casos, os locais tumorais incluídos cancro cárdia 295 (39,2%) e 458 do cancro não-cárdia (60,8%). Os pacientes com o tipo difuso (437, 58,0%) mostrou uma proporção ligeiramente mais elevada do tipo intestinal (316, 42,0%). Com base na classificação TNM da Comissão Americana Conjunta sobre o Câncer (manual de estadiamento do câncer AJCC, 6

th edition) [19], 17,3%, 17,3%, 50,6% e 14,8% dos pacientes apresentaram T1, T2, T3, e T4, respectivamente. Enquanto isso, 60,6% dos pacientes apresentaram metástase em linfonodo positivo e 13,0% existia metástases à distância. De acordo com estas características clínicas, todos os pacientes foram finalmente identificados para a fase I, II, III e IV, com 26,8%, 21,9%, 35,3% e 16,0%, respectivamente.

Os efeitos globais de rs2295080 Polimorfismo sobre o risco de GC

o genótipo distribuições e freqüências alélicas de rs2295080 são apresentados na Tabela 2. as freqüências genotípicas nos controles estavam de acordo com o modelo HWE (

P

= 0,569 ). Como mostrado na Tabela 2, as frequências dos genótipos de rs2295080 foram 64,0%, 32,7%, e 3,3% para os genótipos TT, TG, e GG entre os casos e 58,2%, 35,7%, e 6,1% entre os controlos, respectivamente. A diferença entre os casos e controles foi estatisticamente significativa (

P =

0,008). Além disso, a freqüência do alelo G foi significativamente menor entre os casos do que nos controles (19,7% versus 23,9%,

P

= 0,003). Além disso, a freqüência do genótipo TG /GG combinado foi menor entre os casos do que nos controles (36,0% versus 41,8%,

P

= 0,016). Ao tomar genótipo TT como referência, descobrimos que os genótipos variantes (TG e GG) foram associados com uma diminuição do risco de GC de uma maneira dose-resposta em comparação com o genótipo TT (OR ajustado = 0,83, 95% CI = 0,67-1,02 para TG, e 0,49, 0,30-0,80 para GG;

P

tendência = 0,003). Da mesma forma, também observamos que os genótipos TG /GG combinados associados a uma susceptibilidade estatisticamente significativamente menor para GC em comparação com o genótipo TT (0,78, 0,64-0,96). Tomados em conjunto, estes dados sugerem que o

mTOR

alelo rs2295080 G pode ser um alelo protetor putativo.

Os machos foram mais suscetíveis ao câncer gástrico com rs2295080 Polimorfismo

como está bem estabelecido, idade e sexo foram fatores importantes na carcinogênese de tumores, incluindo o câncer gástrico. De acordo com a análise de estratificação com fatores de idade e sexo, verificou-se que associação significativa foi observada no grupo masculino, em vez de no grupo feminino (Tabela 3). Nos machos, levando alelo G rs2295080 foi um diminuíram significativamente fator de risco (OR = 0,72, 95% CI = 0,56-0,93 para TG /GG contra TT), comparando com transportando alelo T. No entanto, não houve diferença estatística entre indivíduos jovens e velhos.

A análise estratificada das Associações entre o polimorfismo rs2295080 e variáveis ​​clínicas de câncer gástrico

Realizou-se a análise da estratificação polimorfismo rs2295080 em todas as disciplinas por características clínicas da GC. Entre todas as variáveis ​​independentes, os efeitos protetores foram observadas principalmente em subgrupos de pacientes com câncer de cárdia (OR = 0,68, IC 95% = 0,52-0,91), tipo intestinal (0,73, 0,56-0,96), T3 invasão profundidade (0,78, 0,60 -1.00), metástase positiva linfonodos (0,79, 0,62-1,00), metástases à distância negativa (0,76, 0,62-0,94), e estágio localizada (0,76, 0,59-0,98) (Tabela 4).

efeito do polimorfismo rs2295080 no transcricional Atividade

Para obter uma visão sobre o efeito funcional biológica do polimorfismo rs2295080 no

mTOR

transcrição, GES-1, BGC823, MGC803, e as células SGC-7901 foram transfectadas com diferentes plasmídeos relatório luciferase, incluindo o tipo selvagem (T alelo) e tipo de mutação (G alelo). Como mostrado na Fig. 1A, verificou-se que a actividade de transcrição do alelo T foi mais elevado do que o alelo G com um aproximadamente de 1,5 vezes na acima de quatro linhas de células, sugerindo que o alelo rs2295080 L trabalhado como uma defesa para o cancro gástrico, reduzindo a transcrição da

mTOR

.

(A) A actividade do promotor de diferentes alelos de

mTOR

polimorfismo rs2295080. T alelo foi descrito cerca de 0,5 vezes em relação G capacidade alelo dentro ensaio de luciferase de quatro tipos de linhas de células gástricas (GES-1, BGC-823, MGC-803 e SGC-7901). (B) as proteínas nucleares atividade de diferentes alelos de ligação

mTOR

polimorfismo rs2295080. As sondas biotiniladas (20 fmol) foram incubadas com 8 ug de extractos nucleares a partir de células SGC-7901. Em experimentos de competição, 10, 100-, e excesso molar de 200 vezes de sondas G T /rs2295080 rs2295080 não marcados foram utilizados para demonstrar a especificidade de cada reacção de ligação.

Protein Nuclear actividade de ligação do Variantes em rs2295080

em seguida, foi realizado um experimento EMSA analisar as consequências biológicas do polimorfismo rs2295050 em células SGC-7901. Uma banda forte (complexo de proteína) foi deslocado quando os extractos nucleares foram incubadas com a sonda rs2295080 T marcado com biotina, enquanto que foi observada a banda mais fraca quando os extractos nucleares foram incubadas com biotina marcada com sonda rs2295080 L. As bandas desviadas foram significativamente inibidas por um excesso molar de um rs2295080 T ou G rs2295080 competidor não marcado de uma forma de dose-dependem (Fig. 1B). Estes resultados indicam que o alelo G rs2295080 poderia diminuir a atividade de ligação da proteína nuclear até certo ponto.

Associação entre

mTOR

polimorfismo rs2295080 e os níveis de expressão de

mTOR

mRNA

Sessenta e três tecidos de câncer gástrico com diferentes genótipos de

mTOR

rs2295080 estavam disponíveis em nosso estudo. Por causa da baixa freqüência do genótipo GG, nós adicionamos em amostras com TG genótipo para análise. Como mostrado na Fig. 2, os níveis de

mTOR

mRNA foi significativamente maior nos indivíduos com genótipo TT do que naqueles com TG ou genótipo GG expressão (média ± SEM de TT em relação TG /GG: 12,35 ± 1,51 contra 6,17 ± 1,32,

P

= 0,004).

TT contra TG genótipos /GG,

P

= 0,004.

Discussão

no presente estudo, foi demonstrado que o alelo G de

mTOR

rs2295080 polimorfismo do promotor estava associada com um risco significativamente reduzido de GC. Descobrimos que o T para G na mudança rs2295080 alteraram substancialmente a actividade de transcrição de

mTOR

gene através de influenciar a ligação do factor de transcrição alguns. Observamos também que

mTOR

alelo rs2295080 T foi associado com maior

mTOR

níveis de expressão de mRNA

in vivo

.

alvo da rapamicina em mamíferos (mTOR) , também conhecido como FRAP1, é necessário um membro da via PI3K /Akt /mTOR e central para sinalização metabólica [20], [21]. Ele pode ser activada pela insulina, factores de crescimento semelhantes a insulina e outros factores de crescimento, e inactivado durante a fome celular. mTOR existe dois tipos diferentes de complexo, chamado mTORC1 e mTORC2, respectivamente [22]. O complexo mTORC1 fosforila o seu efector a jusante p70s6k, o que poderia induzir a degradação do substrato do receptor da insulina e aumentar ainda mais a actividade de Akt-driven insulina. O complexo mTORC2 fosforila o C-terminal da Akt Ser473 no, o que poderia levar a toda a activação de Akt [9]. Como um alvo terapêutico em outros cancros [4], [8], [23] – [27], mTOR poderia também emergiu como um alvo potencial para o tratamento do cancro gástrico, espontaneamente. Sirolimus [28] e [29] everolimus, os inibidores de mTOR, foram identificados para resultar na paragem do ciclo celular G1 e inibiu a proliferação de linhas de células gástricas. Recentemente, um novo potencial

mTOR

rs2295080 polimorfismo do promotor foi descrita em vários estudos [30] – [32]. No entanto, insuficientes estudos funcionais foram realizados para avaliar o papel desta variante genética na regulação da expressão

mTOR

. No GC, os nossos resultados desde que a evidência de que rs2295080 alelo T poderia aumentar a atividade de transcrição de

mTOR

em certa medida na linha de células de GES-1 após transfectadas

in vitro

. E ainda de ensaio de luciferase em três linhas de células de cancro gástrico (isto é, BGC-823, MGC-803, e SGC-7901) confirmou ainda mais este efeito de polimorfismo rs2295080. Estes resultados em nosso estudo estavam de acordo com os resultados em linha de células de cancro renal e linha de células de câncer de colo [32]. No ensaio de EMSA, rs2295080 foi previsto para localizar sobre o potencial local de ligação, cuja variantes polimórficos poderia influenciar o recrutamento de fatores de transcrição (usando o programa de p-MATCH, que usa sites em TRANSFAC vinculativo; www.gene-regulation.com). Tomados em conjunto estes resultados, é plausível que

mTOR

polimorfismo rs2295080 poderia influenciar o nível de

mTOR Comprar e susceptibilidade individual a vários cancros expressão.

Os rs2295080 SNP, bem como outro rs11121704 intron SNP, foi primeiramente relatada por Hildebrandt

et al.

de localizar em

mTOR e região promotor potencial [13]. Conforme descrito no câncer de esôfago, rs2295080 parecia nenhuma associação ou função com a sobrevivência após quimioradioterapia e cirurgia. Mas, até agora, vários estudos têm identificado o efeito desse polimorfismo no

mTOR Compra de risco de câncer [30] – [32], os quais considerados alelo T rs2295080 como um fator de risco. No estudo atual, a associação entre o alelo rs2295080 T e risco GC foi consistente com os resultados dos últimos três estudos [30] – [32]. Além disso, os nossos resultados também sugerem que o polimorfismo pode ser um ponto crucial biológico no desenvolvimento de GC. Devido a diferentes populações e diferentes mecanismos entre ocorrência, desenvolvimento e sobrevivência, nós especulamos as diferenças etnia e distinções mecanicistas pode explicar essas discordâncias.

Outro resultado novela vem a partir da associação entre os sexos e

mTOR

polimorfismo rs2295080 em análise estratificada. Este polimorfismo rs2295080 revelou mais forte significado em homens do que mulheres. Além disso, Hartgrink

et al

. (2009) relatou a relação entre homens e mulheres infectados por câncer gástrico é de cerca de 2:01 por ano [33]. Mais explicações para conexões destes resultados precisa ser procurado, e diferentes tipos de expressão hormônios em machos e fêmeas se tornar o melhor consideração, racionalmente. Em um estudo do cancro da mama, Galoian

et ai.

Deu os dados que prolinerich polipéptido-1 exerce um efeito antiproliferativo através de inibição da actividade da mTOR quinase em ER-negativo MDA-231, mas nenhum efeito inibitório existe em T47 luminal -D célula que funciona como uma linha de células ER-positivo [34]. No entanto, para os estudos de androgénio, acredita-se que pode estimular a actividade de androgénio mTOR em células de cancro da próstata PTEN-deficiente. Um estudo recente sobre o receptor andrógeno melhorou o papel dos andrógenos no up-regulação da actividade mTORC2 [35]. É provável que o andrógeno, em vez de estrogênio, pode aumentar o

expressão mTOR

; andrógeno pode levar à alta incidência de câncer gástrico em homens eo forte significado de

mTOR

rs2295080 no grupo masculino em nosso estudo.

Algumas limitações do nosso estudo devem ser apontadas como segue . Em primeiro lugar, rs2295080 não foi o único polimorfismo significativamente existente no

mTOR

, ea importância de SNPs combinando foi negligenciado em nosso estudo. Em segundo lugar, como factores cruciais na carcinogênese gástrica, a falta de

Helicobacter pylori

informações, fumando informações, e bebendo informações também eram insuficientes em nosso estudo, é inconveniente para nós para uma investigação mais aprofundada dos efeitos deste polimorfismo. Além disso, por causa do pequeno tamanho da amostra relativa em nosso estudo, não houve resultados significativos parecia ser encontrada em particular estratos (subgrupos etários, subgrupo feminino, e outros subgrupos clínico-patológico) de análises estratificadas (Tabela S3 e S4). era esperado estudo ainda maior, com mais informações para verificar os nossos achados.

Em conclusão, nosso estudo iluminado

mTOR

rs2295080 localizando na região promotora de

gene mTOR

foi significativamente associado com o risco de câncer gástrico em uma população chinesa.

Informações de Apoio

Tabela S1.

Primers e sondas usadas para genotipagem

doi:. 10.1371 /journal.pone.0060080.s001

(DOC)

Tabela S2.

Primers para construção de plasmídeos

doi: 10.1371. /journal.pone.0060080.s002

(DOC)

Tabela S3.

Interação análises de

mTOR

polimorfismo rs2295080 e idade ou o estado do sexo em estudo caso-controle

doi:. 10.1371 /journal.pone.0060080.s003

(DOC)

Tabela S4.

Interação análises de

mTOR

polimorfismo rs2295080 e idade /sexo ou caracteres clínicos no estudo de caso-only

doi:. 10.1371 /journal.pone.0060080.s004

(DOC)

Reconhecimentos

gostaríamos de agradecer Luo Y (Nanjing Cruz vermelha Centro de sangue) por sua assistência com experiências funcionais.