Abstract

O papel dos telômeros e da telomerase no cancro colorectal (CRC) está bem estabelecida como a principal força motriz na geração de instabilidade cromossômica. No entanto, o seu potencial como marcadores prognósticos permanece obscuro. Nós investigamos as implicações do resultado de telômeros e da telomerase neste tipo de tumor. Nós considerado o comprimento dos telômeros (TL), razão entre o comprimento dos telômeros em câncer de tecido não-câncer (relação T /N), a atividade da telomerase e

níveis TERT

; sua relação com variáveis ​​clínicas e seu papel como marcadores prognósticos. Foram analisados ​​132 CRCs e emparelhado tecidos não-cancerosas. curvas de Kaplan-Meier para a sobrevida livre de doença foram calculados para a relação TL, T /N, a atividade da telomerase e

níveis TERT

. Em geral, os tumores tinham telómeros mais curtos do que os tecidos não tumorais (P 0,001), e mais do que 80% de CRCs exibido actividade da telomerase. telomere comprimentos de tecidos e CRCs não tumorais foram correlacionados positivamente (P 0,001). , Considerando o estado do telómero e variáveis ​​clínicas, o menor grau de encurtamento dos telómeros foi mostrado por tumores localizados no recto (P = 0,021). Em relação aos estudos de prognóstico, os pacientes com tumores que mostram uma média TL 6.35 Kb experimentou um significativamente melhor evolução clínica (P 0,001) e nenhum deles com o maior grau de encurtamento dos telômeros tumor recaída durante o período de seguimento (P = 0,043). A média TL em CRCs emergiu como um fator prognóstico independente na análise Cox (P = 0,017). a actividade de telomerase-positivo foi identificado como um marcador que confere uma tendência para um prognóstico pobre. No CRC, nossos resultados suportam o uso do status dos telômeros como um fator prognóstico independente. estatuto dos telômeros pode contribuir para explicar as diferentes identidades moleculares deste tipo de tumor

Citation:. Fernández-Marcelo T, Sánchez-Pernaute A, Pascua I, De Juan C, Cabeça J, Torres-García AJ, et al . (2016) relevância clínica Telomere Estado e telomerase Atividade no câncer colorretal. PLoS ONE 11 (2): e0149626. doi: 10.1371 /journal.pone.0149626

editor: Michel M. Ouellette, University of Nebraska Medical Center, United States |

Recebido: 21 Setembro, 2015; Aceito: 03 de fevereiro de 2016; Publicação: 25 de fevereiro de 2016

Direitos de autor: © 2016 Fernández-Marcelo et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Data Availability:. Todos relevante os dados estão dentro do papel

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado por subsídios da Fundação de Investigação Médica Mutua Madrileña e Santander-UCM. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer colorretal (CRC) é o terceiro câncer mais comum em homens ea segunda em mulheres em todo o mundo [1]. Vários fatores estão associados com uma menor probabilidade CRC, como a alta atividade física e consumo elevado de fibra dietética, peixes, nozes, produtos lácteos e frutas e legumes. No entanto, a ingestão de alto índice de massa corporal e circunferência da cintura, tabagismo, consumo de álcool, e vermelhas e carnes processadas estão relacionadas a um maior risco CRC [2-4].

eventos genéticos e epigenéticos diferentes estão envolvidos na progressão CRC de [5]. Actualmente, três vias, não se excluem mutuamente e nomeados pelo processo celular que promove-los, foram implicados no desenvolvimento de CRC. A instabilidade cromossómica (CIN) via é caracterizada pela acumulação de anormalidades numéricas ou estruturais que faz com que a perda de genes onco-supressores e a activação de oncogenes. A instabilidade microssatélite (MSI) via é definida como um sistema de reparação de ADN não corresponde deficiente que faz com que os erros não reparados nas microssatélites (sequências de nucleótidos de repetição). Finalmente, o CpG island methylator fenótipo (CIMP) via exibe o silenciamento de genes devido a uma hipermetilação das ilhas de CpG generalizada em vários loci [6-9].

Aproximadamente 85% de CRCs são caracterizados pela instabilidade cromossómica e disfunção telomérica pode ser considerada uma importante força motriz para gerar esse recurso [9]. Os telómeros são sequências de ADN repetitivas (TTAGGG) localizados na extremidade dos cromossomas, que são associados com o complexo Shelterin. Entre suas principais funções, os telômeros protegem os cromossomos de fusão end-to-end e degradação do DNA [10,11]. O problema de replicação final, devido à incapacidade da polimerase de DNA de replicar a extremidade 3 ‘dos ​​cromossomas, provoca um encurtamento dos telómeros progressiva que é acoplado a divisão celular. Quando um comprimento de telómeros crítico é atingido, as células activar os mecanismos de protecção, isto é, a senescência apoptose, a fim de evitar a proliferação de células geneticamente instáveis. Se estes mecanismos de falha, as células continuam a dividir e entra em uma fase de crise que é caracterizado por instabilidade genómica e morte celular massiva [9,12,13]. Neste ponto, a activação da telomerase (um complexo ribonucleoproteico composta de um componente interno de ARN e uma proteína catalítica com actividade de transcriptase reversa específicos de telomere) compensa para o encurtamento dos telómeros e permite que as células de saída com sucesso a partir da fase de crise. A telomerase é expressa especificamente em células imortais, tais como células estaminais, tecidos germinativas e células cancerosas. Para este último, a telomerase confere um potencial replicativo ilimitado e tem sido implicada na imortalização e carcinogénese [13-16].

Telómero encurtamento é um evento precoce na carcinogénese e CRC dos telómeros /disfunção da telomerase é considerado como um jogador fundamentais neste processo [9]. Para telomerase, há um consenso geral de que altos níveis de hTERT ou atividade da telomerase são associados com mau prognóstico [17,18]. No entanto, o papel prognóstico do comprimento dos telômeros em CRCs ainda precisa ser confirmada [9]. Recentemente, a utilidade clínica dos telómeros foi demonstrada para melhorar o tratamento do cancro colo-rectal metastático: o resultado de pacientes tratados com a terapia anti-EGFR parece ser dependente do comprimento de telómeros de tumores [19]. Enquanto a maioria dos estudos identificar encurtamento dos telómeros como um evento inicial essencial na carcinogénese, o papel do comprimento dos telómeros nas células cancerosas como um marcador de progressão da doença é controverso [20]. De facto, considerando CRC, significa telomere atrito tem sido associada com a capacidade invasiva dos linfonodos de células de cancro do cólon [21], ao passo que outros trabalhos indicam que o comprimento dos telómeros no tecido do cancro foi significativamente mais longo na fase tardia de tumores colo-rectais [22].

Considerando a relevância dos telômeros e da telomerase na carcinogênese e, em particular, o seu papel como biomarcadores de prognóstico, o nosso principal objetivo neste trabalho foi destacar e ajudar a esclarecer a importância dos parâmetros acima mencionados da função dos telômeros como independentes biomarcadores de prognóstico em CRC. Com este objectivo, foram avaliados o estado dos telômeros (comprimento dos telômeros T /N) e telomerase, a sua relação com variáveis ​​clínicas, e seu papel como biomarcadores moleculares para predizer o resultado de uma grande série de pacientes com CRC operado

Materiais e Métodos

pacientes e amostras de tecido

cento e trinta e dois carcinomas colo-rectal (CRCs), e suas amostras de tecido de controlo correspondentes, foram obtidos de pacientes que haviam sido submetidos cirurgia potencialmente curativa em San Carlos Hospital em Madrid, Espanha, entre 2006 e 2010. Emparelhado tecidos normais do mesmo paciente, utilizados como controle, foram obtidos e microscopicamente confirmados. Após a ressecção cirúrgica, todas as amostras de tecido foram congeladas em azoto líquido e armazenado a -80 ° C até serem processadas. Criostato segmentado, H E coradas amostras de cada bloco do tumor foram examinadas microscopicamente por dois patologistas independentes para confirmar a presença de células tumorais ≥ 80%. Todos os casos foram coletados sem selecção em função do sexo, idade ou estágio do tumor e nenhum paciente havia recebido quimioterapia anterior ou radioterapia antes do diagnóstico e entrada neste estudo. consentimento informado por escrito foi obtido de pacientes antes da investigação e este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética do Hospital.

tumores colorretais foram encenadas patologicamente como a AD Dukes Stage, de acordo com a modificação do regime inicial de preparo Dukes por Turnbull el al [23]. Portanto, 17 tumores foram classificados como estádio A, 55 como fase B, 33 como estágio C e 18 como estágio D. Dukes Stage não estava disponível para 9 casos. O período médio de acompanhamento foi de 5 anos, (variação, 1-110 meses).

O comprimento dos telômeros e da telomerase medida

fragmento de restrição terminal (TRF) medida de comprimento foi realizada utilizando Telo TTAGGG Telomere kit de ensaio de comprimento, Cat No. 12 209 136 001 (Roche Applied Science, Penzberg, Alemanha), como descrito anteriormente [18]. TRF para comprimentos de tumores e controlo de tecidos foram determinados por comparação do sinal em relação a um peso molecular padrão usando o software de calibre Imagem Versão 3.46 (Fujifilm, Tóquio, Japão). A relação do comprimento TRF foi determinada como a razão entre o comprimento do TRF tecido tumoral e o seu TRF tecido normal emparelhado (razão T /N). Na Figura 1, um filme de raios-x para análise representativa do comprimento de telómeros podem ser observados. Todas as pistas foram divididos em intervalos e o comprimento médio TRF foi definida como Σ (OD

i) /Σ (OD

I /L

i), em que OD

i é o sinal quimioluminescente a uma dada posição (I) e L

i é o comprimento do fragmento TRF na mesma posição (I). O encurtamento ou alongamento dos TRFs foi definida se o comprimento do TRF de tecidos tumorais foi mais curto ou mais longo do que os correspondentes tecidos não tumorais, respectivamente.

C, controlo positivo. MWM, ADN marcador de peso molecular.

amostras colorrectais, a telomerase foi medida utilizando o protocolo de amplificação de repetição telomérica (TRAP) à base de telomerase reacção em cadeia da polimerase (PCR), ensaio imunossorvente ligado a -enzyme (ELISA) kit Cat No. 11 854 666 910 (Roche Applied Science, Penzberg, Alemanha), que permitiu estabelecer um ensaio semiquantitativo [24]. Assim, considerando que o corte para TRAP-ELISA negatividade corresponde a uma densidade óptica OD

450 nm 0,2, todas as amostras com OD

450 nm ≥ telomerase 0,2 foram considerados positivos [25].

Quantificação de

expressão TERT

O RNA total foi extraído de tecidos tumorais utilizando TRIzol

® (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EUA) de acordo com as instruções do fabricante. reacções de transcrição reversa foram realizadas com 2 ug de ARN total utilizando o ADNc de alta capacidade kit de transcrição reversa (Thermo Fisher Scientific) seguindo as instruções do fabricante. A expressão de

TERT

foi medida por PCR em tempo real quantitativo (qRT-PCR) utilizando a sonda Taqman

TERT

(Hs99999022_m1, Thermo Fisher Scientific). A quantidade de alvo (Ct

TERT

) foi normalizado para a expressão da referência endógena ciclofilina A,

PPIA

(Ct

PPIA

) ( Hs99999904_m1, Thermo Fisher Scientific) [25]. Assim, os resultados são expressos como valores ΔCt (Ct

TERT

-Ct

PPIA

); Note que os valores ΔCt inferiores equiparado ao aumento dos níveis de expressão de mRNA.

A análise estatística

As análises estatísticas foram realizadas utilizando o pacote de software SPSS versão 19 (SPSS Inc., Chicago, IL, EUA). Diferenças no comprimento dos telômeros e relação T /N entre os vários grupos de doentes, discriminadas por variáveis ​​clínicas, foram analisados ​​pela suas alternativas não-paramétricos ANOVA Student-T e, ou, teste de Mann-Whitney e Kruskal-Wallis. Valor P 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. O teste T pareado foi utilizado para comparar as médias de duas variáveis ​​relacionadas ou a sua opção de não-paramétrico, o teste de Wilcoxon. O teste do qui-quadrado foi utilizado para determinar a relação entre duas variáveis ​​categóricas. As correlações foram avaliadas pelo teste de Spearman.

curvas grupo orientado para a sobrevivência livre de doença (DFS) foram calculados de acordo com o método considerando comprimento Kaplan-Meier dos telômeros, a relação T /N, a atividade da telomerase e

expressão TERT

. DFS foi calculado a partir da data da cirurgia até recorrência. As diferenças de DFS em diferentes grupos foram comparadas pelo teste de log-rank. O impacto prognóstico relativo do comprimento dos telômeros em comparação com fatores prognósticos estabelecidos foi avaliada por Cox univariada e multivariada. A marca de dados censurados indica o fim de um período de acompanhamento individual. Aplicação de corte Procurar na Internet (https://molpath.charite.de/cutoff/) [26] foi utilizada para determinar os pontos de corte para análise de prognóstico.

Resultados

estatuto Telomere e a actividade da telomerase em amostras de tecido

comprimento

Telómero foi analisada em um total de 264 amostras de tecidos colo-rectais: 132 CRCs e respectivas amostras não tumorais correspondentes. Os comprimentos dos telômeros médios foram 5,49 ± 0,23 Kb em amostras de tecidos tumorais e 7,32 ± 0,33 Kb em amostras não-tumorais. tumores colorrectais exibida telómeros significativamente mais curtos do que os tecidos que não de tumor (P 0,001, teste de Wilcoxon). A razão média T /N foi de 0,79 ± 0,02. Cento e quatro tumores (104/132; 82,5%) apresentaram a actividade de telomerase positiva e vinte e dois (22/132; 17,5%) eram negativos da telomerase. A atividade da telomerase não estava disponível para seis tumores

estatuto Telomere e atividade da telomerase:. correlação com variáveis ​​clínicas

A população do estudo foi integrada por 132 pacientes com uma idade mediana de 71 anos. Uma correlação inversa entre o comprimento dos telômeros de amostras de CRC e idade foi encontrado (r = -0,176; P = 0,066, teste de Spearman) e a mesma tendência para comprimentos dos telômeros de tecidos não-tumores e idade (r = -0.256, p = 0,007, Spearman test). Além disso, os comprimentos dos telômeros de tumores e tecidos emparelhados controle foram positivamente correlacionados (r = 0,685; P 0,001, teste de Spearman).

Em amostras de CRC houve uma tendência de associação entre o comprimento dos telômeros ea fase Dukes (P = 0,086, teste de Kruskal-Wallis) (Tabela 1). Além disso, uma associação significativa foi encontrada entre a razão T /N e localização do tumor (P = 0,021, ANOVA de um factor) (Tabela 1): Os tumores localizados no recto apresentaram a maior razão T /N, em relação aos tumores localizados no cólon direito ou esquerdo (Tabela 1). Não foram encontradas diferenças significativas entre o comprimento dos telômeros de género e tumor ou a razão T /N; nem à fase de Dukes e T /N rácio nem localização do tumor e tumor comprimento dos telômeros (Tabela 1). Finalmente, não há associações foram estabelecidas entre as variáveis ​​clínicas e o comprimento dos telómeros significativo de amostras não tumorais (Tabela 1). Não foi possível estabelecer uma relação estatística entre gênero, estágio Dukes, localização do tumor e atividade da telomerase (Tabela 2).

estatuto Telomere, a atividade da telomerase e CRC prognóstico

A valor prognóstico do estado dos telômeros (comprimento dos telômeros T /N ratio) e atividade da telomerase foi explorada por estudos de prognóstico em pacientes com CRCs ressecados. Somente os pacientes que tinham sido submetidos a cirurgia potencialmente curativa (estádio Dukes A, B ou C) e que não morreu durante o período pós-operatório foram consideradas nestes estudos, conforme estabelecido na literatura.

A população de estudo consistiu em 101 pacientes para o prognóstico análises, considerando o estado dos telômeros. Óptimos pontos de corte para o comprimento dos telômeros de tumor médio (6,35 Kb P . 0,001; log-rank) e média T /N rácio (. 0,665 P = 0,043; log-rank) foram calculados utilizando a aplicação Web Cutoff Finder (http : //molpath.charite.de/cutoff/) [26]. Os pacientes com uma média comprimento dos telômeros tumor 6,35 Kb experimentou um significativamente melhor evolução clínica em comparação com o grupo de pacientes cuja média do tumor dos telómeros comprimento era 6,35 Kb (Figura 2A). Além disso, nenhum dos pacientes com o mais alto grau de encurtamento dos telómeros no tumor recaída durante o período de acompanhamento (Fig 2B).

(A) curvas de sobrevida de Kaplan-Meier em relação ao comprimento significam telômero ( MTL). (B) Curvas de sobrevivência de Kaplan-Meier em relação à razão T /N. Os números entre parênteses representam casos com recorrência do tumor e cruzes indicam dados censurados.

A seguir, uma análise multivariada de Cox foi realizada para identificar quais os fatores independentes tinham em conjunto uma influência significativa na sobrevivência. Para este estudo, foram selecionadas variáveis ​​com P-valor menor que 0,15 na análise univariada (estádio Dukes of CRC e dizer o comprimento dos telômeros de tumores) (Tabela 3). Como resultado, a média do comprimento dos telômeros em tumores colorretais mostrou-se um parâmetro de prognóstico independente para sobrevida livre de doença (P = 0,017) na análise multivariada. O risco de recidiva para os 73 pacientes com uma média do comprimento de telómeros de tumor 6.35 Kb foi menor em comparação com o 28 que tinha uma média de comprimento 6,35 Kb (Tabela 3). Além disso, confirmaram que a implicação prognóstico do comprimento dos telômeros tumor no CRC não varia com a idade. Assim, nossos resultados indicaram que o valor prognóstico do estado do telômero é mantida mesmo quando a idade média dos pacientes foi considerada. Depois de comparar os dados de sobrevivência para pacientes com uma idade mediana 71 anos, com as de pacientes com uma idade mediana 71 anos, tumores que mostram telômeros mais curtos ( 6,35 Kb) conferido a melhor evolução clínica (P 0,001). Não era matematicamente possível estabelecer o estudo multivariada Cox incluindo a taxa média T /N, porque um subconjunto de eventos estava vazio (nenhum caso de reincidência dentro do grupo de relação de 0,665) e um valor indefinido para o teria sido obtido risco relativo.

Não foram encontradas associações significativas entre as categorias com base no comprimento dos telômeros ea atividade da telomerase (P = 0,165, teste de qui-quadrado), nem T /N rácio e da atividade da telomerase ( P = 0,062, teste do qui-quadrado).

a atividade da telomerase positivo foi identificado como um marcador de uma tendência em direção a um mau prognóstico. Durante o período de acompanhamento, sem recidivas foram detectados no grupo de pacientes que tinham tumores telomerase-negativo (p = 0,184, a Log-Rank). Finalmente, um corte ideal (valor ΔCt 11,2; P = 0,26) para o

TERT

expressão foi calculada usando a Web Application Cutoff localizador [26]. No entanto, não foram encontradas diferenças significativas prognósticos entre os dois grupos definidos pelo

TERT

expressão (valor ΔCt 11,2

vs

ΔCt valor 11,2)

Discussão

O diagnóstico precoce do cancro colorectal tem contribuído para diminuir sua taxa de incidência. Além disso, a incorporação de novos biomarcadores preditivos e prognósticos permitiu especificando a eficácia das terapias e a resposta ao tratamento, e prever, com mais precisão, o resultado provável de cancro [27]. trabalhos de pesquisa anteriores avaliaram o papel do estatuto dos telômeros para identificar grupos de pacientes com câncer colorretal metastático susceptíveis de beneficiar de uma terapia específica [19]; também, como fator prognóstico [9] e, mais recentemente, o status dos telómeros tem demonstrado ser útil para a sub-classificação do câncer retal [28]

Telomere biologia é complexa:. proteção cromossomo termina de ser reconhecido como DNA quebras, mas telómeros encurtar com a idade de uma forma acoplada a divisão celular [29]. Assim, os nossos resultados mostram uma correlação inversa significativa entre a idade dos pacientes e comprimentos dos telômeros de tecidos colorretais não-cancerosas, de acordo com estudos anteriores [30,31]. Da mesma forma, foi detectada uma diminuição de comprimentos dos telômeros de câncer colorretal com a idade dos pacientes, embora não conclusivos, sugerindo que as células tumorais herdar a história proliferativa do tecido saudável. Este fato pode ser reforçado pela correlação significativa e positiva encontrada neste estudo entre os comprimentos dos telômeros em tecidos colorretais não-cancerosas e de tumores. A correlação negativa entre o comprimento dos telômeros e idade foi demonstrada em tecidos tumorais de mama [32], mas a literatura não é conclusiva para o cancro colorectal [18,31]. Para outros tipos de tumores, como câncer de esôfago, sugere-se que outros fatores (estresse oxidativo e estresse da vida) afeta o comprimento dos telômeros [32]. Além da história proliferativa do tecido saudável, o forte potencial replicativo das células cancerosas influencia comprimentos telomere tumorais: a maioria dos tumores têm telómeros semelhante ou mais curto em comprimento do que os tecidos normais adjacentes [33]. Para cânceres colorretais, é bem estabelecido que os telômeros são mais curtos em comparação com a mucosa adjacente [9], e nossos resultados estão em linha com este fato. Estudos anteriores demonstraram um aumento da atividade da telomerase em tecidos de cancro colorrectal [18,34]. De facto, 90% dos tumores humanos manter comprimentos telomere através da telomerase, com o objectivo de compensar o encurtamento dos telómeros e garantindo a capacidade proliferativa de células cancerosas [33]. Mais de 80% dos tumores avaliados neste estudo apresentaram atividade telomerase, de acordo com dados publicados anteriormente [18].

O estudo do comprimento dos telômeros ea atividade da telomerase, em relação às variáveis ​​clínicas, pode lançar luz sobre biologia do cancro colorectal. Considerando a localização do tumor, o prognóstico dos cancros rectais é pior do que a dos cancros do cólon e do tratamento clínico é diferente [35]. Em relação ao comprimento dos telômeros ea atividade da telomerase, os resultados anteriores demonstraram que o comprimento dos telômeros diferiu de acordo com a localização do tumor, sendo maior em cancros rectais [15]; demonstrou-se recentemente que a actividade da telomerase é inferior em cancro rectal, em comparação com o cancro do cólon [36]. Embora não foram detectadas diferenças entre os comprimentos dos telômeros de câncer colorretal e tecidos não-tumorais e a anatomia do intestino, nossos resultados sugerem que a dinâmica de encurtamento dos telômeros é diferente de acordo com a localização do tumor, como o menor grau de encurtamento dos telômeros, ou seja, o mais alto T /N, é atingido pelos tumores localizados no recto. Assim, o estado do telómero e da actividade da telomerase pode contribuir para definir a identidade do cólon e tumores rectais e melhorar as terapias. Além disso, foi identificada uma relação entre o estado dos telômeros e estágio do tumor: o mais alto grau de encurtamento dos telómeros e os telômeros mais curtos foram encontrados em tumores de estágio Dukes A, de acordo com dados publicados anteriormente [31], apoiando a hipótese de que a estabilização dos telômeros suficiente, mediada por hTERT é alcançado no final de tumorigênese [37].

no cancro colorectal, a decisão prognóstico e terapia apenas com base no estágio do tumor específico, por vezes, tornam-se insuficientes para prever a resposta ao tratamento e recorrência da doença. Assim, a incorporação de novos biomarcadores é necessária. Pesquisas anteriores mostraram o papel prognóstico do comprimento dos telômeros e relação de comprimento dos telômeros em câncer colorretal [9], mas uma “faixa saudável” ainda é necessária [38]. Aqui, demonstramos um limite para o comprimento do telómero e relação de comprimento de telómeros, o qual define um resultado clínico diferencial: os pacientes com um comprimento de telómeros médio do tumor 6.35 Kb experiente o melhor evolução clínica e nenhum deles com o maior grau de encurtamento dos telômeros sofreu uma recorrência durante o período de acompanhamento. Assim, os telômeros mais longos indicam mau prognóstico no câncer colorretal. Uma explicação molecular possível para este fato poderia ser a regulação diferencial de expressão da telomerase em células epiteliais colo [39]. Além disso, pode ser possível que a viabilidade de vias senescência e morte celular, em resposta a telómeros curtos, contribui para a tumorigénese limitantes, como anteriormente a hipótese de [40]. Os resultados parecem indicar que o atrito do telómero pode ser agindo como um mecanismo supressor tumoral em CRC. No entanto, considerando que a expressão inapropriada de telomerase, que mantém o comprimento dos telômeros, permite a superação de senescência celular e apoptose [20], as moléculas adicionais relacionados com a manutenção dos telômeros e instabilidade do genoma devem ser investigados a fim de explicar completamente a base molecular da favorável evolução clínica de pacientes com CCR com o encurtamento do telômero estudado neste trabalho.

Como já foi mencionado anteriormente, o encurtamento do telômero é um evento crucial na carcinogênese, que foi encontrada em diferentes tipos de tumores, inclusive CRC. Além disso, os telómeros foram consideradas no contexto de terapia [41]. No entanto, a utilização dos telómeros na gestão clínica da CRC é ainda um desafio. Nesse tipo de tumor e outros (câncer, por exemplo gástrico) os resultados são discordantes em relação às alterações dos telômeros ea progressão da doença [20], para que mais estudos são necessários para esclarecer esta questão. Nossos resultados tentar fortalecer a melhor prognóstico clínico conferido pelo encurtamento dos telômeros em pacientes com CCR e estão em linha com os dados publicados anteriormente: em uma população de 57 pacientes com carcinoma colorretal, analisados ​​pelo Dr. Gertler e cols [31], a sobrevida global significativamente maior taxa foi mostrado no grupo de pacientes com uma relação T /N ≤ 0,9. Além disso, a taxa de sobrevivência global mais elevada foi exibido pelo grupo de pacientes com CCR analisados ​​pelo Dr. Valls e cols [42] com uma T /N rácio ≤ 1 e comprometimento de linfonodos negativo. Como não há acordo sobre o papel dos telômeros como marcador de progressão da doença em CRC, é muito importante para compilar os resultados, a fim de chegar a um consenso. Em relação ao nosso estudo, podemos destacar o grande número de pacientes considerados na análise prognóstico, bem como a utilização da Aplicação Web Cutoff localizador [26], o que permitiu uma distinção objetiva entre grupos com um prognóstico clínico diferente com base no status dos telômeros .

Além disso, temos demonstrado no presente trabalho o potencial uso clínico da atividade da telomerase para a previsão de recorrências de cancro colorrectal. Em relação ao prognóstico de pacientes de CRC, os nossos dados só mostrou uma tendência em direção a uma pior evolução clínica em pacientes com tumores positivos telomerase; e, quando o

níveis TERT

são considerados, há diferenças de prognóstico estatisticamente significativas entre os dois grupos de pacientes com CCR definidos pela

expressão TERT

. No entanto, em outros estudos, a telomerase tinha sido identificado como um marcador de prognóstico independente para sobrevida global em doentes com cancro colorectal: pacientes com alto

níveis TERT

mostrou uma sobrevida global significativamente pior do que aqueles com menor

TERT

níveis [17]. O consenso não foi alcançado [9] e mais estudos são necessários para determinar o valor de cut-off que distingue entre as populações com prognóstico diferente. Quantificação de

TERT

ARNm e quantificação da actividade da telomerase são as duas estratégias principais utilizados para estimar os níveis de telomerase [9]; Além disso, a actividade de telomerase estimada pela armadilha correlaciona-se com os níveis de

hTERT

ARNm, como publicado anteriormente [25]. Portanto, a dicotomização da actividade da telomerase, considerando população câncer poderia ser útil para identificar grupos de pacientes suscetíveis a receber terapias destinadas a inibição da telomerase.

Conclusão

No cancro colorectal, os nossos resultados apoiam a uso de estatuto dos telômeros (comprimento dos telômeros rácio T /N) como um fator prognóstico independente para prever o resultado clínico. O novo achado deste estudo é o papel prognóstico independente de um estatuto dos telômeros específico em pacientes com CCR. função do telômero pode contribuir para explicar as diferentes identidades moleculares deste tipo de tumor. O câncer colorretal é ainda uma importante causa de mortes relacionadas ao câncer; Assim, a consideração de novos biomarcadores para prever recidivas e ajudar nas decisões de terapia pode proporcionar uma melhoria no manejo clínico da doença.

Reconhecimentos

Este trabalho foi apoiado por subsídios da Fundação de Investigação Médica Mutua Madrileña e Santander-UCM.