Sumário

Os microRNAs (miRNAs) são sequências não-codificantes de proteínas que podem funcionar como oncogenes ou genes supressores tumorais. Este estudo documenta o papel supressor de tumor de miR-1280 no cancro da bexiga. Quantitative PCR em tempo real e

in situ hibridação

as análises mostraram que o miR-1280 é significativamente regulada negativamente em linhas celulares de cancro da bexiga e tumores, em comparação com uma linha de células não-malignas ou amostras de tecidos normais. Para decifrar o significado funcional de miR-1280 no cancro da bexiga, nós ectopicamente sobre-expressa miR-1280 em linhas celulares de cancro da bexiga. A sobre-expressão de miR-1280 teve efeitos antiproliferativos e auditivos formação de colónias das linhas celulares de cancro da bexiga. FACS (classificação de células activadas por fluorescência) análise revelou que a re-expressão de miR-1280 em células cancerosas da bexiga induzida paragem do ciclo celular G2-M e apoptose. Os nossos resultados demonstram que o miR-1280 inibiu a migração e a invasão de linhas celulares de cancro da bexiga. miR-1280 também atenuou a expressão da proteína e ROCK1 RhoC. ensaios de repórter de luciferase demonstrou que oncogene ROCK1 é um alvo direto de miR-1280 no cancro da bexiga. Este estudo também indica que miR-1280 pode ser de importância de diagnóstico e prognóstico no câncer de bexiga. Por exemplo, a análise de ROC mostrou que a expressão de miR-1280 pode distinguir entre os casos de câncer de bexiga malignos e normais e análise de Kaplan-Meier revelou que os pacientes com miR-1280 expressão elevada apresentaram maior sobrevida global em comparação com aqueles com baixa expressão de miR-1280. Em conclusão, este é o primeiro estudo a documentar que funciona miR-1280 como um supressor de tumor por segmentação ROCK1 oncogene à invasão /metástase e migração. Vários compostos estão sendo usados ​​como inibidores Rock1; Por conseguinte, a restauração do supressor de tumor de miR-1280 pode ser terapeuticamente útil por si só ou em combinação com estes compostos no tratamento de cancro da bexiga

citação:. Majid S, Dar AA, S Saini, Shahryari V, Arora S, Zaman MS, et ai. (2012) MicroRNA-1280 inibe a invasão e metástase alvejando ROCK1 no cancro de bexiga. PLoS ONE 7 (10): e46743. doi: 10.1371 /journal.pone.0046743

Edição: Natasha Kyprianou, da Universidade de Kentucky College of Medicine, Estados Unidos da América

Recebido: 24 Julho, 2012; Aceito: 30 de agosto de 2012; Publicação: 04 de outubro de 2012

Direitos de autor: © Majid et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Esta pesquisa foi apoiado pelo Centro Nacional de pesquisa de Recursos dos Institutos Nacionais de Saúde, através Grant Número RO1CA138642, RO1CA130860, RO1CA160079 e VA Mérito Review and VA Projeto de Programa. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

Conflito de interesses:. Rajvir Dahiya é membro do Conselho Editorial PLOS ONE. Isto não altera a adesão dos autores para todas as políticas de PLoS One sobre os dados e materiais de partilha

Introdução

Os microRNAs (miRNAs) são sequências não-codificantes de proteínas pensado para regular . 90 % dos genes humanos [1]. A desregulação da expressão de miARN foi identificada em vários tipos de cancro [2], [3], e acumular evidência indica que alguns miARN pode funcionar como oncogenes ou genes supressores de tumores. miARNs são expressos de uma forma específica do tecido e podem desempenhar papéis importantes na proliferação celular, apoptose, diferenciação e [4], [5]. Inactivação de miRNAs oncogênicos [6], [7] ou restauração de miRNAs supressores de tumores [8], [9], [10] podem ter grande potencial para o tratamento do câncer.

A) Análise quantitativa RT-PCR de miR-1280 em linhas celulares. B)

in situ de fluorescência

fluorescente (FISH) em linhas de células. C) em tempo real Análise quantitativa PCR da expressão de miR-23b em amostras de tecido microdissecadas Capturado-laser combinados. (Tumor T /N- /normal).

As alterações nas funções celulares tais como a proliferação celular, a adesão e a motilidade baseiam-se nas alterações morfológicas resultantes de reorganização do citoesqueleto de actina. As proteínas da família Rho interagir com o citoesqueleto de actina regulação da formação de fibras de stress e adesões focais dentro das células. proteína cinase Rho-associated serina-treonina, ROCK [11], [12], um dos melhores caracterizados efectores a jusante de Rho, é activada quando se liga selectivamente com a forma ligada a GTP activa de Rho. ROCHA activado interage com o citoesqueleto de actina para promover a formação de fibras de stress-e montagem de contactos focais [13]. Rearranjos do citoesqueleto de actina estão envolvidos na migração de células de cancro que é central para o processo de metástase. Tang et al [14] examinou os efeitos de inibição ROCK1 sobre a actividade de RhoA a montante e Rac1. ROCK1 diminui indiretamente a atividade de RhoA a montante estimulando a atividade Rac1 induzida Tiam1. ROCK1 fornece um mecanismo de feedback, mediando Rac1 a montante ea atividade RhoA, reflectindo assim os diversos efeitos de ROCK1 sobre o equilíbrio funcional de GTPases pequenas [14]. Rearranjando as proteínas do citoesqueleto de actina em resposta a Rho é importante para a capacidade de células tumorais para metastizar [15]. A via de Rho /ROCK desempenha um papel na progressão do cancro através da regulação reorganização do citoesqueleto de actina e um inibidor específico ROCHA foi encontrado para suprimir o crescimento tumoral e metástase [16], [17]. Em células PC-3 de carcinoma da próstata, RhoA é um promotor endógeno crítico de invasão celular e migração [18]. A inibição da RhoA ou seu principal efector a jusante, ROCK1, diminui a motilidade das células de carcinoma da próstata [18]. No cancro da bexiga, a via Rho /ROCK foi relatado para ser envolvido na ocorrência e progressão de cancro da bexiga [19]. Estas observações sugerem que a via de Rho /rocha pode ser um alvo molecular para a prevenção de invasão e metástases de cancro. Aqui, pela primeira vez, um relatório sobre a actividade supressora de tumores de microRNA-1280 (miR-1280) no cancro da bexiga e mostrar que a migração câncer de bexiga e invasão diretamente pela segmentação ROCK1.

A) características clínico-patológicos do paciente coorte. B) ROC análise da curva que mostra o desempenho de expressão de miR-1280 para discriminar entre amostras de tecido maligno e não-malignas. C) Análise de Kaplan-Meier para a sobrevida global com base na expressão de miR-1280.

Materiais e Métodos

linhas celulares e Cultura de Células

SV-HUC-1 , células T24 e J82 foram adquiridos a partir da American Type Culture Collection (ATCC) e cultivadas de acordo com protocolos de ATCC. células SV-HUC-1 foram cultivadas em Meio F-12K (ATCC), com 10% de FBS. As células T24 foram cultivadas em meio de McCoy 5A suplementado com FBS a 10% e as células J82 foram cultivadas em meio essencial mínimo (MEM) suplementado com FBS a 10%.

A) a transfecção transiente de miR-1280 precursora aumentou significativamente a expressão de miR-1280 em células de cancro da bexiga. B) Proliferação de células J82 e T24 após transfecção de miR-1280 foi significativamente reduzido em comparação com o miR-cont. C) miR-1280 sobre-expressão inibe significativamente colónia capacidade de formação de células de câncer de bexiga.

Os plasmídeos, Precursores e transfecção

As sondas TaqMan e precursores para hsa-miR-1280 e negativos controlo pré-miR foram adquiridos a Applied Biosystems (Foster City, CA). PMIR-GLO luciferase dupla miARN alvo Vector de Expressão foi adquirido a Promega. Lipofectamine 2000 (Invitrogen) foi utilizado para todas as transfecções.

Extração de RNA

miARN e o ARN total foi extraído a partir de linhas de células utilizando um Mini Kit miRNeasy e um Kit RNeasy Mini (Qiagen). miARNs a partir de amostras clínicas foram extraídos utilizando técnicas de captura Microdissecção a laser com um kit miRNeasy FFPE (Qiagen).

AB) mostra a análise por FACS miR-1280 sobre-expressão induz a paragem do ciclo celular G2-M em J82 e células T24 com um decréscimo correspondente nas células em fase S. Os valores são mostrados a partir de experiências em triplicado ± DP.

A-B) miR-1280 sobre-expressão induz a apoptose em células J82 e T24 com uma diminuição concomitante no número viável de células. Os valores apresentados são de experiências em triplicado ± SD.

amostras clínicas Humanos

As amostras clínicas foram obtidos a partir de San Francisco Veterans Affairs (VA) Medical Center. consentimento informado por escrito foi obtido de todos os pacientes eo estudo foi aprovado pelo Comitê de UCSF em Pesquisa com Seres Humanos (Número de aprovação: H9058-35751-01).

Quantitative PCR em tempo real

miRNAs maduro foram ensaiadas usando os TaqMan microARN Ensaios de acordo com as instruções do fabricante (Applied Biosystems). Todas as reações RT, incluindo controles não-modelo e RT menos controles, foram executados em um rápido Tempo real PCR System 7500 (Applied Biosystems). As concentrações de RNA foram determinadas com um NanoDrop (Thermo Scientific, Rockford, IL). As amostras foram normalizadas para RNU48 (Applied Biosystems). Os níveis de expressão do gene foram quantificados usando o 7500 Rápido Tempo real Software sistema de detecção Sequence (Applied Biosystems). Comparativa PCR em tempo real foi realizada em triplicado, incluindo controles não-modelo. A expressão relativa foi calculada usando a Ct comparativa.

In Situ Hibridização

In situ

hibridação foi realizada como descrito anteriormente [20]. linhas celulares Resumidamente foram coradas utilizando ácido marcada com DIG bloqueado nucleico (LNA) sondas baseados específico para miR-1280 seguindo o protocolo do fabricante (Exiqon, Inc. de Woburn, MA) e detectado utilizando anticorpos anti-DIG-fluoresceina, fragmentos Fab (Roche Applied Science , Indianapolis, IN).

ensaios A) Migração de J82 e células T24 transfectadas com miR-1280. B) imagens representativas de ensaio de migração.

ensaio A) Invasion mostra uma diminuição significativa no número de invadir células J82 e T24 transfectadas com miR-1280. B) imagens representativas de ensaio de invasão.

viabilidade celular e Clonability Ensaio

A viabilidade celular foi determinada em 24, 48 e 72 h, utilizando o CellTiter 96 Aqueous One Solution Proliferação Celular Assay kit (Promega, Madison, WI) de acordo com o protocolo do fabricante. A absorvância foi medida a 490 nm utilizando SpectraMAX 190 (Molecular Devices). Os dados são apresentados como valor médio para ensaios em triplicado em comparação com o controlo negativo. Para o ensaio de formação de colónias, as células foram semeadas a baixa densidade (1000 células /prato) e deixou-se crescer colónias visíveis até aos apareceu. Em seguida, as células foram coradas com Giemsa e as colónias foram contadas.

migração e invasão Ensaios

Cytoselect 24 poços de migração celular e ensaio de invasão kits (Cell Biolabs, Inc) foram utilizados para a migração e invasão os ensaios de acordo com o protocolo do fabricante. Resumidamente, as células T24 e J82 transfectadas com precursora pré-miR miARN ou um controlo negativo foram colhidas 72 horas após a transfecção e foram ressuspensas em soro isento de Opti-MEM. As células (10 x 10

4 por 300 ul de meios sem soro) foram adicionadas à câmara superior e a câmara inferior foi preenchida com 500 ul de meio contendo 10% de FBS. As células foram incubadas durante 16 horas a 37 ° C numa incubadora de cultura de tecidos com CO2 a 5%. Após 16 horas, as células que não migraram /não-invasoras foram removidos a partir do lado superior das inserções de filtro de membrana Transwel utilizando um cotonete. células que migraram /invadidos no lado inferior foram coradas e a absorvância foi lida a 560 nm de acordo com o protocolo do fabricante.

A) sequências no ROCK1 3’UTR ligação cortesia miR-1280. B) Análise de Western blot mostra que miR-1280 reprime tradução de oncogenes ROCK1 e RhoC. Os ensaios C) de luciferase que mostram a diminuição da actividade repórter após a co-transfecção, quer do tipo selvagem ou mutante Src-3’UTR com miR-1280 em células J82 e T24. sequência mutada 3’UTRROCK1 Mut-. D) Representação esquemática do papel do miR-1280 no cancro da bexiga.

Immunoblotting

A proteína foi isolada de 70-80% placas confluentes de células cultivadas utilizando a proteínas de mamíferos M-PER Reagente de Extracção (Pierce Biotechnology, Rockfield, IL) seguindo as instruções do fabricante. As concentrações de proteína foram determinadas pelo método de Bradford. Quantidades iguais de proteína foram resolvidos em géis de poliacrilamida 4-20% de dodecil sulfato de sódio (SDS) e transferido para uma membrana de nitrocelulose por transferência do gradiente de voltagem. As manchas resultantes foram bloqueadas com leite seco sem gordura 5% e sondado com anticorpos específicos. As manchas foram então incubadas com anticorpos secundários conjugados com peroxidase apropriados e visualizada usando quimioluminescência aumentada (Pierce Biotechnology, Rockford, IL).

Luciferase Reporter Assay

Um pmirGLO Dual-Luciferase miARN alvo foi vector de expressão utilizadas para ensaios de 3′-UTR de luciferase (Promega, Madison, WI). O oncogene alvo de miARN-1280 foi seleccionado com base na linha microARN https://www.microrna.org/microrna/home.do base de dados destino. As sequências dos iniciadores para o tipo selvagem 3’UTR foram: Atacante 5 ‘CGCGGCCGCTAGTCTGTGGAATCGTGTGGGAT 3’ e Reverse 5 ‘ctagatcccacacgattccacagactagcggccgcgagct 3’. Para o mutante 3’UTR, as sequências iniciadoras foram: para a frente 5 ‘CGCGGCCGCTAGTCTGTGGAATCGTTCATACT 3’ e 5 inverter ‘ctagagtatgaacgattccacagactagcggccgcgagct 3’. Para o ensaio lucifease, células T24 e J82 foram co-transfectadas com HSA-miR-1280 e pmirGLO Dual-Luciferase miARN alvo com vectores de expressão de tipo selvagem ou mutante sequência alvo utilizando Lipofectamine 2000. As actividades da luciferase do pirilampo foi medida utilizando o ensaio de luciferase duplo (Promega, Madison, WI), 18 h depois da transfecção e os resultados foram normalizados com a luciferase da Renilla. Cada plasmídeo repórter foi transfectado pelo menos três vezes (em dias diferentes) e cada amostra foi ensaiada em triplicado.

Análise Estatística

As análises estatísticas foram realizadas com GraphPad Prism 5 e MedCalc versão 10.3.2 . Todos os dados quantificados representa uma média de amostras em triplicado, pelo menos, ou como indicado. As barras de erro representam o desvio padrão da média. Todos os testes foram realizados dois atados e

p

valores 0,05 foram considerados estatisticamente significativos. curvas de funcionamento do receptor (ROC) foram calculados para determinar o potencial de miR-1280 para discriminar entre amostras malignas e não-malignas. Para a progressão da doença, de Kaplan-Meier (teste log-rank) análise foi realizada.

Resultados

A expressão de miR-1280 na bexiga tumores e câncer linhas celulares

A expressão de miR-1280 foi analisada por PCR em tempo real em linhas celulares de cancro da bexiga J82, T24 e comparada com a linhagem de células não-malignas SV-HUC1. Os resultados indicaram que o miR-1280 foi regulada negativamente em linhas celulares de cancro (Figura 1A).

In-situ

hibridação também confirmou a presença de expressão de miR-1280 (sinal verde) em células de SV-HUC1 em comparação com linhas celulares de cancro (Figura 1B). Para examinar a importância biológica de miR-1280, a sua expressão foi analisada em capturado a laser (LCM), tecido de tumor humano e microdissecados bexiga em comparação com tecido de controlo normais pareados. A expressão de miR-1280 verificou-se ser significativamente regulada negativamente em todas as amostras de tumor, em comparação com as suas amostras normais correspondentes (Figura 1C). Estes resultados indicam um papel supressor tumoral putativo para miR-1280 no cancro da bexiga.

Diagnóstico e significado prognóstico de miR-1280 no cancro da bexiga

demografia clínicos do grupo de pacientes estão resumidos na Figura 2A . curva de funcionamento do receptor (ROC) foram realizadas para avaliar a capacidade de expressão de miR-1280 para discriminar entre casos normais e tumorais usando amostras de tecido. Uma área sob a curva ROC (AUC) de 0,886 (P 0,0001; IC de 95% = 0,775-0,998) (Figura 2B) foi obtido sugerindo que a expressão de miR-1280 pode discriminar entre amostras malignas e não-malignas e, portanto, pode ser utilizada como marcador de diagnóstico para câncer de bexiga, embora amostras adicionais podem fortalecer esses resultados. Para determinar se miR-1280 tem qualquer significado prognóstico, dividimos casos em baixa miR-1280 (S /N 0,8 vezes) e alta miR-1280 (expressão T /N 0,8 vezes) grupos e realizada análise de sobrevivência de Kaplan-Meier . Na análise de Kaplan-Meier, o grupo de miR-1280 alta tinham significativamente maior probabilidade de sobrevivência global em comparação com o grupo de baixa miR-1280 (Logrank ensaio P 0,02) (Figura 2C). Estes achados sugerem que miR-1280 tem o potencial para ser um marcador diagnóstico e prognóstico para câncer de bexiga.

MicroRNA-1280 superexpressão Suprime o cancro de bexiga proliferação celular e Colony Formação

Para determinar o significado funcional da superexpressão de miR-1280 no cancro da bexiga, nós transfectadas linhas celulares de cancro da bexiga J82 e T24 com precursores de miR-1280. miR-1280 foi significativamente sobre-expressos em células T24 J82 e linhas após a transfecção transiente com miR-1280 precursora comparação com a precursora cont miR-(Figura 3A). A expressão ectópica de miR-1280 diminuíram significativamente a proliferação celular em comparação com células que expressam o miR-cont (Figura 3B). miR-1280 células transfectadas também teve baixa capacidade de formação de colónias como o número de focos de células que expressam o miR-1280 foram reduzidas quando comparadas com células de miR-cont (Figura 3C) transfectadas. Estes resultados indicam efeito anti-proliferativo de miR-1280 no cancro da bexiga.

miR-1280 Dispara paragem do ciclo celular e induz a apoptose em células de cancro da bexiga

FACS (células activadas por fluorescência de classificação) análise revelou que re-expressão de chumbo miR-1280 a um aumento significativo no número de células na fase G2-M do ciclo celular (17% para 35%), enquanto que a população de S-fase diminuiu de 15% para 8% em J82 células (Figura 4A). Resultados semelhantes foram observados em células T24 com um aumento na população G2-M de células (6% a 19%) e uma diminuição da população da fase S (12% a 6%), sugerindo que o miR-1280 desencadeia um G2-M paragem em células transfectadas miR-1280 em comparação com o miR-cont. A análise FACS para a apoptose foi realizada utilizando Anexina-V-FITC-7-AAD corante. A percentagem de células apoptóticas totais (início apoptótica + apoptótica) foi significativamente aumentada (4% a 12%) em resposta a sobre-expressão de miR-1280 em comparação com CONT-miR com uma diminuição de 10% correspondente na população de células viáveis ​​em células J82 (Figura 5A). Em células T24, um aumento (de 2% a 12%) em células apoptóticas foi observado com a sobre-expressão de miR-1280 em comparação com o miR-cont (Figura 5B). Estes resultados indicam um papel supressor de tumor de miR-1280 no cancro da bexiga.

Anti-migration /Invasão Efeitos de miR-1280 no cancro da bexiga

A superexpressão de miR-1280 teve anti-migratório e efeitos anti-invasivos em linhas celulares de cancro da bexiga. Menos de absorvância foi observado a 560 nm com as células transfectadas miR-1280 em comparação com o miR-cont no ensaio de migração (Figura 6) e a sobre-expressão de miR-1280 também reduziu de forma significativa a capacidade de invasão de células cancerosas da bexiga (Figura 7).

miR-1280 Diretamente Alvos Oncogene ROCK1

ROCK1 foi relatado para ser uma importante molécula que impulsiona a migração câncer de bexiga e invasão. Usando um banco de dados alvo microRNA em linha encontramos oncogene ROCK1 como o alvo putativo de miR-1280 com sites de 3’UTR complementares para a sequência de semente de miR-1280 (Figura 8A). Foi realizada análise de Western para a expressão em células transf ectadas ROCK1 miR-1280 e descobriram que o miR-1280 atenuou a expressão da proteína de ROCK1 em comparação com o miR-cont (Figura 8B). Encontramos também uma diminuição nos níveis de proteína de ROHC, outra proteína oncogénica que está a montante de ROCK1. Para verificar se uma interação direta está envolvido entre miR-1280 e sua ROCK1 alvo oncogene, realizamos ensaios de repórter de luciferase. Descobrimos que a co-transfecção de miR-1280 juntamente com o tipo selvagem da 3’UTR oncogene ROCK1 causou uma diminuição significativa nas unidades de luciferase em comparação com os controlos (Figura 8c). Estes resultados sugerem que as metas de miR-1280 oncogene ROCK1 diretamente.

Discussão

Embora pouco se sabe sobre microRNA-1280, um estudo demonstrou que o miR-1280 é expresso em cancros do cólon e pancreáticos baseados na análise de 19 colorectal e 17 amostras cancerosas humanas pancreáticas [21] expressão. Aqui nós para o primeiro relatório de tempo que o miR-1280 desempenha um supressor de tumores e tem potencial de diagnóstico e prognóstico em câncer de bexiga. Também realizamos análises funcionais para confirmar os efeitos anti-tumorais de miR-1280 e mostram que miR-1280 visa diretamente ROCK1 oncogene, uma importante molécula na migração de células de câncer de bexiga e invasão.

Também observamos que miR- 1280 é significativamente regulada negativamente em linhas celulares de cancro da bexiga e tecidos tumorais em relação à linha de células não-malignas ou os tecidos normais, indicando que o miR-1280 pode ser um supressor tumoral no cancro da bexiga. Estudos anteriores demonstraram que microARNs são altamente específica do tecido e que pode actuar como supressor de tumores ou oncogenes [5], [6]. MicroRNAs possuem várias características que os tornam candidatos atraentes como novos biomarcadores de prognóstico e poderosas ferramentas para o diagnóstico precoce do câncer [22]. Neste estudo, descobrimos que miR-1280 foi preditivo de sobrevida global de tal forma que os pacientes com maior expressão de miR-1280 teve maior sobrevida global em comparação a pacientes com baixa expressão de miR-1280. expressão MicroRNA-1280 também distinguido maligna de tecidos normais, indicando a importância de diagnóstico de miR-1280 no cancro da bexiga, embora este deve ser confirmado em uma coorte maior de amostras de tecido. Os nossos ensaios funcionais revelou que o miR-1280 tem efeitos anti-proliferativos, que induzem a paragem do ciclo celular e apoptose no cancro da bexiga. Também mostrou efeito anti-migratório e anti-invasivo em células cancerosas da bexiga.

Desde ROCK1 é uma importante molécula que está envolvido na migração e invasão do cancro da bexiga [19], nós examinamos se ROCK1 é um alvo de miR -1280 no cancro da bexiga. A sobre-expressão de ROCK1 tem sido referida a ocorrência de vários cancros [14], [19] e a Rho /via ROCHA foi encontrado para ser associada com a progressão de cancro da bexiga [19]. ROCHA medeia as respostas na via iniciada por Rho, e regula a reorganização das proteínas cytosleletal tais como a formação de fibras de stress e adesões focais [23]. Rearranjando proteínas do citoesqueleto é importante para a capacidade de células tumorais para metastizar [15] e o nosso estudo mostrou que o miR-1280 atenuou a expressão de oncogene ROCK1. Os ensaios de luciferase também revelou interação direta de miR-1280 e ROCK1. Por conseguinte, estes resultados indicam que o miR-1280 inibe a migração /invasão e metástase, assim, de que o cancro da bexiga é mediado através de regulação negativa do oncogene ROCK1 (Figura 8D). Encontramos também a diminuição da expressão de oncogene RhoC que está a montante de ROCK1. Um estudo anterior tenha relatado que ROCK1 diminui a actividade dos seus membros da família a montante RhoA indirectamente [14]. Pelo mesmo princípio, a inibição da ROCK1 por miR-1280 pode ter uma ação inibitória indirecto no oncogene RhoC.

Em conclusão, nosso estudo é o primeiro relatório para documentar o papel supressor de tumor de miR-1280 na bexiga Câncer. miR-1280 visa diretamente oncogene ROCK1, inibindo a migração /invasão que são fundamentais para o processo de metástase. Vários compostos, tais como Y-