Abstract

As evidências sobre a associação entre os níveis de vitamina D eo risco de câncer de pâncreas é inconsistente. Esta inconsistência pode ser parcialmente atribuível à variação em genes que regulam a vitamina D. Foram selecionados genes 11 vitamina relacionadas com a D (

GC

,

DHCR7

,

CYP2R1

,

VDR

,

CYP27B1

,

CYP24A1

,

CYP27A1

,

RXRA

,

CRP2

,

CASR

e

CUBN

), totalizando 213 única polimorfismos de nucleotídeo (SNP), e examinou as associações com adenocarcinoma do pâncreas. Nosso estudo incluiu 3.583 casos de câncer de pâncreas e 7.053 controles dos estudos de associação do genoma de PanScans-I-III de câncer de pâncreas. Foi utilizado o teste conjunto Adaptive ea estatística Adaptive Posto truncado Produto para o caminho e análises de genes, e regressão logística incondicional por SNP análises, o ajuste para idade, sexo, estudo e estratificação populacional. Examinámos modificação do efeito pela concentração de vitamina D em circulação (≤50, 50 nmol /L) para os SNPs mais significativos utilizando um subconjunto de casos de coorte (n = 713) e controlos (n = 878). A via metabólica de vitamina D não foi associada a risco de câncer pancreático (p = 0,830). Dos genes individuais, nenhum foi associado com risco de câncer pancreático em um nível de significância de p 0,05. SNPs perto do

VDR

(rs2239186),

LRP2

(rs4668123),

CYP24A1

(rs2762932),

GC

(rs2282679) e

CUBN

(rs1810205) genes foram os principais SNPs associados com cancro do pâncreas (P-valores 0.008-0.037), mas nenhuma foi estatisticamente significativa após o ajuste para comparações múltiplas. As associações entre esses SNPs e câncer pancreático não foram alteradas pela concentrações de vitamina D. Estes resultados circulando não suportam uma associação entre genes relacionados com a vitamina D e risco de câncer pancreático. Pesquisas futuras devem explorar outras vias através das quais o status da vitamina D pode estar associada com o risco de câncer pancreático

Citation:. Arem H, Yu K, Xiong X, Moy K, Freedman ND, Mayne ST, et al. (2015) de vitamina D Genes Metabolic Caminho e Pancreatic Cancer Risk. PLoS ONE 10 (3): e0117574. doi: 10.1371 /journal.pone.0117574

Editor do Academic: Jeffrey S. Chang, Institutos Nacionais de Pesquisa em Saúde, TAIWAN

Recebido: 14 Julho, 2014; Aceito: 28 de dezembro de 2014; Publicação: 23 de março de 2015

Este é um artigo de acesso aberto, livre de todos os direitos autorais e pode ser livremente reproduzido, distribuído, transmitido, modificado, construído em cima, ou de outra maneira usado por qualquer pessoa para qualquer finalidade lícita. O trabalho está disponível sob a licença Creative Commons CC0 domínio público dedicação

Dados Disponibilidade: Todos os dados utilizados na análise genética está disponível a partir DBGAP a adesão # phs000206.v5. A análise sub-coorte estratificada por circulação de vitamina D foi realizado utilizando dados de coortes de terceiros. Alguns dos dados envolvem seres humanos com informações de identificação e as restrições éticas impedirá a publicação destes dados online. Entre em contato com [email protected] para solicitar os dados utilizados nesta análise. investigadores interessados ​​terão de seguir regras de terceiros de cada coorte sobre como obter os dados solicitados

Financiamento:. Este projecto foi financiado no todo ou em parte, com fundos federais do National Cancer Institute, National Institutes of saúde, sob contrato nº HHSN261200800001E. O conteúdo desta publicação não reflecte necessariamente a posição nem as políticas do Departamento de Saúde e Serviços Humanos, nem a menção de nomes comerciais, produtos comerciais ou organizações implica o endosso pelo Governo dos EUA. Por favor, consulte a seção Informações Suplementares para uma lista detalhada de financiamento específico do estudo. Os co-autores Xiaoqin Xiong (Information Management Systems, Inc.), Dennis Maeder (Leidos Biomedical Research, Inc.) e Michelle Brotzman (Westat) são empregados por empresas comerciais, e recebeu o salário dessas empresas para apoiar este estudo. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

interesses em conflito:. Os co-autores Xiaoqin Xiong (Information Management Systems, Inc.), Dennis Maeder ( Leidos Biomedical Research, Inc.) e Michelle Brotzman (Westat) são empregados por empresas comerciais. Isto não altera a adesão dos autores para PLOS ONE políticas em dados e materiais de compartilhamento.

Introdução

sinalização de vitamina D é de interesse em relação ao câncer devido ao seu papel na indução hipótese de células imunitárias a diferenciação e a proliferação do tumor e inibir a angiogénese [1]. Nos seres humanos, a maior parte da vitamina D é sintetizado endogenamente através da exposição da pele à radiação ultra-violeta B solar, que converte a 7-dehyrocholesterol na pele de vitamina D. Pequenas quantidades também vir de fontes alimentares tais como peixe ou produtos lácteos enriquecidos e, em algumas populações, suplementos alimentares [2].

alguns estudos anteriores sugeriram menor risco de câncer pancreático com marcadores de proxy de maior status da vitamina D. estudos ecológicos, que são baseados em médias populacionais em vez de dados de nível individual, têm mostrado taxas de mortalidade do cancro do pâncreas mais baixas em áreas com maior exposição solar em Espanha [3], os Estados Unidos [4,5], e no Japão [6,7] . Um grande estudo prospectivo, que usou uma estimativa prevista de status da vitamina D com base em cinco determinantes de níveis séricos de 25-hidroxivitamina D (25 (OH) D) (dieta e suplementos de vitamina D, a pigmentação da pele, a adiposidade, residência geográfica e Lazer) também encontraram uma associação inversa com o risco de câncer pancreático [8].

o soro 25 (OH) D é o biomarcador mais utilizado para avaliar o nível de vitamina D em estudos epidemiológicos, uma vez que reflete tanto a síntese endógena ea ingestão dietética de vitamina D [9]. No entanto, estudos anteriores que avaliaram medida que circula concentrações de 25 (OH) D com risco de câncer de pâncreas mostra resultados conflitantes. Um grande estudo, agrupada de concentrações séricas de oito coortes como parte do Projeto de vitamina D Pooling (952 casos, 1.333 controles) relataram aumento do risco de câncer de pâncreas com relação circulantes maiores concentrações de vitamina D (odds (OR) = 2,12, 95% de intervalo de confiança (CI)) comparar os níveis séricos ≥100 nmol /L ao referente 50-75nmol /L [10]. Em contraste, um estudo aninhada de caso-controle pooling cinco coortes prospectivos (451 casos, 1.167 controles) sugeriu uma associação inversa OR = 0,67, 95% CI quintos ,46-,97 comparar o plasma 25 (OH) D ( 81,05 para 45,64 nmol /L) e nenhuma associação ao usar as categorias empregadas no Projeto vitamina D Pooling [11].

análise baseada no Caminho de GWAS pode detectar associações que podem ser perdidas, focando única loci ou mesmo genes [ ,,,0],12]. Para o nosso conhecimento apenas um estudo de caso-controle de base populacional anterior (628 casos, 1.193 controles) avaliou a associação entre variantes genéticas relacionadas com a vitamina D e câncer de pâncreas, e não relatou nenhum polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) associações após o ajuste para comparações múltiplas [13 ]. No presente estudo, foram utilizados dados de 20 estudos em PanScans I-III para examinar 11 genes na via metabólica de vitamina D e 213 SNPs correspondentes com risco de câncer pancreático. Em um subconjunto dos grupos foram avaliados modificação medida efeito pela circulação de concentrações de vitamina D. Algumas das amostras utilizadas nesta análise de sobreposição com os utilizados na vitamina D projecto Partilhar [10]. Nossa hipótese é que a evidência contraditória circulando vitamina D e risco de câncer pancreático pode ser explicada por variações genéticas em genes relacionados com a vitamina D e interação multiplicativa entre circulante da vitamina D ea variação genética.

Materiais e Métodos

Estudo participantes

Foram obtidos dados de 20 estudos em colaboração PanScan que aceitaram participar nesta análise via. PANSCAN fases I-III foram previamente descritos [14-16]. A nossa análise primária incluiu dados de genótipos de 10 estudos de coorte e 10 estudos de caso-controle na colaboração PanScan. coortes participantes incluíram o Estudo de Saúde Agrícola, alfa-tocoferol, Beta-caroteno Cancer Prevention Study (ATBC), dá-nos uma pista para o cancro e coração Disease Study (INDÍCIO II), Cancer Prevention Study II (CPS-II), Melbourne Collaborative Cohort estudo (MCCS), multiétnica coorte (MEC), das mulheres da universidade de New York Health Study (NYU-WHS), próstata Lung colorretal e Screening Trial cancro do ovário (PLCO), selênio e vitamina Cancer Prevention Trial e (SELECIONAR) e as vitaminas e Estilo de Vida coorte (VITAL). Os estudos de caso-controle foram incluídos na Mayo Clinic Epidemiologia Molecular de Estudo do cancro do pâncreas, da Universidade da Califórnia em San Francisco, da Universidade de Yale, MD Anderson Cancer Center, da Universidade de Toronto, Johns Hopkins University, Memorial Sloan-Kettering Cancer Center, Estudo do Pacífico do Grupo saúde e Northern California Kaiser Permanente, Espanhol Estudo do cancro do pâncreas (PANKRAS II) [17], e doença pancreática Investigação (Pandora) (Heidelberg, Alemanha) [18]. Todos os casos foram diagnosticados com adenocarcinoma primário de pâncreas (CID-O-3 código C250-C259 ou C25.0-C25.3, C25.7-C25.9). Em suma, PanScans-I e II utilizou um desenho aninhada estudo caso-controle para os estudos de coorte. casos de coorte foram confirmados através de registros de câncer, certidões de óbito ou revisão de prontuários médicos por pessoal médico. controles de coorte para PanScan-I foram densidade de incidência amostrados com uma proporção de 1: 1 e estavam vivos e livre do câncer no momento do diagnóstico do caso correspondido. Em todos os estudos de caso-controle, critérios correspondentes incluídos ano civil de nascimento dentro de cinco anos, sexo, raça e etnia, enquanto algumas coortes também combinava com a idade no início do estudo ou coleta de sangue, o tabagismo, a data /hora da coleta de sangue, em jejum de status em tempo de de coleta de sangue, eo comprimento de follow-up. Todos os dados foram de-identificados antes de genotipagem e antes amostras foram enviadas ao NCI. A genotipagem foi realizada no Cancer Genomics Research Laboratory (NCI) do Instituto Nacional de Câncer (anteriormente conhecida como a Facility Núcleo genotipagem) usando a matriz Illumina HumanHap550 para PanScan-I, a matriz 610-Quad Illumina Humano para PanScan II, ea 770 Illumina Humano chip de -Quad para PanScan III. Em PanScan controles III foram previamente genotipados usando de segunda geração microarrays Illumina SNP (por exemplo OmniExpress, Omni 1M ou Omni 2,5M) e extraídas PanScan III coortes prospectivas e um estudo de caso-controle espanhol e, portanto, não foram pareados com os casos [19] . SNPs aqui relatados foram limitados àqueles com freqüências alélicas menores (MAF) ≥5%. No total, foram utilizados dados de 3.583 casos de câncer de pâncreas e 7.053 controles (1.108 casos e 4.353 controles de coortes e 2.475 casos e 2.700 controles de estudos caso-controle) de ascendência europeia. A distribuição por idade e sexo dos casos e controles é descrito na Tabela S1. consentimento por escrito foi obtido de todos os participantes do estudo. Cada estudo participantes foi analisada e aprovada pelo seu IRB local para adequação da participação PanScan (Tabela S2) [15].

A vitamina D de medição

Um subconjunto de participantes da coorte com dados GWAS também teve 25 (OH) D no soro medido como parte da vitamina D Projecto de comparticipação (713 casos e 878 controlos) [20]. Estes assuntos foram a partir dos seguintes grupos: ATBC, INDÍCIO-II, CPS-II, NYU-WHS, e PLCO. Os métodos para o ensaio de 25 (OH) D foram previamente descritos [10]. Em suma, coração Ensaios, Inc. (Ames, Iowa) realizados ensaios de 25 (OH) D para as amostras de PISTA-II, DPC-II, NYU-WHS, PLCO, e um subconjunto de amostras utilizando o ATBC DiaSorin LIGAÇÃO 25 OH A vitamina D total do ensaio (Diasorin, Inc., Stillwater, Minnesota). As amostras restantes foram ensaiadas ATBC anteriormente utilizando um método semelhante, no laboratório do Dr. R. Vieth [21]. Os métodos e coeficientes de percentagens de variação para as amostras de controle de qualidade cegos do Heartland 25 (OH) D medidas tenham sido previamente relatada (10). Usando um componentes aninhados de análise de variância com medidas logaritmicamente transformadas de controle de qualidade em todo lotes, o intra-geral e coeficientes interbatch de variação foram 16,5% e 4,7% para as concentrações anteriormente testadas nos estudos ATBC e PLCO, respectivamente.

funções vitamina relacionada-D de genes incluídos

DHCR7

(DHC-7 redutase) converte pró-vitamina D

3 (7-dehydrocholesterol) na pele de colesterol. Alternativamente, pré-vitamina D é formado a partir de 7-dehydrocholestrol após exposição UVB dérmica. A vitamina D é também derivado da dieta ou suplementos, sob a forma de colecalciferol (D

3) ou ergocalciferol (D

2). A proteína de ligação a vitamina D (DBP, também conhecido como GC), transporta provitamina D para o fígado, bem como outros compostos de vitamina D para os tecidos alvo. No fígado 25-hidroxilases

CYP2R1

e

CYP27A1

converter vitaminas D

2 e D

3 da dieta e exposição ao sol para 25 (OH) D (calcidiol), o principal metabolito da vitamina D. Calcidiol é, então, convertida na forma activa a 1,25 (OH)

2D

3 (calcitriol) por 1α-hidroxilase (

CYP27B1) no rim e de outros órgãos. 1α-hidroxilase (

CYP27B1) está localizado na membrana mitocondrial interna onde se produz a forma activa da vitamina D, que se liga ao receptor de vitamina D (

VDR)

com uma afinidade substancialmente maior do que 25 ( OH) D. A proteína de ligação da vitamina D, GC, transporta metabólitos da vitamina D em órgãos-alvo, onde calcitriol se liga a

VDR

e forma um heterodímero com

RXRA

(alpha retinóide-receptor x). Este heterodímero atribui a elementos de resposta vitamina D em vários genes alvo, alguns dos quais se pensa terem propriedades anti-cancerígenas [1]. A vitamina D é catabolized por 24-hidroxilase (

CYP24A1

) para formas inactivas [22].

Três genes adicionais, cubulin (

CUBN

), megalin (

LRP2) Comprar e Calcium Sensing Receptor (

CASR

) foram adicionados a nossa análise para ser coerente com o estudo anterior sobre genes relacionados com a vitamina D e câncer pancreático [13]. Ambos cubulin megalina e são receptores de membrana de plasma que, em combinação medeiam uma actualização endocítica de ligado-GC vitamina D. O

CASR

proteína da membrana se liga a cálcio na matriz extracelular e desempenha um papel importante na homeostase do cálcio.

No total, os dados de genótipos de 213 SNPs tag com MAF 0,05 em 11 genes envolvidos na síntese (

DHCR7

,

CYP27A1

,

CYP2R1

), transportes (

GC

,

CASR

), o metabolismo (

CYP27B1

,

LRP2

,

CUBN), transdução de sinal (

VDR

,

RXRA

) ou catabolismo (

CYP24A1

) do endógena de vitamina D foram usados ​​em nossa análise [1]. Estes SNPs estão localizados dentro de uma extensão de 20 kb 5 ‘a montante e 10 kb de 3’ a jusante da região de codificação do gene, tal como definido pelo National Center for Biotechnology genoma humano de informações de compilação 36,3. SNPs e genes associados estão listados na Tabela S3.

A análise estatística

Foi utilizada a regressão logística não condicional para testar a associação entre SNPs individuais e risco de câncer pancreático, o ajuste para idade (≤50, 51- 60, 61-70, 71-80, ≥81 anos), sexo, estudo e 5 autovetores captura ascendência étnica. Foi realizada a via e análises de genes usando o AdaJoint pacote de R eo produto truncado classificação adaptativa (ARTP) estatística [23]. Em cada análise foram realizadas 1.000.000 de permutações. Esta estatística representa gene ou o tamanho do percurso e desequilíbrio de ligação e resume os sinais de associação conjuntas dentro de um gene ou caminho. As análises foram restritas aos caucasianos. Nós também testamos a heterogeneidade entre as três fases (PanScan I, II e PanScan PanScan III), utilizando o pacote de R para efeitos fixos meta-análise. Nós ajustado para comparações múltiplas na análise p-heterogeneidade, considerando um valor de p 0,0002 tão significativo. As análises estratificadas por três fases PANSCAN foram realizadas para explorar possíveis diferenças entre associações de fase.

Para testar possível modificação de efeito por status da vitamina D, foi realizada análise estratificada no subgrupo de estudos de coorte com medida 25 (OH) D; criamos uma variável dicotômica para a circulação de vitamina D (≤50 nmol /L ou 50 nmol /L), como acima deste limiar é considerado adequado para a saúde óssea e global nas recomendações nacionais [24,25] e foi perto de a mediana para controles em nossa população de estudo (controlar mediana de 25 (OH) D = 51,5 nmol /L). Nesta análise subconjunto que adicionalmente ajustados para fumar (nunca, anterior, corrente), índice de massa corporal (IMC), e época de colheita de sangue (outono, inverno, primavera, verão). Para testar a interação multiplicativa, criamos um termo de interação entre circulante da vitamina D como uma variável dicotômica e SNPs individuais. Usando uma correção de Bonferroni para comparações múltiplas, genes com um valor de p 0,006 e SNPs com um valor de p 0,0002 foram considerados estatisticamente significativos. Nós, adicionalmente, avaliou se SNPs associados com níveis de vitamina D em GWAS publicado (rs2282679, rs12785878, rs10741657, rs6013897) sobre circulante da vitamina D [26,27], ou SNPs tag representativas, foram associados com vitamina D em um subconjunto da nossa amostra do estudo.

resultados

a variação genética na via metabólica de vitamina D em geral não foi associado com o risco de câncer de pâncreas (via ARTP valor p = 0,830, Tabela 1). Nenhum dos 11 genes foram associados com cancro do pâncreas (Tabela 1). SNPs perto do

VDR

(rs2239186),

GC

(rs2282679),

LRP2

(rs4668123),

CYP24A1

(rs2762932) e

CUBN

(rs1810205) genes foram os principais SNPs associados com cancro do pâncreas (P-valores 0.008-0.037) (Tabela 2), apesar de não atingir o limiar de significância estatística após o ajuste para múltiplas comparações.

Um teste para heterogeneidade entre as três fases da PanScan indicaram nenhuma evidência de heterogeneidade após o ajuste para comparações múltiplas. Resultados estratificados por fase PanScan são apresentados para a via geral e 11 genes em S4 Mesa e para SNPs com valores de p 0,05 em S5 Table. Nenhuma associação foi significativa após ajuste para comparações múltiplas. Na análise estratificada por alta vs. circulando baixa concentração de vitamina D, não foram observadas diferenças significativas e testes de interação entre a concentração de vitamina D e de cada um dos 20 melhores SNPs não foram significativas (todos os valores de p 0,1; dados não mostrados).

dos quatro variantes identificadas como associadas com circulação concentração de vitamina D no GWAS publicado [26,27], em nossa amostra apenas uma SNP tag no

GC

mostraram associação (p = 5,30 x10

-7) com o estado de vitamina D; Tag SNPs em ou perto de

DHCR7 /NADSYN1

e

CYP2R1

não mostraram uma associação e rs6013897 no

CYP24A1

não poderia ser estudada como a plataforma Illumina HumanHap550 não inclui uma tag SNP para rs6013897.

Discussão

Este estudo é o maior até à data para avaliar os efeitos conjuntos de SNPs na via metabólica vitamina D e risco de câncer pancreático. Ao contrário do que nossa hipótese de que poderíamos observar uma associação entre a via metabólica de vitamina D eo risco de câncer de pâncreas, não encontramos nenhuma evidência para uma associação, seja pela via, genes, SNPs individuais, nem para interacções com as concentrações séricas de medição de vitamina D.

o estudo anterior sobre variantes genéticas na via de vitamina D eo risco de câncer de pâncreas com sede no Canadá mostraram valores de p significativos para SNPs no

CASR

,

CYP24A1

,

CYP2R1

,

DHCR7

, e

LRP2

genes (P-valores variaram 0,011-0,050), mas após o ajuste para comparações múltiplas nenhuma das associações permaneceu significativa [13] . Embora para diferentes SNPs, os nossos resultados mostrando associações com SNPs no

CYP24A1

e

LRP2

regiões podem oferecer algum suporte esses achados. A associação mais forte SNP demonstrado em nosso estudo foi no

VDR

gene (p-valores ,008-0,046 para três SNPs significativo), o que não foi observado no estudo canadense.

A investigação específica para polimorfismos na via metabólica de vitamina D e cancro do pâncreas é limitada [28]. No entanto, mais pesquisas existe na forma hormonalmente activa da vitamina D, calcitriol. Estudos pré-clínicos sugerem que os efeitos anti-proliferativos de calcitriol na pele, nódulos linfáticos, e tecidos mamários [29] e as células cancerígenas pancreáticas [30], atribuída a mecanismos relacionados com a inibição da angiogénese, G0 /paragem do ciclo celular G1, a diferenciação, a indução de apoptose e modulando diferentes vias de sinalização em células tumorais [1].

pontos fortes do nosso estudo incluem o tamanho da amostra muito grande com os dados genéticos, eo subconjunto com ambos os dados genéticos e 25 (OH) D medidos antes do diagnóstico. Incluindo genes na via que não só têm sido mostrados para prever circulantes de vitamina D, mas também aqueles que são conhecidos por estar envolvidos no metabolismo numa via colectiva fornece um âmbito de aplicação mais amplo do processo biológico, uma vez que pode estar relacionada com o risco de cancro pancreático. as concentrações sanguíneas de vitamina D pode variam consoante a época de colheita de sangue ou outras características, tais como atividade física ou IMC; embora nós não temos informação sobre ingestão alimentar e suplementos de vitamina D, foi ajustado para co-variáveis ​​disponíveis nas análises estratificadas por circulando o status da vitamina D. Ainda assim, os dados genéticos são menos sujeitos à influência ou confusão por exposições exógenos. Limitações do nosso estudo incluem as diferenças entre as plataformas de genotipagem, como 17 SNPs em análise não foram incluídas na plataforma PanScan I. Além disso, embora os procedimentos de controle de qualidade extensa foram instituídos, circulando 25 (OH) D foi testado em dois locais diferentes, introduzindo o potencial para efeitos de lote ou de outras variações entre laboratórios e medições.

Conclusão

nossos resultados não suportam uma associação entre variantes genéticas comuns na via metabólica vitamina D e risco de câncer pancreático, apesar do grande tamanho da amostra e capacidade de avaliar a modificação medida efeito pela concentração de vitamina D em circulação. Pesquisas futuras devem explorar outras vias através das quais a vitamina D pode estar associada com o risco de câncer de pâncreas; por exemplo, através de estudos de interações gene-nutriente que envolvem variantes em vias de sinalização a jusante envolvendo vitamina D.

Informações de Suporte

Tabela S1. Sexo e idade distribuições de casos e controles incluídos na análise, separados por fase

doi:. 10.1371 /journal.pone.0117574.s001

(DOC)

S2 Table. Os estudos incluídos e revisão associado Institucionais Boards

doi: 10.1371. /journal.pone.0117574.s002

(DOC)

S3 tabela. lista completa de SNPs (n = 213) e genes associados (n = 11) incluídos na análise

doi:. 10.1371 /journal.pone.0117574.s003

(DOC)

S4 Table. análise de caminho para o risco de câncer e de genes conjuntos pancreáticas na via da vitamina D, separados por fase PanScan

doi:. 10.1371 /journal.pone.0117574.s004

(DOC)

S5 Table. Vitamina D relacionados polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) com valores de p 0,05 e risco de câncer pancreático, separados por fase PanScan

doi: 10.1371 /journal.pone.0117574.s005

(DOC)

Reconhecimentos

os autores reconhecem a contribuição da equipe do Laboratório de Genômica de Pesquisa do Câncer (CGR). Especificamente, gostaríamos de agradecer a Aurelie Vogt, Xiang Deng, Belynda Hicks e Amy Hutchinson, bem como as equipes de Genotipagem Produção CGR Infinium e CGR incluindo Salma Chowdhury, Kedest Teshome, Kerrie Lashley, Herbert Higson e Michelle Manning por sua ajuda inestimável em todo o projeto. Também gostaríamos de agradecer Preethi Raj por sua ajuda na preparação para a apresentação.