Abstract
Objectivo
O câncer de esôfago foi o quinto câncer mais comumente diagnosticado ea quarta principal causa de morte relacionada ao câncer na China em 2009. os fatores genéticos podem desempenhar um papel importante no carcinoma epidermóide de esôfago (CEE) carcinogênese.
Designs and Methods
Para avaliar o efeito
p21
,
p53
,
TP53BP1
e
p73
polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) sobre o risco de ESCC, realizamos um estudo de caso-controle de base hospitalar. Um total de 629 casos CICAc e 686 controles foram recrutados. Seus genótipos foram determinados utilizando o método de reacção de detecção de ligação (LDR).
Resultados
Quando o
p21
rs3176352 genótipo homozigoto GG foi utilizado como grupo de referência, o genótipo CC foi associado a um risco significativamente aumentado de ESCC. Quando o
p73
rs1801173 genótipo homozigoto CC foi usado como grupo de referência, o genótipo CT foi associado com um aumento significativo do risco de CICAc. Após a correção de Bonferroni, para
p21
rs3176352 G C, o
p
correta ainda era significativa. Para os outros seis SNPs, em todos os modelos de comparação, foi observada associação entre os polimorfismos e risco CICAc
Conclusões
p21
rs3176352 G . C e
p73
rs1801173 C T SNPs estão associados com um risco aumentado de CICAc. Para confirmar os resultados atuais, são necessárias adicionais, estudos maiores e caracterização biológica específica de tecido
Citation:. Zheng L, Tang W, Shi Y, Chen S, Wang X, Wang L, et al. (2014)
p21
rs3176352 G C e
p73
rs1801173 C T polimorfismos estão associados com um risco aumentado de câncer de esôfago na população chinesa. PLoS ONE 9 (5): e96958. doi: 10.1371 /journal.pone.0096958
editor: Ralf Krahe, da Universidade do Texas MD Anderson Cancer Center, Estados Unidos da América
Recebido: 13 Janeiro, 2014; Aceito: 12 de abril de 2014; Publicado: 12 de maio de 2014
Direitos de autor: © 2014 Zheng et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Este estudo foi apoiado em parte pela National Natural Science Foundation da China (81370001, 81371927, 81101889, 81000028), província de Jiangsu Natural Science Foundation (BK2010333, BK2011481), Fundação para o Desenvolvimento social da Zhenjiang (SH2010017) e Changzhou jovens talentos e Fundação Ciência-Tecnologia de Serviços de saúde (QN201102) e Hospital da Affiliated Popular da Universidade fundo de Jiangsu (Y200913). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
Como a quarta principal causa de mortes por câncer e o quinto câncer mais comum diagnosticada na China em 2009 [1], a taxa de 5 anos de sobrevivência de câncer de esôfago é muito pobre e contas somente 12,3% em 23 Europeu países [2]. Mais de 90% cânceres de esôfago são o carcinoma de células escamosas do esôfago (ESCC). Além dos fatores de risco ambientais, como fumar e beber pesado, polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) como fatores genéticos podem desempenhar um papel importante na CICAc carcinogênese [3].
proteína p53 tumor supressor é frequentemente mutado em diversos tipos de cancros e está implicada na proliferação de células e a progressão do tumor [4]. O
p53
gene está no cromossomo 17p13.1. Um bem estudado
p53
polimorfismo, Arg72Pro (rs1042522 C /G; R /P) foi relatado para ter significado funcional [5], [6]. Comparado com Arg proteína de tipo selvagem, a proteína variante alelo Pro codificado é mais eficiente na indução de genes de reparação de ADN de expressão nuclear [7]. Polimorfismo
p53
rs1042522 G C tem sido associada com o risco de vários tipos de cancros [8]
P21 (WAF1 /Cip1 /CDKN1A), um inibidor de cdk não específico e uma chave. mediador de paragem do ciclo celular G0-G1, é sobre-regulada por p53 de tipo selvagem. funções p21 durante o reparo gene e angiogênese [9]. a paragem do ciclo celular no ponto de restrição fase G1-S é mediada através de p21 sobre-regulação induzida por p53, e a ciclinas G1-cdk2 complexos inibição associada [10]. Em células deficientes em p53, p21 interage com antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA) e faz com que tanto o G1 eo ciclo celular prisão G2 [11]. Ao inibir a replicação do ADN dependente de PCNA, a expressão da p21 pode suprimir o crescimento do tumor e reparação incompatibilidade in vitro [12].
p21
codifica uma proteína 21-kDa, está localizado no cromossomo 6p21.2 e consiste de três exons e dois introns [13].
protéicas Tumor 53 de ligação 1 (TP53BP1) interage especificamente com o
p53
e participa de ambos reparo de DNA e controle do ciclo celular. Cooperando com sensores de danos e transdutores de sinais, TP53BP1 ajuda a mediar o posto de controle de danos ao DNA [14].
P73
ações estruturais e semelhanças funcionais para
p53
.
p73
está localizado na 1p36.33, mapeamento de uma região que é frequentemente suprimida em cancros [15]. p73 activa a transcrição de genes e p21- p53-sensível, que participam no controlo do ciclo celular, a reparação do ADN, a apoptose e inibe o crescimento celular de um modo p53 como por indução de apoptose ou paragem do ciclo celular G1 [16], [17]. Isto sugere que a p73 tem funções supressores de tumores. Caso contrário, o
p73
gene tem algumas diferenças significativas de p53. Em contraste com os ratinhos deficientes em p53, aqueles que não possuem
p73
não mostram um aumento da susceptibilidade a tumorigénese espontânea [18].
variações genéticas nos genes de vias, tais como p53,
p21
,
p53
,
TP53BP1
e
p73
, pode contribuir para o desenvolvimento de ESCC. Em um estudo de caso-controle de base hospitalar, realizamos análises de genotipagem de oito funcional
p21
,
p53
,
TP53BP1
e
p73
SNPs em 629 casos CICAc e 686 controles em uma população chinesa.
Materiais e Métodos
a aprovação ética do protocolo do estudo
os dados foram depositados em arquivos de suporte de informação. Em relação à conduta ética de pesquisas envolvendo seres e /ou animais humanos, temos cumprido com a Declaração da Associação Médica Mundial de Helsinki. O Conselho de Revisão da Universidade de Jiangsu (Zhenjiang, China) aprovou este estudo de caso-controle de base hospitalar. consentimento informado por escrito foi fornecido por todos os sujeitos do estudo.
Pacientes e controles
Entre Outubro de 2008 e Dezembro de 2010, do Hospital das pessoas afiliadas da Universidade de Jiangsu e Affiliated Hospital da Universidade de Jiangsu (Zhenjiang , China), 629 indivíduos com câncer de esôfago foram recrutados consecutivamente. Por meio patológicas, todos os casos de câncer de esôfago foram diagnosticados como ESCC. Os critérios de exclusão foram: pacientes que já tiveram câncer; qualquer metástase de câncer e à radioterapia ou quimioterapia. 686 pacientes sem câncer foram pareados com os casos com relação à idade (± 5 anos) e sexo, como controles. Os controles foram recrutados a partir do acima mencionado dois hospitais no mesmo período de tempo. A maioria dos controles estavam sendo tratados para trauma (incluindo 612 pacientes de trauma, 45 pacientes de doenças infecciosas e 29 pacientes com hipertensão).
Usando um questionário pré-testado, entrevistadores treinados questionou cada assunto pessoalmente e obteve informações de dados demográficos ( por exemplo, idade, sexo) e fatores de risco relacionados (como tabagismo e consumo de álcool). Amostras de sangue venoso (2 mL) foram coletadas após a entrevista de cada sujeito. A definição de “fumantes” estava fumando um cigarro por dia para 1 ano. A definição de “bebedores de álcool” foi o consumo ≥3 bebidas alcoólicas por semana durante 6 meses
Isolamento de DNA, a seleção SNPs e genotipagem por reacção de detecção de ligação (LDR)
De todo. sangue, o ADN genómico foi isolado [19]. A seleção 8 SNPs foi baseada em artigos publicados anteriores com consideração funcional [20], [21], [22], [23]. Com o apoio técnico do Shanghai Biowing Applied Biotechnology Company, as amostras foram genotipados usando o método LDR [24]. Em 160 (12,17%) amostras selecionadas aleatoriamente com alta qualidade DNA, análises repetidas foram feitas para controle de qualidade.
Análise estatística
Usando o
χ
2 test , entre os casos e controles, as distribuições das características demográficas, variáveis selecionadas e genótipos do
p21
,
p53
,
TP53BP1
e
p73
foram avaliadas as diferenças entre as variantes. Usando análises de regressão logística, as associações entre as oito SNPs e risco de ESCC foram estimados para OR bruto e ajustado RUP quando o ajuste para idade, sexo, tabagismo e estado de beber. Devido ao número de comparações, foi aplicado o processo de correcção de Bonferroni. Por um bem-of-fit
χ
2 de teste, o equilíbrio de Hardy-Weinberg (HWE) foi testado para comparar as freqüências genotípicas observadas aos esperados entre os indivíduos do grupo controle. Com SAS 9.1.3 (SAS Institute, Cary, NC, EUA), foram realizadas todas as análises estatísticas.
Resultados
características da população de estudo
Casos e controles ‘ características estão resumidas na Tabela 1. com o
χ
2 testes, os casos e controles são adequadamente combinados por idade e sexo. Entre os casos e os controles, foi detectada diferença significativa no status de fumar e beber, que é mostrada na Tabela 1. A informação primária para oito genotipados SNPs estava na Tabela 2. As taxas de concordância de análises repetidas foram de 100%, exceto
p21
rs3176352 G C (158/160, 98,75%). Para todos os SNPs, frequência menor alelo (MAF) em nossos controles foi similar ao MAF para o chinês no banco de dados. Nos controles, para estes oito polimorfismos, as freqüências genotípicas observadas foram todos em HWE (Tabela 2).
Associações entre p21, p53, p73 e TP53BP1 polimorfismos e risco de ESCC eo genótipo análise combinação
Quando o
p21
rs3176352 genótipo homozigoto GG foi utilizado como grupo de referência, o genótipo GC não foi associado com o risco de ESCC; o genótipo CC foi associado com um risco significativamente aumentado de ESCC (CC vs. GG: OR ajustado = 1,61 CI, 95% = 1,18-2,20,
p
= 0,0030). No modelo dominante, a
p21
rs3176352 variantes GC /CC não foram associados com o risco de ESCC, em comparação com o
p21
rs3176352 genótipo GG. No modelo recessivo, quando
p21
rs3176352 genótipos GG /GC foram usados como o grupo de referência, o genótipo homozigoto CC foi associado com um aumento de risco de 63% de CICAc (CC vs GG /GC: OR ajustado = 1,63, 95% CI = 1,23-2,15,
p
= 0,0006) (Tabela 3).
Quando o
foi usada p73
rs1801173 genótipo homozigoto CC como o grupo de referência, o genótipo CT foi associado com um aumento significativo do risco para CICAc (CT vs CC: OR ajustado = 1,39, IC 95% = 1,10-1,76,
P
= 0,006); o genótipo TT não estava associada com o risco de CICAc. No modelo dominante,
CT p73
rs1801173 /variantes do TT foram associados com um risco significativamente aumentado de ESCC (CT /TT vs. CC: OR ajustado = 1,37, 95% CI = 1,10-1,72,
p
= 0,006), em comparação com o
p73
rs1801173 genótipo CC. No modelo recessivo, quando o
p73
rs1801173 CC /genótipos CT foram utilizados como grupo de referência, o genótipo homozigoto TT não foi associado com o risco de ESCC (Tabela 3).
Quando
p21
rs1801270 genótipo homozigoto CC foi usado como grupo de referência, o genótipo AA foi associada com uma redução significativa do risco de ESCC. Quando o
TP53BP1
rs560191 GG /genótipos GC foram usados como grupo de referência, o genótipo CC foi associada com uma redução significativa do risco de ESCC (Tabela 3). A análise de regressão logística revelou que os
p21
rs2395655 G A,
p21
rs1059234 C T,
p21
rs762623 C A e
p53
rs1042522 L polimorfismos C não foram associados com o risco de CICAc (Tabela 2). Após a correção de Bonferroni (número de mutiple test = 32), para a
p21
rs3176352 G C, o ajustado
p
= 0,096 para CC vs. GG, ajustado
p
= 0,0192 para CC vs. GG /GC. Para
p73
rs1801173 C . T, o
p
correta = 0,202 para CT vs. CC depois de ajustado para idade et al,
p
correta = 0,195 para CT /TT vs. CC. Para o resto 6 SNPs, em todos os modelos de comparação,
p Restaurant . 0,05
Quando
p21
rs3176352 genótipo CC e
p73
rs1801173 CT /TT genótipos foram considerados como genótipos variante de risco. Quando o grupo transportador genótipo nenhuma variante de risco foi utilizado como grupo de referência, a um ou outro grupo transportadora genótipo variante de um risco (OR ajustado = 1,42, 95% CI = 1,12-1,80,
p
= 0,0035) e tanto o risco grupo genótipos variantes transportadora (OR ajustado = 2,47, 95% CI = 1,60-3,82,
p Art 0,0001) foram associados com um risco significativamente aumentado de ESCC
analisa Estratificação na p21. rs3176352 G C e p73 rs1801173 C polimorfismo T eo risco de ESCC
para avaliar os efeitos do
p21
rs3176352 G genótipos C no risco CICAc de acordo com diferentes idades, sexo, tabagismo e estado de consumo de álcool; Foram realizadas análises a estratificação. Um aumento significativo do risco de ESCC associada ao
p21
rs3176352 G polimorfismo C era evidente entre todos os subgrupos, exceto em pacientes do sexo feminino após estratificação (Tabela S1). A redução significativa do risco de ESCC associada ao
p73
rs1801173 C . Polimorfismo T era evidente entre os pacientes mais idosos, pacientes do sexo feminino e pacientes que nunca beber ou fumar (Tabela S2)
Discussão
neste estudo caso-controle de base hospitalar de ESCC, descobrimos que o
p21
rs3176352 CC e
p73
rs1801173 CT /genótipos TT foram associados com risco aumentado de ESCC; resultados positivos também foram observados na análise de combinação de genótipos. Para o melhor de nosso conhecimento, esta é a primeira associação positiva de
p21
rs3176352 G /C e
p73
rs1801173 C /polimorfismos T com risco ESCC.
P21 é um inibidor de quinase dependente de ciclina. Tem sido observado que em uma ampla variedade de cancros, a expressão de p21 é alterada. Na fase G1, a proteína p21 interrompe ciclo celular progressão [25], [26]. Ligação do p53 proteína supressora de tumor p21 à expressão promotor p21 induzindo [27]
P21
rs3176352 G /C (IVS2 + 16 G C). Está localizado no intrão 2 de
p21
, 16 pb a jusante do sítio de splicing. Esta transição C-a-L está previsto para afectar o
p21
RNA mensageiro splicing [28]. Choi
et al.
Demonstrou que
p21
rs3176352 G /C polimorfismo parecia estar em desequilíbrio de ligação com Ser31Arg em uma população coreana. A análise deste haplotipo para susceptibilidade ao cancro do pulmão demonstraram um efeito protector que era dependente do número de alelos variantes. Em um estudo anterior envolvendo 80 pacientes com câncer de esôfago e 200 controles sem câncer de Ningxia Região da China, o
p21
rs3176352 G /polimorfismo C não foi associada com o risco de câncer de esôfago [29]. Um estudo de caso-controle do nordeste do Irã, com 126 casos e 100 controles, foi realizado para detectar associações de
p21
polimorfismos (rs1801270 e rs1059234) com CICAc risco [30]. Os dados sugerem que estes dois
p21
polimorfismos, tanto isoladamente e em combinação, não são CICAc biomarcadores susceptibilidade genética, o que está de acordo com os nossos resultados.
P73, um homólogo de p53, tem algum p53- atividades como e desempenha um papel importante na modulação do ciclo celular, apoptose e reparação do DNA. Em uma região de alta incidência da China,
p73
polimorfismos não foram associados com CICAc susceptibilidade [31]. No entanto, nossos resultados são mais confiáveis por causa dos números mais elevados de casos e controles.
p73
rs1801173 C /T méritos polimorfismo mais estudo funcional para elucidar a etiologia deste SNP e ESCC.
As frequências dos polimorfismos genéticos muitas vezes variam entre os grupos étnicos. No presente estudo chinês, a freqüência do alelo de
p21
rs3176352 C foi 0,410 em 686 indivíduos de controle, o que é consistente com os valores reportados na base de dados SNP para o Han Chinese (0,422) e populações japonesas (0,455) , maior do que a do Africano (0,233) população subsaariana e população americana Africano (0,250), e, mas menor do que a da população europeia (0,758). A freqüência do alelo de
p73
rs1801173 T foi 0,230 em 686 indivíduos de controle, o que é consistente com os valores reportados na base de dados SNP para a população (chinês Han + japoneses) JPT CHB + (0,267), maior do que a do Sub-Saara Africano (0,102) populacional e população europeia (0,150).
Este estudo de caso-controle tinha várias limitações. Primeiro, porque os pacientes e controles foram inscritos de hospitais, o viés inerente pode ter resultado em resultados espúrios. Em segundo lugar, os polimorfismos estudados não podem fornecer uma visão abrangente do
p21
,
p53
,
TP53BP1
e
p73
variabilidade genética. estudos de Belas-de mapeamento são necessários. Em terceiro lugar, devido ao tamanho da amostra moderada e ausência de uma coorte de validação, o poder estatístico foi limitado. Finalmente, a infecções virais e parâmetros imunológicos informação não estava disponível, assim, o poder de nossas análises foi restrito.
Em conclusão, nosso estudo fornece fortes evidências de que
p21
rs3176352 G /C e
p73
rs1801173 C /polimorfismos T podem contribuir para o risco ESCC. estudos de caracterização e replicação biológicos de tecidos específicos com populações maiores são necessários para confirmar nossos achados.
Informações de Apoio
Tabela S1.
estratificada analisa entre
p21
rs3176352 G C polimorfismo eo risco CICAc por sexo, idade, tabagismo e consumo de álcool
doi:. 10.1371 /journal.pone.0096958.s001
( DOCX)
Tabela S2.
estratificada analisa entre
p73
rs1801173 C T polimorfismo eo risco CICAc por sexo, idade, tabagismo e consumo de álcool
doi:. 10.1371 /journal.pone.0096958.s002
( DOC)
dados S1.
Dados de p21, p53, p73 e TP53BP1 polimorfismos
doi:. 10.1371 /journal.pone.0096958.s003
(SAV)
Reconhecimentos
Agradecemos a todos pacientes que participaram deste estudo. Queremos agradecer Dr. Yiqun Chen (Biowing Applied Biotechnology Company, Xangai, China) para suporte técnico.