Sumário

família de proteínas de domínio associação RAS 1a (RASSF1A) é um gene supressor de tumor putativa localizada na 3p21, tem sido considerada a desempenhar papéis importantes na regulação de diferentes tipos de tumores humanos. Relatórios anteriores demonstraram que a frequência de metilação RASSF1A foi significativamente maior no grupo de pacientes em comparação com os controles, mas a relação entre metilação do promotor RASSF1A e características patológicas ou o grau do tumor de cancro da bexiga permanece controverso. Portanto, uma meta-análise de estudos publicados que investigam os efeitos da situação RASSF1A metilação em ocorrência e associação de cancro de bexiga com tanto pTNM (p, estágio patológico; T, o tamanho do tumor; N, status do nó; M, estado metastático) e grau do tumor em cancro da bexiga foi realizada no estudo. Um total de 10 estudos envolvendo elegíveis 543 casos e 217 controlos foram incluídos nas análises combinadas. Sob o modelo de efeitos fixos, o OR de metilação RASSF1A em doentes com cancro da bexiga, em comparação com controles não-cancerosas, foi 8. 40 com 95% CI = 4. 96-14. 23. O pool ou com o modelo de efeitos aleatórios de pTNM e grau do tumor em pacientes metilados RASSF1A, em comparação com pacientes não metiladas, era 0. 75 (IC95% = 0. 28-1. 99) e 0. 39 (95% IC = 0. 14-1. 09). Este estudo mostrou que RASSF1A metilação parece ser um fator prognóstico independente para o câncer de bexiga. Os achados também necessitam de confirmação através adequadamente desenhados estudos prospectivos

Citation:. Gao T, Wang S, Ele B, Pan Y, Song G, Gu L, et al. (2012) A Associação de RAS Associação domínio da família Protein1A (RASSF1A) metilação Unidos e do cancro de bexiga de risco: uma revisão sistemática e meta-análise. PLoS ONE 7 (11): e48300. doi: 10.1371 /journal.pone.0048300

editor: William B. Coleman, University of North Carolina School of Medicine, Estados Unidos da América

Recebido: 24 Julho, 2012; Aceito: 20 de setembro de 2012; Publicação: 06 de novembro de 2012

Direitos de autor: © 2012 Gao et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. O estudo foi apoiada pela Fundação Nacional de natureza científica da China (81172141 /H1611; https://isisn.nsfc.gov.cn/egrantweb/). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer de bexiga é o tumor maligno mais comum do trato urinário, e da 9ª diagnóstico de câncer mais comum no mundo, com mais de 330, 000 novos casos por ano e mais de 130, 000 mortes por ano. geralmente Estima-se que do sexo masculino: taxa de incidência no sexo feminino é 3. 08:01. 0 [1]. O tipo histológico e patológico de câncer de bexiga é o carcinoma urotelial principalmente, também chamado de carcinoma de células transicionais, respondendo por aproximadamente 90% [2]. Outros tipos, incluindo carcinoma de células escamosas e adenocarcinoma, são responsáveis ​​por 3-7% e 2%, respectivamente [3]

metilação do DNA das regiões promotoras está a emergir como o principal mecanismo de inativação de ETG (supressor de tumor. gene). ADN é metilado apenas com citosinas localizadas 5 ‘em relação guanosinas em dinucleótidos CpG e a metilação do DNA é um evento frequente epigenética em muitos cancros humanos [4]. Esta modificação tem efeitos Regula tory-importantes na expressão do gene, especialmente quando envolve áreas ricas em CpG conhecidas como ilhas de CpG, localizadas nas regiões promotoras de muitos genes. Em muitos casos, a metilação aberrante dos genes da ilha de CpG tem sido correlacionada com uma perda de expressão do gene, e que é proposto que a metilação de DNA proporciona uma via alternativa para a deleção do gene ou mutação para a perda da função TSG. Marcadores de metilação aberrante pode representar um método promissor para o monitoramento da ocorrência e progressão do câncer. O (família de domínio Ras-associação 1) RASSF1 família de proteínas representa uma classe de Ras efetores que possuem propriedades supressoras do tumor. RASSF1A, um dos sete isoformas diferentes de RASSF1, é um gene supressor de tumor putativa localizada na 3p21, uma região de deleções heterozigotos e homozigotos comuns em diferentes tipos de tumores humanos [5] – [6]. Ela partilha uma elevada homologia de sequências com uma proteína conhecida rato (Nore1) e pode servir como um efector que medeia os efeitos apoptóticos por ligação de Ras de um modo dependente-trifosfato de guanosina [6]. Os relatórios subsequentes indicam que a hipermetilação das ilhas de CpG dentro da região do promotor RASSF1A, em vez de eventos clássicos de mutação /exclusão, são a maior causa de perda de expressão [6]. As células tratadas com agentes de desmetilação re-express RASSF1A confirmando o papel da metilação do DNA na inactivação de RASSF1A em linhas celulares de tumores [7]. Em muitos tumores sólidos humanos de órgãos, metilação de RASSF1 foi identificado [Genebank Adesão # AC002481, os nucleótidos 17730-18370] e a sua frequência varia entre 30% e 50% [8], [9]. Além disso, foi relatada a metilação RASSF1A como um indicador de prognóstico no carcinoma de células renais, cancro do pulmão de células não pequenas, neuroblastoma, melanoma, cancro do endométrio e cancro da mama [10] – [17]. Todos estes achados sugerem que ele pode desempenhar um papel fundamental no desenvolvimento do câncer humano.

Apesar de uma série de estudos individuais realizados em doentes com cancro da bexiga, o valor prognóstico do estado RASSF1A metilação no cancro da bexiga diagnóstico do paciente ea relação entre metilação RASSF1A e características patológicas ou o grau do tumor de cancro da bexiga permanece controverso. Portanto, uma revisão sistemática foi realizada da literatura com meta-análise para obter uma avaliação mais precisa do seu valor prognóstico no câncer de bexiga.

Materiais e Métodos

Publicação seleção

os estudos foram identificados através de uma pesquisa eletrônica do PubMed e EMBASE usando as seguintes palavras-chave: cancro de bexiga, UBC, RAS protein1A família domínio associação, RASSF1A, metilação, prognóstico, prognóstico, características patológicas e grau do tumor. Nós também procurou manualmente as referências destas publicações, a fim de recuperar estudos adicionais. Somente aqueles publicados como artigos de texto completo e em Inglês foram incluídos como candidatos. A pesquisa atualizada em 28 de julho de 2012.

Cada ponto representa um estudo separado para a associação indicada. Logor logaritmo natural de OR, linha horizontal significa tamanho do efeito. FIG. 1: Lote de funil de Begg de teste de viés de publicação

Inclusão e Exclusão Critérios

Os estudos foram selecionados para análise, se cumpridos os seguintes critérios:. 1) eles estavam epidemiológica originais estudos sobre a correlação entre a metilação do promotor RASSF1A eo prognóstico de pacientes com câncer de bexiga, características patológicas ou o grau do tumor de câncer de bexiga; 2) o status RASSF1A metilação foi examinada usando PCR específicos de metilação (MSP) ou MSP quantitativa (QMSP); 3) os sujeitos em cada estudo foi composto pelos pacientes e controles não-cancerosas; 3) estudos deve ser com texto completo não apenas resumos para a extração de informações relevantes; 4) quando a mesma população paciente relatou em diversas publicações, apenas o relatório mais recente ou o mais completo foi incluído nesta análise para evitar sobreposição entre coortes; 5) o número de pacientes e controles em cada estudo deve ser superior a 3, respectivamente.

Recolha de Dados

Para cada estudo elegíveis, foram coletadas informações sobre autores, ano e fonte de publicação, país de origem, critérios de inclusão, critérios de exclusão, características patológicas, o grau do tumor, as frequências de metilação RASSF1A nos controles não-cancerosas e pacientes de câncer de bexiga e o método de detecção de metilação. Todos os estudos incluídos utilizada pessoas não-cancerosas como um grupo de controle, embora alguns deles não forneceu a definição de noncancer. Em estudos que definem as pessoas não-cancerosas, há duas definições: (1) pessoa saudável normal; (2) as pessoas com doença urológica, mas sem história prévia de malignidade geniturinário. Uma vez que é impossível para redefinir as pessoas não-cancerosas em um padrão unificado, combinamos as pessoas não-cancerosas em nossa meta-análise de acordo com o seu grupo original em cada estudo individual. Destes estudos, o grau do tumor ≤1 foi definida como de baixo grau, e o grau do tumor ≥2 foi definida como sendo de alto grau que foram definidas por diferenciação celular. Os artigos finais elegíveis seleccionados para posterior meta-análise foram avaliados independentemente por dois revisores. pequenas discrepâncias foram resolvidas por discussão dos autores.

Meta-análise e Análise Estatística

A análise acima de tudo examinaram as diferenças na frequência de metilação RASSF1A entre pacientes com câncer de bexiga e pessoas não-cancerosas, odds ratio (OR) com a correspondente IC 95%. Além disso, a força de associação entre a metilação RASSF1A e pTNM dos pacientes (p, fase patológica; T, o tamanho do tumor; N, status do nó; H, estado metastático) e o grau do tumor também foram avaliados por OR com o correspondente IC 95%. Para avaliar a heterogeneidade entre os estudos, um teste estatístico para heterogeneidade foi realizada com base nas estatísticas [18]. Se os estudos mostraram-se homogénea com P 0. 05 para Q-estatísticas, o resumo das OR foi calculada por um modelo de efeitos fixos (o método de Mantel-Haenszel), quando entre os estudos heterogeneidade estava ausente [19]. Caso contrário, um modelo de efeitos aleatórios (o método DerSimonian e Laird) foi selecionada [20]. Além disso, análises estratificadas foram também realizadas por materiais e método. Além disso, uma análise de sensibilidade, que por um estudo único na meta-análise foi eliminada de cada vez para determinar a influência dos dados individuais definidos para o pool ou global, foi realizada para avaliar a estabilidade dos resultados. O viés de publicação potencial foi analisado visualmente em um gráfico de funil de log [OR] contra o seu erro padrão (SE), e o grau de assimetria foi testada pelo teste de Egger [21]. Esta meta-análise foi realizada utilizando o software STATA versão 12. 0. Todos os valores P foram baseados em dois lados testes e um P-valor inferior a 0. 05 foi considerado estatisticamente significativo.

Resultados

Características de estudos

de acordo com os critérios de inclusão, um total de 10 estudos elegíveis [22] – [31] envolvendo 543 casos e 217 controles foram incluídos nas análises combinadas. As características destes estudos estão resumidos na Tabela 1. Destes estudos, seis estudos foram conduzidos na Ásia, duas estavam na Europa, e o restante eram nos EUA, Brasil. Os níveis RASSF1A metilados foram detectados usando a metilação de PCR específica (MSP) [22], [24], [25], [28] – [31] ou de metilação quantitativa PCR específica (QMSP) [23], [26], [ ,,,0],27]. estado de metilação de DNA do promotor RASSF1A foi avaliada em tecidos de urina ou tumorais. cancros da bexiga foram confirmados histologicamente ou patologicamente em todos os estudos.

metanálise

Em geral, as frequências de metilação RASSF1A foram testadas em dez estudos fiáveis. Os principais resultados foram resumidos na Tabela 2. Sob o modelo de efeitos fixos, o pool ou de metilação RASSF1A em doentes com cancro da bexiga, em comparação com controles não-cancerosas, foi 8. 40 com 95% CI = 4. 96-14. 23. Na análise estratificada por material, riscos significativamente aumentados foram encontrados em amostras de urina na metilação detction RASSF1A em cancro da bexiga (OR = 7. 29, CI = 4. 20-12. 65 95%) e em tecidos (OR = 28 . 76, IC 95% = 3. 73-221. 59). Como análise estratificada por método de aumentar significativamente os riscos também foram encontrados em MSP (OR 14. 76, 95% CI = 6. 89-31. 61) e QMSP (OR = 3. 68, IC 95% = 1. 69-8 . 03). No metilação RASSF1A avaliar e pTNM /grau no cancro da bexiga, cada um foi realizado em seis estudos. Os principais resultados foram resumidos na Tabela 3. Sob o modelo de efeitos aleatórios, o pool ou de pTNM e grau do tumor em pacientes metilados RASSF1A, em comparação com pacientes não metiladas era 0. 75 (IC95% = 0. 28-1. 99) e 0. (IC 95% = 0. setembro 14-01.) 39

análises de Sensibilidade

a análise de sensibilidade revelou que quatro estudos independentes foram a principal fonte de heterogeneidade [22] -. [ ,,,0],25]. Em seguida, a heterogeneidade da metilação RASSF1A em doentes com cancro da bexiga, em comparação com controles não-cancerosas foi diminuída quando esses quatro estudos foram removidos (P = 0,49). Além disso, nenhum outro estudo única foi encontrada para impactar o pool ou como indicado por análise de sensibilidade.

Publicação

Viés

Como se mostra na Figura 1, a forma das parcelas pareciam funil assimétrico na comparação de metilação entre os doentes com cancro da bexiga e controles não-cancerosas, sugerindo a presença de viés de publicação. Em seguida, o teste de Egger fornece evidência estatística de assimetria gráfico de funil (t = 5. 14, P = 0. 001). Para ajustar este viés, um método guarnição-e-enchimento desenvolvido por Duval e Tweedie [32] foi implementado (Figura 2). Meta-análise com ou sem o método de guarnição e enchimento não tirou conclusões diferentes, indicando que nossos resultados foram estatisticamente robusta. gráfico de funil e teste de Egger foram realizados para avaliar o viés de publicação em estudos de associação entre a metilação RASSF1A e pTNM /série, A forma do gráfico de funil não indicaram qualquer evidência de assimetria óbvia (figura não mostrada) e o teste de Egger sugeriu a ausência de viés de publicação (P . 0 05).

Discussão

Os resultados de nossa revisão sistemática mostrou que RASSF1A metilação no câncer de bexiga foi associado com o risco de tumor como quer detectada na urina ou tecido por MSP ou QMSP. No entanto, a metilação RASSF1A não foi associado com um risco aumentado para o desenvolvimento de características patológicas ou o grau do tumor de cancro da bexiga em comparação btween RASSF1A metilado bexiga cnacer pacientes e pacientes não metiladas.

Os dados acumulados documentado que pacientes com câncer de bexiga sempre mostrar RASSF1A metilação [31]. Relatórios anteriores demonstraram também que as variações genéticas de RASSF1A afetam a suscetibilidade ao câncer de bexiga [28] e a frequência de metilação RASSF1A foi encontrado para ser significativamente maior no grupo de pacientes em comparação com controles [27], [28]. Para confirmar ainda mais estado de metilação do promotor RASSF1A no diagnóstico do paciente com câncer da bexiga, foi realizada uma meta-análise de 10 estudos envolvendo 543 casos e 217 controles para obter uma estimativa mais precisa da associação. Nossos resultados sugerem que RASSF1A metilação é um fator de risco potencial para o câncer de bexiga detectada tanto em tecidos de urina e tumorais. A frequência de metilação RASSF1A em doentes com cancro da bexiga foi 8. 40 vezes maior do que em pessoas não-cancerosas. No entanto, a MSP é um método de PCR nonfluorometric não quantitativa para investigar metilação do promotor. Este método pode não conseguir detectar baixas concentrações de alelos metilados, ao contrário QMSP que pode detectar-se a 1/1000 alelos metilados [27]. Nesta meta-análise, ambos apresentam um efeito positivo na detecção de metilação RASSF1A. Além disso, a metilação frequente foi detectado em RASSF1A com as associações significativas com o estágio do tumor, grau e capacidade de invasão muscular [30], [38] que não foi encontrado em outros estudos [27], [31]. Para resolver os resultados conflitantes, nós também realizada uma meta-análise que indicou que a frequência de metilação RASSF1A não se correlacionou com a pTNM ou tumor grau de pacientes com câncer de bexiga. Estes resultados sugerem que a inactivação de RASSF1A pode ser um evento precoce na carcinogénese da bexiga.

Epigenetic alterações são uma característica do cancro humano. Em particular, a metilação do ADN é um mecanismo comum para a inactivação de supressor de tumor e outros genes do cancro em células tumorais [33]. Os padrões de metilação aberrante têm sido utilizados como alvos para a detecção de células tumorais em amostras clínicas, tais como biópsias de tecidos ou fluidos do corpo [34]. RAS domínio associação proteína da família 1A (RASSF1A) é um gene supressor de tumor putativa localizada na 3p21, tem sido considerada a desempenhar papéis importantes na regulação de diferentes tipos de tumores humanos [5], [6]. Tem sido bem documentado que as proteínas Ras ligam um conjunto diversificado de moléculas efectoras e mediar efeitos supressores de tumor, tais como a diferenciação e a apoptose do terminal, bem como efeitos oncogénicos [35], [36]. Além disso, a activação da via de sinalização de Ras é um acontecimento importante no processo de desenvolvimento do cancro. As mutações no proto-oncogene Ras comumente ocorrem em câncer, levando à sua hiperativação, a sinalização crescimento aberrante, e proliferação de células desmarcada. Foi sugerido que RASSF1 pode mediar a inibição do crescimento de Ras activado através da sua função e pró-apoptótica RASSF1A inactivação pode ser um mecanismo tumorigénico que é distinta da activação oncogénica de sinalização de Ras em tumores [37]. Estudos anteriores também demonstraram que a poluição arsénio está associada com DAPK e metilação RASSF1A no cancro da bexiga [39], [40]. Também pode ser um dos fatores que contribuem para este epigenotype metilação distinto.

Afinal, esta meta-análise ainda existem algumas limitações. Em primeiro lugar, os controlos incluíram na análise não eram uniformes. A maioria dos controles foram população saudável, enquanto alguns deles eram pacientes. Deste modo, alguns dos controlos, especialmente aqueles que têm doença benigna deve ter diferentes riscos que sofrem de cancro da bexiga. Em segundo lugar, havia apenas dois estudos de detecção de tecidos na análise de subgrupo. O tamanho da amostra foi pequeno demais para ter poder substancial para explorar a associação real. Em terceiro lugar, havia apenas seis literaturas matriculados em meta-análise da associação entre metilação e pTNM /série, e foi observada a heterogeneidade entre os estudos. Portanto, as RUP reunidas foram calculados pelo modelo aleatório. Em quarto lugar, as informações detalhadas (tais como idade, sexo e estilo de vida) não pôde ser rastreada para que nossas estimativas não ajustadas devem ser confirmados por novos estudos.

Conclusão

A nossa meta-análise sugerido que a detecção da metilação RASSF1A na urina vertida é uma ferramenta de diagnóstico não invasiva potencial no cancro da bexiga. É necessário realizar estudos de amostra grande de a associação entre a metilação RASSF1A eo risco de câncer de bexiga, acabou levando a nossa melhor compreensão.