Abstract
agrupamento familiar de câncer colorretal ocorre em 15-20% dos casos, no entanto reconhecido síndromes de câncer explicar apenas uma pequena fração desta doença. Assim, a base genética para a maior parte do cancro colorectal hereditário permanece desconhecida.
EPHB2
foi recentemente implicada como um gene supressor de tumor candidato para o cancro colorectal. O objetivo deste estudo foi avaliar a contribuição de
EPHB2
ao câncer colorretal hereditário. Nós selecionados para germinal
EPHB2
sequência de variantes em 116 familiares casos de câncer colorretal de base populacional por sequenciação de ADN. Em seguida, estimamos as freqüências populacionais e caracterizadas as atividades biológicas do EPHB2
variantes identificadas. Três novas alterações missense nonsynonymous foram detectados. Duas destas variantes (A438T e G787R) resultar em mudanças significativas de resíduos, enquanto o terceiro leva a uma substituição conservadora no domínio SAM carboxi-terminal (V945I). As duas primeiras variantes foram encontrados uma vez em 116 casos, enquanto a variante V945I estava presente em 2 casos. A genotipagem dos pacientes adicionais e controlo do cancro colorectal temas revelou que A438T e G787R representam raras
EPHB2
alelos.
In vitro
estudos funcionais mostram que a substituição G787R, localizado no domínio de cinase, faz com que a actividade do receptor de quinase deficiente e, portanto, é patogénico, ao passo que a variante A438T mantém a sua função de receptor e provavelmente representa um polimorfismo neutro. O tecido tumoral do caso variante G787R manifesta perda de heterozigosidade, com perda do alelo de tipo selvagem, apoiando um papel de supressor de tumor para
EPHB2
em raros casos de cancro colo-rectal. germinal rara
EphB2
variantes podem contribuir para uma pequena fração do câncer colorretal hereditário
Citation:. Zogopoulos G, Jorgensen C, Bacani J, Montpetit A, Lepage P, Ferretti V, et al. (2008) da linhagem germinativa
EPHB2
Receptor Variantes em Familial câncer colorretal. PLoS ONE 3 (8): e2885. doi: 10.1371 /journal.pone.0002885
editor: Jörg Hoheisel, Deutsches Krebsforschungszentrum, Alemanha |
Recebido: 20 de dezembro de 2007; Aceito: 03 de julho de 2008; Publicação: 06 de agosto de 2008
Direitos de autor: © 2008 Zogopoulos et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Este trabalho foi apoiado pelo Instituto Nacional do Câncer, dos Institutos Nacionais de Saúde, sob RFA # CA-96-011 (a SG) e através de acordos de cooperação com os membros do Colon Registro Familiar Câncer e PIs O conteúdo deste manuscrito não refletem necessariamente a posição nem as políticas do National Cancer Institute ou qualquer uma das instituições colaboradoras ou investigadores no cólon CFR, nem a menção de nomes comerciais, produtos comerciais ou organizações implica o endosso pelo governo dos EUA ou Colon CFR. Cancer Care Ontario, como a organização de acolhimento para o Projeto Genoma ARCTIC, reconhece que este projecto foi parcialmente financiado pela Genome Canada por meio do Instituto Ontario Genomics, por genoma Québec, o Ministério do Desenvolvimento ÿconomique et Régional et de la Recherche du Québec e Ontario Institute for Cancer Research. GZ é um estudioso da Sociedade de Cirurgiões da Universidade e um destinatário de um Terry Fox Foundation Research Fellowship do National Cancer Institute of Canada. TJH é um destinatário de um prêmio Clínico-Scientist em Pesquisa Translacional do Fundo Burroughs Wellcome
Conflito de interesses:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
cancro colorectal é uma doença maligna comum na sociedade ocidental, com 15-20% dos casos em desenvolvimento, com base em predisposição genética resulta [1]. No entanto, os reconhecidos síndromes-familiar de câncer colorretal polipose adenomatosa familiar (FAP), hereditário não-polipose câncer colorretal (HNPCC) e
MYH
-Associated polipose (MAP) -account por muito menos do que um terço dos herdada . cancro colo-rectal, deixando o componente hereditário desta doença adicional inexplicada [1]
na grande maioria dos cancros colo-rectais, mutacional activação da via de sinalização Wnt desempenha um papel essencial na iniciação tumorigénese [2] – [4 ]. Hiperativação de sinalização Wnt mais comumente ocorre no início do adenoma a sequência de carcinoma como consequência de mutações de inactivação no
APC
gene supressor de tumor ou ativar oncogênico
β-catenina
mutações. Estas alterações genéticas levar à activação constitutiva de β-catenina /TCF4 complexo, que, por sua vez, dirige a sobre-expressão da sinalização de Wnt alvos. Estes efectores a jusante da via de WNT incluem genes com um papel crítico no desenvolvimento de tumores colorrectais, tais como os
EphB
e
genes efrina
[5], [6].
um papel para
EPHB2
, um membro da família do receptor de tirosina quinase Ef, como um gene supressor de tumor, na carcinogénese colorrectal foi sugerida por várias descobertas recentes.
EphB2
mapas para a região cromossómica (1p36.1), muitas vezes excluída nestes tumores [7]. Além disso, estudos imuno-histoquímicos mostraram que a expressão de múltiplas isoformas EphB é frequentemente suprimida em tumores colorrectais humanos invasivos [8]. Além disso, Alazzouzi
et al
. têm mostrado recentemente uma alta incidência de
EphB2
mutações frameshift em microssatélites instável tumores colorretais e aberrante
EPHB2
metilação do promotor em ambas as neoplasias estáveis e instáveis microssatélites [9]. A perda da expressão EPHB2 em tumores colorrectais também tem sido associada a um pior prognóstico [10].
inactivação mutacional de
EPHB2
tem sido associada a carcinogénese da próstata. Huusko
et al.
Recentemente descrita uma variedade de
EphB2
mutações em tumores da próstata e em linhagens de células [11], e uma mutação nonsense comum tem sido associado com câncer de próstata em homens afro-americanos com uma história familiar dessa doença [12]. Estas conclusões tomadas juntamente com o papel estabelecido de receptores EphB em câncer colorretal, levaram-nos a hipótese de que germinal
EPHB2
mutações podem ser responsáveis por, pelo menos, uma fração das alterações genéticas subjacentes a parte inexplicável de câncer colorretal hereditário, e pode representar uma nova síndrome que causam câncer predisposição genética para câncer colorretal e de próstata. Portanto, neste estudo, foram selecionados 116 familiares casos de cancro colorrectal baseados na população para a linha germinal
EPHB2
mutações. Os 116 probands testados tinham pelo menos um adicional afetada parente de primeiro grau. Estes casos tiveram tumores microsatélites estáveis, e não preencheram os critérios diagnósticos para a FAP, HNPCC e MAP. Nós também enriqueceu a nossa série com indivíduos que preencheram os critérios de inclusão acima e tinham histórias pessoais ou familiares de cancro da próstata. Nossos resultados sugerem que raras
EPHB2
alelos contribuir para uma pequena fração do cancro colorectal familial.
Materiais e Métodos
Os sujeitos do estudo e DNA amostras
Biospecimens foram obtidos a partir da Familial Cancer Registry Ontario colorretal (OFCCR), um membro do Instituto do Câncer Cooperativa família Registros Nacionais de Estudos de Câncer Colorretal (https://epi.grants.cancer.gov/CFR/about_colon.html) [13]. O OFCCR inclui 3.770 casos de câncer colorretal diagnosticados na província de Ontário, Canadá, entre 1997-2000, com uma idade no momento do diagnóstico de 20 a 74. idade e indivíduos controles pareados por sexo sem história pessoal de câncer colorretal foram recrutados por telefone, de uma lista de números de telefones residenciais selecionados aleatoriamente para Ontário e do Rolls de Infração de base populacional do Ministério das Finanças de Ontário. Os sujeitos do estudo doou uma amostra de sangue venoso e linfócitos periféricos foram isolados usando Ficoll-Paque, de acordo com as recomendações do fabricante (Amersham Biosciences, Baie d’Urfe, Quebec, PQ, Canadá). O método de fenol-clorofórmio, foi utilizada para isolar o ADN genómico a partir de linfócitos e linhas celulares de cancro colo-rectal. O protocolo QIAamp (Qiagen Inc., Mississauga, Ontário, Canadá) foi utilizado para extrair ADN genómico a partir de tecidos embebidos em parafina. Todos os sujeitos do estudo assinaram termo de consentimento para participar de um Conselho de Ética em Pesquisa do Hospital Mount Sinai escrita estudo de pesquisa aprovado.
EPHB2
Mutation Screening
Usando o sequenciamento automatizado (Applied Biosystems 3730xl DNA Analyzer , Foster City, CA, EUA), nós selecionados para germinal
EPHB2
(Entrez Gene ID: 2048; RefSeq: NM_004442, NM_017449) variantes de sequência em 116 casos colorretais familiares (média de idade no momento do diagnóstico 54 anos, faixa 22 a 74 anos, 59 do sexo feminino, 57 do sexo masculino). Nossa análise incluiu pacientes com histórias pessoais (n = 6) e /ou familiares (pai, n = 19; irmão, n = 23; meio-irmão, n = 4) de câncer de próstata. Foram excluídos pacientes com FAP, HNPCC ou MAP. Uma série de linhas celulares de cancro colorrectal (Caco2, Colo320DM, Colo320HSR, HT29, LS513, LS1034, SW837, SW948, SW1417, T84) foram também pesquisados. Nós sequenciado toda a região de codificação e, pelo menos, 50 pb da sequência intrónica nas fronteiras exão /intrão. sequências de iniciadores de PCR e as condições são fornecidos na Tabela S1. Variantes identificadas são numerados em relação ao RefSeq NM_004442.
A438T, D679N e G787R Frequência dos alelos
Foram selecionados aleatoriamente uma amostra de casos e controles pareados da série OFCCR de estudos para avaliar a A438T, D679N e G787R alelo frequências. Amostras de DNA de linfócitos de uma série adicional de casos OFCCR (n = 364 para A438T; n = 1160 para D679N; n = 182 para G787R) e controles pareados por população (n = 384 para A438T; n = 1133 para D679N; n = 199 para G787R) foram testados para avaliar as frequências populacionais das variantes A438T, D679N e G787R. testes de genotipagem para os A438T, D679N e G787R variantes foram desenvolvidos usando Polarização de Fluorescência-Single Extensão Base (FP-SBE) [14], SNPstream [14] e RFLP, respectivamente (Tabela S2).
Pedigree and Loss de heterozigose (LOH) Análises
o teste para a segregação nas famílias dos probandos portadores das variantes A438T e G787R foi realizada por sequenciação directa, utilizando linfócitos ou DNA de arquivo de blocos de tecido embebidos em parafina. A perda de heterozigotia foi realizada por sequenciação de amostras de tumor emparelhado /normais de ADN e a sequência de arquivo comparando autorradiogramas para um decréscimo na intensidade do sinal não mutada comparada com a sequência mutada (Tabela S2). Estas reacções foram realizadas utilizando o kit de sequenciação do ciclo Thermo Sequenase Radiolabeled Terminator, de acordo com o protocolo do fabricante (Corporação USB, Cleveland, Ohio, EUA)
caracterização bioquímica do A438T Variantes G787R
O
A438T
e
G787R
variantes de sequências de ADNc foram geradas utilizando a mutagénese dirigida baseada em PCR e RefSeq NM_004442 (OriGene Technologies Inc., Rockville, MD, EUA) como molde. Os produtos de PCR foram clonados em pcDNA3 (Invitrogen Canada Inc.), e a sequência verificada. DU145 (um presente do Dr. Irene Andrulis, Samuel Lunenfeld Research Institute) foram cultivadas em MEM /FBS 10%. As células foram transitoriamente transfectadas com os vários
EPHB2
construções de ADNc (de tipo selvagem,
A438T
, ou
G787R
) utilizando lipofectamina 2000 (Invitrogen Canada Inc., Burlington, Ontário , Canadá), de acordo com as instruções dos fabricantes. Cinco horas após a transfecção, o meio foi mudado para meio de fome (MEM /FBS a 0,5%) durante 16 h. As células foram então estimuladas com 2 ug /ml preclustered efrina B1-Fc (efrina B1-Fc, R D Systems, Minneapolis, MN, EUA; anticorpo anti-Fc, Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc., West Grove, PA, EUA) para 30 minutos. EPHB2 transfectadas foi imunoprecipitado usando anti-soro anti-EPHB2 [15] e imunomarcados com anti-fosfotirosina (4G10, Upstate Biotechnology, Lake Placid, Nova Iorque, EUA) ou anti-EPHB2. Expressão e imunoprecipitação de variantes para EphB2
in vitro
ensaios de quinase foi realizada como acima, excepto as células foram deixadas não estimulado antes da lise celular e a imunoprecipitação, tal como anteriormente descrito por Holland
et ai. [16] Os géis foram analisados e quantificados utilizando um phosphorimager Storm (Molecular Dynamics Inc., Sunnyvale, Califórnia, EUA).
Resultados
triagem mutacional do
EPHB2
gene em 116 doentes com cancro colorectal familial identificados 3 alterações missense nucleotídeos novos e a variante D679N previamente sugerido por Huusko
et al.
[11] para ser patogênicos no cancro da próstata (Tabela 1). Três pacientes não relacionados foram encontrados serem portadoras do alelo D679N, diagnosticado com câncer colorretal nas idades de 57, 59 e 67 anos, respectivamente. No entanto, a análise posterior de temas adicionais sugere que D679N representa um neutro EPHB2
rara
polimorfismo, uma vez que o alelo variante foi observada com frequências semelhantes em pacientes com câncer colorretal (11 em 1133) e controles pareados por população (11 de 1160).
Nós também rastreados para
EphB2
mutações em 10 linhas celulares de cancro colorrectal e Caco2 foi encontrado para expressar uma variante nova, R4q (nt. 11 a → L), em adição ao receptor EPHB2 de tipo selvagem. A substituição de aminoácidos R4q pode causar uma alteração no péptido de sinal, o que pode levar a uma diminuição da expressão EPHB2. No entanto, a imunoprecipitação com anti-soro anti-EPHB2, seguida de imunotransf erência utilizando um anticorpo antifosfotirosina, demonstraram que apesar de carregar a variante R4q, a linha celular CAC02 produz um receptor funcional EPHB2 (dados não mostrados).
Dois dos três novas variantes nonsynonymous (A438T G787R) identificamos resultado em mudanças de resíduos bioquimicamente significativos e potencialmente patogénicas. O resíduo afectada pela substituição A438T está localizado no domínio extracelular de fibronectina de tipo III [17]. Uma vez que este domínio possa estar envolvido na ligação do ligando, que postularam que a variante A438T pode ter diminuído a actividade de ligação e função de sinalização. A variante G787R afecta um resíduo no domínio de cinase, e, portanto, esta substituição pode afectar directamente cinase do receptor e a actividade biológica [18]. A variante do terceiro romance (V945I) foi detectada em dois pacientes, e conduz a uma substituição conservada no terminal carboxilo extremo no domínio SAM [19]; nós não têm caracterizado este alelo mais.
A variante A438T foi encontrado em um paciente que tinha dois cânceres primários. Ele foi diagnosticado com câncer de próstata e um estábulo câncer de cólon microssatélites do lado direito com as idades de 61 e 64 anos, respectivamente (Figura 1A, a família 1). O pai do probando também carregava a variante A438T e é o único outro membro da família com câncer de cólon, ele foi diagnosticado com um microssatélite câncer sigmóide estável com a idade de 76 anos. Dos 6 membros familiares não afectados testados para esta mudança missense, 3 foram encontrados para transportar a variante A438T (Figura 1A). Sequenciação As análises de amostras de ADN genómico de tumor normal emparelhado revelou perda do tipo selvagem
EPHB2
alelo no cancro do cólon do probando, mas não no cancro do cólon do seu pai (dados não mostrados). tumor do pai manifestada LOH da variante, em vez do tipo selvagem,
EPHB2
alelo. Esta última observação pode refletir a perda frequente de região 1p36.1 cromossômica durante a tumorigênese [7], [8], e não a inativação alvo do
EPHB2
lócus por LOH.
+ /-, transportador; – /-, Não portador; LOH +, tecido de tumor colo-rectal foi encontrada para manifestar LOH, com perda do alelo de tipo selvagem; Ca, câncer.
A variante G787R foi detectado em um paciente com diagnóstico de câncer retal com a idade de 67 anos (Figura 1B, Família 2). Este tumor mostrou perda do alelo de tipo selvagem (Figura 2). O paciente também relatou uma história de cancro da tiróide tipo folicular na idade de 73 anos. Este probando foi seleccionada para rastreio de mutação por causa de uma história familiar de cancro colorectal no lado materno. No entanto, os dados de genotipagem revelou que o alelo variante G787R quer origina do lado paterno ou é o resultado de um
de novo
mutação (Figura 1B). A filha do probando é a única outra portadora desta variante, e ela é actualmente afectada com a idade de 45 anos.
Relativa para as intensidades das bandas de guanina na reacção de sequenciação, a intensidade do nucleótido guanina na posição 2359 é substancialmente reduzida na amostra do tumor, o que sugere a perda do alelo de tipo selvagem (G) no tumor, mas não no tecido normal adjacente (seta mostra nt. 2359).
Nós estimamos o freqüências alélicas das variantes A438T e G787R por rastreio de uma série adicional de casos de cancro colorectal de base populacional e os controles de idade e sexo pareados. Os resultados de genotipagem sugerem que estes dois alelos raros são variantes (Tabela 1). Nem variante foi detectada em indivíduos controle e eles não foram identificados em todos os casos adicionais de câncer colorretal. Portanto, para avaliar melhor o possível papel patogênico do A438T e variantes do receptor G787R, caracteriza a sua actividade de tirosina-quinase intrínseca.
A caracterização bioquímica das A438T e G787R isoformas revelou que que a variante G787R é funcionalmente prejudicada, enquanto que o mudança A438T provavelmente representa um polimorfismo neutro. células DU145, que não exprimem um receptor endógeno EPHB2 funcional [11], foram transfectadas transientemente quer com o receptor EPHB2 de tipo selvagem ou uma das duas variantes. Encontrámos diminuída autofosforilação do receptor de G787R, mas não a variante A438T, após a estimulação ephrinB1 em comparação com o receptor de tipo selvagem (Figura 3A). Confirmou-se que o receptor de G787R tem uma actividade catalítica reduzida, utilizando um ensaio de cinase in vitro. A capacidade do receptor de G787R para autophosphorylate ou de fosforilar o substrato a enolase era aproximadamente nove vezes mais baixa do que a do receptor do tipo selvagem (Figura 3B), demonstrando que a mutação G787R altera a actividade do receptor e não é um polimorfismo neutro rara.
Painel a: autofosforilação diminuída de EPHB2 variante G787R em resposta à estimulação ephrinB1. células DU145 foram transfectadas transitoriamente com construções de cDNA (vector vazio; de tipo selvagem, em peso; A438T; G787R) e para a esquerda não estimuladas (-) ou estimulado (+) com preclustered ephrinB1-Fc durante 30 min. EPHB2 foi imunoprecipitada (IP) e imunotransferidas (IB) com anti-fosfotirosina (4G10) para avaliar a autofosforilação do receptor. O lisado celular foi imunotransferidas com antiEPHB2 para verificar que não foi igual a eficiência da transfecção. Painel B: actividade quinase Abolished da variante EPHB2 G787R. Em ensaios de cinase in vitro foram realizados utilizando-tipo selvagem ou EPHB2 imunoprecipitados G787R e enolase como substrato exógeno. Antes da imagiologia ou immonoblotting contra EPHB2, as proteínas fosforiladas foram separadas por electroforese em gel e coradas com Coomassie. Autorradiograma mostrando
32PγATP incorporação nos EPHB2 e enolase (painel superior), immunoblot anti-EPHB2 (painel do meio) e igual carregamento de enolase é mostrado (painel inferior). A tabela mostra a atividade da quinase relativa do receptor EPHB2 do tipo selvagem (definido como 100%)
vs.
A variante G787R.
Discussão
O Ef família de receptores é o maior subgrupo conhecido da tirosina-quinases receptoras. Esta família é subdividida em duas classes distintas, EphA (A1 a A10) e EphB (B1 a B6), com base nas suas afinidades de ligação para duas famílias de ligandos ancoradas às membranas, com os nomes correspondentes de tipo A (A1 a A5) e B (B1 a B3), efrinas [19], [20]. Após ligação ao ligando, os receptores Eph activam as vias de repulsão celulares para modular a compartimentação celular e ordenou a migração celular numa variedade de processos biológicos [19].
Mouse Estudos em modelos animais têm mostrado que, no intestino delgado, os receptores EphB mediar proliferação de células estaminais intestinal [21], bem como migração de células epiteliais e organização ao longo do eixo das vilosidades da cripta-[5]. Desde que a perda de controle da atividade mitótico, padronização epiteliais e arquitetura do tecido são características de tumorigênese, a interrupção da expressão do receptor EphB normal e função provável promove carcinogênese colorretal. a expressão do receptor EphB constitutiva pode estimular a iniciação do tumor por perturbar a homeostase de células estaminais proliferativa, e silenciamento secundário da actividade do receptor EphB pode permitir a expansão das células cancerosas, para além dos limites espaciais impostas pela função receptor de EphB intacta para preencher as estruturas de tecido adjacentes, [5], [6 ], [21]. Em apoio a esta hipótese, e outros mostraram recentemente um papel causal para EphB inativação na progressão tumoral [22]. Descobrimos que
EphB2
ou
EphB3
silenciando em Apc
Min /+ ratos resulta em tumorigênese colorretal acelerado e mais agressivo.
No presente estudo, nós analisamos 116 população com base em casos familiares de cancro colorectal de mutações no gene supressor de tumor um candidato, EPHB2, e identificadas três variantes candidatos (A438T, D679N, G787R), que foram ainda caracterizados. Embora o alelo A438T não foi observada em indivíduos de controlo e foi encontrado para segregar com doença na Família 1, caracterização bioquímica sugere que A438T é um polimorfismo neutro rara; não se pode excluir a possibilidade de que afecta aspectos mais subtis de sinalização EPHB2, tais como a formação de oligómeros de ordem superior. A variante D679N foi previamente relatado para ser associado com o cancro da próstata [11]. Embora, ainda é possível que esta variante modula a predisposição ao câncer de próstata, nossos dados sugerem que isso ocorre com uma frequência população de cerca de 1% e que não faz, por si só, aumentar a susceptibilidade ao cancro colo-rectal. Observamos o alelo D679N em um número semelhante de pacientes com câncer colorretal e controles pareados por populacionais. Em contraste a estas últimas variantes, os nossos dados sugerem que a variante G787R é funcionalmente comprometida e pode ser uma causa rara de cancro colorectal hereditário. A variante G787R foi identificada em um paciente diagnosticado com câncer retal em 67 anos de idade, e caracterização bioquímica revelou que a substituição G787R marcadamente diminui a actividade da quinase intrínseca do receptor.
Houve duas outras investigações que examinaram a contribuição de germinal
EphB2
mutações a suscetibilidade ao câncer colorretal. Oba
et al.
Selecionados para
mutações EphB2
em tumores de cólon e respectivos tecidos normais do cólon de 50 pacientes com cancro colo-rectal, e identificou uma alteração intron 8 em uma amostra de tumor único, o que resulta em uma mutação nonsense. No entanto, não é claro se isto é uma mutação somática, como não há nenhuma indicação se esta alteração genética também foi observada na amostra de cólon normal, emparelhado [23]. Esta investigação também identificou 15 casos com LOH envolvendo a
gene EPHB2
e rastreados para mutações nos restantes
EPHB2
alelo. Uma vez que as mutações no alelo restante não foram identificados, Oba
et ai.
Sugeriu que
EPHB2
não é um gene supressor de tumor clássica. No entanto, uma vez que apenas 50 amostras de casos esporádicos prováveis de cancro colorectal foram analisados, um papel supressor de tumor para
EPHB2
não pode ser excluída. Em um estudo mais recente, Kokko
et al.
Relatado uma associação de três novas variantes com câncer colorretal [24]. alterações da linha germinativa resulta em missense I361V, R568W, D861N e foram observadas em doentes com cancro colorectal, mas não nos controlos saudáveis. No entanto, é possível que estas três variantes são raras polimorfismos neutros desde a importância biológica das variantes não foi avaliada utilizando ensaios funcionais directas. Os pacientes triados nestes dois últimos estudos não necessariamente têm histórias familiares significativos de câncer colorretal. Em contraste com estes dois relatórios anteriores, nosso estudo foi desenhado para avaliar especificamente o papel da linha germinal
mutações EphB2
em doentes com cancro colorectal familial, e não em casos esporádicos. Apesar das diferenças desenho do estudo, em conjunto, estes três investigações sugerem que
EphB2
mutações germinativas não são ocorrências comuns no cancro colorectal. Novas investigações de amostras maiores são necessários para confirmar esta observação.
Em resumo, identificamos uma linha germinal
EPHB2
variante (G787R), com actividade biológica diminuída em um paciente com câncer colorretal, e sugerem que
EphB2
mutações contribuem para uma pequena fração do câncer colorretal hereditário. A raridade da linha germinal
EPHB2
mutações suporta um papel mais significativo para EPHB2 na progressão do tumor colorretal em vez de iniciação do tumor. Uma vez que os receptores EphB (EPHB2, EPHB3 e EphB4) seguem um padrão semelhante de silenciamento transcricional em cânceres colorretais, todos os membros da família de receptores EphB provavelmente desempenhar um papel semelhante nesta doença. Portanto, a família EphB provavelmente é responsável por uma proporção menor de predisposição genética para o cancro colorectal, mas tem um papel importante na progressão do tumor. Embora os nossos resultados sugerem que o
EphB
gene da família não deve ser rotineiramente para mutações germinativas em casos familiares, o
EphB
genes são supressores de tumor candidatos, provavelmente representando casos raros de cancro colorectal familial .
Informações de Apoio
Tabela S1.
doi: 10.1371 /journal.pone.0002885.s001
(0.06 MB DOC)
Tabela S2.
doi: 10.1371 /journal.pone.0002885.s002
(0.05 MB DOC)
Reconhecimentos
Os autores agradecem ao Dr. D. Daftary, Ms. S. Holter, Ms. A. Janson por sua assistência com coleta de dados, e Ms. Joelle Fontaine, Ms. T. Selander eo Biospecimen Repository Mount Sinai Hospital para assistência técnica.