Abstract

Variantes genéticas no 15q25

CHRNA5-CHRNA3

lócus foram mostrados para influenciar o risco de câncer de pulmão no entanto, há controvérsia quanto a se as variantes têm um efeito cancerígeno direto sobre o risco de câncer de pulmão ou impactar indiretamente por meio de comportamento de fumar. Efetuamos uma análise detalhada do risco 15q25 variantes rs12914385 e rs8042374 com o comportamento de fumar eo risco de câncer de pulmão em 4.343 casos de câncer de pulmão e 1.479 controles da genética Lung Cancer Study Predisposição (Gelcaps). A forte associação entre rs12914385 e rs8042374, eo risco de câncer de pulmão foi mostrado, odds ratio (OR) foram 1,44, (intervalo de confiança de 95% (CI): 1,29-1,62,

P

= 3,69 × 10

-10) e 1,35 (95% CI: 1,18-1,55,

P

= 9,99 × 10

-6), respectivamente. Cada cópia de alelos de risco em rs12914385 e rs8042374 foi associado com o aumento do consumo de cigarro de 1,0 e 0,9 cigarros por dia (CPD) (

P

= 5,18 × 10

5 e

P

= 5.65 × 10

-3). Estas diferenças modestas geneticamente determinadas no comportamento de fumar pode ser mostrado ser suficiente para explicar a associação 15q25 com o risco de câncer de pulmão. Para comprovar o efeito indireto de 15q25 sobre o risco, restringimos nossa análise do risco de câncer de pulmão para que nunca fumaram e conduziram uma meta-análise de estudos publicados anteriormente de risco de câncer de pulmão em nunca fumaram. estudos Never-fumador publicados em Inglês foram apurados a partir estipulando PubMed – câncer de pulmão, de risco, de associação do genoma, os genes candidatos. Nosso estudo e cinco estudos publicados anteriormente forneceu dados sobre 2.405 não-fumante casos de câncer de pulmão e 7.622 controles. Na análise agrupada nenhuma associação foi encontrada entre o risco de câncer de 15q25 variação e de pulmão (OR = 1,09 IC 95%: 0,94-1,28). Este estudo confirma a associação 15q25 com o tabagismo e é consistente com uma relação indirecta entre o genótipo eo risco de câncer de pulmão

Citação:. Wang Y, Broderick P, Matakidou A, Eisen T, Houlston RS (2011) Chromosome 15q25 (

CHRNA3-CHRNA5

) Variação Impactos indiretamente sobre Lung Cancer Risk. PLoS ONE 6 (4): e19085. doi: 10.1371 /journal.pone.0019085

editor: Nicholas John Timpson, da Universidade de Bristol, Reino Unido

Recebido: 08 de novembro de 2010; Aceito: 28 de março de 2011; Publicação: 29 de abril de 2011

Direitos de autor: © 2011 Wang et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado pelo Cancer Research UK (C1298 /A8780 e /Fundo Moore Bobby A8362- C1298 para Cancer Research UK), que forneceu o financiamento principal para este estudo. Athena Matakidou foi o destinatário de uma bolsa de pesquisa clínica do Fundo Lerner J Allan. Os autores também são gratos à Rede Nacional de Pesquisa do Câncer, Helen Rollason Cure Cancer Charity e Sanofi-Aventis. Eles reconhecem NHS financiamento para o Centro de Investigação Royal Marsden biomédica. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

Conflito de interesses:. O trabalho foi parcialmente financiado pelo financiador comercial Sanofi-Anventis. Isto não altera a adesão dos autores para todos os PLoS ONE políticas sobre a partilha de dados e materiais. O financiador comercial Sanofi-Aventis declarou que não existem interesses conflitantes.

Introdução

Uma associação entre variantes comuns no

CHRNA5-CHRNA3 CHRNB4-

gene da subunidade receptor nicotínico cluster no cromossomo 15q25 e risco de câncer de pulmão foi relatado recentemente [1], [2], [3]; nomeadamente com o polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) rs1051730 e SNPs altamente correlacionados (incluindo rs12914385). Esta associação foi identificado pela primeira vez diretamente através de estudos genômicos de associação (GWA) de câncer de pulmão realizados por Amos et al [1] e Hung et al [2]. Em simultâneo com a publicação destes dois estudos Thorgeirsson et al [3] relatou uma associação estatisticamente significativa com os mesmos 15q25 variantes e métricas de dependência da nicotina, concluindo que este explicou o risco elevado de câncer de pulmão também observado. Antes destes estudos foi identificado o SNP rs16969968 15q25, que está correlacionada com rs1051730 através de estudos de genes candidatos como determinantes de dependência à nicotina [4]. A associação entre a 15q25 lócus marcado por rs16969968 /rs1051730 e outros correlacionados SNPs foi robustamente replicado para características relacionadas com o tabagismo, incluindo, cigarros por dia (CPD) e tabagismo pesado, em ambos os estudos de genes candidatos [5] e recentes grandes meta-análises de dados da GWA [6], [7], [8].

enquanto o risco de câncer de pulmão associado com 15q25 variantes relatados em vários estudos são comparáveis, ~1.3 risco relativo, os pesquisadores diferem quanto a saber se a associação é direta ou simplesmente reflexo da propensão a fumar e, portanto, o aumento da exposição aos carcinógenos do tabaco. Tem sido argumentado que a associação com CPD não é suficiente para explicar a associação entre 15q25 variação e cancro do pulmão risco [9], sugerindo um papel directo para 15q25 no desenvolvimento do câncer de pulmão. Esta possibilidade é suportado pela descoberta de um risco aumentado de câncer de pulmão, tanto em constante e nunca fumaram associado com 15q25 variantes de risco relatados por Hung et al [2]. A observação de riscos de câncer de pulmão maiores em estratos mais baixos expostas ao tabagismo e em indivíduos com história familiar da doença também tem sido interpretada para implicar 15q25 variantes, tanto o comportamento de fumar e directamente no cancro do pulmão [10]. O suporte para esta afirmação vem da constatação de que os riscos de câncer de pulmão associados com 15q25 variantes foram relatados para ser essencialmente inalterados após o ajuste para CPD [9]. Outros estudos, no entanto não conseguiu demonstrar uma associação de câncer de pulmão em não-fumantes levantar dúvida sobre um efeito direto do 15q25 locus no risco de doença [1], [10], [11].

genotipagem extensivo de a região 15q25 forneceu recentemente evidência de múltiplos sinais de associação que definem a dependência da nicotina dentro desta região cromossômica; especificamente um segundo provável locus da doença independente do rs1051730-rs16969968, que é anotado pelo altamente correlacionados rs8042374 SNP, rs6495309 e rs578776 [5], [6], [12].

Para explorar ainda mais a relação entre 15q25 variação e risco de câncer de pulmão, especificamente evidências para um efeito indireto, temos realizado uma análise detalhada da relação entre o loci dois 15q25 risco com o fenótipo de fumar quantificar impacto das variantes sobre o câncer de pulmão. Para proporcionar maior poder de demonstrar uma relação entre 15q25 genótipo eo risco de câncer de pulmão em nunca fumaram, foi realizada uma meta-análise, unindo os nossos resultados do estudo com dados publicados anteriormente.

Materiais e Métodos

O diagrama de fluxo para este estudo e apoiando lista de verificação PRISMA estão disponíveis como informação de apoio; veja Checklist S1 e Diagrama S1.

Ética Declaração

Recolha de amostras e informações clinico-patológico foi realizada com o consentimento informado e escrito e de acordo com os princípios da Declaração de Helsinki. Ética aprovação Review Board foi obtido a partir do Royal Marsden NHS Hospitals Trust and Comissão de Ética do Reino Unido Multicentre.

Os participantes do estudo e SNP genotipagem

Para avaliar 15q25 variação sobre o risco de câncer de pulmão nos derivados rs12914385 e genótipos rs8042374 do nosso relatado anteriormente estudo GWA de câncer de pulmão, que anotou os dois loci independente em 15q25 [12], [13]. rs12914385 é altamente correlacionado com as duas rs16969968 e rs1051730 (

D ‘

= 1,0, r

2 = 0,81, e

D’

= 1,0, r

2 = 0,83, respectivamente baseado em HapMap CEU) anotando assim o mesmo locus. detalhes completos do nosso estudo GWA foram relatados [12], [13]. Resumidamente, uma série de 4.343 casos de câncer de pulmão (2.782 do sexo masculino, idade média no momento do diagnóstico de 66 anos) foram apurados através da genética Lung Cancer Study Predisposição (Gelcaps) [14]. Todos os casos tinham confirmado patologicamente câncer de pulmão. Para controles que genotipados 1.479 indivíduos saudáveis ​​(461 do sexo masculino, com idade média na amostragem de 63 anos) determinado com base em cápsulas de gel. Dados quantidade de fumar detalhada estava disponível em 4.019 casos e 907 controles. Definimos fumantes em ambos os casos e controles com base em ter tido uma exposição da vida de mais de 100 cigarros. A história familiar de câncer de pulmão em casos foi baseada na definição de ter pelo menos um parente de primeiro grau afetados com câncer de pulmão. Ambos os casos e controles eram residentes britânicos e auto-relatados de ser de ascendência europeia. A genotipagem foi realizada utilizando BeadChips Ilumina Human550 e matrizes Ilumina Infinium de acordo com os protocolos do fabricante, tal como descrito anteriormente [12], [13]. Para garantir a qualidade de genotipagem, uma série de amostras em duplicado e foram incluídos os casos e os controlos foram genotipados nos mesmos lotes. Nós já confirmou a ausência de diferenças genéticas sistemáticas entre casos e controles e mostrou nenhuma evidência de estratificação populacional nesses conjuntos de amostras [12], [13].

A análise estatística

O risco de câncer de pulmão associado com SNP genótipo foi avaliado por RUP e

P

-Valores derivado do teste de Cochran-Armitage meio de regressão logística. Desvio das freqüências dos genótipos nos controles das esperadas sob Hardy-Weinberg (HWE) foi avaliada pela χ

2 de teste. Para analisar o impacto do genótipo sobre o comportamento de fumar, testamos tendência no consumo de cigarros, que foi avaliada por log transformado CPD, iniciação ao tabagismo, cessação e duração por meio do teste de Cochran-Armitage. Para explorar a possibilidade de que o genótipo influencia a idade de início de câncer de pulmão, realizamos teste de Cochran-Armitage sobre a idade média de diagnóstico entre os estratos genótipo em ambos os fumantes e nunca fumaram. Idade, sexo e tabagismo foram ajustados em todos os testes, quando apropriado. Quando ajustado para, a quantidade de fumar e duração foram introduzidos usando a transformação ideal derivado pelo método Box-Cox.

O risco atribuível populacional (RAP), que quantifica a proporção do risco total de câncer de pulmão que é devido ao o efeito genético de que o locus foi estimada utilizando as fórmulas:., onde é a prevalência nos controles do alelo de risco de câncer de pulmão no locus, e é o OR do alelo de risco no locus

Nós estimamos o risco familiar relativo de câncer de pulmão atribuível ao comportamento de fumar usando a metodologia previamente publicado [15].

Todas as análises estatísticas foram realizadas em R (v2.8) software. Em todas as análises estatísticas foi considerada uma frente e verso

P

-valor de 0,05 ou menos para ser estatisticamente significativa.

Meta-análise

identificação do estudo.

para identificar os estudos previamente publicados relatando a relação entre 15q25 variação e risco de câncer de pulmão em nunca fumaram que interrogou o banco de dados eletrônico PubMed (a partir de Janeiro de 1996 até ao final de julho de 2010). A estratégia de busca incluiu as palavras-chave “de câncer de pulmão, de risco, de associação ampla de genoma, os genes candidatos”. Temos procurado por quaisquer estudos adicionais nas bibliografias de publicações identificadas, incluindo artigos de revisão anteriores.

Os critérios de seleção.

Os estudos foram elegíveis se eles foram baseados em indivíduos não aparentados e examinaram a associação entre o câncer de pulmão eo genótipo polimórfico na 15q25 em nunca fumantes. Somente estudos publicados como artigos completos ou letras em revistas e jornais em Inglês foram incluídos na análise.

Extração de dados.

Os dados de análise, incluindo desenho do estudo, tamanho da amostra, etnia , bem como freqüências alélicas e genotípicas, foram extraídos dos artigos publicados e resumidos de forma consistente para auxiliar comparação. Quando um estudo relatou resultados em diferentes sub-populações de acordo com a etnia, consideramos cada sub-população como um estudo separado na meta-análise.

A análise estatística.

Os dados brutos de freqüências genotípicas de 15q25 rs16969968 variante e seus aliados, foram utilizados para o cálculo das estimativas específicos de estudo de OR e IC. Meta-análise foi realizada em ambos os modelos de efeitos fixos e aleatórios, estimando estatística Q de Cochran para testar a heterogeneidade e o I

2 estatística para quantificar a proporção da variação total entre os estudos [16], [17]. Para lidar com a heterogeneidade entre os estudos que derivou uma odds ratio agrupada sob um modelo de efeitos aleatórios [16]. Uma estimativa do potencial de viés de publicação foi realizada pelo exame de parcelas do funil. Uma trama assimétrica é o reflexo de viés de publicação. A simetria gráfico de funil foi avaliada pelo teste de Egger baseado em inverso-variância de regressão ponderada do tamanho do efeito padronizado (OU /o erro padrão (SE) de OU) na sua precisão (1 /SE) para testar se a intercepção se desvia significativamente de zero. O significado do pool ou foi determinada pelo Z-teste e

P

. 0,05 foi considerado estatisticamente significante

Resultados

As características dos pacientes com câncer de pulmão e série de controle estudados são detalhadas na Tabela 1. de acordo com a relação estabelecida entre o fumo eo risco de câncer de pulmão, os casos de câncer de pulmão apresentaram taxas estatisticamente significativamente mais elevados de CPD e embalar anos (

P

= 2.55 × 10

-23 e

P

= 2.00 × 10

-13, respectivamente). Além disso, houve, contudo, uma forte tendência no CPD entre os grupos etários; casos no quantil superior com um consumo de cigarros de 3,2 CPD menos do que aqueles no menor quantil idade (

P

= 3.01 × 10

-21).

Os genótipos foram obtidos para 95% dos casos e controlos para rs12914385 e rs8042374 (Tabela 2). Não havia nenhuma evidência de qualquer desvio sistemático em genotipagem e houve uma concordância completa de genótipos SNP entre as amostras duplicadas. A freqüência do alelo de cada SNP nos controles foi semelhante aos dados anteriormente publicados sobre a população da Europa do Norte (população HapMap, CEU). Além disso, não havia nenhuma evidência de estratificação da população como a distribuição dos genótipos em ambas as séries de controle para cada um dos SNPs satisfeito HWE.

Impacto da 15q25 genótipo sobre o câncer de fumar e de pulmão em fumantes

Ambos os SNPs mostrou associação estatisticamente significativa com o risco de câncer de pulmão de uma forma dependente da dose forte em fumantes (OR = 1,43 e 1,32, respectivamente; Tabela 2). Essas associações permaneceram estatisticamente significativa após ajuste para idade, sexo e CPD categorizados (Tabela 2). Com base no risco associado a cada uma das variantes ~ 30% do PAR de câncer de pulmão é sublinhada pela variação 15q25 em fumantes.

Houve uma significativa 1,2 vezes sobre-representação de rs12914385 e rs8042374 alelos de risco entre os casos de câncer de pulmão que tinham relatado uma história familiar de câncer de pulmão. (Tabela 2;

P

-Valores para o caso somente a análise, 0,004 e 0,03, respectivamente)

Nós examinamos a relação entre o genótipo eo comportamento de fumar em primeiro lugar, considerando CPD como uma característica quantitativa (Tabela 3). Observou-se uma forte correlação entre o consumo de cigarro e genótipo de risco, tanto 15q25 loci em casos (Tabela 3). Enquanto uma relação semelhante entre o fumo eo genótipo foi mostrado em controles não foi estatisticamente significativa (Tabela 3). É provável que isso simplesmente refletir pequeno tamanho da amostra e poder, portanto, limitado a demonstrar uma relação, como enquanto nós tivemos 90% de poder para demonstrar uma relação entre 15q25 genótipo e CPD (1 CPD por alelo de risco) em casos, para poder controles foi única ~ 50% estipulando um

P

-valor de 0,05. Em casos aqueles homozigotos para rs12914385 e risco rs8042374 alelos fumaram em média 2,0-2,3 CPD mais do que indivíduos homozigotos para alelos não-risco (Tabela 3); o impacto correspondente de rs12914385 e rs8042374 genótipo em CPD nos casos era 0,9-1,0 por alelo (dados não mostrados). Em segundo lugar, foi examinada a relação entre genótipo e tabagismo pesado, definido como 20 CPD. Nos casos de câncer de pulmão foi mostrado uma forte relação entre genótipo de risco SNP e consumo de cigarros pesado (Tabela 4).

Nós determinamos se a iniciação do tabagismo ou a cessação foi modificado pelo 15q25 genótipo, entre sempre -smokers. Não observamos associação estatisticamente significativa entre o genótipo em qualquer lugar com a iniciação do tabagismo em casos isolados ou controla sozinha ou em indivíduos combinados entre nunca fumantes. Da mesma forma que não encontrou provas de que o genótipo modificado idade de cessação entre os ex-fumantes (dados não mostrados).

Em seguida, examinaram a possibilidade de que o genótipo pode influenciar a idade de início de câncer de pulmão. teste de tendência Armitage foi utilizado para detectar tendência na média de idade de início entre grupos de genótipos. Para genótipo de risco rs12914385, portadores homozigóticos tinham uma idade média de diagnóstico de 64,7 anos, em comparação com 65,7 e 66,4 anos no heterozigoto e portadores do genótipo do tipo selvagem respectivamente (

P

= 0,0001). Correspondente média de idade no momento do diagnóstico pelo genótipo rs8042374 foram 65,5, 66,4 e 66,8 anos, respectivamente (

P

= 0,003). Estas diferenças permaneceram estatisticamente significativa após correção para o sexo e CPD e duração do hábito de fumar utilizando a modelagem linear. A duração média de fumar para portadores de alelos de risco em rs12914385 ou rs8042374 foi um ano mais elevada do que a de não-portadores (44 vs 43 anos e 43 vs 42 anos, respectivamente), embora não significativa.

Impacto da 15q25 genótipo sobre câncer de pulmão em não-fumantes

na nunca fumaram comparação das freqüências genotípicas nos casos e controles fornecida nenhuma evidência de que o risco de câncer de pulmão é influenciado por qualquer rs12914385 ou genótipo rs8042374 (Tabela 2). Foi examinada a possibilidade de que 15q25 genótipo pode influenciar idade de aparecimento de câncer de pulmão em nunca fumaram. Para genótipo de risco rs12914385, portadores homozigóticos tinham uma idade média de diagnóstico de 65,8 anos, em comparação com 65,6 e 66,0 anos no heterozigoto e portadores do genótipo do tipo selvagem respectivamente (

P

= 0,99). Correspondente média de idade no momento do diagnóstico pelo genótipo rs8042374 foram 66,8, 64,1 e 66,2 anos, respectivamente (

P

= 0,31).

Para maximizar a possibilidade de identificar uma associação entre 15q25 genótipo e do câncer de pulmão em nunca fumantes foi realizada uma meta-análise reunindo nosso estudo com estudos caso-controle publicados anteriormente. Foram recuperados 95 estudos utilizando nosso critério de pesquisa (Figura 1). Cinco destes 95 estudos preencheram os critérios pré-determinados para a inclusão; dois foram baseados em caucasianos [10], [11], um na população japonesa [18], e dois estudos de caso-controle relatados de vários países [2], [19]. Os dados apresentados por Amos et al [1] é substituído pelo estudo e foi, portanto, não analisados. O rs16969968 e rs1051730 SNPs foram genotipados cada em cinco dos estudos e rs8034191 publicados em um. Como rs12914385, rs1051730 e rs8034191 estão altamente correlacionados com rs16969968 (

D

‘= 0,98-1,00 e r

2 = 0,81-0,98, baseado em HapMap CEU) cada SNP pode ser considerado como proxies para outro. Enquanto as freqüências alélicas menores de rs1051730 e rs16969968 são mais baixos em japonês (0,013, 0,013) do que em caucasianos (0,35, 0,35), o haplótipo definido pelos alelos SNP risco é associados com o risco de câncer de pulmão na população japonesa [18]. Dadas as fortes correlações entre genótipos SNP que, portanto, considerado rs8034191, rs1051730, rs16969968 e rs12914385 como a definição de um único locus genético e conduziram uma meta-análise de seis estudos sobre esta base. Colectivamente estes cinco estudos e nosso estudo forneceu dados sobre um total de 2.405 não-fumante casos de câncer de pulmão e 7.622 controles. Meta-análise desses seis estudos não forneceram evidências de uma associação estatisticamente significativa entre o genótipo 15q25 e risco de câncer de pulmão em nunca fumaram; OR = 1,06 (IC 95%: 0,99-1,15,

P

= 0,12) (Figura 2). Houve, no entanto entre os estudos heterogeneidade (

P

het

= 0,008, eu

2 = 68%), eo pool ou sob um modelo de efeitos aleatórios foi de 1,09 (IC 95%: 0,94 -1,28,

P

= 0,26). Entre estudo de heterogeneidade foi em grande parte atribuível a inclusão do estudo japonês. Omitindo este estudo da heterogeneidade análise entre-estudo não foi significativa, mas a associação permaneceu não significativa com um pool ou de 1,05 (95% CI: 0,97-1,13,

P

= 0,20;

P

het

= 0,06, I

2 = 56%). No viés de publicação foi encontrada examinando quer a trama funil ou teste formal de Egger (

P

= 0,34).

As caixas representam OU estimativas pontuais, suas áreas, sendo proporcional ao inverso da variância peso da estimativa. As linhas horizontais representam intervalos de confiança de 95%. Diamond (e linha quebrada) representa o resumo ou calculado sob um modelo de efeitos fixos, com intervalo de confiança de 95% determinado pela sua largura. A linha vertical ininterrupta está no valor nulo (OR = 1,0).

Discussão

Enquanto uma associação entre 15q25 variação e risco de câncer de pulmão está agora bem estabelecido atualmente não há consenso sobre o impacto relativo de variantes na propensão a fumar contra um efeito cancerígeno directo. Neste estudo, realizamos uma análise detalhada do 15q25 variantes, comportamento de fumar e de risco de câncer de pulmão em uma série de base populacional dos casos de câncer de pulmão para obter insights sobre a base subjacente desta associação câncer.

Confirmamos anterior observações de uma forte relação entre os dois 15q25 loci anotados por rs12914385 e rs8042374 tanto com o comportamento de fumar eo risco de câncer de pulmão. Descobrimos que para cada fumantes do locus com duas cópias do alelo de risco fumava em média, mais de duas CPD do que aqueles homozigotos para alelos não-risco.

Grande parte da afirmação de que 15q25 variação tem um efeito direto sobre o risco de câncer de pulmão ao invés de ser apenas um proxy para fumar vem da observação de que a associação de câncer de pulmão não é contabilizada pela relação com a quantidade de fumar. Aplicando o modelo Doll e Peto [20] da relação dose-resposta entre tabagismo e câncer de pulmão para aqueles com idade 16-25 fumar 40 CPD, Brennan e colegas de trabalho estimou que uma diferença de 1,2 no CPD entre homozigotos rs16969968 só resulta em um aumento de 9% no risco de câncer de pulmão [9]. Isto é substancialmente menor do que a associação observada entre rs16969968 eo risco de câncer de pulmão. Enquanto descobrimos que o ajuste para CPD teve pouco efeito sobre a estimativa do risco de câncer de pulmão associado com 15q25 variantes, que tem sido consistentemente demonstrado que para homens e mulheres, o número de anos de fumo de cigarro é muito mais importante do que a CPD na previsão de câncer de pulmão risco [20], [21]. No modelo de Peto e Boneca o risco de câncer de pulmão em homens com idades entre 40-79 anos é proporcional (CPD + 6)

2 (idade 22,5)

4.5 [20]. Sob este modelo, mesmo uma diferença de 1,0 CPD irá explicar a diferença observada no risco de câncer de pulmão se genótipo influencia a duração do hábito de fumar por um ano durante um período de 30 anos. Foi previamente demonstrado que

CHRNA3-CHRNA5

variantes influência vício precoce de tabaco [22] e estudos recentes têm demonstrado que 15q25 genótipo influencia a capacidade de parar de fumar [23]. Assim, é provável que os portadores de 15q25 genótipos de risco vai fumar de forma mais consistente ao longo de um período mais longo e ter um comportamento mais sustentado fumar. Embora não encontramos forte relação entre tabagismo e genótipo em casos de câncer de pulmão nossos resultados do estudo são concordantes com esta hipótese.

Uma sobre-representação de 15q25 alelos de risco em casos de câncer de pulmão familiares e associação com início precoce doença tem sido sugerido para fornecer evidência para um efeito directo de variantes no risco de cancro de pulmão. É, no entanto bem estabelecido que o comportamento de fumar tem um elevado hereditariedade (0,5-0,7) [24]. Uma vez que o risco relativo de câncer de pulmão associado com o tabagismo é ~ 30 [25] o risco de câncer de pulmão familial diretamente atribuíveis à propensão herdada para o fumo é ~1.4 se 10% -25% da população consistentemente fumar. Tal como acontece com os 15q25 lócus qualquer sobre-representação das variantes no câncer de pulmão familiar ou de início precoce pode ser facilmente contabilizado através de um mecanismo indireto. É interessante notar a este respeito que, embora 15q25 variantes de risco foram associados com doença de início precoce em fumantes sem tal associação foi observada em casos de câncer de pulmão não-fumante. Além disso dado que o risco relativo familiar de câncer de pulmão é ~1.7 [26], o comportamento geneticamente determinado fumar é susceptível de contribuir de forma significativa para o agrupamento observado de câncer de pulmão.

O design do nosso estudo é muito semelhante ao outros estudos de caso-controle que anteriormente investigaram a relação entre a variação polimórfica eo risco de câncer de pulmão. Embora os dados sobre diagnósticos de câncer de pulmão são derivadas de registros histológicos, detalhes sobre o comportamento de fumar foi obtido por meio de questionários auto-administrados; assim, existe uma diferença qualitativa no robustez destes dois pontos finais utilizados na nossa análise. Auto-relato de dados sobre tabagismo comportamentos há várias décadas é inerentemente problemática. o uso do cigarro tem sido demonstrado ser comumente sub-relatada pelos fumantes em estudos que correlacionam o uso do cigarro auto-reportados com níveis de cotinina [27]. Se subnotificação hábito de fumar ou consumo do cigarro difere entre casos e controles esta é uma fonte potencial de viés significativo no estabelecimento de uma associação direta entre a 15q25 lócus eo risco de câncer de pulmão. Isto é especialmente preocupante como 15q25 influências genótipo comportamento de fumar. Além destes problemas tem sido demonstrado que os portadores de variantes de risco extrair uma maior nitrosaminas carcinogénicas, por dose de cigarro [28]. Enquanto auto-reportados CPD permitiu uma associação entre 15q25 e fumar deve ser demonstrada, mesmo que avaliada com precisão CPD não têm em devida conta a carga cancerígeno. Em vista disso, os ajustes simples usando métricas CPD auto-relatados é provável que seja abaixo do ideal para trazendo à tona efeitos diretos sobre o risco de câncer de pulmão e talvez não seja surpreendente que tamanhos de efeito para muitos 15q25 associações de câncer de pulmão parecem relativamente inalterado quando ajustes simples são feitas . futuros estudos epidemiológicos destinados a demonstrar um efeito direto do 15q25 no risco de câncer de pulmão deve levar em consideração a questão significativo potencial de confusão no desenho do estudo.

Os fortes dados epidemiológicos que apoiam um papel direto da variação genética em 15q25 como um fator de risco para câncer de pulmão seria fornecido pela demonstração de uma associação em que nunca fumaram. Enquanto o nosso próprio estudo do que nunca fumaram foi relativamente pequeno que tinha% de energia ~ 80 para demonstrar uma associação de câncer de pulmão assumindo um OR de 1,3. Embora este tamanho do efeito é comparável à observada para a associação de câncer de pulmão em fumantes pode-se afirmar que qualquer associação direta pode ser mais modesto. No entanto, o meta-análise foi realizada falharam em demonstrar uma relação significativa, apesar de ter em excesso de 80% de energia para mostrar um risco relativo de 1,1. Portanto, se há um efeito direto de 15q25 no risco de câncer de pulmão é susceptível de ser ofuscado pelo efeito indireto.

Embora nossos dados favorece, assim, um efeito indireto da 15q25 variação no risco de câncer de pulmão não podemos excluir totalmente a possibilidade de efeito directo. O teste de ácido provar um efeito directo é susceptível de ser dependente de ensaios biológicos. A prova de que a nicotina ou é cancerígeno ou co-cancerígenas ou funções como promotor de tumor de câncer de pulmão iria apoiar a plausibilidade de uma relação direta entre o risco 15q25 lócus e câncer de pulmão. Há evidências de que as variantes na região estão associados com a diminuição da expressão de

CHRNA5

nos pulmões e que

CHRNA5

expressão é superior em cancros do pulmão que favorecem um papel directo [29]. Enquanto a rs16969968 SNP é um SNP não-sinónimo causando a substituição D398N em

CHRNA5

e enquanto causas 398N diminuição da resposta a um agonista de nicotina [30], um papel directo desta variante na biologia do câncer de pulmão, até agora, não tem foi demonstrado. Além disso dados atualizados sobre o efeito direto da nicotina sobre a biologia do cancro do pulmão são escassos e inconsistentes (revisto em [31]).

Em conclusão, os resultados de nossas análises reafirmam a forte relação entre o 15q25 lócus e ambos fumar eo risco de câncer de pulmão. No entanto, os nossos resultados não fornecem evidência de efeito directo do 15q25 no risco de câncer de pulmão e é possível explicar esta associação em fumantes através da influência sobre o comportamento de fumar. Afirmação de um efeito direto de variantes sobre o risco de cancro do pulmão é actualmente fraca e isso não deve diminuir os esforços concertados para reduzir a incidência do cancro do pulmão através de iniciativas de saúde pública para reduzir o tabagismo. . Tendo em conta que 15q25 variação influencia o comportamento de fumar é possível que ensaiar 15q25 genótipo pode ter utilidade cuidados de saúde para ajudar a adaptação de estratégias de cessação do tabagismo

URLs

A suite R podem ser encontradas em http: //www.r-project.org/

HapMap: https://www.hapmap.org/

Informações de Apoio

Checklist S1. Lista de verificação

PRISMA.

doi: 10.1371 /journal.pone.0019085.s001

(DOC)

Diagrama S1.

PRISMA diagrama de fluxo.

doi: 10.1371 /journal.pone.0019085.s002

(DOC)

Reconhecimentos

Nós gostaríamos de agradecer a todos os indivíduos que participaram neste estudo e os médicos que tomaram parte no consórcio gelcaps.