Sumário
RAD52
é um importante, mas não foi bem caracterizado gene de reparação de recombinação homóloga que se pode ligar a extremidades de cadeia simples de ADN e mediar a interacção ADN-ADN necessário para o recozimento de complementar cadeias de ADN. Para avaliar o papel da
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variantes na resposta das células tumorais aos agentes de platina, investigamos as suas associações com resistência de platina e prognóstico em pacientes com câncer cervical. Foram incluídos 154 pacientes com carcinoma de células escamosas do colo do útero, que passou por uma cirurgia radical entre 2008 e 2009, e genotipados três
RAD52
variantes potencialmente funcionais pelo ensaio instantâneo. Testamos
in vitro
resistência de platina e de expressão RAD52 usando os métodos MTT e de imunohistoquímica, respectivamente. Em 144 casos que tiveram dados de genotipagem, descobrimos que tanto a variante rs1051669 e expressão da proteína RAD52 foram significativamente associados com a resistência à carboplatina (
P
= 0,024 e 0,028, respectivamente) e rs10774474 com a resistência nedaplatina (
P
= 0,018). A variante rs1051669 foi significativamente associada com a expressão da proteína RAD52 (OR ajustado CI = 4,7, 95% = 1,4-16,1,
P
= 0,013). Quando estes três
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variantes foram combinados, sobrevida livre de progressão foi menor nos pacientes que realizaram pelo menos um (≥1) alelo variante em comparação com aqueles sem nenhum dos alelos variantes (
P
= 0,047). Portanto, tanto
RAD52
variantes e expressão da proteína pode prever resistência de platina, e
RAD52
variantes parecia predizer o prognóstico em pacientes com câncer do colo do útero. Grandes estudos são necessários para validar esses achados
Citation:. Shi T-Y, Yang G, Tu X-Y, Yang J-M, Qian J, Wu X-H, et al. (2012)
RAD52
Variantes prever a resistência de platina e prognóstico do câncer do colo do útero. PLoS ONE 7 (11): e50461. doi: 10.1371 /journal.pone.0050461
editor: Shannon M. Hawkins, Baylor College of Medicine, Estados Unidos da América
Recebido: 16 de julho de 2012; Aceito: 22 de outubro de 2012; Publicação: 29 de novembro de 2012
Direitos de autor: © 2012 Shi et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Este estudo foi apoiado pela Science Foundation for Young Scholars da Universidade de Fudan. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
o câncer cervical é o terceiro câncer mais comumente diagnosticado ea quarta principal causa de morte por câncer em mulheres, sendo responsável por 9% (529.800) de todos os novos casos de cancro e 8% (275.100) de todas as mortes por câncer entre as mulheres em 2008 no mundo [1]. Mais de 85% destes casos e mortes ocorrem nos países em desenvolvimento, incluindo a China [1]. quimioradioterapia simultâneo é a terapia padrão mais utilizado para pacientes com carcinoma de células escamosas do colo do útero (CSCC) que têm localmente avançado [2], [3] e recorrente e /ou metastático [4] doenças. No entanto, quimiorresistência primária ou adquirida é um grave problema clínico que contribui para a mortalidade a recorrência da doença, a progressão e específica da doença [5] – [7]. O mecanismo de resposta heterogénea subjacente dos pacientes é multifatorial e pode incluir vários fatores genéticos. Alguns desses fatores genéticos podem de forma confiável e prospectivamente ser avaliada pelo seu papel na determinação da resposta a agentes anticancerígenos.
reparação do ADN é a principal responsável para a reparação e /ou remoção de adutos-DNA de platina. Esta reparação do DNA envolve as actividades coordenadas de mais de 20 enzimas que removem e restaurar um segmento de ADN contendo um aducto volumoso [8]. reparação de recombinação homóloga (FCR) é um dos principais mecanismos de reparação do ADN para reparar quebras de cadeias duplas (DSB) durante a fases S e G2 [9], que é um mecanismo de defesa celular contra os efeitos citotóxicos de agentes quimioterapêuticos à base de platina [10] – [13].
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, tal como um gene de HRR relativamente menos bem caracterizado, abrange 37,6 kb no cromossoma 12p12.2-13 e codifica para uma proteína com 417 aminoácidos, que se pode ligar a extremidades de cadeia simples de ADN e mediar a interacção ADN-ADN necessário para o recozimento de cadeias de ADN complementares [14]. Recentemente, Tassone et ai. relataram que uma sobre-expressão de
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ARNm em células HCC1937 BRCA1 defeituoso foi associada com elevada sensibilidade a compostos derivados de platina [15]. Portanto, a hipótese de que
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podem estar envolvidos na resistência de platina em células cancerosas.
Polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) em genes envolvidos na reparação do ADN podem afetar locais de ligação de proteína ou afinidade ou causar alterações na estrutura da proteína e, assim, podem modificar as funções dos genes e tornar as células de cancro mais sensíveis a um tratamento de platina [16], [17]. Até o momento, poucos estudos relatados investigaram associações de
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SNPs com o risco de malignidade [18], [19], e nenhum avaliou isso com chemoresistance. No presente estudo, avaliou-se a associação de três potencialmente funcional
RAD52
SNPs com
in vitro
resistência de platina e prognóstico em pacientes com CSCC.
Materiais e Métodos
Ética Declaração
Este projeto foi aprovado pelo Institutional Review Board de Fudan University Shanghai Cancer Center (FUSCC). Um consentimento informado foi obtido de todos os indivíduos recrutados, e cada investigação clínica foi realizada de acordo com os princípios expressos na Declaração de Helsinki consentimento.
Os pacientes
No presente estudo, foram recrutados 154 pacientes cSCC que tiveram histerectomia radical e linfadenectomia pélvica entre março de 2008 e março de 2009, na Fudan University Shanghai Cancer Center (FUSCC). Todos os casos foram confirmados histologicamente ser carcinoma de células escamosas por dois patologistas ginecológicas (XYT e Gy). A informação clínica detalhada foi extraído do banco de dados eletrônico do paciente no FUSCC e idade, estágio do tumor incluído (FIGO, Federação Internacional de Ginecologia e Obstetrícia, 2009), o tamanho do tumor (ou seja, o maior diâmetro do tumor relatado pelo patologista após a ressecção cirúrgica) , linfonodos pélvicos (LN) metástases, linfo-vascular invasão do espaço (Lvsi) e profundidade de invasão do estroma cervical. Os pacientes foram acompanhados a cada três meses durante os primeiros dois anos, a cada seis meses para os próximos dois anos, e anualmente para os anos seguintes depois. A análise de todas as amostras de sangue e tecidos foi realizado de forma cega em relação ao status chemoresistance e sobrevida dos pacientes.
SNP Seleção
Os SNPs foram selecionados do banco de dados do NCBI dbSNP (http : //www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP), o banco de dados International HapMap Project (https://hapmap.ncbi.nlm.nih.gov/) eo software de previsão função SNP (FuncPred) (http : //snpinfo.niehs.nih.gov/snpfunc.htm) com base em quatro critérios: 1) localizados nas duas extremidades do
gene RAD52
[isto é, flanqueante 5 ‘, a região 5′ não traduzida (UTR), 3′-UTR, 3’-flanqueadora], 2) tinha uma frequência do alelo menor de pelo menos 5% em populações chinesas, 3) em baixo desequilíbrio de ligação usando um
R
2 limite de 0,8 para o outro, e 4) previu SNPs como potencialmente funcionais do microRNA (miRNA) sites ou fator de transcrição locais de ligação de ligação. Como resultado, três
foram seleccionados RAD52
SNPs, e eles são rs1051669G A (3′-UTR), rs10774474A T (flanqueante 5 ‘) e rs11571378T . Um (flanqueante 5’)
Extracção de DNA e genotipagem
o ADN genómico foi obtido a partir de amostras de sangue total, utilizando um ADN inteiro Kit QuickGene sangue (Fujifilm Co., Tóquio, Japão) de acordo com as instruções do fabricante. pureza do DNA e concentração foram determinadas por espectrofotometria de absorção a 260 e 280 nm por Synergy ™ 4 Multi-Modo Microplate Reader (BioTek, Winooski, VT).
Os SNPs seleccionados foram genotipados utilizando o ensaio SNaPshot multiplex. Os iniciadores para a amplificação e de extensão SNaPshot de PCR foram concebidos para ter uma temperatura de recozimento de cerca de 60 ° C utilizando o software Primer5. Para testar para possíveis sequências repetitivas, primers foram alinhadas com o banco de dados GeneBank usando a ferramenta on-line BLAST. AutoDimer software foi utilizado na detecção de estruturas em gancho de cabelo e potenciais combinações possíveis de dimeros de iniciadores. Todos os iniciadores foram sintetizados por Sangon Biotech Co., Ltd. (Xangai, China). Após amplificação e purificação, os produtos de PCR foram misturados e utilizados como molde na reacção de extensão instantâneo. Em seguida, a electroforese foi realizada no ABI 3130 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, Foster City, CA) para verificar a qualidade dos produtos de PCR. Os dados de genotipagem foi finalmente analisados por Peak Scanner Software versão 1.0 (Applied Biosystems). Dez por cento das amostras foram seleccionados aleatoriamente para ser sequenciado. Como resultado, a taxa de genotipagem média foi de 93,5% utilizando o ensaio SNaPshot multiplex. A taxa de discrepância em todos os controlos positivos (ou seja, as amostras duplicadas, amostras de sobreposição de estudos anteriores e amostras seleccionadas aleatoriamente para ser sequenciado) foi inferior a 0,1%.
O Ensaio MTT [20]
na realização do ensaio MTT, consideramos relatado anteriormente concentrações plasmáticas máximas (CPP) para os quatro agentes de platina selecionados: cisplatina 10 mg /ml (Qilu Pharmaceutical Co., China; clínico de dosagem de 100 mg /m
2) [21] , carboplatina 20 ug /ml (Qilu Pharmaceutical Co., China; clínico de dosagem de 450 mg /m
2) [22], nedaplatina 10 ug /ml (Nanjing Dongjie Pharmaceutical Co., China; clínico de dosagem de 100 mg /m
2) [23] e oxaliplatina 12 ug /ml (Nanjing Pharmaceutical Factory Co., China; clínico de dosagem de 130 mg /m
2) [24]. No ensaio real, utilizou-se 10 × PPC como a concentração final de trabalho para cada um destes agentes de platina, tal como recomendado anteriormente [25], [26].
histopatologia confirmou tecidos tumorais frescas obtidas no momento da cirurgia foram cortadas em pedaços de menor do que 5 x 5 mm e suspensa no meio RPMI 1640 (Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO) fornecido com soro de bovino fetal a 15% (Gibco, Langley, OK) à temperatura ambiente. as células cancerosas foram suspensos vertida sobre uma malha de aço estéril 150 um colocado no prato. Percoll descontínuo com centrifugação em gradiente de 400 g foi usado para separar e purificar as células cancerígenas, tal como recomendado anteriormente [20]. As células cancerígenas foram identificados usando a H E coradas exame morfológico e, em seguida, ressuspensas a uma concentração de 1 × 10
5 células viáveis /ml e cultivadas em microplacas de 96 poços a 37 ° C numa atmosfera de 5% de CO
2 incubadora. No segundo dia, 90 ul de meio RPMI 1640 fornecido com soro bovino fetal a 15% e 10 uL das soluções com 100 × PPC para cada um dos agentes seleccionados foram misturados durante 48 h. Para cada paciente, a 100 ul de suspensão de células cancerosas sem agentes de platina foram cultivadas como controlos de ensaio negativos. No quarto dia, 20 ul de MTT (5 mg /mL, Xangai Lanji Co., China) foi adicionado em cada poço a 37 ° C durante 4 h, e, em seguida, 100 ul de tampão de solução (10% de SDS, 5% de isobutanol e 0,012 mol /G HCl) foram adicionados em cada cavidade durante a noite para dissolver os cristais de formazano. As densidades ópticas (DO
570 nm) foram medidos por Leitor de Microplacas (BIO-RAD550, Hercules, CA). A taxa de inibição foi obtida por meio da fórmula de (1-OD
platina /OD
controlo) × 100%.
Tissue Microarray, imuno-histoquímica (IHQ) Ensaio ea Avaliação da resposta imune a coloração
as porções de tecido tumoral /normal a ser utilizado para a micromatriz de tecido foram selecionados a partir de uma área de tumor representativo /normal no correspondente H e secção de cada bloco coradas por dois patologistas ginecológicos (XYT e Gy). A (120 núcleos) de matriz 10 × 12 foi feito pelo Banco de Tecidos FUSCC, que também incluiu 17 controles de tecidos cervicais normais. Para cada paciente, dois núcleos foram feitas a partir de fontes separadas. O IHC foi realizada em secções de tecido de 5 um de espessura preparadas a partir de tecido fixado em formalina, embebido em parafina do bloco tissue microarray construído utilizando anticorpo contra RAD52 [SC-8350, o anticorpo policlonal de coelho, Santa Cruz Biotechnology (Inc., Santa Cruz, CA ), diluição 1:50] e kit de detecção ChemMate ™ ™ EnVision (Dako, Glostrup, Dinamarca). Uma amostra positiva conhecida foi incluído como um controlo positivo. Para o controlo negativo, o anticorpo primário foi substituído por soro de coelho não imune.
IHC resultados de coloração foram independentemente marcado por dois patologistas ginecológicas (XYT e Gy), que foram cegados às informações do paciente, usando BX51 microscópio e câmeras DP25 (Olympus Co., Tóquio, Japão). O sistema de pontuação foi determinada com base na percentagem de células positivas e a intensidade de coloração, tal como descrito anteriormente [27]. A avaliação do estado de expressão de proteína foi definida como negativa (≤2 +) e positivo ( 2 +). Para núcleos que eram não interpretável por causa da perda de tecido ou a falta de células, uma pontuação de não aplicável (N /A) foi dado.
Métodos Estatísticos
Uma vez que as taxas de platina de inibição não seguiu distribuições normais, foi realizado o
teste de Wilcoxon não paramétrico
e
Kruskal-Wallis
teste para comparar as taxas de platina de inibição para cada agente, tanto entre os agentes e entre diferentes grupos. χ de Pearson
2-teste e análise de regressão logística também foram utilizados para avaliar a associação entre o
RAD52
genótipos e expressão da proteína. Para a análise de sobrevivência, a sobrevivência livre de progressão (PFS) e os tempos de sobrevida global (OS) foram calculados a partir da data da primeira cirurgia para a data de recorrência da doença e da morte, respectivamente. Pacientes sem progressão, perdidos para follow-up ou morreram de outras causas foram censurados na sua última data de registro.
Kaplan-Meier
estimativa sobrevivência e teste de log-rank foram calculados para avaliar PFS e OS. Foram realizadas análises de riscos proporcionais de Cox para avaliar os efeitos do
RAD52
genótipos sobre a probabilidade cumulativa de sobrevida em pacientes cSCC. Cada relatou
valor P
foi em frente e verso, e
P Art 0,05 foi utilizado para inferir a significância estatística. Todas as análises foram realizadas utilizando software SAS (versão 9.1; SAS Institute, Cary, NC).
Resultados
características do paciente e in vitro Platinum-inibição Rates pelo Ensaio MTT
a genotipagem foi vencida em 10 casos após os ensaios repetidos. Portanto, a análise final incluiu 144 pacientes cSCC, cuja clínica e patológica características estão resumidas na Tabela 1. A idade média dos pacientes no momento do diagnóstico foi de 46,5 anos (variação, 20-70 anos). distribuição estágio FIGO foi de 68 o estádio IB (47,6%), 67 (46,9%) IIA palco e oito (5,6%) estágio IIB. Os doentes com um tamanho do tumor superior a 4 cm representavam 43,8% (63/144) dos casos. Quarenta e nove (34,0%) e 50 (34,7%) pacientes tinham metástases LN pélvico positivos e Lvsi positivo, respectivamente. Havia 109 (75,7%) casos cujas células cancerosas invadiram mais de 1/2 camada de estroma do colo do útero. O acompanhamento médio foi de 37,6 meses (variação, 32.1-41.6 meses), e houve 20 (13,9%) recorrências e 10 (6,9%) óbitos durante o período de acompanhamento.
A mediano
in vitro
taxa de inibição do crescimento de células cancerosas por cisplatina, carboplatina, nedaplatina e oxaliplatina foi de 80,8%, 34,3%, 76,4% e 52,0%, respectivamente (Figura 1). Ao usar o
Kruskal-Wallis
teste, verificou-se que os quatro agentes de platina mostrou uma diferença significativa na inibição de células cancerosas (
Kruskal-Wallis
teste,
P Art 0,001; Figura 1). Cisplatina e nedaplatina ambos tiveram um efeito maior sobre inibir as células cancerosas do que carboplatina fez (
Kruskal-Wallis
teste,
P Art 0,001; Figura 1). Além disso, não foi observada diferença significativa nas taxas de inibição entre cisplatina e grupos nedaplatina (
Wilcoxon
teste,
P
= 0,269; Figura 1). Para cada agente de platina, comparamos as suas taxas de inibição em diferentes grupos de acordo com diversas características clínicas e patológicas, mas não houve diferença significativa (dados não mostrados).
A mediana
in vitro
inibição taxa de crescimento de células cancerosas por cisplatina, carboplatina, nedaplatina e oxaliplatina foi de 80,8%, 34,3%, 76,4% e 52,0%, respectivamente, e marcados com “-“. Quatro grupos mostraram uma diferença significativa na inibição de células cancerosas (
Kruskal-Wallis
teste,
P Art 0,001). Não foi observada diferença significativa nas taxas de inibição entre cisplatina e grupos nedaplatina (
Wilcoxon
teste,
P
= 0,269).
Associação entre RAD52 SNPs e in vitro Platinum-inibição Preços
Todas as distribuições genotípicas observadas entre os pacientes concordaram com o equilíbrio de Hardy-Weinberg (HWE,
P
= 0,533 e 0,115 para rs1051669 e rs10774474, respectivamente), com exceção de rs11571378 (
P
= 0,0004). No geral, os alelos variantes rs1051669A e rs10774474T foram significativamente associados com resistência de platina. As células cancerosas com rs1051669AA e rs10774474TT homozigotos variantes tiveram respostas mais baixos para carboplatina e nedaplatina, respectivamente (
Kruskal-Wallis
teste,
P
= 0,024 e 0,018, respectivamente; Tabela 2). Especificamente, assumindo um modelo de genética recessiva, descobrimos que os pacientes que realizaram o genótipo TT rs10774474 tinha um aumentou significativamente a resistência à nedaplatina, em comparação com aqueles que realizaram AA /AT genótipos (
Wilcoxon
teste,
P
= 0,027). Os portadores do genótipo rs1051669 AA parecia ter maior resistência à carboplatina em comparação com Gg /os genótipos AG, mas isso não foi estatisticamente significativa (
Wilcoxon
teste,
P
= 0,074). Não houve associação significativa entre as
in vitro
taxas de inibição e do SNP rs11571378.
associação entre as características clínicopatológicos, RAD52 SNPs e Sobrevivência
Após o ajuste para pacientes ‘idade, estágio FIGO, tamanho do tumor, metástases LN pélvico, Lvsi ea profundidade da invasão estromal, não encontramos uma associação independente de uma única variante, sozinha, com os pacientes “sobrevivência (dados não mostrados). No entanto, quando estes três selecionados RAD52 SNPs foram combinados, os pacientes portadores de, pelo menos, um (≥1) alelo variante (ou seja, rs10774474T, rs11571378A e rs1051669A) teve PFS mais pobres e OS em comparação com aqueles sem nenhum dos alelos variantes (teste log-rank ,
P
= 0,047 e 0,162, respectivamente;. Figura 2A e 2B)
Os pacientes portadores de, pelo menos, um (≥1) alelo variante (ou seja, rs10774474T, rs11571378A e rs1051669A) teve mais pobres sobrevida livre de progressão ea sobrevida global em comparação com aqueles sem nenhum dos alelos variantes (teste log-rank,
P
= 0,047 e 0,162, respectivamente). RAD52 (C) negativos e (D) expressão positiva com baixa fundo citoplasmática foi detectado pelo anticorpo sc-8350 (400 ×).
RAD52 SNPs associado à expressão RAD52 Protein
Para avaliar ainda mais plausibilidade biológica subjacente à associação observada, foi realizada a análise de IHC tecidos alvo e descobriram que RAD52 foi localizada para o núcleo (Figura 2C e 2D). Os escores médios de RAD52 níveis de expressão de proteína foram de 1,6 ± 1,8 e 4,2 ± 1,8 para câncer e tecidos normais do colo do útero, respectivamente. Dos 144 casos analisados, 109 (75,7%) foram RAD52 negativos, 30 (20,8%) foram RAD52 positivo e cinco (3,5%) foram RAD52 N /A. A taxa de expressão positiva ( 2 +) de proteína RAD52 em tecidos de cancro do colo do útero foi de 22% (30/139) comparado com 88% nos tecidos normais (15/17) (χ
2-teste,
P
0,001). As distribuições dos genótipos da gt rs1051669G A, rs10774474A T e rs11571378T A SNPs em pacientes RAD52-negativos e positivos estão apresentados na Tabela 3. Nos modelos genéticos dominantes, a variante rs1051669 transportadoras AG /AA mostrou uma diminuição significativa do nível de expressão de proteína RAD52 em pacientes cSCC, em comparação com as transportadoras variante genótipo GG [análise de regressão logística, o odds ratio ajustado (OR) = 4,7, intervalo de confiança de 95% (CI) = 1,4-16,1,
P
= 0,013; Tabela 3]. Além disso, a taxa de RAD52-negativo foi significativamente associada com má resposta das células cancerosas cervicais à carboplatina (
Wilcoxon
teste,
P
= 0,028; Tabela 2). No entanto, não havia nenhuma correlação significativa entre a expressão da proteína RAD52 e sobrevida dos pacientes (dados não mostrados).
Discussão
A resistência à quimioterapia baseada em platina é um challege em clínica prática [5] – [7]. No presente estudo, para avaliar a resistência de platina, foi realizado o ensaio de MTT, que foi amplamente utilizado para o teste de sensibilidade química, e sua precisão total foi de cerca de 81,3% para a previsão de efeito clínico em câncer ginecológico [28]. Verificou-se que a taxa de inibição de nedaplatina e cisplatina para células de cancro cervical são muito mais elevados do que a carboplatina e a oxaliplatina, independentemente de variáveis clínicas e patológicas. Este resultado é consistente com as atuais recomendações das diretrizes NCCN que a cisplatina ser a primeira escolha para a quimioterapia de câncer cervical. Nossos achados em relação nedaplatina também são consistentes com os dados clínicos publicados. Aumentando dados sugeriram que nedaplatina é tão eficaz como a cisplatina com menos digestivo e toxicidade renal e pode ser uma escolha alternativa promissora para pacientes com cancro do colo do útero [29]. No entanto, os ensaios clínicos randomizados maiores são necessários para validar esta conclusão.
é bem conhecido que a reparação do ADN desempenha um papel importante na resistência de platina e qualquer perturbação na reparação do ADN pode conduzir a uma alteração da sensibilidade ao tratamento [30 ], [31]. LAP, a forma mais letal de danos no ADN induzidos por agentes de radiação ionizante e de platina, são reparadas por duas vias principais-HRR de reparação e de junção de extremidade não-homóloga [32]. Sugeriu-se que uma elevada frequência de LAP e aberrações cromossómicas são observados 16-24 h após a exposição a cisplatina [33] e supressão de proteínas relacionadas envolvidas na via de HRR podem ser responsáveis pela resistência a cisplatina [34]. Em
Saccharomyces cerevisiae
, fermento
RAD52
desempenha um papel fundamental na HRR associada à replicação [35]. RAD52 de levedura e de mamífero RAD52 mostram sequência de aminoácidos semelhantes e actividades bioquímicas, o que sugere a sua função conservado [36]. Dados anteriores demonstraram que RAD52 mamíferos poderia responder a DSB de ADN e replicação parando independentemente do BRCA2, agindo como uma via HRR independente e alternativa [37]. Por exemplo, a ausência da proteína RAD52 resultou em extensos aberrações cromossómicas, especialmente aberrações cromatídicas [37], e agentes de platina pode ligar-se directamente ao ADN, conduzindo a diferentes tipos de lesões do ADN [38]. Além disso, a regulação negativa do
RAD52
mRNAs foi associada com fraca resposta de células-se a compostos derivados de platina em células HCC1937 BRCA1 defeituoso [15]. Consistentemente, no presente estudo, verificou-se que o status expressão da proteína RAD52-negativo foi associado com má resposta das células cancerosas cervicais à carboplatina. Por conseguinte,
RAD52
pode estar envolvido na formação de resistência de platina. No entanto, são necessários estudos adicionais para explorar os mecanismos subjacentes aos níveis de expressão de baixo RAD52 observado que será fundamental para quimioterapia do câncer cervical.
Para o melhor de nosso conhecimento, este é o primeiro estudo que incidiu sobre o valor preditivo de
RAD52 Compra de variações na resistência de platina e prognóstico em CSCC. Curiosamente, observou-se que a distribuição rs11571378 genótipo entre os pacientes partiu de HWE mas não prever qualquer um dos desfechos clínicos. Em contraste, os outros dois SNPs (ou seja, rs1051669 e rs10774474), cujas distribuições genótipo entre os pacientes acompanhados HWE, foram independentemente associados com o
in vitro
taxas de inibição de carboplatina e nedaplatina em células cSCC, respectivamente, indicando um papel importante de
RAD52
variantes de resistência de platina. Na verdade, estes dois SNPs são ambos previstas como potencialmente funcional. Por exemplo, o SNP rs1051669 está localizado na 3′-UTR de
RAD52
e pode estar em um sítio de ligação de miARN perturbar a interacção miARN-mRNA e afectar a expressão de genes-alvo miARN [39]. Da mesma forma, o SNP rs10774474 está localizada a montante de
RAD52
, que pode ser um sítio de ligação de factor de transcrição a participar no gene redes reguladoras, tais como as vias de reparação do ADN [40]. Além disso, os níveis de expressão de proteína RAD52 foram associados com taxas de inibição de carboplatina, um resultado semelhante ao observado para o
RAD52
-rs1051669 SNP. Curiosamente, a correlação genótipo-fenótipo também análises demonstraram que o SNP rs1051669 foi significativamente associada com níveis de expressão de proteína RAD52. Portanto, parece biologicamente plausível que o
RAD52
-rs1051669 SNP pode ser funcional pela regulação da expressão RAD52 e, assim, contribuir para a resistência de platina em doentes com cancro do colo do útero.
Kaplan-Meier
estimativas de sobrevivência mostrou ainda que os pacientes que realizaram pelo menos um (≥1) alelo variante de três
RAD52
SNPs tinha PFS significativamente mais pobres do que aqueles que não carregam qualquer um dos alelos variantes, indicando o efeito de
RAD52
SNPs sobre o prognóstico dos pacientes cSCC. Porque esses genótipos variantes podem predizer a expressão da proteína, a hipótese de que RAD52 níveis de expressão de proteína pode prever a sobrevida no câncer cervical. No entanto, no presente estudo, não observamos qualquer associação entre SNPs individuais ou níveis de expressão de proteína RAD52 e sobrevivência, que pode ser devido ao tempo relativamente curto de acompanhamento com eventos limitadas de recidivas e mortes. No entanto, alguns dados publicados sobre outros cancros que apoiar a nossa hipótese, ainda não há estudos sobre o cancro do colo do útero têm sido publicados até à data. Recentemente, Jewell et ai. informou que a sobre-expressão de
RAD52
mRNA poderia prever PFS pobres com uma taxa de risco de 4,49 no melanoma e que as células cancerosas com genes regulada de vias de reparo de DNA eram susceptíveis de ser mais agressivo [41].
Em resumo,
RAD52
SNPs, quer individual quer colectivamente, podem modificar a função do gene e alterar os níveis de expressão de proteína RAD52, tornando assim célula cancerosa resistente a agentes de platina. Maiores estudos prospectivos com maior tempo de seguimento são necessários para validar os nossos resultados.
Reconhecimentos
Gostaríamos de agradecer Yunhua Ling, Guangqi Qin e Hongyu Gu de Fudan University Shanghai Cancer Center for Performing
in vitro
técnicas de ensaio MTT, imunohistoquímica e, respectivamente, e agradecer ao Prof. Shaokang Zhan de Fudan University School of Public Health para o apoio análise estatística. Agradecemos também a Prof. Mario Leitao do Memorial Sloan-Kettering Cancer Center para rever este papel.