Abstract

Fundo

Com base no potencial dos compostos base de Schiff para agir como fontes para o desenvolvimento de agentes quimioterápicos contra o câncer, este

in vivo

estudo foi realizado para investigar as propriedades inibidoras do composto sintético Schiff base de Cu (BrHAP)

2 no cólon focos de criptas aberrantes (ACF).

Metodologia

Este estudo envolveu cinco grupos de ratos machos. O grupo de controlo negativo foi injectado com soro fisiológico normal, uma vez por semana durante 2 semanas e alimentados com 10% de Tween 20 para 10 semanas, o grupo de controlo do cancro foi injectado subcutaneamente com 15 mg /kg de azoximetano uma vez por semana durante duas semanas consecutivas, o grupo de controlo positivo foi injectada com 15 mg /kg de azoximetano uma vez por semana durante duas semanas consecutivas e 35 mg /kg de 5-fluorouracilo (injectados intraperitonealmente) durante 4 semanas, e os grupos experimentais foram injectados primeiro com 15 mg /kg de azoximetano uma vez por semana durante duas semanas consecutivas, e então alimentada 2,5 ou 5 mg /kg do composto de base de Schiff, uma vez por dia durante 10 semanas. A aplicação do composto de base Schiff suprimida a formação de ACF colônico total em até 72% a 74% (

P Art 0,05) quando comparado com o grupo controle do câncer. Análise de amostras colorrectais revelou que os tratamentos com o composto base de Schiff diminuiu as pontuações médias das criptas em ratos tratados com azoximetano. Também foram observados aumentos significativos de superóxido dismutase, glutationa peroxidase e catalase e uma redução no nível de malondialdeído. Histologicamente, todos os grupos de tratamento apresentaram reduções significativas na displasia em comparação com o grupo de controlo do cancro (

P Art 0,05). coloração imuno-histoquímica demonstrou a regulação negativa da proteína PCNA. western blot comparativa revelou que COX-2 e Bcl-2 foram sobre-regulada e Bax foi regulada para baixo em comparação com o grupo controle OMA.

Conclusão

O presente estudo demonstrou que o Cu (BrHAP )

2 composto tem atividades quimioprotectores promissores que são evidenciadas pela redução significativa no número de ACFs no câncer de cólon induzida por azoximetano

Citation:. Hajrezaie M, Hassandarvish P, Moghadamtousi SZ, Gwaram NS, Golbabapour S , NajiHussien A, et al. (2014) quimiopreventivo Avaliação de um complexo de cobre Derivado Schiff Base (II) contra o Cancro Colorectal Azoximetano-induzida em ratos. PLoS ONE 9 (3): e91246. doi: 10.1371 /journal.pone.0091246

editor: Ashraf B. Abdel-Naim, Faculdade de Farmácia da Universidade Ain Shams, Egipto

Recebido: 10 de outubro de 2013; Aceito: 10 de fevereiro de 2014; Publicação: 11 de março de 2014

Direitos de autor: © 2014 Hajrezaie et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Os autores gostaria de agradecer à Universidade de Malaya para apoiar este PV069-2012A projeto e HIR-Mohe (F000009-21001) do Ministério do Ensino Superior Malásia. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer colorretal, também conhecido como câncer de intestino grosso, pode envolver crescimentos anormais no apêndice, cólon e reto e está entre os três tipos mais prevalentes de câncer [1]. Apesar de muita pesquisa e do progresso na prevenção e tratamento de câncer de cólon, supressão significativa de tumores ainda é raramente alcançado, e tratamento com agentes conhecidos pode levar a progressão do tumor em alguns casos [2]. A detecção e tratamento de câncer de cólon em estágio inicial com agentes adequadas desempenha um papel crítico na redução do número de vítimas de câncer colorretal [3]. O modelo azoximetano (OMA) de câncer de cólon experimental imita as extensas características moleculares, clínicos e histológicos de câncer de cólon humano [4]. O composto azoximetano (metil-metilimino-oxidoazanium) é um óxido de azomethane (fórmula molecular C

2H

6N

2O) e é normalmente usado para induzir o cancro do cólon em modelos experimentais [5], [6] .

Os complexos metálicos têm sido amplamente utilizados em farmacologia durante séculos [7], [8]. O desenvolvimento de fármacos à base de metal tem sido promovido por realizações significativas que foram obtidos com agentes anti-tumor com base em platina, tais como oxaliplatina, cisplatina e carboplatina. No entanto o tratamento com medicamentos à base de platina é normalmente associada com a evolução da resistência aos medicamentos e efeitos colaterais graves durante os processos de terapia [9]. O cobre é bem conhecido por ser um catião vital para a sobrevivência celular, que desempenha um papel essencial como um co-factor de cerca de metaloenzimas. Cobre tem sido um excelente candidato para o tratamento de câncer desde 1960 [10]. A natureza oxidativo e bio-atividade do cobre em humanos tem atraído químicos inorgânicos para abordar as aplicações farmacológicas de cobre (II) [11], [12]. Estes tipos de metais com o carácter único da reactivação com dioxigénio são utilizadas no sistema do corpo, depois de passar através das paredes intestinais [13]. Devido ao seu potencial para a clivagem de ADN através de mecanismos oxidativos ou hidrolíticos e fortes interacções com o ADN através de intercalação ou associações de superfície, cobre (II) com bases heterocíclicas têm sido amplamente investigados [14]. As bases de Schiff são uma classe notável de compostos com potencial significativo anti-úlcera [15], antibacteriana, antifúngica [16], [17], anti-diabético [18], anti-tumoral [19] – [23], anti-proliferativa [24 ], [25] e as actividades anti-inflamatórias [26], [27].

Schiff cobre derivado de base de (II) tem forte potencial anti-proliferativo, anti-bacteriano gastroprotectora e por causa das propriedades de seu metal centros ou seus ligantes coordenam, que estão associados com caracterizações eletrônicas e estruturais que sejam atribuíveis à sua coordenação [15]. O presente estudo foi desenhado para investigar o efeito inibitório de um complexo de cobre (II), derivado a partir de N, N’-etileno-diamina de dimetilo e 2-hidroxiacetofenona ligando base de Schiff de Cu (BrHAP)

2 contra a carcinogénese do cólon induzida por OMA em ratos em termos de incidência da ACF.

Materiais e Métodos

Chemicals

Para esta experiência, o produto químico cancerígeno do azoximetano (AOM) foi adquirido a Sigma Aldrich (ST . Louis, MO, EUA), e 5-fluorouracilo, uma referência positiva do cancro do cólon, foi comprada a Calbiochem (San Diego, CA, EUA).

Síntese do complexo

o cobre complexo foi sintetizado como anteriormente descrito num artigo publicado [15]. Este Cu (BrHAP)

2 composto de base Schiff foi alcançada a partir do Departamento da Faculdade de Ciências da Universidade de Malaya Química.

As questões éticas

O protocolo deste estudo foi aprovado pela comissão de ética para experimentação animal da Faculdade de Medicina da Universidade de Malaya, Malaysia (Ethic No. PM /27/07/2010 /MAA (R)). Os animais foram tratados de acordo com os critérios do Guia da Academia Nacional de Ciência é para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório [28], [29].

toxicidade aguda avaliação

Para demonstrar a segurança do uso do Cu (BrHAP)

2 complexa, 36 do sexo feminino saudável e ratos machos (peso entre 150-180 g) retirado da casa animal da Faculdade de Medicina da Universidade da Malásia, Kuala Lumpur, sofreu análise de toxicidade aguda. Os ratos foram divididos em três grupos seguintes: um grupo de controlo com veículo, um grupo que recebeu (II) e 100 mg /kg de cobre, e um grupo que recebeu 2,000 mg /kg de cobre (II), complexo de [15]. Depois de uma noite de jejum, os ratos foram alimentados com o cobre (II) e, subsequentemente, foram observadas a cada duas horas durante 24 horas, e quaisquer sintomas de toxicidade foram registados. A mortalidade foi registada ao longo dos 14 dias do experimento. Depois de os ratos foram sacrificados, o sangue e os órgãos foram recolhidos para bioquímicos, hematológicos e análise histológica.

Avaliar o efeito quimiopreventivo de cobre (II), complexo

ratos macho Sprague-Dawley foram obtidas a partir de a Casa animal da Faculdade de Medicina da Universidade de Malaya. princípios internacionais e regulamentos locais foram observadas em relação ao cuidado e uso desses animais de laboratório. Os ratos ponderada aproximadamente 180-200 gramas e foram recebidos com a idade aproximada de 6-8 semanas. Os animais foram mantidos sob condições controladas, à temperatura ambiente (22-24 ° C) e 50-60% de humidade num ciclo de luz-escuro de 12 horas com acesso ad libitum a dieta padrão e água. Os animais foram aclimatados às condições de laboratório padrão para um período de duas semanas antes do início de qualquer experimento

Trinta e seis ratos machos adultos foram divididos aleatoriamente nas seguintes cinco grupos de seis animais cada:. Controle negativo grupo (estes ratos foram receberam injecções subcutâneas de solução salina normal e foram administrados oralmente 10% de Tween 20 a cada dia durante 10 semanas), um grupo de controlo do cancro (estes ratos receberam injecções subcutâneas de 15 mg /kg AOM, uma vez por semana durante duas semanas consecutivas. eles foram administrados por via oral com 10% de Tween 20 (5 mL /kg) por dia), um grupo de controlo positivo (estes ratos receberam injecções subcutâneas de 15 mg /kg AOM, uma vez por semana durante duas semanas consecutivas e seguido com injecções intra-peritoneais de 35 mg /kg de 5-f luorouracilo, durante 4 semanas) e dois grupos de tratamento (estes ratos primeiro receberam injecções subcutâneas de 15 mg /kg AOM, uma vez por semana durante duas semanas consecutivas e administração oral do Cu (BrHAP)

2 Schiff composto de base em doses de 2,5 mg /kg ou 5 mg /kg durante 10 semanas) [5]. Durante os experimentos, os ratos foram pesados ​​e observados diariamente para sinais de toxicidade.

Scoring de criptas aberrantes

Para gravar a incidência de ACF, os locais e números de criptas foram registrados 10 semanas após a última injecção AOM. Para fazer isso, os ratos foram sacrificados com uma dose elevada de xilazina e cetamina anestesia, e os seus cólons foram extraídos e lavados com soluto salino frio tamponado com fosfato (PBS) e, em seguida, aberto longitudinalmente a partir ânus para recto. Para a análise topográfica, 0,2% de azul de metileno foi utilizado para corar o cólon, e do cólon foi observada lado da mucosa com um microscópio de dissecação Nikon. A pontuação ACF foi calculada com base no número de focos de criptas aberrantes, que são conhecidos como focos contendo mais do que dois criptas aberrantes. Foram determinados o número de ACF por dois pontos e o número de criptas aberrantes em cada foco.

A classificação histológica dos ACFs

formalina tamponada (10%) foi usado para corrigir os espécimes de cólon seguinte transformação uma máquina de processamento de tecido parafina (Leica, Alemanha). Os tecidos foram embebidos em blocos de parafina e cortado em secções de 5 | im. Os cortes foram corados com hematoxilina e eosina (H E) e foram observados com um microscópio de luz (Nikon, Japão)

Imunohistoquímica

Depois de aquecer os slides secção de tecido em um de ar quente. forno durante 25 min a 60 ° C, xileno e álcool foram usadas para de-paraffinize e re-hidratar o tecido, respectivamente, a qual foi, em seguida, imuno-histoquimicamente coradas de acordo com o protocolo do fabricante (DakoCytomation, EUA). Um bloqueio da peroxidase foi usado para bloquear a peroxidase endógena (0,03% de peróxido de hidrogénio contendo azida de sódio) e depois de se lavar com tampão de lavagem, as lâminas foram incubadas com PCNA rato diluído (1:200, Cat: ab2426) anticorpo monoclonal, o qual foi fornecido pela a Companhia Abcam. Quantidades suficientes de estreptavidina-HRP foram incubadas com as secções durante 15 min. Depois de lavar cuidadosamente com tampão de lavagem, as secções foram incubadas com substrato DAB-cromagénio-durante 5 min e em seguida coradas com hematoxilina durante 5 seg. Eles foram, em seguida, mergulhado em amónia 10 vezes e lavou-se com água destilada, e as lâminas foram montadas com uma lamela de cobertura. As amostras positivas exibida uma cor castanho sob um microscópio de luz. O índice de marcação PCNA (IP) foi medido como o [(número de células positivas) /(número total de células epiteliais)] x 100 em cada campo. Estes valores de IP para todas as diferentes seções do cólon dos ratos pertencentes a grupos semelhantes foram, então, em média.

Western Blot analisa

Após o sacrifício dos ratos, o tecido do cólon foi coletado, e analisar proteínas expressão através de análise de western blot, as proteínas foram extraídas com tampão de extracção de proteínas (Pierce, EUA), e o sobrenadante foi submetido a ensaios de western blot.

, proteínas extraídas breves (30 ug) foram separadas em 10% resolver geles de poliacrilamida (por exemplo, SDS-PAGE) e electrotransferidas (25 mA durante 2 h). proteínas extraídas foram transferidas para membranas de PVDF (Pierce, USA), usando uma célula de transferência semi-seco (Bio-Rad, EUA) Trans-Blot SD em 15 V, 95 mA, durante 1 h, em seguida a membrana de PVDF foi bloqueada utilizando Blocker Casein ( Pierce, EUA) durante 1 h à temperatura ambiente e lavou-se duas vezes com TBST. Após incubação durante a noite a temperatura ambiente, com anticorpos primários específicos (1:10000 p-actina (cat: ab6276), Bax 1:1000 (Cat: ab7977), Bcl-2 1:1000 (Cat: ab183656) e COX-2 1: 1000 (Cat: ab15191), as manchas foram incubadas durante 2 h com anticorpos secundários acoplados com peroxidase apropriados e subsequente detecção foi realizada com película XOMAT através de quimioluminescência aumentada os xerograms foram digitalizados com um digitalizador Epson, e as intensidades da banda foram quantificados usando. gel de laboratório IP.

actividades antioxidante de homogenatos do cólon

Depois de se lavar as amostras de tecido do cólon com solução salina arrefecida com gelo, um homogenato (10% w /v) foi preparada em gelo frio de 50 mM tampão de fosfato (pH 7,4), contendo um cocktail inibidor da protease dos mamíferos e centrifugou-se a 10000 × g durante 30 minutos a 4 ° C. em seguida, o sobrenadante foi utilizado para analisar as actividades da catalase (CAT), a glutationa peroxidase (GPX), e dismutase (SOD) enzimas superóxido e para o ensaio MDA. Os kits foram fornecidos pelo Cayman Chemical Co. (Michigan, EUA).

Análise estatística

Software de Análise preditiva (PASW) foi utilizada a versão 18 para analisar os dados deste estudo. Os dados experimentais foram analisados ​​com one-way análise de variância (ANOVAs) seguida do teste post-hoc de Tukey. Os dados são apresentados como a média ± o (erro padrão da média) S.E.M. O nível de significância foi estabelecido em

P

. 0,05

Resultados

toxicidade aguda estudo

Conforme relatado em nosso artigo publicado anteriormente, a aplicação do composto base de cobre (II) de Schiff não produziram sinais de hematologia, bioquímica sérica anormalidade, ou toxicidade hepática ou renal. Assim, este complexo parece ser seguro para o uso [13].

Os pesos corporais e análises bioquímica sérica do potencial quimiopreventivo do Cu (BrHAP)

2

Não houve diferenças significativas observada nos pesos corporais dos ratos em todos os grupos (Tabela 1). As tabelas 2 e 3 ilustram analisa a bioquímica do soro do sangue recolhido dos animais escarificadas para o exame dos parâmetros da função hepática e renal em comparação com os seus grupos de veículos.

ACF frequência

A quantificação do tumor análises dos dois pontos que foram coradas com azul de metileno imediatamente após o sacrifício encontram-se resumidos na Tabela 4. A Figura mostra S1 vista topográfico da metileno coradas de azul tecidos do cólon de os diferentes grupos. ACFs foram distinguidas das criptas normais circundantes pelos seus tamanhos aumento, o aumento da distância da lâmina à das superfícies das células basais, bem como as zonas pericryptal facilmente discerníveis. Não ocorreram alterações microscópicas foram observadas no grupo de controlo normal, e um número significativamente maior de ACFs foram registrados no grupo de controle do câncer. Os grupos que receberam o complexo de cobre (II) exibiram reduções significativas no número de ACF (72,2% e 74,7%;

P

0,05). A distribuição de ACFs no grupo de controlo do cancro foi centrada no meio do cólon no grupo de controlo do cancro, e o cobre (II) grupos complexos tratados exibiram distai significativamente reduzido, médio e distribuições ACF proximais em comparação com o grupo de controlo do cancro ( tabela 5).

a avaliação histológica

as diferenças patológicas macroscópicas nos tecidos do cólon de diferentes grupos indicaram que o ACFs continha células epiteliais luminais estreitas e células caliciformes deformados com alongado núcleos. Perdas de polaridade celular e aumenta em mitoses foram também observadas em ACFs displásicas em comparação com as células normais em forma circular com núcleos basalmente localizados. fotos histológica dos tecidos do cólon do grupo de controlo positivo apresentaram reduções nos números de células com diferenças patológicas, e uma redução semelhante foi observado no cobre por via oral (II) os grupos de tratamento complexos (Figura S2).

A imuno-histoquímica

coloração imuno-histoquímica da proteína PCNA das secções de cólon a partir do grupo azoximetano revelou um aumento da regulação da proteína. O grupo de controlo positivo apresentaram um número inferior de células positivas em comparação com o grupo de azoximetano, e resultados semelhantes foram observados no de cobre (II) os grupos tratados complexos. As células PCNA positivas (%) do tecido do cólon no grupo de controlo do cancro foram de 100%, enquanto que as células positivas a PCNA (%) do grupo tratado foram 47,4% e 35,4%, respectivamente (

P 0,05) (Figura 1)

A) normal mucosa do cólon.. mucosa B) Colon do grupo exposto à OMA. C) da mucosa do cólon de o grupo tratado com 5-fluorouracilo. mucosa D) cólon do grupo tratado com /kg de cobre () complexo II 2,5 mg. E) da mucosa do cólon do grupo tratado com /kg de cobre complexo de 5 mg de (II). coloração imuno-histoquímica para PCNA proteína revelou uma diminuição da regulação da proteína PCNA nos ratos tratados com a Cu (BrHAP)

2 complexo. Ampliação: 100x. Todos os valores são expressos como a média ± o erro padrão da média. A diferença média foi significativa no p 0,05 comparado com o grupo controle do câncer

análises de Western blot

análises

Western blot revelou que o (23 kDa) proteína Bax estava para baixo. -regulated no grupo de controlo do cancro e que o Cu (BrHAP)

2 complexo aumentou a expressão dessa proteína. O Cu (BrHAP)

2 complexo e 5-fluorouracil causada down-regulamentação da COX-2 (69 kDa) e Bcl-2 (26 kDa) proteínas nos ratos tratados em comparação com o grupo controle do câncer. expressão de proteínas a partir de transferências de Western foram quantificadas utilizando o programa de software J imagem. As densidades do grupo de cancro (A) foram definidos como 1 e as densidades relativas para os grupos tratados e positivos foram representados graficamente. Os dados são a média ± SEM. A significância estatística foi expressa como p . 0,05 (Figura 2)

A) Colon mucosa do grupo exposto à OMA. mucosa B) do cólon no grupo tratado com 5-fluorouracilo. mucosa C) de cólon no grupo tratado com /kg de cobre () complexo II 2,5 mg. D) cólon mucosa do grupo tratado com /kg de cobre () 5 mg do complexo II. expressão de COX-2 e Bcl-2 foi aumentada e expressão do Bax foi reduzida no grupo de tratamento comparado com o grupo de controlo AOM. β-actina foi utilizado como um controlo interno para confirmar o carregamento igual de amostra. O programa J A imagem foi usada para avaliar a expressão da proteína. Todos os valores são expressos como a média ± o erro padrão da média. A diferença média foi significativa no p 0,05 comparado com o grupo controle do câncer

atividade das enzimas antioxidantes

O Cu (BrHAP)

2 complexo aumentou significativamente os níveis. de SOD, CAT e GPX, em amostras homogeneizadas do cólon em comparação com os do grupo de controlo do cancro (

P

0,05). O nível de MDA foi significativamente reduzida nos grupos tratados com complexos de base de Schiff, e o grupo de controlo do cancro exibiu um aumento da regulação do nível de MDA (

P

0,05) expressão. (Figura 3)

a) grupo cólon negativo, B) o grupo exposto a OMA, C) grupo tratado com 5-fluorouracilo, grupo D) tratados com o grupo de 2,5 mg /kg de cobre (II), E) tratados com 5 mg /kg de cobre (II). Todos os valores são expressos como a média ± o erro padrão da média. A diferença média foi significativa a p . 0,05 comparado com o grupo controle do câncer

Discussão

descoberta de drogas anticâncer com base em estratégias biológicas do uso de química dos metais de transição para atingir vias de crescimento do câncer e activar a apoptose de células de cancro têm sido desenvolvidos para diminuir a gravidade de cancro em pacientes [30], [31].

de acordo com a pesquisa recente que sugere que para controlar o crescimento do cancro, não é suficiente para contar com um único evento celular ou fisiológico, olhando para os agentes com um papel de controle em múltiplos eventos tumorigênicos e mecanismos associados é extremamente importante [32], [33]. grupos de base de Schiff de compostos têm sido extensivamente estudados quanto aos seus efeitos quimioprotectores. O complexo de cobre tem a capacidade de inibir a actividade das células relevantes para a proliferação celular, e deduzir os marcadores de proliferação e a elevação das vias de apoptose [10], [15]. Os estudos anteriores relataram que inibidores de proteassoma induzir a apoptose e têm potenciais papéis anticarcinogênicos [34], [35]. Um estudo realizado por Xiao

et al

. [36] revelou o papel inibitório de Schiff base de cobre contra a actividade de proteassoma, permitindo a indução de apoptose a aumentar.

No presente estudo, foi demonstrado que o Cu (BrHAP)

2 pode reduzir a formação de ACF e por conseguinte, a incidência de tumor do cólon em ratos. Mecanisticamente, o composto mostra efeitos quimiopreventivos promissora contra a formação de ACF por inibição da proliferação de células tumorais e controlada a expressão de proteínas específicas chave e indução de apoptose mitocondrial. Afigura-se que o controle dos níveis de expressão dos enzimas antioxidantes com o composto desempenha um papel importante na inibição da formação de ACF (Figuras 1, 2, 3).

Quando modelos animais são usados ​​no estudo, clínicos e as investigações toxicológicas de novos compostos sintéticos são cruciais para garantir a segurança e eficácia destes compostos. Conforme relatado em nosso artigo publicado anteriormente, o LD

50 de Cu (BrHAP)

2 observada neste estudo pode ser considerada segura com base no sistema harmonizado global da classificação e rotulagem de produtos químicos [15], [28]. Assim, nossos resultados demonstraram a segurança toxicológica da administração oral deste composto, pois não havia sinais de anomalias comportamentais ou perda de peso. Não foram encontradas diferenças significativas nos grupos tratados em comparação com o grupo controle em termos de função hepática e renal. Assim, nossos resultados suportam a utilização lógica deste novo composto de base Schiff sintético.

O cancerígeno composto dimetil diazeno-1-óxido (azoximetano) tem provado ser capaz de produzir tumores de cólon após administração a ratos machos para um determinado período de tempo [37]. Os tamanhos e números de focos de criptas aberrantes são utilizados como biomarcadores intermediários e correlacionam-se com o risco de desenvolvimento de cancro do cólon. Assim, tamanhos e números de focos de criptas aberrantes fornecer uma medida rápida para compostos de triagem que podem ser eficazes na supressão do desenvolvimento de câncer de cólon [38] – [40]. Como explicado anteriormente, através da indução de activação de apoptose por meio da via mitocondrial, o complexo de cobre tem a capacidade de prevenir cancros [10]. O presente estudo mostrou que a administração de Cu (BrHAP)

2 em doses de 2,5 mg /kg e 5 mg /kg reduziu significativamente a formação de ACF-total induzida OMA cólon e crescimento de criptas aberrantes Multicrypt por 72% e 74% (

P

. 0,05), respectivamente

A presença de PCNA foi utilizada como um marcador da proliferação de células (que desempenha um papel importante na progressão do cancro) nos tecidos do cólon, porque PCNA indica uma célula de capacidade extra de divisão [41] – [43]. Os estudos em modelos animais mostraram que a proliferação anormal das células epiteliais é uma das primeiras indicações de pré-neoplasia [44] – [45]. Com base em um estudo realizado por Deschner EE

et al

. [46], os animais tratados com qualquer carcinógeno químico cólon revelou uma zona de proliferação maior e um índice de marcação mais elevado em comparação com o grupo tratado com veículo. De acordo com os resultados de imuno-histoquímica desta investigação, Cu (BrHAP)

2 induzida cólon proteção dos tecidos por PCNA-down regulação. Por conseguinte, os grupos tratados com o composto tinha uma zona de menor proliferação e um índice de marcação inferior, de modo que as células já não eram no ciclo de crescimento (

P

0,05). Uma redução similar no antígeno nuclear de proliferação celular foi relatado anteriormente em um estudo que demonstrou a quimioprevenção bem-sucedida contra o cancro do cólon induzida por OMA em um modelo animal [47]. Assim, o composto utilizado nesta experiência pode inibir a formação de ACF, modificando a proliferação celular. Múltiplos fatores na via de apoptose imunitário desempenham papéis críticos na sobrevivência ou morte das células, e esses fatores interagem para afetar os resultados finais [47]. A indução de cancro do cólon com AOM provoca lesões oxidativas seguintes produção de peroxidação lipídica em células e eritrócitos cólon, o que causa aumento da secreção de proteínas totais e albumina por via renal, o que, por sua vez, resulta na elevação das concentrações de uréia no sangue. Este processo pode desempenhar um papel na etiologia de cancro do cólon em ratos [48] – [49] O equilíbrio entre os níveis de ROS no organismo é essencial para a função celular e o circuito apoptótico em células pré-cancerosas [50]. Se não houver uma regulação eficaz, o excesso de ROS poderia danificar lípidos, proteínas ou ADN e, por sua vez inibe a função normal e modulação da expressão do gene, do ciclo celular, o metabolismo celular, a adesão celular e morte celular [51]. O composto com base Schiff utilizado neste estudo é suposto ter a capacidade de contrabalançar estes hotéis em Ross. O mecanismo de acção deste composto pode ser através de eliminação de radicais livres e a têmpera da formação de oxigénio singleto, que protege o cólon contra o stress oxidativo e estimulados mecanismos de reparação do cólon. Existe uma possibilidade de que o composto possui efeitos protectores contra a formação de ACF e lesão do cólon através dos sistemas de enzimas oxidantes endógenas envolvidas no sistema de defesa do cólon, tais como (CAT), (SOD) e (GPX), os quais contrabalançam o stress oxidativo induzido pela OMA. Neste estudo, demonstrou-se que a administração de AOM causou graves danos ao sistema antioxidante endógeno do rato, representada pela perturbação das enzimas do estresse oxidativo (CAT, SOD e GPX) atividades que levaram a uma diminuição em seus níveis, ao lado de peroxidação lipídica, que foi caracterizada por aumento da regulação dos níveis de MDA.

estudos anteriores têm demonstrado o papel do aumento das atividades de enzimas antioxidantes (SOD, CAT e GPX), que são induzidas por agentes antitumorais, no mecanismo da terapia quimiopreventivo [ ,,,0],52]. O

avaliação in vivo

de antioxidantes realizadas neste estudo demonstraram elevações significativas na SOD, CAT e atividades GPX nos grupos tratados com Cu (BrHAP)

2. No entanto, reduziu a peroxidação lipídica sugeriram uma diminuição significativa nos níveis de MDA. Embora este resultado não era significativa, devido ao efeito de Cu (BrHAP)

2 na neutralização dos compostos tóxicos que são produzidos através da conversão de AOM a um metabolito altamente tóxico, os níveis de proteínas totais, albumina e ureia foram restaurados para valores normais [53]. Para investigar ainda mais a actividade quimiopreventiva do presente composto em cancro do cólon e o mecanismo subjacente a este efeito, as manifestações de Bax, proteínas pró-apoptóticas, linfoma das células B 2 (BCL-2) (que tem efeitos anti-apoptóticos) e ciclooxigenase 2 (COX-2 ) nos diferentes grupos foram analisadas. ensaio Western blot foi utilizada neste estudo para detectar proteínas específicas no cólon extraída homogeneizada. Estas proteínas desempenham um papel essencial no desenvolvimento de novos medicamentos contra o câncer [54]. Bcl-2 desempenha um papel essencial no controlo do processo de morte celular por bloqueio de vários sinais de apoptose. Em contraste, a proteína Bax desempenha um papel na libertação de um factor que promove a apoptose no citoplasma. Assim, o equilíbrio das expressões de Bcl-2 e Bax é importante no processo da morte de células [52] – [55]. A COX-2 tem sido relatada a ser sobre-expressos na fase inicial, e os níveis de COX-2 têm sido relatados para aumentar com a progressão do cancro. A COX-2 é a enzima limitante da velocidade na biossíntese de prostanóides, que aumentam a proliferação, a resistência à apoptose e na angiogénese durante a carcinogénese do cólon. A expressão da COX-2 foi regulada positivamente em tumores do cólon induzida por AOM. A sub-regulação da COX-2 tem demonstrado ter um papel crucial na supressão induzida por agente anticancerígeno de tumorigénese induzida OMA num modelo animal [53]. Nossos resultados revelaram que Cu (BrHAP)

2 aumentou a expressão da proteína BAX, o que é incompatível com um estudo prévio de Zhang

et al

. [56] que relataram que a indução da expressão da proteína BAX levou a apoptose de células usando o composto de cobre base de Schiff, e regulados negativamente a expressão de COX-2 e bcl-2 proteínas, e este padrão de expressão altera fortemente sugere que a apoptose será induzida pela via mitocondrial. Ma

et al

. [10] também demonstrou o efeito anti-cancro de um complexo de cobre de base de Schiff romance (II) através da activação da via mitocondrial. O resultado deste estudo foi semelhante com a nossa pesquisa publicada anterior sobre o mesmo composto, que revelou seu papel efetivo na gastro-prevenção. O resultado demonstrou que o complexo foi capaz de reduzir significativamente a expressão da proteína Bax [15]. avaliações anteriores de agentes quimiopreventivos eficazes também revelaram o mesmo padrão de Bax, Bcl-2, a expressão da proteína e a COX-2 [52], [53].

Conclusões

Com base no resultado deste estudo, o potencial quimiopreventivo de Cu (BrHAP)

2 foi demonstrada por reduções nos números de ACFs que pudessem ser atribuídas à sub-regulação de proteínas que promovem a proliferação celular em células cancerosas e a elevação dos níveis de enzimas antioxidantes. As análises Western blot revelaram que o cobre (II), complexo de apoptose activada através da via mitocondrial por COX-2 e Bcl-2 e Bax-se-regulação.

Informação Apoiando-regulação para baixo

Figura S1.

vista topográfico de mucosa do cólon. A) da mucosa do cólon normal. mucosa B) Colon do grupo exposto à OMA. C) da mucosa do cólon de o grupo tratado com 5-fluorouracilo. mucosa D) cólon do grupo tratado com /kg de cobre () complexo II 2,5 mg. E) da mucosa do cólon do grupo tratado com /kg de cobre complexo de 5 mg de (II). tecido do cólon rato foi corado com azul de metileno. Ampliação:. 20x

doi: 10.1371 /journal.pone.0091246.s001

(TIF)

Figura S2. estudo

histológica de câncer de cólon em ratos. A) da mucosa do cólon normal.