Abstract

Fundo

Nós relatado anteriormente o papel de IL-6 em um modelo murino de caquexia associada ao câncer e actualmente documentado um paciente no qual tocilizumab, anticorpo anti-receptor da IL-6, dramaticamente melhorada caquexia induzida por IL-6 que sobre-expressam o cancro do pulmão. Apesar deste potencial para aliviar a caquexia do cancro, Tocilizumab não foi aprovado para este uso clínico. Portanto, precedendo o nosso ensaio clínico planejado de tocilizumab, nós projetamos os dois estudos descritos aqui para avaliar os níveis de IL-6 em pacientes com cancro do pulmão e o efeito de tocilizumab em um modelo murino de caquexia associada ao câncer humano.

métodos

em primeiro lugar, nós medimos séricos de IL-6 níveis em pacientes com câncer de pulmão e analisados ​​sua associação com caquexia e sobrevivência. Em seguida, examinamos o efeito de um análogo de roedor de tocilizumab (MR16-1) no modelo de caquexia experimental.

Resultados

séricos de IL-6 níveis foram mais altos em pacientes com caquexia do que aqueles sem caquexia. Em pacientes com câncer de pulmão quimioterapia-resistente, um alto nível de soro IL-6 se correlacionou fortemente com a sobrevivência, e o nível de corte para afetar seu prognóstico era de 21 pg /mL. Enquanto isso, o transplante de IL-6 de células que expressam Lewis Lung Carcinoma caquexia provocada em ratinhos, os quais, em seguida, receberam ou MR16-1 ou 0,9% de solução salina. O crescimento do tumor foi similar em ambos os grupos; no entanto, o grupo MR16-1 perderam menos peso, mantidas melhor a ingestão de alimentos e água e tinha características caquéticos mais leves no sangue. MR16-1 também prolongou a sobrevida de camundongos LLC-IL6 transplantados (36,6 vs. 28,5 dias, p = 0,016).

Conclusão

Os nossos estudos clínicos e experimentais revelaram que a IL-6 no soro é um marcador substituto para avaliar caquexia e o prognóstico dos pacientes com câncer de pulmão metastático resistente à quimioterapia e que tocilizumab tem o potencial de melhorar o prognóstico e melhorar a caquexia que tanto devasta sua qualidade de vida. Este resultado encoraja grandemente nossos ensaios clínicos para avaliar a segurança e eficácia do tratamento tocilizumab para pacientes com aumento de soro IL-6

Citation:. Ando K, Takahashi F, Kato M, Kaneko N, Doi T, Ohe Y , et ai. (2014) Tocilizumab, a terapia proposta para a caquexia de Interleukin6-Expressando câncer pulmonar. PLoS ONE 9 (7): e102436. doi: 10.1371 /journal.pone.0102436

editor: Rossella Rota, Ospedale Pediatrico Bambino Gesù, Itália |

Recebido: 09 de novembro de 2013; Aceito: 18 de junho de 2014; Publicação: 10 de julho de 2014

Direitos de autor: © 2014 Ando et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este estudo foi apoiado por bolsas-in-Aid para no.21591003 Pesquisa científica (Kazuhisa Takahashi) e no.23591906 (Fumiyuki Takahashi) do Ministério da Educação, Cultura, Desporto, Ciência e Tecnologia do Japão. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

caquexia Câncer é um estado de hipercatabolismo caracterizada pela diminuição dos pacientes no músculo e tecido adiposo, bem como anorexia, astenia e anemia. Esta condição é freqüente em pacientes com câncer avançado e acompanhado por uma deterioração da qualidade de vida e tempo de sobrevida encurtada [1] – [5]. Estas alterações parecem ser parte de uma resposta inflamatória que inclui a elaboração de citoquinas pró-inflamatórias, tais como interleucina-6 (IL-6) e factor de necrose tumoral-alfa (TNF-α) [6] – [8]. Além disso, em um estudo do cancro do pulmão, os pacientes com caquexia tinham aumentado as respostas inflamatórias que se manifestam como um aumento de IL-6 no soro, receptor de TNF-α solúvel e a proteína C-reactiva (CRP) [9]. Por conseguinte, a gestão destas citoquinas é vital como é o tratamento paliativo de sintomas e na redução em perigo quando o tratamento de pacientes com caquexia do cancro.

IL-6, que é uma citocina multifuncional envolvida nas respostas inflamatórias e imunológicas que são característica de muitas doenças auto-imunes, é considerado para ser um mediador chave da caquexia [10], [11]. Para elucidar o papel da IL-6 na caquexia induzida por cancro do pulmão, que previamente estabelecida uma linha celular de cancro do pulmão transfectadas com ADNc de IL-6 e estas células transplantadas em ratinhos C57BL /6 [12]. Como resultado, a IL-6 induzida marcada mudanças caquéticos nesses camundongos, incluindo o tempo de sobrevivência encurtado. Comparativamente, resulta em ratinhos tratados com um análogo Tocilizumab que diminui os sintomas e tempos de vida alongadas sugeriu que este tratamento tem como alvo especificamente caquexia do cancro [12]. Além disso, no momento experimentado e descrito um paciente no qual Tocilizumab, anticorpo anti-receptor da IL-6, caquexia drasticamente atenuado induzido por IL-6 que sobre-expressam o cancro do pulmão [13]. Este paciente, cujo diagnóstico foi carcinoma de grandes células com câncer caquexia, sofreu um performance status (PS), que se deteriorou a um score ECOG de 4 com um aumento de IL-6 no soro para 173 pg /ml. No entanto, uma vez que a IL-6 segmentação tratamento com tocilizumab começou, os seus sintomas de caquexia, PS e os níveis de albumina rapidamente melhorado, e um período de sobrevivência de nove meses seguidos sem sintomas relacionados com a caquexia [13]. Esse resultado e os nossos relatórios anteriores indicam que tocilizumab, que tem sido usado principalmente para o tratamento de artrite reumatóide, artrite idiopática juvenil sistêmica e doença de Castleman, tem um bom potencial como terapia para caquexia associada ao câncer, mas ainda não foi aprovado. Assim, para avaliar a eficácia e segurança de tocilizumab, estamos neste momento a planear o ensaio clínico.

MR16-1, um anticorpo de receptor de rato anti-murino IL-6, tem sido caracterizada como um análogo de roedor adequada de tocilizumab [14], [15]. Anteriormente, Mori et ai. informou que MR16-1 impediu o desenvolvimento de anemia relacionada ao câncer em um modelo experimental, LC-06 ratos JCK [16]. No entanto, se MR16-1 suprime tais mudanças caquéticos como peso e perda de apetite permanece pouco clara e deve ser avaliada antes do ensaio clínico. Portanto, como um passo preliminar, determinamos aqui se o soro IL-6 é um marcador substituto confiável para uso em pacientes com cancro do pulmão e caquexia, e verificada a eficácia do MR16-1 no nosso modelo experimental previamente estabelecido dessa condição.

Materiais e Métodos

a coleta de dados para a avaliação do soro IL-6 níveis em pacientes com câncer de pulmão

durante o período de abril de 2010 a março de 2011, sangue periférico foi elaborado a partir 33 pacientes com cancro do pulmão que foram diagnosticadas por testes patológicos em Kameda Medical center, de 1000-cama centro de atendimento terciário. O soro foi separado e armazenado a -70 ° C até à análise. Foram excluídos pacientes que não consentimento ou cuja condição iria interferir com os resultados do estudo, por exemplo, doença infecciosa ou doença coexistente. Como a medição de dados de amostras de sangue, obteve o seu consentimento informado verbal e documentadas em seus registros clínicos. Nossa análise retrospectiva, o procedimento de consentimento verbal e análise de seus dados em seu estudo foram aprovados pelo Comitê de Ética do Centro Médico Kameda.

Avaliação de parâmetros caquéticos em pacientes com câncer de pulmão

Em primeiro lugar, para avaliar as características clínicas dos pacientes, que designado dois grupos que representam a presença ou ausência de caquexia do cancro no momento da recolha de amostras de soro. O grupo caquexia e grupo não-caquexia foram então comparadas em termos de características de base e fatores em suas amostras de sangue. O diagnóstico de câncer caquexia foi estabelecido com base no consenso internacional publicado, que foi a perda de peso superior a 5%, ou perda de peso superior a 2% em indivíduos que já mostram o esgotamento de acordo com o peso corporal e altura atuais [índice de massa corporal (IMC) menor de 20 kg /m

2] ou degenerados perda de músculo esquelético (sarcopenia) [1]. Em seguida, para avaliar a relação entre estes parâmetros e sobrevida em pacientes caquéticos com cancro do pulmão metastático, foram selecionados 19 pacientes com estádio IIIb ou câncer IV cujos cuidados de suporte haviam sido recebidos apenas após a avaliação IL-6. Em seguida, analisamos a correlação entre as características dos pacientes e tempo de sobrevivência. Finalmente, foi calculado o nível de corte mais adequada de IL-6 no soro para sua sobrevivência.

As linhas celulares e culturas com modelos animais de caquexia associada ao câncer

câncer de pulmão Lewis (LLC) células originadas como um carcinoma espontânea do pulmão num 6 rato C57BL /[17], [18]. Nós estabelecemos células LLC transfectadas com o gene de IL-6 humano (LLC-IL6), que tem uma potente capacidade para induzir caquexia do cancro em ratinhos, como anteriormente descrito [12]. Resumidamente, ADNc de IL-6 humana foi introduzido na Sall local do vector de expressão de ADNc eucariótico BMGNeo, e foi transfectado em células LLC utilizando o reagente lipofectina (Gibco BRL, Gaithersburg, MD) de acordo com as instruções do fabricante [12], [19 ]. As células foram mantidas em Iscove modificado por Dulbecco Médio (IMDM, Wako, Osaka, Japão) com 20% de soro fetal bovino, penicilina e estreptomicina (100 U /mL e 100 ug /ml, respectivamente).

modelos murinos de caquexia

livre-Virus 5 semanas de idade do sexo masculino C57BL /6J foram obtidos a partir de Japão SLC (Hamamatsu, Japão). Os animais foram (5 por gaiola), a uma temperatura de 24 ± 2 ° C, humidade relativa de 55% ± 10% alojados em grupo, e de 12 h de luz /12 horas de ciclo escuro. Depois de habituação por 1 semana, os ratos foram alojados dois por gaiola durante todo o experimento. água clorada e alimentos irradiados foram fornecidos

ad libitum

. Todos os procedimentos realizados sobre os animais foram aprovados pelo comitê de cuidados com os animais institucional e uso (IACUC) da Universidade de Juntendo.

Nós previamente estabelecido o modelo de caquexia experimental por transplante LLC-IL6 em ratinhos de 6 semanas de idade [12 ]. Além disso, em muitos outros estudos que determinaram a patogénese de cancro e caquexia eficácia farmacológica, os ratinhos foram usados ​​em cinco a seis semanas de idade, para a transplantação de linhas celulares de cancro, como relatado [16], [20], [21]. Por conseguinte, também neste estudo, LLC-IL6 (1 × 10

6) foram inoculados subcutaneamente no flanco direito de cada rato às 6 semanas de idade depois de um período anterior de alojamento, e que designado o dia de LLC- IL6 inoculação como o dia 0.

MR16-1 protocolo de tratamento

MR16-1 (Low. No. MC45038) é um anticorpo receptor de rato anti-murino IL-6, e foi gentilmente fornecida a partir de o laboratório de Chugai Pharmaceutical Co. (Kamakura, Japão). Conforme apresentado na Introdução, Mori et al. previamente determinada a eficácia da MR16-1 para a anemia relacionada com o cancro, quando injectado por via intraperitoneal numa dose única semanal de 20 mg /kg [16]. Por outro lado, que previamente avaliado em detalhe os parâmetros caquéticos, em vinte e um dias após a inoculação do tumor e também confirmou que o nosso modelo experimental com caquexia LLC-IL6 produziu sobrevivência de cerca de três semanas sem qualquer tratamento [12]. Além disso, na situação clínica, Tocilizumab geralmente é administrado a cada duas ou quatro semanas com o mesmo intervalo para o tratamento da artrite reumatóide (RA) e doença de Castleman [22], [23]. Do mesmo modo, foi iniciado o uso MR16-1 a uma dose semanal de 20 mg /kg, começando no dia três, de modo a administrar-o com o mesmo intervalo e avaliou os parâmetros caquéticos, em vinte e um dias após a inoculação do tumor.

Avaliação de MR16-1 efeito sobre a sobrevivência e cachecia

primeiro, para avaliar a eficácia de MR16-1 na caquexia, vinte ratinhos foram divididos em quatro grupos. Os ratinhos no grupo 3 e 4 representado o modelo de caquexia do cancro, em que LLC-IL6 foi inoculado por via subcutânea (grupo caquexia cancerosa), enquanto que os grupos 1 e 2 receberam apenas a mesma quantidade de solução salina, 0,9% cloreto de sódio (grupo de controlo saudáveis). Além disso, os grupos 2 e 4 receberam MR16-1 tratamento como no protocolo anterior (marcado “com MR16-1”), e os grupos 1 e 3 receberam a mesma quantidade de solução salina (rotulado “sem MR16-1”).

Foram avaliados o peso corporal, a ingestão de alimentos e água e volume de tumor duas vezes por semana, como descrito anteriormente [20]. O volume do tumor nos grupos 3 e 4 foi calculada pela (comprimento) x (largura)

2/2 (cm

3) [24]. Vinte e um dias após a inoculação do tumor, os ratinhos foram anestesiados com somnopentyl e eutanasiados. No momento do sacrifício, foram coletadas amostras de sangue, em seguida, músculos dissecados e pesados ​​a partir das extremidades e gordura de tecidos em torno dos testículos [25], [26]. Para determinar o estado nutricional desses animais, medimos os níveis de glicose e triglicerídeos no soro e contagem avaliada glóbulos brancos (WBC), hematócrito (Ht) e plaquetas (Plt) conta no sangue. Cada grupo consistiu em cinco ratinhos, e todas as experiências foram realizadas duas vezes

A seguir, para determinar o efeito de MR16-1 na sobrevivência, vinte ratos também foram transplantados com LLC-IL6 e divididos aleatoriamente em dois grupos:. Um grupo recebeu MR16-1 com o mesmo protocolo, como acima, e o segundo grupo recebeu apenas a mesma quantidade de solução salina. Cada grupo consistiu em dez ratinhos, e o seu tempo de sobrevivência foi analisada após a inoculação do tumor. tratamento semanal havia sido continuou com o mesmo intervalo até que a morte foi confirmada.

Medição de parâmetros caquéticos em

sangue

Para a avaliação dos dados dos pacientes em nosso estudo clínico, soro IL-6 foram determinada usando radioimunoensaio disponível comercialmente com enzimas ligadas e kits de ensaio ligado a enzima (ELISA) de acordo com as instruções dos fabricantes (SRL Inc., Tóquio, Japão). Outros parâmetros também foram medidos por exame de rotina em Kameda Medical Center. Além disso, para avaliar a eficácia da MR16-1 nos animais experimentais, a IL-6 no soro foi medido utilizando um ELISA de IL-6 Kit murino, e todos os outros parâmetros foram medidos por meio de testes laboratoriais de rotina (KAC Inc., Quioto, Japão) .

análise estatística

Foram realizadas análises estatísticas com SPSS versão 20, e os dados são expressos como média ± desvio padrão. O teste do qui-quadrado ou teste de Mann-Whitney foi usado como apropriado comparar as características dos pacientes em nosso estudo clínico. Correlações de características dos pacientes com sobrevivência foram avaliados por análise de correlação de Spearman. Para determinar o nível de corte mais adequada de IL-6 no soro para uma sobrevivência mês, foi utilizado o critério de Akaike informações (AIC), que é um indicador para avaliar a qualidade do ajuste para um modelo estatístico [27], [28]. Um valor AIC menor indicou um modelo mais confiável para prever resultados. As taxas de sobrevivência foram estimadas com o método de Kaplan-Meier usando o valor de corte calculada pela análise de AIC.

Para avaliar a eficácia da MR16-1, comparamos as variáveis ​​para os dois grupos usando um unpaired

t

-teste ou diferenças significativas honestas de Tukey após análise de variância (ANOVA). A curva de sobrevivência de cada grupo foram analisados ​​pelo teste de log rank. Para todas as análises estatísticas, valor de p inferior a 0,05 foi considerado significativo.

Resultados

Perfil clínico de 33 pacientes com câncer de pulmão

Como a Tabela 1 mostra, entre os 33 pacientes perfilado neste estudo clínico, a idade média foi de 71,3 ± 10,0 anos e 76% eram do sexo masculino. Dezessete dos pacientes tinham sido diagnosticados com adenocarcinoma (52%), treze com carcinoma de células escamosas (39%), um com carcinoma de grandes células (3%) e dois com carcinoma de células pequenas (6%). Um total de 26 pacientes tinham sido tratados com quimioterapia (n = 22), radioterapia (n = 4) ou cirurgia (n = 1) antes ou após a avaliação da IL-6. Sete pacientes receberam apenas cuidados de suporte. Após as avaliações para este estudo, 19 pacientes tinham apenas cuidados de suporte; 11 teve uma história de administração de quimioterapia e um tinha radioterapia. Dezoito pacientes foram diagnosticados com câncer caquexia, conforme estabelecido no estudo consenso internacional [1].

Características dos pacientes no grupo de caquexia (n = 18) em comparação com o grupo não-caquexia (n = 15) são mostrados na Tabela 1. a média de idade, sexo, IMC, o estado histológico e estágio da doença não foram estatisticamente diferentes entre os dois grupos. O grupo caquexia tinha uma maior proporção de doentes com um nível baixo desempenho (score ECOG 2, 77,8% vs. 20,0%), e mais deles foram tratados com cuidados de suporte após a avaliação de desempenho, (77,8% vs. 33,3%) do que no grupo não-caquexia. Nas amostras de sangue, contagem de glóbulos brancos foram maiores no grupo de caquexia (11722 x 5873 /mL), assim como o conteúdo de PCR (7,1 vs 2,5 mg /dL), e os níveis séricos de IL-6 (40,2 vs 13,0 pg /mL ); No entanto, os níveis de albumina do grupo caquexia foram mais baixos (2,7 vs. 3,5 g /dL) do que no grupo não-caquexia. proteína total não foi diferente entre os dois grupos (6,4 versus 6,7 g /dL).

Os nossos resultados foram parecidos com os de uma grande coorte anterior de pacientes com câncer pancreático estudado por Bachmann et al [29]. Assim, embora o número de pacientes incluídos em nossa análise foi relativamente pequeno, os resultados certeza de que nossos dados foram valiosos para análise mais detalhada.

Correlação de soro de IL-6 níveis com a sobrevivência

então correlacionados os parâmetros analisados ​​caquéticos com sobrevida em 19 pacientes com estágio IIIB ou câncer IV que receberam tratamento de suporte depois de IL-6 avaliação (Tabela 2). Todos os pacientes tinham sido diagnosticados com cancro do pulmão de células não pequenas (NSCLC); dez com adenocarcinoma, oito com carcinoma de células escamosas e um com carcinoma de grandes células. Os tempos de sobrevivência após o que a avaliação tinha uma correlação negativa estatisticamente significativa com o estado de desempenho ECOG (r = -0,621, p = 0,005), PCR (r = -0,529, p = 0,020) e soro IL-6 níveis (r = -0,639, p = 0,003), e uma correlação positiva com os níveis de albumina (R = 0,588, p = 0,008). as contagens de leucócitos (r = -0,425, p = 0,069) e a proteína total (r = 0,515, p = 0,060) também tendem a correlacionar-se com a sobrevivência prolongada, mas não ao nível de significância estatística. Entretanto, no soro de IL-6 níveis bem correlacionados com albumina (R = -0,449, p = 0,054) e PCR (r = 0,543, p = 0,016), mas não com a proteína total (r = -0,006, p = 0,981).

também considerou que era importante incluir a análise de pacientes que tinham sido diagnosticados com câncer de pulmão de pequenas células (CPPC) ou que estava sob tratamento para determinar o efeito de IL-6 na quimioterapia. No entanto, uma vez que o número desses pacientes era pequeno, não poderíamos verificar seu efeito sobre a quimioterapia ou o seu prognóstico neste estudo.

O soro IL-6 níveis e sobrevivência

Para determinar o mais adequado cut-off nível de soro de IL-6 conteúdo dos pacientes e a sua relação para a sobrevivência, foi calculado o AIC (Figura 1A). Como resultado, o menor valor de AIC foi obtido em 20 ou 21 pg /ml nos níveis séricos de IL-6 e ligado a 21 a 28 dias de tempo de sobrevivência, respectivamente (AIC = -10,395, cada combinação foi o mesmo valor). Isto revelou que os pacientes com soro de IL-6 níveis ≥21 pg /ml pode ser previsto para ter o menor tempo de sobrevivência de um mês ou menos.

(A) Um limiar conservadora ligados 20 ou 21 pg /ml de IL-6 no soro (eixo y) com 21 a 28 dias de tempo de sobrevivência (eixo do x), tal como determinado por análise de AIC (ver Métodos), identificando de forma satisfatória o nível de corte mais apropriada (eixo z, a AIC = -10,395). Note-se que os doentes com níveis séricos de IL-6 ≥21 pg /ml foram preditos a ter menos tempo de sobrevivência. (B) A probabilidade de sobreviver um e três meses após a avaliação foi menor nos pacientes com a IL-6 21 pg /ml do que aqueles com 21 pg /ml (sobrevivência um mês, 20,0% versus 77,8%, P = 0,007; e três meses de sobrevivência de 10,0% vs. 33,3%, p = 0,025). (C) A proporção de pacientes com a IL-6 ≥21 pg /ml foi de 80,0% para os pacientes que sobreviveram menos de um mês, 20,0% para os pacientes sobreviventes um a três meses e 25,0% para os pacientes que sobrevivem mais do que três meses.

com base nas estatísticas da AIC, os pacientes foram então divididos entre aqueles com IL-6 21 pg /ml e 21 pg /mL e analisado para a probabilidade de sobrevivência usando o método de Kaplan-Meier. A Figura 1B mostra o padrão de sobrevivência após a avaliação da IL-6. Há a probabilidade de sobrevivência para um e três meses após a avaliação é claramente inferior em pacientes com a IL-6 21 pg /mL do que com 21 pg /mL (uma sobrevivência mês, 20,0% versus 77,8%, p = 0,007 ; e três meses de sobrevivência de 10,0% vs. 33,3%, p = 0,025). Nós classificamos ainda mais os pacientes em três grupos de acordo com o tempo de sobrevivência: dentro de um mês, de um a três meses e mais de três meses. Análise de IL-6 no soro em níveis de cada grupo, como a Figura 1C representa, indicou que a proporção de pacientes com a IL-6 ≥21 pg /mL foi de 80,0% que sobreviveram no período de tempo de um mês, ao passo que 20,0% sobreviveram para uma a três meses, e 25,0% sobreviveram mais de três meses.

O efeito da MR16-1 na caquexia associada ao câncer em LLC-IL6-ratinhos portadores

no 21º dia de nossas experiências duplicadas, um total de oito em cada dez ratos sobreviveram em cada grupo de caquexia associada ao câncer (grupos 3 e 4), enquanto todos os dez ratos sobreviveram em grupos de controle saudáveis ​​(grupos 1 e 2). Nós sacrificado um total de 36 ratos, e os seus parâmetros caquéticos, são mostrados na Tabela 3.

Como para comparação entre os ratinhos não tratados de controlo saudáveis ​​(Grupo 1) e o grupo de caquexia do cancro (grupo 3), pesos das carcaças (grupo 1, 25,9 g vs. grupo 3, 22,1 g, p 0,001), pesos do músculo gastrocnêmio (128,1 mg vs. 60,4 mg, p = 0,006), do músculo quadríceps (102,7 mg vs. 14,7 mg, p 0,001), músculo biceps femoris (145,4 mg versus 27,1 mg, p 0,001), e tecido gordo em torno dos testículos (490,5 mg vs. 169,4 mg, p 0,001) foram significativamente mais elevados no grupo 1 do que no grupo 3. os valores de Ht (32,8 vs. 9,4%, p = 0,001), triglicerídeos (87,0 versus 23,0 mg /dl, P 0,001) e glicose (311,6 versus 29,6 mg /dl, P 0,001) também foram mais elevados no grupo 1 do que aqueles no grupo 3, respectivamente. Uma vez que estes resultados foram semelhantes aos do nosso relatório anterior [12], que confirmaram a reprodutibilidade do nosso modelo experimental estabelecido.

Quanto à comparação entre ratos caquexia do cancro tratados e não tratados (grupo 3 [sem MR16-1 ] e 4 [com MR16-1]), por outro lado, o peso da carcaça (grupo 3, 22,1 g vs grupo 4, 24,1 g, p = 0,032), os pesos do músculo gastrocnémio (60,4 mg 106,6 mg versus, p 0,001), músculos quadríceps (14,7 mg versus 48,5 mg, p = 0,007), o músculo bíceps femoris (27,1 mg versus 59,4 mg, p = 0,001), e a gordura do tecido em torno dos testículos (169,4 mg 312,4 mg versus, p = 0,015) foram significativamente maiores no grupo 4 que o grupo 3. Além disso, o WBC (48350 x 4100 /mL, p = 0,004) foi significativamente menor contagem, e os valores de Ht (9,4 versus 21,8%, p = 0,004 ), triglicéridos (23,0 versus 48,0 mg /dl, p = 0,005), e glucose (29,6 vs. 101,0 mg /dl, p = 0,003) foram maiores no grupo 4 do que os do grupo 3, respectivamente (Tabela 3). Enquanto isso, o soro IL-6 níveis foram maiores no grupo 4 do grupo 3 (41,9 ± 17,9 vs 296,1 ± 283,2 pg /mL, p 0,001).

A Figura 2 mostra mudanças seriais de peso corporal (A) , o crescimento do tumor (B), e alimentar (C) e de água (D) ingestão. Quanto à comparação entre os grupos caquexia do cancro, o crescimento do tumor não foi estatisticamente significativamente diferentes (Figura 2B, p = 0,061), mas o peso corporal permaneceu mais elevada no grupo 4 (Figura 2A, p = 0,032). reduções progressivas na ingestão de alimentos e água foram observadas em ambos os grupos após a inoculação de LLC-IL-6, mas MR16-1 tendia a melhorar estes valores para o ponto que diferenças significativas foram destaque no dia 14 (Figuras 2C, p 0,001 e Figura 2D, p 0,001). Estes resultados indicam que a administração de MR16-1 diminuiu significativamente a redução de peso da carcaça, de comida e água ingestão sem afectar o crescimento do tumor num modelo murino de caquexia.

Transplante de células LLC-IL-6 que expressam causada em caquexia os ratinhos (grupos 3 e 4), enquanto que os grupos 1 e 2 receberam apenas a mesma quantidade de solução salina, 0,9% cloreto de sódio (grupos de controle saudáveis). Nós administrado MR16-1 (grupos 2 e 4), ou 0,9% de solução salina (grupos 1 e 3), respectivamente. O peso corporal, tamanho do tumor e da ingestão de alimentos e água foram medidos nos dias 0, 3, 7, 10, 14, 17 e 21 após o transplante. A quantidade medida de alimentos ou de água foi dividido pelo número de ratinhos e dias para determinar cada ingestão por animal por dia. A significância estatística foi avaliada com diferenças de Tukey Honest significativas (HSD), após o one-way ANOVA. Os dados representam a média e DP (D.P. dados de peso são mostrados na Tabela 4). O crescimento do tumor não foi significativamente diferente entre os grupos 3 e 4 (B), mas o peso corporal (A) e alimentos (C) e ingestão de água (D) foram significativamente melhorados no grupo 4 (†, p 0,01). Não foram observadas diferenças significativas no peso de carcaça e de alimentos e água ingestão entre o não tratado (grupo 1) e ratos saudáveis ​​tratados (grupo 2).

Segurança da MR16-1 em ratos saudáveis ​​de controle

Para determinar a segurança de MR16-1, também avaliamos outros parâmetros bioquímicos em camundongos de controle saudáveis ​​e comparou-os entre os grupos 1 e 2. Como mostrado nas Tabelas 3 e 4, os parâmetros bioquímicos não foram estatisticamente significativamente diferente entre os dois grupos. As contagens de WBC (4,667 vs. 3,867 /uL, p = 0,8644) e plaquetas (548000 vs. 693000 /uL, p = 0,249) também não foram significativamente diferentes, mas os valores de Ht (32,8 vs 35,4%, p = 0,049) foi maior no grupo 2 do que no grupo 1. alterações de série do peso corporal e ingestão de alimentos e água não foram diferentes entre os dois grupos (Figura 2).

O efeito da MR16-1 na sobrevivência em LLC-IL6-ratinhos portadores

Vinte ratos foram transplantados com células LLC-IL6 e divididos em dois grupos; com (tratadas) ou sem MR16-1 (não tratada). tempo de sobrevivência foi determinada como mostrado na Figura 3. Os tempos de sobrevivência de tratados e ratinhos não tratados foi de 36,6 ± 11,1 e 28,5 ± 4,1 dias, respectivamente, e MR16-1 melhorou significativamente o tempo global de sobrevivência após a inoculação do tumor (p = 0,016). Estes resultados indicam que MR16-1 tem o potencial para melhorar a sobrevivência, bem como suprimir a progressão da caquexia do cancro.

Cada grupo consistiu em dez ratinhos transplantados LLC-IL6. Um grupo recebeu MR16-1 (linha a cheio), e o outro grupo recebeu apenas a mesma quantidade de solução salina (linha a ponteado). tratamento semanal tinha sido continuado com o mesmo intervalo de tempo até à morte foi confirmada. A média ± S.D. da sobrevivência de ratinhos transplantados LLC-IL6 sem MR16-1 foi de 28,5 ± 4,1 dias. A injeção de MR16-1 prolongou a sobrevivência de ratos transplantados LLC-IL6 para 36,6 ± 11,1 dias (p = 0,016).

Discussão

Em nossa clínica e

em in vivo

estudos, que mostram a utilidade de IL-6 no soro, como um marcador substituto para a avaliação do prognóstico e eficácia do anticorpo anti-receptor da IL-6 como um mediador da caquexia do cancro. Descobrimos que (1) a presença de IL-6 no soro fortemente correlacionada com a sobrevivência em pacientes portadores de câncer metastático de pulmão quimioterapia resistente; (2) pacientes com soro de IL-6 níveis ≥21 pg /mL foram previstos para ter tempo de sobrevivência mais curtos; (3) MR16-1 teve o efeito benéfico de melhorar caquexia e sobrevivência de câncer. Assim, mostrámos pela primeira vez que a IL-6 era um tratamento útil, bem orientada para o cancro do pulmão metastático quimioterapia-resistente, e Tocilizumab parecia ser um agente anti-caquécticos promissor e inovador para o tratamento de pacientes com a IL-6 sobre-expressando tumores.

Actualmente, a associação de marcadores bioquímicos com o prognóstico tem sido amplamente relatada em pacientes com câncer metastático. Isto é, níveis elevados de PCR indicam reacção inflamatória sistémica destes pacientes e referem-se a sua concentração tipicamente baixa esquelético índice muscular e albumina do soro, bem como prognóstico pobre [30] – [32]. Alguns estudos relataram que os níveis de corte de CRP e albumina para afetar o prognóstico foram de 10 mg /L e 3,5 g /dL, respectivamente [33] – [35]. Uma vez que estas reacções resultar do efeito de citocinas, nossos resultados também indicam que o soro IL-6 níveis logicamente suportar uma forte correlação com o tempo de sobrevida em pacientes com câncer de pulmão metastático quimioterapia-resistente. Além disso, descobrimos que um soro de IL-6 níveis de 21 pg /mL é um limite conservador para afetar seu prognóstico. Este ponto de corte foi baseado nos dados deste estudo, mas consideramos que ele poderia ser um indicador mais preciso do que o CRP e albumina.

Tal como para o tratamento da caquexia associada ao câncer, dos vários agentes avaliada de modo agora, corticosteróides e agentes progestacionais ter sido o melhor mostrado para aliviar a anorexia relacionada com câncer em estudos prospectivos e uma meta-análise [36] – [38]. No entanto, nenhum agente que melhora a expectativa de vida e qualidade de vida já foi documentada. Portanto, o estabelecimento de uma nova modalidade terapêutica para aliviar a caquexia associada ao câncer é urgentemente necessário. Nesse contexto, relataram anteriormente que tinha Tocilizumab notavelmente melhorada caquexia do cancro de um paciente induzido por uma IL-6 que sobre-expressam o cancro do pulmão [13]. Embora tumor deste paciente tinha gradualmente progrediu, seu estado geral se estabilizou, e ele sobreviveu nove meses após o início do tratamento tocilizumab [13]. Da mesma forma, em modelos animais experimentais, MR16-1 diminuição da progressão da caquexia. Além disso, no soro de IL-6 aumentou em níveis de um grupo tratado com MR16-1 em comparação com um grupo de controlo não tratado. Em relação a esses mecanismos, Nishimoto et al. analisada a cinética de IL-6 no soro e solúvel do receptor de IL-6 (sIL-6R), bem como a proporção de sIL-6R saturado com tocilizumab após a sua administração a doentes com doença de Castleman e RA. Os autores relataram que a sIL-6R aumentou marcadamente como IL-6, fez. Isto é, a administração de tocilizumab levou à formação de tocilizumab /sIL-6R complexos imunes desse modo prolongando o tempo de semi-vida de sIL-6R. A indisponibilidade subsequente de livre-Tocilizumab IL-6R, em seguida, inibiu o consumo de IL-6R-mediada de IL-6 [39]. Nossos resultados concordam com essas respostas em um estudo anterior e, no nosso caso relatado [13], [39]. Por conseguinte, acreditamos que Tocilizumab é útil para o tratamento de caquexia induzida por IL-6 que sobre-expressam o cancro.

Enquanto isso, considerámos também algumas preocupações relativas a uma função inibidora de IL-6. Primeiro, algumas citocinas são conhecidas para participar na imunidade anti-tumor através da activação ou regulação da função das células T efectoras antitumoral [40] – [42]. Por conseguinte, bloqueando a sinalização de IL-6 pode promover o crescimento e diferenciação das células tumorais por inibição da imunidade anti-tumoral. Pelo contrário, os nossos resultados mostraram que o crescimento do tumor não foi estatisticamente diferente, apesar de um aumento modesto nos ratos tratados com MR16-1 do que no grupo de controlo não tratado.