Abstract
Fundo
O composto solúvel em água STA-1474 novela é metabolizado a ganetespib (ex-STA-9090), um inibidor HSP90 potente mostrado anteriormente para matar linhas celulares de tumores caninos
in vitro e inibem o crescimento do tumor na definição de xenoenxertos de murino. O objetivo do presente estudo foi estender estas observações e investigar a segurança e eficácia do STA-1474 em cães com tumores espontâneos.
métodos e resultados
Este foi um estudo de Fase 1, no qual cães com tumores espontâneos recebeu STA-1474 sob um dos três esquemas de dosagem diferentes. A farmacocinética, as toxicidades, mudanças de biomarcadores tumorais, e as respostas foram avaliadas. Vinte e cinco cães com uma variedade de cânceres foram inscritos. Toxicidades foram principalmente de natureza gastrointestinal constituído por diarreia, vómitos, inapetência e letargia. A sobre-regulação da expressão da proteína HSP70 foi observado em ambas as amostras de tumor e PBMC dentro de 7 horas a seguir à administração de drogas. respostas objectivas mensuráveis foram observadas em cães com doença das células mastro malignas (n = 3), osteossarcoma (n = 1), melanoma (n = 1) e o carcinoma da tiróide (n = 1), para uma taxa de resposta de 24% (6 /25). doença estável ( 10 semanas) foi visto em 3 cães, para uma atividade resultante geral biológica de 36% (9/25)
Conclusões
Este estudo fornece evidências de que STA-1474. actividade biológica exposições em um modelo animal relevante de grande cancro. Dadas as semelhanças de canino e cancros humanos no que diz respeito à biologia do tumor e activação de HSP90, é provável que a STA-1474 e ganetespib irá demonstrar a actividade anti-cancro comparável em pacientes humanos
citação:. Londres CA, Urso MD , J McCleese, Foley KP, Paalangara R, Inoue T, et al. (2011) Fase I Avaliação da STA-1474, um pró-fármaco do romance HSP90 Inhibitor Ganetespib, em cães com câncer espontânea. PLoS ONE 6 (11): e27018. doi: 10.1371 /journal.pone.0027018
editor: Mikhail V. Blagosklonny, Roswell Park Cancer Institute, Estados Unidos da América
Recebido: 9 de julho de 2011; Aceito: 07 de outubro de 2011; Publicação: 03 de novembro de 2011
Direitos de autor: © 2011 Londres et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Esta clínica julgamento foi apoiado pelo financiamento do Synta Pharmaceuticals Corp. os financiadores contribuiu para o desenho do estudo, a análise farmacocinética e preparação de manuscrito, mas não teve nenhum papel no tratamento e avaliação de cães neste estudo
Conflito de interesses:. o os autores declararam que não existem interesses conflitantes.
Introdução
proteína de choque térmico 90 (HSP90), uma chaperona molecular que promove a maturação conformacional e estabilização de uma grande variedade de proteínas clientes, é uma alvo promissor para a intervenção terapêutica em cancro [1], [2], [3], [4]. Muitos clientes de HSP90 são conhecidos oncoproteínas, incluindo membros da família EGFR, Akt, Bcr-Abl, p53 mutante, Kit, e Met, entre outros [1], [3]. A inibição da função da HSP90 promove a degradação destas proteínas clientes na maioria das vezes através da via do proteassoma ubiquitina resultando em apoptose [2], [3], [4]. Acredita-se que selectividade de inibidores de HSP90 para maligna contra células normais para ser conferido pelo fato de que a acumulação de sobre-expressos e proteínas clientes mutadas promove uma mudança para a super-chaperona forma activa, complexo de HSP90 em células cancerosas [5], [6 ], [7]. Neste estado, uma proteína cliente associa com HSP90 com a ajuda da co-chaperonas, tais como p23, Hsp40, HOP, e HIP [3], [5], [6]. Esta super-chaperonas exposições complexos melhorada actividade de ATPase, e, por conseguinte, frequentemente se liga pequena molécula de ATP miméticos com uma afinidade mais elevada do que a forma não-complexada de HSP90, levando à acumulação de tumores em relação aos tecidos normais. Como tal, a actividade de HSP90 aumentada confere uma maior sensibilidade de células malignas à perda de função de HSP90 [5]. Segmentação de HSP90 no cancro também é atraente como não há mutações de resistência foram identificados nesta proteína em cancros humanos, o que sugere que ele representa um alvo relativamente estável para o tratamento químico [8]. Como a inibição de HSP90 pode afectar várias vias que frequentemente contribuem para o processo de oncogénica, inibidores de HSP90 tem o potencial para demonstrar a actividade ampla em vários tipos de tumores [1], [3].
A primeira classe de inibidores de HSP90 foi baseada em geldanamicina, um antibiótico benzoquinona ansamicina que se liga à bolsa de ligação ao ATP N-terminal de HSP90, bloqueando, assim, a sua função de ATPase. A geldanamicina e os seus derivados semi-sintéticos 17-AAG e 17-DMAG evitar a estabilização de proteínas clientes, resultando na sua degradação [9], [10], [11]. No entanto, geldanamicina e os seus derivados têm um número de limitações, incluindo os desafios de formulação e os efeitos secundários, tais como hepatotoxicidade [12]. STA-1474 (Synta Pharmaceuticals Corp., Lexington, MA, EUA) é um pró-fármaco altamente solúvel de ganetespib (anteriormente STA-9090), um novo composto contendo resorcinol não relacionado com geldanamicina que se liga no domínio ATP-biding na extremidade N-terminal de HSP90 e actua como um inibidor potente da HSP90. Ganetespib induz a degradação de várias proteínas clientes de HSP90, matar uma vasta variedade de linhas celulares de cancro humano em concentrações nanomolares baixas
in vitro
, e exibe uma actividade anti-cancro potente em modelos de tumores de xenoenxerto em ratos ([13], [ ,,,0],14], [15] e não publicados dados, Synta Pharmaceuticals Corp).
Em estudos anteriores, demonstramos que ganetespib e sua água pró-fármaco solúvel STA-1474 têm actividade contra linhas celulares de tumores caninos [14], [ ,,,0],15]. Tratamento de osteossarcoma (OSA) e mastocitoma (MCT) de linhas de células, quer com ganetespib ou inibição do crescimento induzida STA-1474, apoptose que foi caspase3 /7 dependentes, e a inactivação e /ou a regulação negativa da PKIT /Kit, PMET /Met , pAkt /Akt, e pSTAT3. Ambos ganetespib e STA-1474 exibiu actividade superior à geldanamicina derivado 17-AAG. Ganetespib inibiu o crescimento tumoral num modelo de xenoenxerto de MCT de murino, enquanto STA-1474 induziu a regressão do tumor, a caspase-3 de activação e regulação negativa de fosfo-Met (PMET) /Met e P-Akt /Akt em xenoenxertos de OSA [14], [15] . O objetivo do ensaio clínico a seguinte era estender os nossos
in vitro Comprar e murino estudos e investigar a segurança e eficácia do STA-1474 em cães com tumores espontâneos como um prelúdio para o trabalho clínico futuro em humanos com câncer.
Materiais e Métodos
Elegibilidade
Este ensaio clínico foi aprovado pelo Comitê Executivo University Veterinary Medical Center Hospital do Estado de Ohio em julho de 2007. consentimento informado por escrito do proprietário de cada cão foi solicitado de acordo com o IACUC e da faculdade de Medicina Veterinária diretrizes Ohio State University. STA-1474 foi administrado a cães com tumores espontâneos que falharam a terapia convencional ou para os quais não havia alternativas terapêuticas, ou para os quais a terapia convencional não era desejada pelo proprietário. Para serem elegíveis para o estudo, cada cão deve ter sido diagnosticado com um de um conjunto seleccionado de confirmação histológica neoplasias espontâneas, e atendeu a todos os critérios de inclusão e nenhum dos critérios de exclusão. malignidades elegíveis incluídos os carcinomas, sarcomas, tumores de células mastro, sarcomas histiocíticos, ou linfomas. Critérios adicionais de elegibilidade incluíram: 1 ano de idade no início do estudo; a função do órgão adequado; pelo menos 2 semanas após a quimioterapia ou radioterapia prévia com recuperação completa das toxicidades agudas destes tratamentos (3 semanas para um procedimento cirúrgico); pelo menos 1 semana desde que o tratamento prévio com qualquer outra droga em investigação; sem diagnóstico de leucemia; e nenhuma evidência de metástases cerebrais ou qualquer doença sistêmica grave incompatível com o estudo, a critério do investigador.
formulação STA-1474
STA-1474, um pró-fármaco solúvel de ganetespib, foi fornecido por Synta Pharmaceuticals Corp. (Figura 1). Liofilizado STA-1474 medicamento foi armazenado a 4 ° C e protegidas da luz, até ao dia do tratamento. O fármaco foi dissolvido em 148 Plasmalyte USP e o pH foi ajustado para a gama de 6,0 a 7,0, usando NaOH 0,1 N solução padrão para uma concentração final de 3 mg /mL. A solução de fármaco foi esterilizado por filtração com um filtro de nylon de 0,2 μ e carregado para um percurso do fluido não-DEHP IntraVia
TM 250 mL recipiente vazio. A bolsa de infusão carregada foi então ligado a um conjunto de polietileno forrada de paclitaxel ventilados, contendo um filtro de 0,22 μ, para administração. Tanto a bolsa de infusão e linha foram cobertos para proteger da luz. solução de fármaco foi utilizado no prazo de 24 horas de preparação.
É mostrada a estrutura química do STA-1474, um pró-fármaco de fosfato solúvel em água da ganetespib.
Desenho do estudo
Este estudo foi um estudo de Fase I dose de escalada, avaliação de rótulo aberto do segurança e farmacocinética do STA-1474 no cliente de propriedade cães com neoplasias espontâneas. Os cães foram administrados STA-1474 em um dos três regimes de dosagem e foram avaliados semanalmente ou duas vezes por semana dependente do regime utilizado. Avaliação das toxicidades clínicas e a resposta do tumor foi realizada em cada visita. Os cães foram avaliados para toxicidade hematológica e bioquímica a cada 7 dias, com exame de sangue de rotina. A dose inicial de STA-1474 foi fixado a 7 mg /kg com base em dados anteriores a partir de cães normais de laboratório (dados não mostrados) e o escalonamento da dose foi ajustada em incrementos de 2,5 mg /kg em grupos de 3 até limitador de dose de toxicidade (DLT) foi identificado. O DLT foi considerado qualquer grau 3 ou 4 hematológica ou toxicidade não hematológica com base em critérios estabelecidos os VCOG-CTAE [16]. Além disso, qualquer não-grade crônica 3 ou 4 toxicidades que impedirá significativamente a qualidade de vida (ou seja, letargia, inapetência) foram qualificados como DLTs. eventos adversos progressão ou sinais e sintomas relacionados com a doença definitivamente a doença não foram consideradas (AEs).
Toxicidade avaliação
Cada paciente foi submetido a uma história de linha de base completa, exame físico e avaliação laboratorial pré-dose, que incluiu um hemograma completo (CBC), perfil bioquímico sérico e urinálise. Os pacientes foram avaliados para eventos adversos nos dias 8, 15, 22 e 29, altura em que um hemograma completo contam com diferencial e química clínica foram realizadas. O exame de urina foi realizada no início do estudo e repetida somente se indicado. Estipulações relativas aos requisitos mínimos para continuar hematológicas dosagem foram incluídos no protocolo: hematócrito 25%, os neutrófilos 1500 /G, plaquetas 100000 /L. Além disso, transaminases hepáticas foram obrigados a ser . 4X limite superior do normal com uma bilirrubina e creatinina sérica total de normal a continuar a terapia STA-1474
medicações concomitantes
Para prevenir ou tratar de drogas -relacionados toxicidades gastrointestinais, cuidados de suporte foi administrado como necessária para cães inscritos nas coortes de dosagem diárias. Este consistiu tipicamente de famotidina, metronidazol, loperamida, metoclopramida, ondansetron, e /ou de maropitant. Os anti-histamínicos foram administradas a cães com tumores de células mastro, uma vez que estes tumores são conhecidos para liberação de histamina. Outros cuidados de suporte administrado a cães consistiu de prednisona e não-esteróides anti-inflamatórios medicamentos para tratar a inflamação associada ao tumor, inapetência, e para o controle da dor.
A resposta tumoral avaliação
As avaliações do tumor foram concluídas antes da entrada no estudo, e nos dias 8, 15, 22, e 29. para os cães que contínuo para além da planeadas 4 doses de STA-1474, as avaliações da resposta foram realizadas a cada 3-6 semanas depois disso, ou no momento da progressão do tumor suspeita. As respostas foram avaliadas pelo investigador de acordo com os critérios do protocolo pré-definido. A resposta em cães com doença avaliável foi realizada através de exame clínico, radiografia, ultra-sonografia ou tomografia computadorizada. Muitas lesões não eram passíveis de imagem radiográfica quantitativa, mas foram seguidos através de exame de série clínica (lesões superficiais; linfonodos palpáveis) ou por ultra-sonografia (gânglios linfáticos abdominais). lesões torácicas foram avaliados por radiografia torácica e lesões nasais por tomografia computadorizada.
A resposta em cães com doença mensurável foi julgado pelo investigador com base nos critérios RECIST [17]. Uma resposta completa (RC) foi definida como o desaparecimento de toda a doença em duas medições separadas por um período mínimo de 3 semanas. Uma resposta parcial (PR) foi definida como uma redução superior a 30% na soma do diâmetro maior das lesões alvo documentados por duas avaliações separados por pelo menos 3 semanas. Um aumento de 20% no tamanho de todas as áreas tumorais mensuráveis como medido pela soma dos maiores diâmetros das lesões alvo tomadas como referência a menor soma desde o início do tratamento, ou o aparecimento de uma nova lesão (s) poderia requerer como doença progressiva (DP). A resposta mista (MR) foi definida como PR em algumas lesões-alvo com PD em outras lesões alvo. Doença estável (SD) foi definida por ausência de critérios tanto para uma resposta ou progressão. Cães que não tinham evidência de progressão do tumor e que não tinham experimentado qualquer toxicidade inaceitável eram elegíveis para ciclos de tratamento prolongados. O aumento da dose em cada cão foi permitido se o cão estava tolerando a terapia
farmacocinética Ganetespib
As amostras de plasma foram coletadas no dia 1 e dia 22 da terapia nos intervalos especificados:., Antes e após a administração a 30, 60, 90, 120, 180, 300 (5 h), 540 (9 h) e 1440 (24 hr) minutos em relação ao início da dosagem. No dia 8, dia 15, e dia 29, foi recolhido plasma antes da dosagem única. Cerca de 1 ml de sangue foi elaborada a partir de um cateter, colocado num tubo de vidro de vácuo heparina de sódio, e colocadas em gelo até à centrifugação. As amostras de sangue foram centrifugadas a 3300 rpm durante 10 minutos, dentro de 30 minutos após a colheita. O plasma foi transferido com uma pipeta em duas criotubos e armazenou-se a -80 ° C até à análise.
Concentrações plasmáticas de ganetespib foram determinados utilizando uma espectrometria de massa em tandem com cromatograf ia líquida qualificado (/MS LC-MS) método. As amostras foram analisados num sistema de HPLC consiste de um módulo de separação HP1100 Agilent (Santa Clara, CA) acoplado a um detector de AB SCIEX API400 MS /MS (Foster City, CA). ganetespib marcada com isótopo estável foi utilizado como um padrão interno. extracção da amostra foi realizada por um método de extracção de líquido-líquido com amostras de plasma de 25 ul e 800 ul de éter metil butilo terciário. A fase orgânica de amostras foi evaporado até à secura sob azoto e reconstituídas com uma solução de água /acetonitrilo para injecção. A separação cromatográfica foi realizada numa coluna analítica de fase inversa (4 mm de partícula, 50 × 2,0 milímetros de diâmetro interno) com eluição gradiente de ácido fórmico de água /0,1% e acetonitrilo /0,1% de ácido fórmico com um caudal de 500 mL /min. O tempo total de execução foi de 4 min. A quantificação foi conseguida por detecção por MS /MS em modo de ião positivo por monitorização de reacção múltipla. O limite inferior de quantificação (LIQ) foi de 1,00 ng /mL, com uma gama de concentrações de 1,00 a 1000 ng /mL.
Os parâmetros farmacocinéticos para ganetespib foram determinados a partir dos dados de concentração de plasma usando o módulo de análise não compartimentada em WinNonlin, versão 5.2 (Pharsight Corporation, St. Louis, MO). As amostras pré-dose que medidos abaixo da LLOQ (BQL) foram tratados como zero para os cálculos. A concentração máxima (Cmax) e tempo de concentração máxima (Tmax) foram directamente determinada a partir dos perfis de tempo de concentração observados. A área sob a curva de concentração plasmática-tempo (AUC) foi calculada pela regra trapezoidal linear. A semi-vida aparente (T
1/2) foi calculada como t
1/2 = 0,693 /λ onde λ era a constante de velocidade de eliminação estimada a partir da regressão do declive terminal da curva de concentração versus tempo.
Avaliação de HSP70 expressão
biópsias pequenas foram coletadas a partir de um subconjunto de tumores de pacientes que eram acessíveis a 0, 7 e 24 horas após o tratamento. As biópsias foram obtidos utilizando um instrumento de punção biópsia 3 mm ou 14 gauge agulha Tru-cut. Todas as amostras foram colocados em criotubos, imediatamente flash congelados em azoto líquido, e armazenado a -80 ° C até à análise de HSP70. Para avaliar os níveis relativos de HSP70 nas amostras tumorais recolhidas, um HSP70-enzima disponível comercialmente linked immunosorbent assay (ELISA; Assay Designs, Ann Arbor, MI) foi realizada. amostras de tumor congeladas foram pulverizadas utilizando um almofariz e pilão congelado. O pó resultante foi ressuspenso em azoto líquido, recolhido, em seguida, dividido entre duas conicals 15 mL; um cônico para ELISA e um para Western blot (ver método abaixo). Uma vez que o azoto líquido evapora-se para longe, as amostras foram deixadas a descongelar em gelo. As amostras para os testes ELISA foram ressuspensas em (1X) Reagente de extracção contendo 1 ug /ml de aprotinina, 1 ug /mL de leupeptina, 1 ug /mL de pepstatina A, PMSF 1 mM, ortovanadato de sódio 1 mM, e 10 fluoreto de sódio mM, usando 1 ml para cada 0,5 cm
3 de tecido. As amostras foram incubadas num agitador rotativo durante 1 hora a 4 ° C, centrifugada durante 15 minutos a 4 ° C, e, em seguida, os sobrenadantes foram recolhidos. ensaio de quantificação de proteína de Bradford foram realizados nos extractos utilizando Reagente BioRad (BioRad, Hercules, CA). As amostras foram igualados a 250 ug /mL com (1X) reagente de extracção, aliquotados, e armazenados a -80 ° C até à análise. Numa data posterior, onde as amostras congeladas deixadas descongelar em gelo, em seguida, diluídas em série com o diluente da amostra 2 (fornecido no kit) para 1:04, 1:16, e 1:32. 100 ul de cada diluição foi adicionada aos poços apropriados, em duplicado, à placa de ELISA de 96 poços pré-revestidos. A ELISA foi realizada seguindo as instruções do fabricante, e a absorvância foi medida no prazo de 30 minutos, utilizando um leitor de microplacas Spectramax (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) com o comprimento de onda ajustado a 450 nm e um comprimento de onda de correcção a 540 nm.
Para avaliar os níveis de HSP70 em células mononucleares do sangue periférico, 8 ml de sangue total foi recolhido antes da dosagem e 24 horas após o tratamento (em alguns casos, também em 7 horas após o tratamento) no dia 1 e no dia 22 a partir da veia jugular em dois 4 mL BD Vacutainer tubos CPT (BD, Franklin Lakes, NJ). As amostras foram mantidas à temperatura ambiente até a centrifugação durante 1 hora a 1600 RCF, dentro de 2 horas após a colheita. Após centrifugação, a camada de células mononucleares no plasma foi transferido para um cónico de 15 mL. As PBMC foram lavadas por adição de 15 mL de PBS e centrifugando durante 15 minutos a 300 RCF. Depois de duas lavagens, os sedimentos celulares foram ressuspensos em 1 mL de PBS, e transferidos para um tubo de microcentrífuga de 1,5 mL. As células foram novamente sedimentadas por centrifugação a 13000 RCF durante 1 minuto. O sobrenadante foi removido e os sedimentos celulares, onde rapidamente congelados em azoto líquido e armazenados a -80 ° C. Imediatamente antes da análise, peletes PBMC foram deixados a descongelar em gelo, em seguida, cada amostra foi ressuspenso em 500 ul de tampão (1x) Extracção com inibidores de protease. Utilizando o método descrito acima, as amostras foram analisadas para concentrações relativas de HSP70 usando o HSP70-ensaio de imunoabsorção enzimática (Designs ensaio, Ann Arbor, MI).
Avaliação de biópsias de tumor para a expressão de HSP90
amostras de tumor congeladas foram processadas tal como descrito acima, em seguida, ressuspensas em 100-150 ul de tampão de lise consistindo em Tris-HCl 20 pH 8,0, 137 mM de NaCl, 10% glicerol, 1% de IGEPAL CA-630, 10 mM de ácido etilenodiaminotetracético (EDTA), 1 mg /mL de aprotinina, 1 mg /ml leupeptina, 1 mg /mL de pepstatina A, fluoreto phenylmethysulphonyl 1 mM, ortovanadato de sódio 1 mM, fluoreto de sódio 10 mM (todos da Sigma, St. Louis, MO). Amostra foram agitadas a 4 ° C durante 1 hora, e, em seguida, centrifugado durante 15 minutos a RCF de 13000. Um ensaio de proteína de Bradford foram realizados em lisados utilizando Reagente BioRad (Hercules, CA). 60-100 ug de proteína foram separadas por SDS-PAGE e transferidos para membranas de PVDF. As membranas foram incubadas durante a noite com anticorpos anti-HSP90 (Cell Signaling Technology, Danvers, MA), lavou-se, em seguida, incubadas com anticorpo secundário ligado a peroxidase de rábano. As membranas foram lavadas novamente, em seguida, expostos a Super Signal Oeste Dura prolongado Substrato Duração (Pierce, Rockford, IL) As membranas foram retirados, lavados, e sondado para β-Actina (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) utilizando o SNAP d.i. Aparelho (Millipore, Billerica, MA) de acordo com as instruções do fabricante.
Resultados
Assuntos
Um total de 25 cães com uma variedade de cancros espontâneos foram incluídos no estudo. Dados demográficos do paciente e tipo de tumor estão listados na Tabela 1. A maioria dos cães envolvidos neste estudo tinham falhado regimes de tratamento anteriores (n = 18, 72%), incluindo a cirurgia, radioterapia, quimioterapia ou uma combinação destes tratamentos. Tendo em conta os dados anteriores demonstram a actividade biológica de ganetespib no osteossarcoma canino (OSA) e linhas de células de tumor de células mastro (MCT), bem como evidência de regressão de tumor /estabilização em modelos de xenoenxerto de murinos de OSA canino e MCT, cães com estes tipos de tumor eram enriquecida neste estudo Fase I. tipos de tumor representados incluídos OSA (n = 10), o MCT (n = 4), o carcinoma da tiróide (n = 3), linfoma (n = 3), outro carcinoma (n = 2), condrossarcoma nasal (n = 1), via oral melanoma maligno (n = 1), e fibrossarcoma oral (n = 1).
Os grupos de tratamento e análise farmacocinética
Cães (n = 12) foram inicialmente entrou em um regime de tratamento consistindo de STA-1474 administrado por via intravenosa durante uma hora, uma vez por semana. Uma segunda coorte de cães (n = 6) foi administrado STA-1474 mais de 8 horas uma vez por semana. Este regime de dosagem foi escolhida com base em uma resposta parcial ao tratamento observado em um cão com melanoma maligno no primeiro coorte após o extravasamento da droga e a exposição prolongada do fármaco devido à lenta absorção subcutânea. O terceiro grupo de cães (n = 7) recebeu STA-1474 administrado durante uma hora, duas vezes por semana. Cada cão colocado no estudo foi destinado a receber pelo menos 4 doses de STA-1474, com a opção de continuar o tratamento na cara de qualquer doença estável ou uma resposta objectiva do tumor.
Os dados farmacocinéticos são resumidos na Tabela 2 . amostragem da farmacocinética completa foi realizada para todos os cães no estudo do primeiro dia de administração da droga. A média de concentração no plasma – tempo perfis para cães entre os três grupos de tratamento são mostrados na Figura 2a, com perfis representativos de 6 cães (dois em cada grupo de tratamento) na Figura 2b. Para os cães que receberam qualquer um dos três regimes de dosagem, a AUC foi relativamente semelhante, variando entre 5013-5701 ng /ml ganetespib-hr. No entanto, as infusões de drogas por hora de 9,25 mg /kg ou 5 mg /kg resultou num Tmax mais curto (0,7 h e 1,1 h, respectivamente) e maior Cmax (3982 ng /ml e 3415 ng /ml, respectivamente) em comparação com o 8 horas de infusão (Tmax 5,7 horas, a Cmax 802 ng /ml)
a) a média de concentração de plasma ganetespib -. perfil de tempo para cada regime de dosagem de b) concentração ganetespib representativas no plasma – perfil de tempo para dois pacientes em cada regime de dosagem.
a avaliação da segurança
Os eventos adversos durante os ciclos de tratamento (resumidas na Tabela 3) consistiu quase inteiramente de desconforto gastrointestinal (anorexia, náuseas, vómitos, diarreia) e letargia. Não hematológicas e bioquímicas toxicidades relacionadas com a droga foram observados em qualquer doses. Um cão com osteosarcoma metastático desenvolveu insuficiência renal aguda anúrica resultando em eutanásia. necropsia subsequente revelou a presença de grandes êmbolos tumorais em ambas as artérias renais, com nenhuma evidência de alterações induzidas droga ao parênquima renal, e como tal progressão da doença foi determinada como sendo a causa da insuficiência renal observada. Um segundo cão desenvolvida teste de função hepática aguda (ALT, ALP) e bilirrubina 24 horas após a administração da droga. O cão vomitado após a ingestão de um grande corpo estranho que consiste em compressas de gaze utilizados para curativos do local do cateter e os valores bioquímicos retornaram ao normal dentro de 72 horas; uma obstrução temporária parcial do ducto biliar comum devido a corpo estranho foi determinado como sendo a causa das alterações bioquímicas no presente caso.
O aumento da dose foi realizado e toxicidades limitantes da dose foram identificados usando o uma vez por semana de infusão de hora em hora. Enquanto quase todas as toxicidades gastrointestinais foram principalmente de grau 1 ou 2 na natureza, em doses superiores a 9,5 mg /kg, os cães foram encontrados para ter letargia e anorexia que os proprietários sentiram qualidade significativamente prejudicada de vida, resultando na interrupção da administração da droga. Por exemplo, todos os três cães que receberam 10,25 mg /kg de droga, de Grau 2 diarreia, letargia, anorexia e cada e subsequentemente receberam apenas uma dose do fármaco. Como tal, 9,5 mg /kg foi considerada como sendo a dose máxima tolerada semanal de fármaco quando administrado semanalmente durante 1 a 8 horas. A esta dose, as toxicidades gastrointestinais são controláveis com a adição concomitante de outros medicamentos que consistem em ondansetron, metoclopramida e /ou maropitant para a náusea /vómitos e metronidazol e /ou de loperamida para a diarreia. Todos os cães que continuaram em tratamento com STA-1474 para além das iniciais 4 ciclos de tratamento manteve-se em uso de medicações concomitantes para a duração do tratamento medicamentoso.
A resposta à terapia
As taxas de resposta foram determinados para cães inscritos para os 3 grupos de dosagem diferentes. Para os cães que receberam uma vez por semana, regime de dosagem (N = 12), não há respostas objectivas foram observadas com a excepção de um cão com uma vasta melanoma maligno oral que experimentou um evento extravasamento durante o 4
th tratamento com STA-1474. Este cão teve uma resposta parcial do tamanho do tumor e na sequência da análise farmacocinética (Figura 3), determinou-se que a administração subcutânea inadvertida resultou num Tmax prolongado, sem uma mudança significativa nas reais AUC (dados não mostrados).
paciente # 5 tinha um melanoma maligno oral, agressivo, que tinha invadido na cavidade nasal. Durante a 4
th ciclo de tratamento com STA-1474, um evento extravasamento ocorreu, resultando em farmacocinética alteradas. Uma diminuição acentuada na massa oral foi observada 7 dias mais tarde e um varrimento da TC subsequente confirmou uma resposta parcial ao tratamento. São mostrados dois representante combinado imagens de CT de tumor antes e após o tratamento.
Com base na evidência de atividade biológica associada a um Tmax mais longo, modelagem farmacocinética foi empregado para determinar um modelo de dosagem que iria conseguir um Tmax semelhante quando a droga foi entregue ao longo de um período de tempo mais longo na mesma taxa de dosagem. A previsão era de que 9,5 mg /kg de STA-1474 entregue uma infusão 8 horas resultaria em concentrações plasmáticas de ganetespib acima de 100 ng /ml de plasma para 8-10 horas e, consequentemente, os próximos 6 cães foram inseridos em uma coorte avaliar este regime de dosagem. Além disso, dois cães do primeiro grupo de dosagem (9,5 mg /kg uma vez por semana) foram transferidos para o protocolo de infusão de 8 horas depois de terminar as planejadas 4 doses de droga. Dos 6 cães tratados inicialmente com o mais infusão, havia duas respostas parciais (carcinoma metastático da tiróide, 36 semanas, Figura 4a; OSA metastático, 20 semanas, Figura 4b), uma resposta mista (MCT metastático, 16 semanas), e dois cães experimentaram doença estável (ambos com OSA metastático, 12 semanas). Um cão com carcinoma de tireóide metastático que trocou o 1 horas para 8 horas de infusão experimentada doença estável por 40 semanas, e o cão com oral de melanoma maligno e extravasamento evento experimentaram uma resposta parcial contínua durante 12 semanas, enquanto no protocolo de infusão de 8 horas.
a) paciente # 14 tinha um carcinoma de tireóide localmente recorrente com doença metastática para os pulmões. Este paciente recebeu STA-1474 sobre o protocolo de infusão de 8 horas e experimentou uma resposta parcial ao tratamento tanto da recorrente local e a doença metastática. Mostrados são representativos radiografias antes e depois de 15 tratamentos com STA-1474. As setas amarelas apontam para os nódulos pulmonares metastáticos. b) Paciente # 18 teve OSA metastático para os pulmões após a amputação e quimioterapia para um OSA apendicular. Este paciente recebeu STA-1474 sobre o protocolo de infusão de 8 horas e experimentou uma resposta parcial ao tratamento. Mostrados são representativos radiografias antes e após 4 tratamentos com STA-1474. As setas amarelas apontam para os nódulos pulmonares metastáticos.
Uma vez que o protocolo de infusão mais pareceu estar associado com atividade biológica, queríamos determinar se a administração mais frequente do STA-1474 usando o protocolo de perfusão de 1 hora seria tanto tolerável e induzir respostas objectivas para a terapia. Uma dose de 5 mg /kg administrada ao longo de uma hora duas vezes por semana foi escolhido com base em dados preliminares de tolerabilidade em cães normais e modelos farmacocinéticos (dados não mostrados). Tal como mostrado na Figura 2a e b, este regime de dosagem resultou numa Cmax e AUC ligeiramente menor do que a gerada pela dose de 9,5 mg /kg. Toxicidades observadas foram semelhantes para aqueles com uma vez por semana a dose mais elevada de STA-1474. Dos 7 cães administrados este protocolo, 2 experimentaram respostas parciais à terapia (ambos os MCTs, figura 5) e ambos os cães passou a ter a sua doença restante extirpado cirurgicamente. Um cão (OSA metastático) tiveram a doença estável por um curto período de tempo, mas o proprietário optou por não continuar a terapia e, como tal, este não satisfazer os critérios RECIST. Os cães restantes (linfoma, n = 3; OSA metastático, n = 1) doença progressiva experimentada
a) paciente # 19 teve recorrente de grau 3 MCTs cutâneas.. Este paciente recebeu STA-1474 sobre o protocolo de infusão de uma hora duas vezes por semana e apresentaram uma resposta parcial ao tratamento de lesões cutâneas após 7 tratamentos. b) Paciente # 24 teve um grande MCT cutânea não tratados previamente. Este paciente recebeu STA-1474 no protocolo de perfusão de 1 hora, duas vezes por semana e apresentaram uma resposta parcial ao tratamento das lesões cutâneas após 4 tratamentos.
a avaliação da expressão de HSP90 e HSP70 em amostras de tumor e PBMC
Após a inibição da HSP90, rápida regulação positiva da expressão de HSP70 é frequentemente observado [14], [15], [18]. Como tal, a regulação positiva de HSP70 pode potencialmente servir como um biomarcador da perda da função de HSP90. Para determinar se o tratamento com STA-1474 alterou a expressão de HSP70, HSP70 e se poderia servir como um biomarcador potencial substituto sensível para as CMSPs de inibição de HSP90 foram recolhidos pré e pós-tratamento e transferência de Western foi realizada para HSP70. Como mostrado na Figura 6a, pequenos aumentos na expressão de HSP70 foram evidentes nas amostras de PBMC post tratamento, embora estas alterações eram difíceis de quantificar com precisão. Por conseguinte, um protocolo de EISLE foi utilizado em amostras subsequentes para avaliar mais definitivamente a regulação positiva de HSP70.