Abstract

Fundo

Os nódulos tireoidianos são comuns, e cerca de 5% desses nódulos são malignos. Pleiotrofina (PTN) é um factor de crescimento de ligação à heparina, que é sobre-expresso em muitos cancros. A expressão de PTN em câncer de tireóide papilar (PTC) é desconhecida

Método e Achados

74 indivíduos (idade 47 ± 12 y, 15 homens) que tinham tireoidectomia com um diagnóstico histológico:. 79 nódulos benignos e 23 PTCs (10 clássicos, de 6 células de altura, 6 variante folicular e 1 indeterminados). Aspirativa com agulha fina foram obtidos (FNA) amostras

ex vivo

a partir de tecido retirado cirurgicamente e ensaiadas para PTN e tireoglobulina (Tg). A imuno-histoquímica (IHQ) foi realizada em secções de tecido. Em amostras de FNA, a concentração PTN normalizados para Tg foi significativamente maior no PTC do que em nódulos benignos (16 ± 6 vs 0,3 ± 0,1 ng /mg, p 0,001). Na variante folicular da PTC (n = 6), a relação de /Tg PTN foi também mais elevada do que em nódulos benignos (1,3 ± 0,6 vs 0,3 ± 0,1 ng /mg,

P

0,001, respectivamente). IHC mostraram localização citoplasmática de PTN em células PTC.

Conclusão

ex amostras vivo

FNA, o PTN à relação de tireoglobulina foi maior em PTCs, incluindo folicular variante PTC, que em nódulos tireoidianos benignos. Os resultados levantam a possibilidade de que a medição do PTN à relação de Tg pode fornecer informações de diagnóstico e /ou prognóstico útil na avaliação dos nódulos da tireóide

Citation:. Jee YH, Sadowski SM, Celi FS, Xi L, Raffeld M, Sacks DB, et al. (2016) Aumento pleiotrofina concentrações no papilar cancro de tiróide. PLoS ONE 11 (2): e0149383. doi: 10.1371 /journal.pone.0149383

editor: Soheil S. Dadras, da Universidade de Connecticut Health Center, United States |

Recebido: 06 de agosto de 2015; Aceito: 01 de fevereiro de 2016; Publicação: 25 de fevereiro de 2016

Este é um artigo de acesso aberto, livre de todos os direitos autorais e pode ser livremente reproduzido, distribuído, transmitido, modificado, construído em cima, ou de outra maneira usado por qualquer pessoa para qualquer finalidade lícita. O trabalho é feito disponível sob a dedicação de domínio público da Creative Commons CC0

Data Availability:.. Todos os dados relevantes estão dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação

Financiamento: Este trabalho foi apoiado pela intramurais Programas de Pesquisa do Instituto Eunice Kennedy Shriver Nacional de Saúde Infantil e Desenvolvimento Humano (NICHD), o Instituto Nacional de Diabetes e Doenças Digestivas e renais (NIDDK), o Centro de Pesquisa do Câncer, National Cancer Institute (NCI), ea Clínica centro dos Institutos Nacionais de Saúde

Conflito de interesses:. YHJ e JB são co-inventores no pedido de patente depositado pelos Institutos Nacionais de Saúde, que abrange a medição de midkine e pleiotrofina em amostras de FNA (pedido de patente dos EUA No. 61 /728,624 arquivado 20 de novembro de 2012. HHS. Referência: e-016-2013/0-US-01 em ensaio para medir midkine ou nível pleiotrofina para o diagnóstico de um crescimento Listados inventores: Baron e Jee). Autores não têm outras declarações relevantes em matéria de emprego, consultoria, patentes, produtos em desenvolvimento ou produtos modificados. Esta não alterou a adesão dos autores para PLoS ONE políticas de dados e materiais de compartilhamento. Caso contrário, os autores declaram que não há conflito de interesse que possa ser entendido como prejudicando a imparcialidade da pesquisa relatada.

Introdução

Os nódulos tireoidianos ocorrem com frequência na população em geral, com uma prevalência de cerca de 3-7% para massas palpáveis ​​[1, 2]. Cerca de 5% dos nódulos da tireóide são malignos [3] e o tipo histológico mais comum é o câncer de tireóide papilar (PTC) [1]. Dois grandes desafios clínicos são para distinguir maligna de nódulos benignos e identificar essas doenças malignas da tiróide que são agressivos [1]. citologia aspirativa por agulha fina (FNA) representa a ferramenta de diagnóstico pré-operatório primária para a avaliação de nódulos da tireóide [4], mas é inconclusivo em até 30% dos pacientes [5]. Em particular, a variante folicular PTC é difícil de distinguir de lesões benignas foliculares pela citologia [6, 7].

pleiotrofina (PTN) e midkine (MDK) estão relacionados com a heparina polipéptido de ligação a factores de crescimento [8, 9] . PTN e MDK são sobre-expressos em vários cancros humanos, onde eles são pensados ​​para promover a sobrevivência celular, proliferação e angiogênese, contribuindo para o crescimento do tumor [10, 11].

Nós informou recentemente que a concentração de MDK em amostras de FNA é elevada em comparação com PTCs nódulos benignos [12]. Nesse estudo, a concentração MDK foi normalizada para a concentração de tiroglobulina (Tg), que ajustada para o índice de tecido e também melhorou a separação entre as amostras benignas e malignas por causa de menores concentrações de TG em nódulos malignos. No entanto, nem a concentração MDK nem a relação MDK /Tg foi elevada na variante folicular do PTC subgrupo [12], limitando o valor diagnóstico potencial desta abordagem.

PTN foi previamente relatado para ser sobre-expresso em medular da tiróide cancro [13], mas a expressão de PTN em PTCs não foi investigada. Trabalhamos com a hipótese de que a concentração PTN e índice de concentração PTN /Tg são mais elevados em PTCs que em nódulos benignos.

Materiais e Métodos

Sujeitos e colheita de amostras

Setenta e quatro indivíduos adultos (idade 47 ± 12 y, 15 do sexo masculino), com nódulos tireoidianos submetidos a tireoidectomia no National Institutes of Health (NIH) Centro clínico foram incluídos na análise. protocolos de estudo foram aprovados pelo Instituto Nacional de Diabetes e Digestivo e Kidney Disease Institutional Review Board, e todos os pacientes desde seu consentimento informado para participar do estudo. Após a tireóide foi excisada, nódulos selecionados com tecidos circundantes foram cortada para o aprovisionamento e, em seguida,

ex vivo

FNA foi realizada pela passagem de uma agulha de calibre 25 para os nódulos. A agulha foi passado 10 a 20 vezes. Não foi aplicada sucção. O tecido no interior da agulha foi removida por lavagem com 0,5 ml de PBS contendo 1% de BSA. As amostras foram divididos em alíquotas e armazenado imediatamente a -80 ° C até ao ensaio. Multiple

ex amostras vivo

FNA (média de 3,0 amostras) foram obtidos por nódulo. Inicialmente tentaram medir PTN em

in vivo

amostras de washout FNA, depois de o conteúdo agulha tinha sido expulso para citologia, mas muitas vezes encontraram concentrações PTN indetectáveis, indicando tecido insuficiente restante na agulha (dados não mostrados).

Um total de 103 nódulos foram amostrados. Destes, 62 amostras de nódulos foram previamente testados para a concentração MDK e incluídos no relatório prévio [12].

pleiotrofina Sandwich ELISA Ensaio

Um sanduíche PTN ELISA foi desenvolvido em nosso laboratório (ver S1 método para detalhes de ensaio). O CV intra-ensaios foi 6,9% de concentração elevada (1,3 ng /mL) e 9% em baixa concentração (0,2 ng /ml). A inter-ensaio foi de 8,8% a 0,2 ng /mL e 12,3% a 0,6 ng /mL. O limite de detecção foi de 10 pg /mL. Não houve reactividade cruzada com até 50 ng /mL de MDK (Fig S1A). PTN concentrações em PBS contendo 1% de BSA permaneceu estável em plástico, mas não tubos de vidro ao longo de 2 horas à temperatura ambiente e com ciclos repetidos de congelação-descongelação (S2 FIG). O ensaio mostrou bom paralelismo (S3 Fig).

Midkine Sandwich ELISA Ensaio

MDK sanduíche ELISA foi realizado como descrito anteriormente usando um kit comercial (Biovendor, República Checa) com modificações [12]. CV intra-ensaios foi 3,4% em concentração elevada (0,7 ng /mL) e 5,2%, a baixa concentração (0,25 ng /mL). -Ensaio Inter CV foi de 12,3% em baixa concentração. O limite de detecção foi de 0,009 ng /ml. Não houve reação cruzada com até 50 ng /mL de PTN (S1B Fig).

Thyroglobulin Ensaio

50 mL de tampão contendo tecido tireoidiano de uma agulha de FNA foi diluído 10 vezes em solução salina normal e a concentração de Tg foi medida com um ensaio imunométrico quimioluminescente (Immulite 2000XPi, Siemens, UK) de acordo com as instruções do fabricante e como descrito anteriormente [12].

análise de mutação BRAF

DNA foi extraído em um dispositivo robótico semiautomated Qiacube (Qiagen, Valencia, CA) utilizando o kit de QIAamp DNA Mini (Qiagen) a partir de 17 amostras de FNA washout e 6 amostras de tecido congeladas, ou o Kit de DNA QIAamp FFPE tecidual (Qiagen) para parafina -embedded secções de tecido, de acordo com as instruções do fabricante.

BRAF

T1799A (V600E) análise mutacional foi realizada utilizando o ensaio de detecção de mutações PrimePCR ddPCR (Bio-Rad, Hercules, CA) em um BIO-RAD QX200 gota sistema digital PCR (ddPCR). Cada reação incluiu 10 ul de 2x ddPCR supermix para sondas (sem dUTP), 1 ml de

BRAF V600E

primer /mix sonda (FAM), 1 jul de BRAF tipo selvagem primer /mix sonda (HEX), e 40-100 ng de ADN genómico. A presença de mutação e a abundância fraccionada do alelo mutante foi determinada com QuantaSoft v.1.7 (Bio-Rad).

pleiotrofina Imunohistoquímica

Os tecidos foram fixados em formalina, embebidos em parafina, e cortado em secções de 5-mm de espessura que foram desparafinadas e re-hidratadas em álcool graduado. Para a recuperação de antigénio, as secções foram colocadas em tampão de citrato a 120 ° C usando uma panela de pressuer durante 10 minutos. Após bloqueio com soro de coelho normal a 1,5% em solução salina e Tween 20 (TBST) Tris-tamponada durante 60 minutos à temperatura ambiente, as lâminas foram incubadas com um anticorpo policlonal de cabra criado contra humano PTN (Cat # AF-252-PB, P ; D Systems, Minneapolis, MN) a 1: 250 de diluição de soro, em 1,5% em TBST durante a noite a 4 ° C e depois visualizada com um anticorpo secundário biotinilado anti-IgG de cabra (1: 200) utilizando o Vectastain ABC (IgG de cabra, PK- 6105) e kits de DAB (Vector Laboratories, Inc. Burlingame, CA) e contrastadas com hematoxilina. A omissão do anti-soro primário foi usado como controlo e de embrião de ratinho negativos lâminas foram utilizadas como um controlo positivo (Fig S5). As lâminas foram digitalizados usando um scanner ScanScope XT digitais slide e visualizados usando software ImageScope (Aperio Technologies, Inc., Vista, CA).

A análise estatística

Todas as amostras de FNA de cada nódulo foram em média de se obter um único valor médio. Após a transformação log, a concentração PTN, a concentração de Tg e PTN /relação de Tg foram comparados entre os grupos histológicos usando t-testes e ANOVA com correção de post-hoc de Bonferroni para comparações múltiplas. A relação entre o PTN e Tg foi avaliada após transformação log pelo modelo linear geral com o número de nódulos como covariável. A relação entre a PTN /Tg e RDM /Tg foi avaliada por regressão Pearson após transformação logarítmica. A análise estatística foi realizada usando SPSS, versão 12 (IBM, NY).

Resultados

As características dos indivíduos e nódulos

Um total de 103 nódulos de 74 indivíduos (idade 47 ± 12 y, 15 machos) foram estudados por

ex vivo

FNA no momento da aquisição, imediatamente após a tireoidectomia. O exame histológico revelou 23 nódulos com PTC (10 clássico, de 6 células de altura, 6 variante folicular, e 1 indeterminado), 1 nódulo com cancro medular da tiróide e 79 nódulos benignos (72 nódulos adenomatóides, 4 adenomas foliculares e 3 nódulos hiperplásicos). Características dos nódulos com PTC são apresentados na Tabela 1.

concentrações Associação de PTN e TG em amostras FNA

concentrações PTN foram positivamente associado com concentrações de Tg em amostras de washout FNA de nódulos benignos (análise incluiu todos os passes individuais, R

2 = 0,04,

P Art 0,001, S4 Fig). Uma vez que esta correlação provavelmente ocorreu porque ambos PTN e as concentrações de TG no fluido de lavagem foi dependente da quantidade de tecido da tiróide presente na amostra, os níveis PTN foram normalizados para níveis de Tg como PTN /Tg, ng /mg, para corrigir para a quantidade de tecido tireoidiano.

concentrações PTN e relação PTN /TG ​​em amostras ex vivo FNA

concentrações PTN em PTC foram significativamente superiores nos nódulos benignos (0,1 ± 0,01 vs 0,05 ± 0,01 ng /mL, média ± SEM, P 0,001). concentrações PTN no subconjunto de variante folicular câncer papilar da tiróide (FVPTC) também foram mais altas do que em nódulos benignos (0,12 ± 0,03 vs 0,05 ± 0,01 ng /mL, p 0,001, Fig 1A).

As amostras foram obtidas pela

ex vivo

aspiração com agulha fina; PTN e Tg foram medidos por imunoensaio. concentrações PTN (média ± SEM) foram maiores em PTC (incluindo todos os subtipos) e no grupo de variante folicular PTC (FVPTC) do que em nódulos benignos (A). Da mesma forma, PTN /Tg foi maior em PTC (incluindo todos os subtipos) e no subconjunto de FVPTC do que em nódulos benignos (B). concentrações PTN não diferiram significativamente entre clássico, variante de células de altura, e FVPTC (C). PTN /Tg tendiam (

P

= NS) a ser menor em FVPTC do que em outros subtipos (D). Scatterplot mostrando valores PTN /TG ​​de todos os nódulos. símbolos fechados, PTC; símbolos abertos, nódulos benignos (E). Valores inferiores a 0.001 são exibidos como igual a 0,001.

concentrações de Tg foram menores em PTC do que em nódulos benignos (112 ± 30 vs 926 ± 88 ug /mL,

P 0,001). No subgrupo FVPTC, as concentrações de Tg também tendem a ser mais baixos do que em nódulos benignos, mas a diferença não foi estatisticamente significativa (203 ± 80 vs 926 ± 88 ug /mL ng /mL,

P

= NS). A proporção de PTN para Tg (ng /mg) foi maior do que em PTC em nódulos benignos (16 ± 6 0,3 ± 0,1 ng /mg,

P

0,001, Figura 1B e 1E), e também significativamente maior do que em FVPTC em nódulos benignos (1,3 ± 0,6 vs 0,3 ± 0,1 vs ng /mg,

P

0,001) (Figura 1B). PTN /Tg também foi elevada em um nódulo contendo cancro medular da tiróide (2,9 ng /mg).

Entre PTCs, não houve diferença nas concentrações PTN entre clássico, variante de células de altura e FVPTCs (0,09 ± 0,02, 0,12 ± 0,03 e 0,12 ± 0,03 ng /mL, respectivamente,

P

= NS) (Fig 1C). No entanto, FVPTC tiveram os mais baixos os rácios PTN /TG ​​(24,5 ± 11,7, 42,1 ± 23,3 e 1,3 ± 0,6 ng /mg, respectivamente,

P

= 0,06) (Fig 1D).

de 10 nódulos benignos com a maior relação /Tg PTN, 2 ocorreram em pacientes com doença de Graves (2 de 2 indivíduos com doença de Graves), 1 em um assunto com um adenoma folicular (1 de 4 indivíduos com adenoma folicular), 1 em um paciente com tireoidite linfocítica crónica (1 de 3 indivíduos com tireoidite linfocítica crónica), 1 em um nódulo benigno adjacentes à PTC e 5 em nódulos benignos sem outros achados histológicos significativos.

O rácio /Tg PTN não tinha associação com o tamanho do nódulo ou a presença de metástases linfonodais (dados não mostrados).

Associação entre o PTN /Tg e MDK /Tg e análise bivariada

Ambos MDK /Tg e PTN /Tg foram medidos em 22 PTCs e 77 nódulos benignos. Não houve associação entre o PTN /Tg e MDK /Tg entre nódulos benignos. No entanto, houve uma correlação positiva entre MDK /Tg e PTN /Tg entre PTCs (R

2 = 0,44,

P

= 0,001) (Fig 2A).

Associação entre PTN rácios /TG ​​e MDK /TG ​​entre todos PTC nódulos estudados (A). PTN /Tg e MDK /Tg foram positivamente correlacionados (R

2 = 0,44,

P

= 0,001). A análise bivariada de PTN /Tg e rácios MDK /TG ​​(B). Todos os PTCs tinha RDM /Tg maior do que 0,2 ng /mL (linha horizontal a tracejado) e PTN /Tg maior do que 0,13 ng /mL (linha tracejada vertical). Valores inferiores a 0.001 são apresentados como sendo igual a 0,001. círculos fechados, PTC; círculos abertos, nódulos benignos.

Um gráfico de duas variáveis ​​de todos os nódulos com tanto PTN /Tg e MDK /Tg aferidos mostraram que todos os PTCs teve MDK /Tg superior a 0,2 ng /mL e maior PTN /Tg que 0. 13 ng /mL (Fig 2B). Dos 35 nódulos que conheci esses dois critérios, 23 eram malignos (100% do PTC) e 12 eram benignos (15% dos nódulos benignos), produzindo uma sensibilidade de 100% e uma especificidade de 85%.

Associação entre PTN /relação de Tg e mutação BRAF

entre 23 nódulos PTC, 16 tiveram o

BRAF V600E

mutação. A relação PTN /Tg tende a ser maior em

BRAF

-positivo do que em

BRAF

nódulos -negative mas a diferença não alcançou significância estatística (21,5 ± 7,9 vs 1,8 ± 0,8,

P

= 0,095).

confirmação de expressão PTN usando imunohistoquímica

coloração imuno-histoquímica de secções de tecido revelou que PTN imunocoloração foi mais intensa nas células epiteliais da tiróide neoplásicas dentro dos PTCs que em as células da tireóide normais próximas epiteliais. (Fig 3A-3C). Algumas células do estroma espalhadas no tecido conjuntivo adjacente também mostrou coloração imuno-histoquímica. Dentro das células epiteliais da tiróide, a coloração PTN foi principalmente citoplasmático e perinuclear (Figura 3C).

A) Os cortes histológicos contendo variante de células de altura PTC histoquímica para PTN (cor marrom) e contrastadas com hematolxylin (cor púrpura). coloração imuno-histoquímica foi mais intensa nas células epiteliais da tiróide neoplásicas dentro dos PTCs (setas fechadas) do que nas em células da tireóide normais próximas epiteliais (setas abertas). Algumas células do estroma do tecido conjuntivo adjacente também mostrou coloração imuno-histoquímica. B) Maior ampliação da PTC e tecido normal do mesmo seção como no painel A. C) esforço imuno-histoquímica da PTC clássico que mostra a localização perinuclear de PTN (setas). bar tamanho, 100 mm.

Discussão

Nós descobrimos que PTN foi aferida em amostras colhidas FNA obtidos

ex vivo

a partir de amostras da glândula tiróide e que as concentrações foram maiores PTN no PTC do que em nódulos benignos. Da mesma forma, a razão E /T g PTN foi maior do que em PTC em lesões benignas. Nós inicialmente escolheu para usar Tg como uma medida do teor em tecido. No entanto, verificou-se que o nível de Tg em amostras de PTC foi menor do que em amostras de nódulos benignos, sugerindo que a expressão de T g pode ser mais baixa em células malignas, consistente com um estudo anterior [14], e, por conseguinte, Tg pode não ser simplesmente uma medida de teor de tecido. No entanto, do ponto de vista pragmático, este efeito é fortuita, pois normalização das PTN para Tg reforçada a separação entre amostras malignos e benignos.

expressão PTN por PTCs foi confirmada por imuno-histoquímica. Os resultados sugerem que a imuno-histoquímica PTN é sobre-expresso pelas células epiteliais da tiróide neoplásicas-se, principalmente, numa localização perinuclear e citoplasmático como relatado em outros tecidos [15-16]. No entanto, a coloração para PTN foi também observada nas células do estroma adjacentes que levantam a possibilidade de que outras células que também possam contribuir para a PTN elevada medida por ELISA em PTC.

A verificação de que PTN é elevado em PTC sugere que a sobre-expressão PTN pode promover o crescimento de PTCs, que também tem sido sugerido para outros cancros, tais como do ovário [17], pancreático [18], glioblastoma [19], o cancro da próstata [20] e do cancro da mama [21]. Por exemplo, num modelo de cancro da mama, PTN superexpressão estimulada remodelação do microambiente, a angiogénese de tumores, e o crescimento tumoral rápido [22]. No entanto, em nosso estudo, não observamos uma associação entre a relação PTN /Tg eo tamanho dos nódulos ou a presença de metástases linfonodais. Nós também não encontrou uma associação significativa entre a proporção PTN /Tg e a presença da mutação BRAF V600E. No entanto, o tamanho da amostra do nosso estudo é insuficiente para excluir definitivamente associações com a agressividade da doença ou etiologia genética.

anteriormente descobriu que a concentração do RDM, um factor de crescimento de ligação à heparina relacionada com a PTN, foi maior em PTC que em nódulos benignos [12]. No estudo atual, descobrimos que MDK /Tg e PTN /Tg foram positivamente correlacionados em PTCs. No entanto, uma diferença importante é que, no FVPTC, a PTN /Tg foi elevada ao passo que a RDM /Tg mostraram valores sobrepostos àqueles de nódulos benignos. Esta constatação é de particular interesse porque FVPTC é muitas vezes difícil de distinguir de lesões foliculares benignas por citologia, muitas vezes necessitando de avaliação histológica [7].

Um gráfico de duas variáveis ​​de PTN /Tg e MDK /Tg mostraram forte agregação de PTC amostras, de tal modo que todas as malignidades tiveram RDM /Tg maior do que 0,2 ng /mg e PTN /Tg maior do que 0,13 ng /mg. Apenas 15% dos nódulos benignos satisfez estes critérios de ambos (Figura 2B). A observação de que a relação de PTN /Tg e a proporção RDM /Tg são elevados em PTC em comparação com os nódulos benignos levanta a possibilidade de que a medição do PTN, RDM, e a Tg em tiróide amostras FNA pode fornecer informação de diagnóstico adjuvante útil para o exame citológico, tal como tem foi demonstrada por perfis de ARN [23], análise mutacional [24] e outras abordagens moleculares [25]. No entanto, para estabelecer uma abordagem clinicamente útil, existem desafios importantes que precisam ser superados, muitas das quais refletem limitações no estudo atual. Em primeiro lugar, para medir PTN na FNA washout, tecido tireoidiano suficientes devem estar presentes. Assim, uma passagem de FNA dedicados, separados daquelas exigidas para citologia, pode ser necessária para se obter tecido suficiente como está a ser feito com o teste de expressão do gene classificador disponível comercialmente [23]. Abordagens alternativas possíveis incluem o desenvolvimento de um ensaio mais sensível PTN ou lavagem da agulha expulso com um menor volume de tampão e realizar o ensaio, sem diluição. Em segundo lugar, o presente estudo foi realizado utilizando amostras FNA obtido

ex vivo

após tireoidectomia. Se dados semelhantes seria observado com

in vivo

, amostragem FNA percutânea é desconhecida. Nós não abordar esta questão devido à indisponibilidade de

In vivo

amostras FNA dedicados a este estudo de pesquisa. Em terceiro lugar, a nossa abordagem pode não ser útil em pacientes com doença de Graves ou tireoidite linfocítica crónica; observamos índices elevados PTN /TG ​​em nódulos benignos dentro glândulas da tiróide afectadas por estas doenças auto-imunes. Em quarto lugar, a adaptação desses resultados para um teste de diagnóstico clínico adjuvante iria requerer um estudo substancialmente maior para determinar a sensibilidade e especificidade em indivíduos com citologia indeterminada. O estudo piloto demonstra um romance observação da elevada PTN /TG ​​em todos os tipos de PTC, mas não foi projetado para validar rigorosamente um teste de diagnóstico. Nosso estudo é projetado para uma prova-de-conceito e usado

ex vivo

materiais FNA. Portanto, a análise ROC não é executada.

Conclusões

Em conclusão, os nossos resultados indicam que as concentrações PTN e do PTN rácio /TG ​​em

ex amostras vivo

FNA distinguir PTC lesões benignas, levantando a possibilidade de que essa estratégia pode ter utilitário de diagnóstico auxiliar para complementar citologia e outros métodos moleculares existentes. No entanto, seriam necessários estudos maiores adicionais para validar esta abordagem.

Informações de Apoio

S1 Fig.

Suplementar Figura 1A. PTN reactividade cruzada com MDK. Suplementar Figura 1B. reatividade cruzada MDK com PTN

doi:. 10.1371 /journal.pone.0149383.s001

(DOCX)

S2 Fig.

Suplementar Figura 2A. Estabilidade em vidro vs tubo de plástico. Suplementar Figura 2B. Estabilidade à temperatura ambiente e durante congelação e descongelação ciclo

doi:. 10.1371 /journal.pone.0149383.s002

(DOCX)

S3 Fig. Suplementar Figura 3.

Paralelismo do PTN ELISA entre a curva padrão e amostras diluídas em série de washout

doi:. 10.1371 /journal.pone.0149383.s003

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S4 Fig. Figura Suplementar 4.

concentrações PTN foram positivamente associado com concentrações de Tg em amostras de washout FNA de nódulos benignos (análise incluiu todos os passes individuais, R

2 = 0,04, P 0,001)

doi:. 10.1371 /journal.pone.0149383.s004

(DOCX)

S5 Fig. Figura Suplementar 5.

controlo positivas e negativas IHC

doi:. 10.1371 /journal.pone.0149383.s005

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Método S1. Método Suplementar

pleiotrofina Sandwich ELISA Ensaio

doi:.. 10.1371 /journal.pone.0149383.s006

(DOCX)