Abstract

O câncer de ovário é a causa mais comum de morte por câncer ginecológico. Compreendendo a biologia da doença, particularmente como linfócitos e fibroblastos associados a tumores contribuir para a progressão e metástase do tumor, tem sido impedida pela ausência de um modelo de xenoenxerto de tumor apropriado. Nós relatamos um sistema simples e reprodutível em que o tumor e estroma tumoral são enxertados com sucesso em camundongos NOD-SCID IL2Rγ

nula (NSG). Isto é conseguido através da injecção de agregados de células de tumor derivadas de tecidos frescos ovarianos biópsia do tumor (incluindo células tumorais e linfócitos associados ao tumor e fibroblastos) i.p. em ratos NSG. a progressão do tumor nestes ratos se aproxima bastante muitos dos eventos que são observadas em pacientes com câncer de ovário. Tumores estabelecer no omento, ovário, fígado, baço, útero e pâncreas. O crescimento do tumor é inicialmente muito lenta e progressiva no interior da cavidade peritoneal, com um último desenvolvimento de ascite tumorais, metástases espontâneas para o pulmão, o aumento dos níveis séricos e ascite de CA125, e a retenção de fibroblastos humanos associados a tumores e linfócitos que permanecem funcionais e responsivo a citocinas por períodos prolongados. Com este modelo um será capaz de determinar a forma como os fibroblastos e linfócitos dentro do microambiente do tumor pode contribuir para o crescimento de tumores e metástases, e fará com que seja possível avaliar a eficácia de terapias que são concebidos para direccionar essas células no estroma do tumor.

Citation: Bankert RB, Balu-Iyer SV, Odunsi K, Shultz LD, Kelleher RJ Jr, Barnas JL, et al. (2011) humanizado mouse modelo de cancro do ovário Recapitulates Paciente sólida progressão do tumor, formação de ascite, e metástase. PLoS ONE 6 (9): e24420. doi: 10.1371 /journal.pone.0024420

editor: Sandra Orsulic, Cedars-Sinai Medical Center, Estados Unidos da América

Recebido: 30 de Junho de 2011; Aceito: 08 de agosto de 2011; Publicado: September 15, 2011 |

Direitos de autor: © 2011 Bankert et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. O estudo foi apoiado em parte pelo NIH CA34196 concessão (LDS) e pelo NIH Grants CA131407, CA108970 e AI079188 (RBB), T32AI1007614 (MSA), Grupo do cancro do ovário de Trabalho Grant do Instituto de Pesquisa do Câncer (KO) e NIH Grant HL-70227 (SB -EU). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

Ambos os tecidos humanos normais e neoplásicas foram enxertados com sucesso em células T e B de células deficientes em

prkdc

scid (SCID)

ratos. O primeiro enxerto bem sucedida de células humanas para estes C.B-17

SCID foi relatado mais de 20 anos [1]. A utilização de xeno-enxertos de tecido humano nestes ratinhos imunodeficientes permitiu uma insights sobre a biologia de cancro humano, autoimunidade e doenças infecciosas [2]. O potencial do uso de vários modelos de xenotransplante tumoral humana diferentes para estudar e avaliar as terapias anti-câncer, juntamente com limitações e armadilhas dos modelos foi revisto [3]. Um dos maiores impedimentos dos anteriores modelos de xenoenxerto foi a resposta do hospedeiro-versus-enxerto (GAV) que foi observada após a implantação de tecidos humanos. Enquanto

SCID faltava células T B funcional e, estes ratos tiveram uma resposta imune inata intacta, que foi responsável pelo complexo de resposta HVG celular e molecular. A intensidade dessa resposta HVG variou consideravelmente de rato para rato e com o tipo histológico do tumor usado para enxerto [3]. Níveis aumentados de enxerto de tecido humano têm dependido principalmente sobre as modificações genéticas de ratos hospedeiros imunodeficientes [2]. Um grande avanço foi a geração de ratinhos imunodeficientes que são homozigotos para mutações dirigidas ao receptor locus de interleucina-2 de cadeia γ [2]. Estes ratinhos são severamente prejudicada no desenvolvimento e função de células T, células B e células [2] NK. Um exemplo deste novo tipo de estirpe de ratinhos imunodeficientes é o NOD.Cg-

Prkdc

scidIL-2RG

tm1Wjl

, abreviado NSG. ratinhos imunodeficientes que não possuem a cadeia de IL-2 receptor de γ foram encontrados para apoiar o enxerto prolongado de células hematopoiéticas humanas e células mononucleares de sangue periférico [2] melhor do que as estirpes anteriores rato imunodeficiente.

Um modelo de xenoenxerto de tumores humanos em que e as células T e B associados a tumores autólogas podem ser co-enxertados e suas interações estudou

in vivo

seria uma oportunidade para determinar como humana e células tumorais imunocompetentes influenciam mutuamente. Os resultados poderiam potencialmente ser usados ​​para avaliar as abordagens de imunoterapia para o cancro. Além disso, tendo em conta a crescente consciência de que as células do estroma não malignas, incluindo fibroblastos, células epiteliais e outros leucócitos interagem com e têm um impacto sobre o crescimento de tumores e metástases [4], o desenvolvimento e utilização de modelos em que o microambiente do tumor é mantido na xenotransplante também é crucial para ganhar insights sobre a patogênese da progressão do tumor. Por implante de peças não separada de tumores humanos subcutaneamente em ratinhos NSG, foram estabelecidos xenoenxertos em que a arquitectura dos tecidos, incluindo leucócitos associada a tumores, os fibroblastos estromais e células tumorais foi preservada e mantida durante períodos prolongados [5]. Este modelo provou ser útil em demonstrar a capacidade de IL-12 entregue por microesferas biodegradáveis ​​para activar células T de memória quiescentes dentro do microambiente do tumor [5]. No entanto, porque esses xenotransplantes tumorais não foram estabelecidas ortotopicamente, e observou-se apenas uma evidência limitada de tumor se espalhando, o modelo não refletem com precisão os padrões de crescimento e metástase que são observadas em pacientes com câncer, e foi, portanto, de valor potencial limitado na identificação de fatores que contribuem para metástases de tumores ou para avaliar a eficácia de protocolos imunoterapêuticos.

um xenoenxerto de tumor modelo foi desenvolvido e é relatado aqui que epiteliais em xenoenxertos de tumor dos ovários humanos são estabelecidos ortotopicamente, e o padrão de crescimento de tumores e metástases reflecte o facto de que é observada em pacientes com cancro do ovário. linfócitos e fibroblastos co-enxertar nos nódulos tumorais e as células T T e B associados a tumores permanece funcional e responsivo a citoquina administrada exogenamente. CA125 está presente nos soros e ascites de ratos portadores de tumor CA125 + e fornece uma oportunidade de monitorizar a presença e do progresso de xenoenxertos de tumor periodicamente. Espera-se que este modelo irá torná-lo possível estudar a capacidade dos leucócitos e tumor do estroma associado ao tumor humano para modular

In situ

progressão tumoral. Além disso, o modelo fornece o potencial para avaliar a eficácia de uma única, bem como a combinação, as abordagens terapêuticas para o cancro do ovário.

Resultados

tumores epiteliais do ovário humano ortotopicamente enxertar no ovário e outros órgãos locais após a injecção intraperitoneal (ip) de agregados celulares derivadas de tumores em ratos NSG

foi estabelecido anteriormente que a implantação subcutânea de peças sólidas de tecidos tumorais humanas frescas em ratinhos NSG resultou no estabelecimento de microambientes tumorais [ ,,,0],5]. As vantagens desta abordagem em relação aos métodos anteriores foram que os xenoenxertos resultantes mantiveram a sua arquitectura original, incluindo leucócitos associados a tumores, fibroblastos do estroma e células tumorais, e os xenoenxertos sobreviveram durante períodos prolongados sem interferência GAV ou infiltração de células hospedeiras. Uma das principais limitações deste modelo de xenotransplante anterior era de que ele não conseguiu refletir os padrões de crescimento do tumor e se espalhando que são observadas em pacientes com câncer, e alguns tumores não conseguiu enxertar ou resultou em xenoenxertos com grandes áreas de necrose devido a uma vascularização inadequada da pedaços sólidos de tumores.

Nós relatamos aqui um método de enxerto, em que tumores de ovário pode ser estabelecida com sucesso como xenoenxertos ortotopicamente no ovário e outros sites de órgãos de ratos destinatário. O crescimento do tumor reflecte o padrão e progressão observada em pacientes com cancro do ovário. Isto foi conseguido através da injecção de uma suspensão de agregados de células (que é derivada de uma perturbação ligeira de tumores ovarianos sólidos) i.p. em ratos NSG (ver Métodos seção). Para segurar o enxerto de tumor bem sucedida, os tecidos de biopsia de tumor deve consistir de áreas de células tumorais viáveis, que incluem linfócitos associados a tumores, e fibroblastos como mostrado na Fig. 1. As suspensões de células derivadas de tumor resultantes das perturbações dos tecidos tumorais sólidos frescos conter pequenas (diâmetro de 200-300 um) agregados de células que incluem leucócitos CD45 +, células tumorais positivas para citoqueratina, células T CD3 + e tricromo de colagénio que é positiva produzido pelos fibroblastos (Fig. 2A-E). agregados celulares derivadas de tumores de ovário, obtidos a partir de cinco pacientes diferentes (Experiência 1-5) foram injectados i.p. em ratinhos NSG e os ratinhos receptores sacrificados nos tempos indicados na Tabela 1. Embora a evidência histológica de ligação e crescimento dos agregados de células de tumor foram observados no omento tão cedo quanto 8 dias após a injecção i.p. inoculação (dados não mostrados) evidência bruta e histológico do tumor e tumor do estroma em diferentes locais de órgãos (discutido abaixo) não foi estabelecida até 80 a 177 dias após a inoculação (Tabela 1). Nenhum dos ratinhos mostraram quaisquer sinais clínicos evidentes de desenvolvimento de tumor durante as primeiras 10 semanas de observação após a inoculação do tumor. A morte era muitas vezes o primeiro sinal de enxerto tumor. Um mouse de cada experimento morreu sem avaliação, e não foi incluído na análise final

Uma seção de um adenocarcinoma seroso papilífero do ovário coradas com hematoxilina e eosina (H E).. Mostrado na A 100 × ampliação e na B 400 × aglomerados de ampliação de células tumorais (T) que mostram infiltração linfocitária (L), juntamente com tecido conjuntivo fibroso (F).

Histologia e imunohistoquímica de tumor agregados celulares derivados obtidos por perturbação leve de um tumor ovariano primário. H E coloração mostrar agrupamentos de células de diferentes tamanhos (A) coloração imuno-histoquímica para CD45 humano (B) e CD3 (C) mostra evidência de leucócitos humanos e de células T, i.e. castanhos coradas células escuras. Tricromo (D) revela a presença de colagénio, que é produzido por fibroblastos e manchas de água marinha. As células tumorais mancha marrom escuro com coloração imuno-histoquímica para citoqueratina (E). Todos os valores são a 400 x de ampliação.

nódulos detectados grosseiramente no interior da cavidade peritoneal de ratinhos injectados com agregados de células derivadas de tumor foi confirmada histologicamente ao ser tumores (Fig. 3AA e 3ab). Os nódulos de tumor variou de diâmetro de 2 mm a 10 mm e foram mais frequentemente observada dentro ou perto da área do omento, isto é, adjacente ao estômago, o baço e pâncreas. Em alguns tumores ratos foram observadas grosseiramente na superfície do baço e do fígado. Para determinar se os tumores haviam se espalhado para outros sites de órgãos dentro da cavidade peritoneal, seções de cada órgão foram tomadas, fixados e corados. FIG. 3AC-3AG revelar a presença de tumor no ovário, periovarian gordura, pâncreas, útero, baço e fígado de um ratinho sacrificado 140 dias após a injecção de aggreages celulares derivadas de tumores (Experiência # 4).

H e coloração mostra evidências de tumor (ver setas) em nódulo peritoneal de omento (AA e AB), ovário e periovarian gordura (Ac), pâncreas (Ad), útero (Ae), baço (Af) e fígado (Ag) . Estes tumores resultou da administração i.p. injecção de agregados de células derivadas de tumor derivadas de um carcinoma seroso papilar do ovário. Os ratinhos foram sacrificados 140 dias após a inoculação. Os linfócitos (seta) foram observados em justaposição com a célula de tumor (ponta de seta) (Ba). coloração imuno-histoquímica (B) mostra a presença de CD45 humano + leucócitos (Bb), células T CD3 + (BC), células CD20 + B (bd), as células CD138 + plasma (BE) e HLA + nódulo tumoral adjacente ao ovário (Bf). A proliferação de células de tumor é mostrado por coloração positiva com Ki67 (Bg), e evidência de fibroblastos estromais ilustrados por tricromo de colagénio ver setas (BH). Seta cabeça mostra células tumorais. Todas as seções em A são a 100 × ampliação e B as seções estão em 400 × ampliação.

A frequência de tumores observados histologicamente em locais diferentes órgãos variados de tumor para tumor e de rato para rato para cada agregado de células derivadas de tumor implantado. Num exemplo típico da distribuição de órgãos em 15 ratinhos, de 116 dias após a injecção i.p. injecção de agregados de células derivadas de tumores ovarianos sólidos (5A Experiência, Tabela 1), a evidência histológica de tumor foi detectado no ovário de 10 ratinhos, o baço dos 10 ratinhos, o fígado de 8 ratinhos, e o útero de 2 ratinhos. É considerado provável que este envolvimento local órgão é uma subestimativa da frequência real de tumores em diferentes órgãos, porque apenas uma pequena área de cada órgão foi examinado histologicamente.

Humano CD45 +, CD3 +, CD20 +, CD138 + Leucócitos , fibroblastos e proliferação de células de tumor estão presentes no microambiente de xenoenxertos de tumor

Secções de nódulos tumorais removidas a partir da cavidade peritoneal e coradas com hemotoxilina e eosina revelou áreas em que os linfócitos (ver seta) estavam presentes em justaposição com tumoral células (ver seta) (Fig. 3Ba). coloração imuno-histoquímica de este tecido estabelecido que os linfócitos foram associados a tumores humanos de CD45 + e incluídas células T CD3 +, células CD20 + B +, e células de plasma CD138 (Fig. 3BB-Be). As células de tumor coradas positivamente para HLA de classe I (Fig. 3BF), e incluiu dividir activamente células positivas Ki67 (Fig. 3BG).

Um tricromo dos nódulos tumorais mostrou que, em adição às células inflamatórias, fibroblastos estavam presentes dentro do microambiente dos xenoenxertos de tumor (ver seta) (Fig. 3Bh). Os fibroblastos coradas positivamente para HLA de classe I (dados não mostrados).

Conclui-se que a arquitectura histológica e composição celular incluindo as células tumorais, leucócitos inflamatórios e fibroblastos do tecido do tumor original são mantidas por períodos de tempo prolongados (até para 177 dias pós-enxerto) no xenoenxerto de tumor e células de tumor que continuam a proliferar no interior de nódulos tumorais presentes na cavidade peritoneal.

Desenvolvimento do tumor ascitico em Ratos NSG inoculados com agregados de células derivadas de tumores do ovário e

pacientes com câncer ovariano geralmente desenvolvem uma ascite tumor nas fases posteriores de sua doença [6], [7]. Para determinar se a ascite tumorais desenvolvem no modelo de xenoenxerto do tumor, os ratinhos foram monitorizados NSG durante períodos prolongados após a administração i.p. inoculação de agregados celulares derivadas de tumor. abdómens distendidos foram observadas em ratos de 14 semanas após a injecção do tumor, sugerindo a presença de ascite. A paracentese confirmou a presença de fluido de ascite na cavidade peritoneal dos murganhos. i.p. Para determinar se as células de tumor viáveis ​​estiveram presentes no fluido de ascites, os fluidos de ascites a partir de ratinhos portadores de tumor (gerada através da inoculação intraperitoneal de agregados de células derivadas de tumores de ovário de três pacientes com cancro do ovário diferentes) foram injectados em ratos NSG ingênuos. Oitenta e sete ratinhos a 94 dias após a inoculação tinha evidência histológica de desenvolvimento do tumor no ovário, útero, fígado, baço e pulmão (dados não mostrados). A maioria destes receptores secundários também tinha desenvolvido ascite por esta altura. Estes resultados estabelecem tanto a presença de células tumorais viáveis ​​no fluido de ascites do tumor original com ratos, e a capacidade de sub-passagem do tumor e, assim, expandir o número de murganhos com xenoenxertos de tumor. Os tumores foram agora com sucesso sub-passadas três vezes. Após a terceira passagem os xenotransplantes tumorais parecem ser em grande parte desprovida de tumor associado fibroblastos humanos e linfócitos tumor associado.

Presença de CA125 no soro e ascite de tumor ovariano Tendo NSG Mice

CA125 é uma glicoproteína de peso molecular elevado que é elevada no soro de aproximadamente 90% dos pacientes com cancro epitelial do ovário avançado [8], [9], e é usado para monitorar a progressão do tumor e a resposta à quimioterapia em pacientes com cancro do ovário [8]. Uma vez que o único sinal clínico de desenvolvimento de tumores em murganhos foi ascite tumorais que ocorre muito tarde, era de interesse determinar se os níveis de CA125 podia ser detectada nos ratinhos NSG enxertados com agregados de células derivadas de tumores de ovário, e para determinar se este marcador pode ser utilizado para monitorizar periodicamente a presença e a progressão dos tumores humanos em ratinhos após a inoculação do tumor. Os agregados de células foram derivadas de tumores sólidos de três pacientes com cancro do ovário com diferentes níveis séricos elevados ( 500 U /ml) de CA125. Cada um dos três agregados de células derivadas de tumor foi injectado i.p. em 10 ratinhos NSG e os níveis de CA125 no soro e ascite foram ensaiados a diferentes tempos após a inoculação do tumor. Aos 80 dias após a inoculação do tumor, CA125 estava presente nas ascites e os soros de todos os ratinhos inoculados com tumores derivados de três pacientes diferentes. Em um dos três grupos de ratinhos os animais foram sangrados periodicamente e os níveis séricos de CA125 determinada. O CA125 no soro aumentou com o tempo atingindo um nível superior a 500 unidades /ml de 100 dias após a inoculação do agregado de células derivadas de tumor. A quantidade de CA125 nos ascites variou consideravelmente de tumor para tumor atingir níveis de 400-5800 unidades /ml 85-116 dias após a inoculação do agregado de células derivadas de tumor. A capacidade de detectar CA125 no soro e ascite de murganhos portadores de xenoenxertos de tumor é o reflexo de ainda um outro caso em que é observada em pacientes com cancro do ovário, e é significativo, uma vez que proporciona uma maneira de verificar periodicamente a presença e a progressão do tumor, e em última análise, para avaliar a eficácia terapêutica de diferentes protocolos de tratamento.

propagação metastática de xenoenxertos de tumores ovarianos da cavidade abdominal no espaço pleural

o intra-abdominal espalhando que observamos após o ip inoculação de células derivadas de tumor do ovário em ratinhos agrega NSG, e a geração de fluido ascítico de tumor são consistentes com o que é visto em pacientes com cancro do ovário Fase IIIc [7]. Nesta fase, a doença pode envolver o omento, mesentério do intestino, superfícies peritoneais abdominais, superfície serosa do intestino e o diafragma. Os ratos que tinham desenvolvido tumores ascite por 16 semanas após a injecção i.p. injeção de agregados de células derivadas de tumores, tinha provas bruto de tumores nas superfícies serosa do intestino e omento e foram cuidadosamente examinados para implantes tumorais diafragmática. evidência grosseira de crescimento do tumor foi observada possível sobre o diafragma, de 12 de 15 murganhos inoculados com os agregados de células derivadas de tumor. A análise histológica confirmou a presença do crescimento do tumor no diafragma (Fig. 4A)

H . E coloração (100 vezes) revela a presença de tumor no diafragma (A), e no pulmão 100 × ampliação (B) e 400 × ampliação (C). A coloração imuno-histoquímica do tumor no pulmão para HLA de classe I (D), estabelece que estes tumores são de origem humana. Os cortes foram feitos a partir dos tecidos de um rato 16 semanas após a injecção i.p. injecção de uma suspensão de agregados tumorais = celulares derivadas.

pacientes com doença da Fase IV apresentam evidência de extra-abdominal espalhamento do tumor e isso pode envolver o espaço pleural com metástases no parênquima pulmonar [7 ]. Enquanto nenhuma evidência grosseira de metástases de tumores em ratinhos foi observada por 16 semanas após a inoculação do agregado de células derivadas de tumor, a análise histológica dos pulmões estabelecido que as micro-metástases do tumor a partir da cavidade peritoneal tinha ocorrido em 4 de 15 ratos. Pequenos focos de tumores observados no pulmão (Fig. 4B, C) coraram positivamente para HLA de classe I (Fig. 4D). O número de ratinhos com metástases do pulmão é provavelmente uma subestimativa, uma vez que apenas uma pequena porção do pulmão foi examinada histologicamente.

Os nossos resultados colectivos indicam que o padrão lenta e progressiva do crescimento de tumores e metástases de tumores ovarianos em ratinhos NSG seguindo o ip inoculação de agregados frescos humanos ovarianos derivadas de tumores de células de perto reflete o observado em pacientes que desenvolvem em estágios IIIc e IV da doença que responde por mais de 70% dos pacientes com câncer ovariano visto na clínica [7].

As células T humanas presentes em xenoenxertos de produzir IFN-γ após activação com células IL-12 e de plasma exógenos constitutivamente produzem imunoglobulina (Ig)

linfócitos incluindo células efectoras de memória T CD4 + [10], NY-ESO-1 tumor específico As células T CD8 + [11], as células T reguladoras CD4 + e CD8 + [12] – [14], e células TH17 [15] foram encontrados dentro microambiente do tumor dos ovários. Estes e outros leucócitos infiltrantes tumorais têm sido mostrados para ser associada tanto com o reforço e a inibição da progressão tumoral [16]. Era de interesse e relevantes para a utilidade potencial do nosso modelo humanizado mouse para determinar se os linfócitos associados a tumores que foram encontrados nos xenoenxertos de tumores permaneceu viável e funcional. Tendo estabelecido por imuno-histoquímica da presença de células T CD3 + CD45 + humana leucócitos, células B CD20 + e células plasmáticas + CD138 no microambiente do tumor de xenoenxertos estabelecido seguindo a injecção i.p. injecção de agregados celulares derivadas de tumores (Fig. 3B), a viabilidade e a capacidade destas células para responder à estimulação de citocina exógena

In vivo

foram investigados.

Nós estabelecemos anteriormente que T células do microambiente do tumor têm um sinal de activação de TCR dirigido atenuada, mas permanecem viáveis ​​e respondem à estimulação com IL-12 através da produção de IFN-γ [17], [18]. Se as células T presentes nos xenoenxertos de tumor permaneceram viáveis ​​previmos que haveria um aumento significativo de IFN-γ nos soros de murganhos portadores de tumor após o tratamento dos ratinhos com IL-12 [19]. ratinhos portadores de tumor (21 dias após a inoculação do tumor) foram injectados i.p. quer com IL-12 humanos lipossomas carregados (50 ug de IL-12 por murganho) ou de controlo de lipossomas (vazio), e os seus soros foram testados 5 dias mais tarde quanto à presença de IFN-γ humano. Enquanto o nível de IFN-γ nos soros dos ratinhos tratados com IL-12 variou de rato para rato, 9 dos 10 destes ratinhos mostraram níveis significativamente elevados de IFN-γ (233-5392 ug /ml) (Tabela 2) . Todos os cinco dos ratinhos portadores de tumor tratados com lipossomas de controlo tinham níveis séricos mais baixos de IFN-γ variando 32-88 pg /ml. Estes resultados sugerem que os linfócitos humanos T associados a tumor e, possivelmente, células NK, presentes no tumor ratinhos portadores são ambos viável e que responde à IL-12. O único tratamento com IL-12 não resultou num decréscimo significativo na progressão do tumor em comparação com ratinhos de controlo. Estudos futuros são planeados para avaliar o efeito de vários tratamentos de ratinhos com

A viabilidade e função das células B e células de plasma em ratinhos portadores de tumor a IL-12 isoladamente ou em combinação com quimioterapia. foram abordados por ensaio dos soros para a presença de Ig humana. Nós observada consistentemente níveis elevados de Ig humana no soro de murganhos portadores de tumor (Tabela 2). Numa experiência representativa, foram observados níveis elevados de Ig em ratinhos 78 dias após o tratamento, quer de IL-12 e ratinhos de controlo tratados e não consistente melhoria dos níveis séricos de Ig ainda não foi visto em resposta a IL-12.

a presença de ambas as células T e B associados a tumores funcionais no xenoenxerto de tumor de ratos portadores de 100 dias proporciona uma oportunidade para investigar o possível papel que estes linfócitos (e os factores biologicamente activos que produzem, ou seja, citocinas e anticorpos ) desempenham na sobrevivência e metástase do tumor, e para determinar se é possível manipular esses linfócitos para que eles montar uma resposta eficaz anti-tumor

in situ

.

Discussão

Desde o primeiro relatório sobre o enxerto bem sucedida de células humanas no CB-17-SCID camundongos [1], vários milhares de artigos foram publicados sobre o uso destes e de outros ratinhos imunodeficientes enxertar tecidos malignos e não malignos humanos em estudos de cancro humano, a hematopoiese, adaptativa e imunidade inata, doenças infecciosas, auto-imunidade e medicina regenerativa [2]. modelos de rato foram utilizados para estudar o crescimento de células cancerosas e pré-clínicos para avaliar a eficácia terapêutica de estratégias de tratamento com base imunes e não imunes base para o cancro. Limitações destes modelos anteriores incluíram uma resposta imune inata significativa dos ratos receptores que limitavam a duração do enxerto e tornou difícil interpretar os resultados de estudos de eficácia terapêutica. Estes modelos de xenotransplante não recapitular os locais e os padrões de crescimento do tumor e na maior parte do co-enxerto modelos de células estromais com o tumor não foi estabelecida [3].

Nós relatamos aqui um modelo humanizado que mais de perto assemelha-se aos padrões de progressão do tumor que são observadas em pacientes com câncer de ovário do que qualquer outro modelo descrito anteriormente. Nosso modelo capta várias características importantes de câncer de ovário humano não visto em modelos anteriores. A propagação, juntamente com o desenvolvimento de ascite intra-abdominal é muito semelhante ao que é observado em pacientes. A co-enxerto de fibroblastos associados a tumores e linfócitos T e B que permanecem viáveis ​​e funcionais durante períodos prolongados fornece uma oportunidade para investigar a possível contribuição destas células não-malignas, e os factores biologicamente activos que produzem, para o crescimento e propagação das células tumorais.

o enxerto ortotópico e disseminação do tumor e co-enxerto de células imunocompetentes associados a tumores com estroma tumoral neste novo modelo humanizado rato torná-lo possível estudar

in vivo

a interacção entre linfócitos e o tumor, os linfócitos e fibroblastos associados ao tumor e fibroblastos e o tumor. Foi previamente estabelecido que o estroma do tumor é crítica para impedir ou permitir a destruição imunológica de células cancerosas [20]. Este trabalho foi mais tarde confirmada [21] e, em seguida, estendida mostrando que o estroma do tumor conduz a uma erradicação mediada por células T de tumor estabelecida [22]. Orimo

et ai.

Mostraram que os fibroblastos derivadas de carcinomas da mama invasivo humano melhorou significativamente o crescimento do tumor em modelos de xenoenxerto [23]. fibroblastos associados a tumores foram mostrados por outros para aumentar ou suprimir a função da célula T [24] – [26] e subconjuntos de células T associados a tumores são conhecidos por interagir com as células tumorais e reciprocamente modular uns aos outros [27]. Se fibroblastos ou leucócitos presentes no microambiente de tumores humanos melhorar e /ou suprimir tumores continua a ser estabelecida [28], [29]. Ao esgotar, funcionalmente a inibição ou activação de subconjuntos específicos de células dentro dos agregados de células derivadas de tumor antes da inoculação em ratinhos NSG o efeito sobre o enxerto e subsequente intra-abdominal espalhamento e metástases no espaço pleural extra-abdominal pode ser determinada, estabelecendo assim que as células do microambiente do tumor contribuir para prisão tumor ou aperfeiçoamento de progressão tumoral.

o câncer de ovário é o mais frequentemente assintomática em seus estágios iniciais, como a maioria dos pacientes têm a doença disseminada no momento do diagnóstico [30]. Novos insights sobre a patogênese e origem de câncer de ovário seroso pode levar a um diagnóstico precoce desta doença. Evidências crescentes indicou que a maioria ou todos os carcinomas ovarianos serosas de alta qualidade são originários de trompas de falópio [31], [32]. Níveis séricos elevados de CA125 (uma proteína marcadora tumoral) encontram-se em 90% dos pacientes com cancro do ovário avançado estágio, mas relativamente poucos pacientes com doença de Fase I são CA125 positivas. Da mesma forma camundongos inoculados i.p. com agregados de células derivadas de tumores não apresentam qualquer evidência clínica de tumores pelo menos durante 80 dias quando os níveis de CA125 elevados nos soros foram inicialmente detectados. O nível CA125 no soro, em seguida, aumentou rapidamente atingindo níveis superiores a 500 unidades /ml por 100 dias após a inoculação. Neste momento e para além dos ratinhos exibiu uma patologia consistente com a Fase III-C e IV do cancro do ovário, isto é, prova de difusão intra-abdominal em múltiplos locais de órgão, implantes diafragmática, o desenvolvimento de ascite tumorais e propagação extra-abdominal no espaço pleural com metástases para o pulmão [7].

Assim, enquanto que os níveis de CA125 é um indicador fiável da presença e da expansão de tumores do ovário em pacientes e no nosso modelo de ratinho humanizado, não é adequado para a detecção precoce de tumores tanto em pacientes ou em ratinhos inoculados com os agregados de células derivadas de tumor. No entanto, os níveis séricos de CA125 são actualmente utilizados de forma eficaz para monitorar a resposta do paciente de cancro do ovário à quimioterapia e cirurgia [8]. Este biomarcador também tem sido utilizada como um indicador de prognóstico para doentes com cancro do ovário. Esperamos que os níveis de CA125 no soro também será um marcador quantificável muito útil para monitorar periodicamente e compare

in vivo

efeitos terapêuticos em nosso modelo humanizado mouse.

A capacidade aumentada de pequenos agregados de tumor e as células tumorais não-malignas de estabelecer, crescem e se espalham na cavidade peritoneal (em comparação com peças não-interrompido sólidos de tecido de tumor) pode depender da capacidade de grupos de células pequenas para sobreviver, inicialmente, até um suprimento vascular suficiente é estabelecido para permitir a expansão do tumor . O sucesso do enxerto de agregados de células derivadas de tumores pode também depender, em parte, a contribuição de factores biologicamente activas produzidas pelas células não-malignas nos agregados de células que produzem factores de crescimento do tumor e estimulantes para a angiogénese. massas de tumor ocorrem mais frequentemente em primeiro lugar nas áreas cranial da cavidade peritoneal e dentro perto do omento. A posição dos nódulos de tumor, bem como o crescimento aumentado dos agregados de células e de progressão lenta dos tumores para outros órgãos pode resultar da fixação inicial dos agregados de células de tumor a áreas altamente vascularizadas dentro do omento chamado manchas leitosas. Estas áreas discretas foram primeiro reconhecidos por Ranvier [33] e foram mostrados para ser locais onde se ligam preferencialmente tumores e proliferam após a injecção i.p. injecção de várias linhas de células tumorais de murino diferentes e uma linha de células tumorais de ovário humano em ratos [34], [35].