Sumário

A miosina IC é um único membro headed da superfamília de miosina. Nós recentemente identificada uma nova isoforma e mostrou que o

gene MYOIC

em células de mamíferos codifica três isoformas (isoformas A, B, e C). Além disso, foi demonstrado que a miosina IC isoforma A, mas não isoforma B exibe um padrão de expressão específico de tecido. Neste estudo, que alargado a nossa análise de miosina IC padrões de expressão da isoforma através da análise da proteína e a expressão de ARNm em várias linhas celulares de mamíferos e em vários espécimes da próstata e tecidos de tumor da próstata de rato transgénico modelo (TRAMP) por imunotransferência, qRT-PCR, e por coloração imuno-histoquímica indirecta de parafina espécime da próstata. A análise de um painel de linhas de células de mamíferos demonstraram um aumento da expressão de ARNm e proteína de miosina IC especificamente isoforma A num painel de linhas celulares de cancro da próstata humano e de ratinho, mas não na próstata não-cancro ou outros (não-prostático) linhas celulares de cancro . Além disso, nós demonstramos que a miosina IC isoforma A expressão é significativamente aumentada nas amostras de próstata de ratinho TRAMP com neoplasia intra-epitelial prostática (PIN) lesões e em metástases distantes do sítio no pulmão e no fígado, quando comparado aos tecidos normais correspondentes. As nossas observações demonstram alterações específicas na expressão de miosina IC isoforma A que são concorrentes com a ocorrência de cancro da próstata no modelo TRAMP do cancro da próstata do rato que imita estreitamente clínica do cancro da próstata. Estes dados sugerem que níveis elevados de miosina IC isoforma A pode ser um marcador potencial para a detecção de cancro da próstata

citação:. Ihnatovych I, Sielski NL, Hofmann, WA (2014) expressão selectiva de miosina IC isoformas A em mouse e linhas de células humanas e do rato do cancro da próstata tecidos. PLoS ONE 9 (9): e108609. doi: 10.1371 /journal.pone.0108609

editor: Craig N. Robson, Instituto Norte para Pesquisa do Câncer, Reino Unido

Recebido: 11 de julho de 2014; Aceito: 01 de setembro de 2014; Publicação: 26 de setembro de 2014

Direitos de autor: © 2014 Ihnatovych et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Data Availability:. O autores confirmam que todos os dados subjacentes às conclusões estão totalmente disponíveis sem restrições. Todos os dados relevantes estão dentro do papel

Financiamento:. Este estudo foi financiado pelo Departamento de Defesa, dirigido programas de investigação médica pelo Congresso (https://cdmrp.army.mil/default.shtml) (concessão # W81XWH -12-1-0234) para WAH e por uma Universidade de Buffalo concessão de inicialização para WAH. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer de próstata é o câncer mais comum em homens diagnosticados em todo o mundo e a segunda causa mais comum de morte por câncer em os EUA [1], [2]. O cancro da próstata pode ser frequentemente indolente, mas também pode ser altamente agressivo e letal em alguns pacientes. Atualmente não há nenhum marcador confiável disponível para a detecção precoce, a confirmação diagnóstica, ou o prognóstico da doença disponíveis [3]. Assim, a identificação de novos biomarcadores que têm a capacidade de identificar e discriminar o cancro da próstata com precisão é de importância para a gestão preciso da doença.

A miosina IC é um membro da superfamília de miosina [4] que se localiza no citoplasma e o núcleo e está envolvido numa variedade de processos em ambos os compartimentos. No citoplasma, miosina IC está envolvido na formação de jangadas lipídicas [5], o transporte de vesículas contendo proteínas de membrana [6], e na regulação do canal iónico em células ciliadas do ouvido interno, [7] – [9]. No núcleo, miosina IC está envolvido em vários aspectos de transcrição [10] – [13], na cromatina remodelação [14], [15], e na organização dinâmica das estruturas cromossómicas [16]. Recentemente, identificou uma isoforma anteriormente desconhecido de miosina IC e mostrou que o

MYOIC

de genes em células de mamíferos codifica três isoformas que são chamados de miosina IC isoformas A, B, e C [17].

a nossa análise anterior da miosina IC expressão da isoforma em tecidos murinos revelou um padrão de expressão específico de tecido de miosina IC especificamente isoforma a com níveis elevados de expressão no rim, glândula supra-renal, pâncreas, e em epididimal e retroperitoneal depósitos adiposos [18]. Em contraste, a miosina IC isoforma B mostra um padrão de expressão ubíqua em todos os tecidos analisados ​​e linhas celulares [17] – [19]

Esta expressão específica do tecido da miosina IC isoforma A nos levou a explorar os perfis de expressão. a miosina IC isoformas mais. Relatamos aqui a avaliação de miosina IC isoformas A e B na expressão de uma variedade de linhas celulares de cultura de tecidos de mamíferos. Nós demonstramos que a expressão de miosina IC isoforma A está significativamente aumentada em linhas de células de cancro de próstata quando comparada com outras (não-próstata) linhas celulares de cancro ou de uma linha de células de próstata não-cancro. Análise subsequente dos tecidos tumorais do cancro da próstata a partir do modelo TRAMP murino que espelha a patogénese do cancro da próstata humano [20] – [23] revela um aumento significativo na isoforma A expressão quando comparado aos tecidos normais. Tomados em conjunto, os nossos dados implicam mudanças específicas na miosina IC isoforma Uma expressão que são concomitantemente com o aparecimento de câncer de próstata.

Materiais e Métodos

Anticorpos

Os anticorpos que reconhecem específica isoformas de miosina IC: 1. o anticorpo anti-NMI é um anticorpo policlonal de coelho que foi produzido contra a 16 aminoácidos de comprimento de péptido N-terminal de NMI, aqui chamado isoforma B [5], [24] (Sigma-Aldrich, St Louis, MO); 2. A miosina IC-isoforma Um anticorpo é um anticorpo monoclonal de ratinho que foi criado contra a miosina IC isoforma um péptido específico no terminal N e reconhece exclusivamente miosina IC isoforma A [17] (Figura 1A). Os anticorpos monoclonais para a p-actina e o antigénio T grande de SV40 (SV40-tag) foram obtidos de Sigma (Sigma-Aldrich, St Louis, MO) e Merck (Merck Millipore Corporation, Billerica, MA), respectivamente. anticorpos anti-ratinho ou anti-coelho secundário conjugado com peroxidase foram obtidos a partir de Jackson ImmunoResearch Laboratories (West Grove, PA).

Detecção de miosina IC isoformas A e B da proteína em várias linhas de células de mamíferos por análise de imunotransferência utilizando anticorpos específica para miosina IC isoformas a, isoforma B, T grande de SV40-antigénio (TAG) e actina (controlo). A) Representação esquemática das sequências específicas de miosina IC isoformas e local de reconhecimento de anticorpos. Descrito é a região 5 ‘da

MYOIC

gene de mamífero com os exões que codificam para péptidos isoforma N-terminal específico. Os locais de início da tradução para as isoformas são indicados assim como as sequências de aminoácidos N-terminais. Sublinhadas são as sequências de péptidos utilizados como imunogénio para criar anticorpos específicos de isoforma. B) representativas de imunotransferência de extractos celulares, que foram analisadas utilizando os anticorpos indicados. marcadores relevantes de peso molecular estão indicados à esquerda em kD. C) Histograma apresentando a intensidade densitométrica média de miosina IC isoforma A expressão normalizados para a actina. D) Histograma apresentando a intensidade densitométrica média de expressão da isoforma B normalizados para a actina. A miosina IC isoforma Uma proteína é altamente expressa em células COS-7 e o TRAMP-C2 linhas de células de cancro de próstata de rato e humana PC-3 e. Em contraste, a miosina IC proteína isoforma B é expresso em níveis comparáveis ​​em todas as linhas celulares analisadas. Os resultados são apresentados como médias ± desvio-padrão; n = 3 ensaios independentes.

linhas de células e cultura de tecidos

COS-7, A-431, MCF-7, TRAMP-C1, DU 145, 22Rv1, RWPE-1 e células PC-3 foram obtidas de American Type Culture Collection (ATCC; Manassas, VA, EUA). OVCAR-3 células, originalmente obtidas a partir de ATCC, foram generosamente fornecidos pelo Dr. Arthur M. Edelman (Departamento de Farmacologia e Toxicologia, Universidade de Buffalo, Buffalo, NY, EUA). células As4.1 [25] eram uma simpática oferta do Dr. Kenneth W. Gross [Dept. de Biologia Molecular e Celular, Roswell Park Cancer Institute (RPCI), Buffalo, NY, EUA]. células TRAMP-C2 [26] eram uma espécie de Dr. Barbara Foster (Departamento de Farmacologia e Terapêutica, RPCI, Buffalo, NY, EUA). COS-7, A431 e As4.1. As células foram cultivadas em meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado com 10% de soro fetal de bovino (FBS). MCF-7 e DU 145 células foram cultivadas em DMEM suplementado com FBS a 10% e 0,01 mg /ml de insulina (Sigma-Aldrich, St Louis, MO). As células PC-3 e 22Rv1 foram cultivadas em meio RPMI suplementado com FBS a 10%. células OVCAR-3 foram cultivadas em meio RPMI suplementado com FBS a 20% e 0,01 mg /ml de insulina. células TRAMP-C1 e TRAMP-C2 foram cultivadas em DMEM de alto teor de glucose suplementado com FBS a 5%, 5% Nu Soro IV (BD Biosciences, San Jose, CA, EUA) de 5 mg /ml de insulina e 10 nmol /L dihidrotestosterona (Sigma- Aldrich, St Louis, MO, EUA). células RWPE-1 foram cultivadas em meio isento de soro de queratinócitos Médio (Invitrogen de Carlsbad, CA, EUA; jogo do catálogo # 17005-042) suplementado com 0,05 mg /ml de extracto de pituitária de bovino (BPE) e 5 ng /ml de factor de crescimento epidérmico humano recombinante (EGF ). Além disso, todas as células foram suplementadas com 1% de penicilina /estreptomicina e crescidas a 37 ° C com 5% de CO

2.

amostras de tecido

amostras de tecido congeladas de 22 semanas de idade ratinhos TRAMP, bem como de ratinhos do tipo selvagem em geral combinados foram adquiridos a partir do tumor do rato no Modelo de Recursos RPCI (Buffalo, NY, EUA). Os tecidos foram coletadas em estrita conformidade com as recomendações do Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório dos Institutos Nacionais de Saúde sob 890m protocolo Tumor bancário da RPCI para o Mouse tumorais modelos de recursos. O protocolo foi aprovado pelo IACUC do Instituto do Câncer Roswell Park (Animal Care Institucional e Comitê de Uso). Os animais foram sacrificados por overdose de anestesia seguida de deslocação cervical. Todos os tecidos da próstata e tumores foram microdissecadas na necropsia, em azoto líquido, e armazenado a -80 ° C até à sua utilização congelado-flash. parafina de cinco micron de espessura cortes de tecidos combinados embarcados foram adquiridos a partir da mesma fonte.

Immunohistrochemistry

embebidos em parafina secções de tecido foram de-parafinado com xileno, reidratadas com álcool, e colocado em dH

2O antes de sofrer a recuperação antigénio padrão (tampão citrato, pH 6). A actividade da peroxidase endógena foi bloqueada usando 3% H

2O

2 antes da incubação com qualquer miosina IC isoforma A ou anticorpos de SV40-Tag para imuno-histoquímica, de acordo com métodos padrão. As imagens foram obtidas com uma Zeiss Axio Imager Z1 (Carl Zeiss Inc, Thornwood, NY, EUA) e processadas utilizando o software Adobe Photoshop.

Immunoblot análise

Para a preparação de extracto celular bruto, um igual número de células foi lisada em tampão de SDS-amostra. Para cada análise baseado numa linha celular, foram realizados três experimentos independentes. extracto de tecido foi preparado como descrito anteriormente [18]. Para cada análise o tecido base, foram analisados ​​a partir de tecidos de três a seis murganhos. Volumes iguais de extracto de células bruto ou de quantidades iguais de extractos de proteína de tecido (40 ug) foram separados por 10% SDS-PAGE (electroforese de sódio dodecil sulfato de gel de poliacrilamida-) e transferidos para uma membrana de nitrocelulose. Após a transferência, a membrana foi cortada em tamanhos adequados e incubadas com anticorpos específicos. bandas imunorreactivas foram detectados por quimioluminescência aumentada. A análise densitométrica foi efectuada sobre as faixas seleccionadas com base nas suas intensidades relativas utilizando o software ImageJ.

quantitativa PCR em tempo real (qRT-PCR)

O ARN total foi isolado a partir de células ou amostras de tecido, utilizando Trizol reagente (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA) seguindo as instruções do fabricante. 1 ug de ARN total de cada linha celular foi usado para realizar a transcrição reversa em cDNA utilizando Superscript III transcriptase inversa e oligo dT de acordo com as instruções do fabricante (Invitrogen, Carlsbad, CA). qRT-PCR foi realizada utilizando o Real-Time System iCycler iQ PCR Detection (Bio-Rad, Hercules, CA, EUA) e primer que reconhecem especificamente mouse e miosina humana IC isoforma A (

homo sapiens:

NM_033375. 4;

mus musculus

: XM_006532429.1) e mouse e miosina humana IC isoforma B (

homo sapiens:

NM_001080950.1;

mus musculus:

NM_001080775). Para a quantificação, triplicados foram normalizados para a média do gene GAPDH de limpeza. O iniciador usado para qRT-PCR são descritas em [18].

A análise estatística

Todos os dados são apresentados como média ± desvio padrão. A normalidade dos dados foi testada com o teste de Kolmogorov-Smirnov. A diferença entre os conjuntos de dados foram testados com o teste t de Student. Os desvios foram consideradas significativas ao nível do

p Art 0,01.

Resultados

Nós previamente analisados ​​os padrões de expressão de miosina IC isoformas em 33 órgãos do mouse e tecidos e descobriu que a miosina IC isoforma A mas não isoforma B é expressa de uma forma específica de tecido [ ,,,0],18]. Nós agora alargado a nossa análise da expressão de ARNm e proteína de miosina IC isoformas a um painel de linhas celulares de mamífero. Para analisar a expressão de proteína, foi realizada a análise de imunotransferência de extractos celulares totais utilizando miosina IC anticorpos específicos de isoforma (Figura 1A). Como mostrado na Figura 1B e C, para além da linha celular de rim de macaco verde Africano COS-7 (onde foi originalmente detectada e caracterizada [18]) miosina IC isoforma Uma proteína é altamente expresso no cancro da próstata do rato humano e linhas de células TRAMP -C1, TRAMP-C2, DU 145, 22Rv1, e PC-3, mas não na linha de células de próstata não-cancro RWPE-1. Além disso, a miosina IC isoforma A mostra os níveis de expressão apenas baixos em outras linhas de células de cancro humano, incluindo a pele (A-431), da mama (MCF-7), e do ovário (OVCAR-3), linhas celulares de cancro. Uma vez que a linha de células COS-7 foi derivado por transformação com um mutante defeituoso origem de SV40 que ainda codifica para o grande antigénio T de SV40 (SV40-tag) [27], também testou a linha celular As4.1 que foi estabelecida a partir de células de um ratinho transgénico com um tumor renal intraparenquimatosa que foi induzida por tumorigênese alvo de uma construção de fusão SV40-tag e também expressa SV40-tag [25]. Como mostrado na Figura 1A, ambas as linhas de células, células COS-7 e As4.1, expressa SV40-TAG mas apenas células COS-7 mostram um nível de expressão elevado de miosina IC isoforma A. Em contraste com esta expressão específica de linha celular de miosina IC isoforma a, miosina IC isoforma B é expressa ubiquamente em níveis comparáveis ​​em todas as linhas celulares analisadas (Figura 1A B).

Para determinar se a expressão da proteína se correlaciona com a expressão de ARNm, que próxima analisada a expressão de ARNm das isoformas utilizando PCR quantitativo em tempo real (qRT-PCR) com iniciadores específicos de isoforma (Figura 2A). Como mostrado na Figura 2, verificou-se que os perfis de miosina IC expressão de ARNm isoformas A e B estão correlacionados com os perfis de expressão de proteínas. Comparável com os dados de proteínas, a expressão de ARNm de miosina IC isoforma A é só alta em células COS-7, TRAMP-C1, TRAMP-C2, DU 145, 22Rv1, e células PC-3, enquanto miosina IC isoforma B mRNA é expressa ubiquamente em todos As linhas celulares analisadas.

Detecção de miosina IC isoformas níveis A e B de ARNm em diferentes linhas de células de mamíferos por qRT-PCR utilizando iniciadores específicos de isoforma. A) esquemático representando a região 5 ‘da

MYOIC

gene e a isoforma resultando A e B mRNAs. A localização sequência alvo do iniciador utilizado para qRT-PCR para detectar isoformas de miosina IC são indicados por setas. B) quantitativo em tempo real A análise de PCR de mRNAs níveis de miosina IC expressão da isoforma Um normalizadas para GAPDH. C) quantitativo em tempo real A análise de PCR de mRNAs níveis de expressão de miosina IC isoforma B normalizadas para GAPDH. A miosina IC isoforma A expressão de ARNm é elevada em células COS-7 e o TRAMP-C2 linhas de células de cancro de próstata de rato e humana PC-3 e. Em contraste, a miosina IC isoforma B do mRNA é expresso em níveis comparáveis ​​em todas as linhas de ELL analisados. Os resultados são apresentados como médias

±

desvio padrão; n = 3 ensaios independentes.

Uma observação marcante da nossa análise da miosina IC expressão isoforma nestas linhas celulares são os níveis elevados de expressão de miosina IC isoforma A do mouse e linhas de células humanas de câncer de próstata quando em comparação com o (não-cancro) a linha de células de próstata normais RWPE-1 e de outros (não-próstata) linhas celulares de cancro, como resumido na Tabela 1. Isto é particularmente interessante porque a nossa análise prévia de tecidos e órgãos de rato mostraram uma expressão muito baixa de miosina IC isoforma a na próstata de camundongos normais [18]. Em combinação com os baixos níveis de expressão da isoforma A na linha de células de próstata humana normal RWPE-1, estes dados sugerem que as alterações na miosina IC isoforma A expressão pode ser associada com o desenvolvimento de cancro da próstata.

Para explorar esta possibilidade, analisamos miosina IC isoforma a expressão em vários tecidos do rato TRAMP. TRAMP é uma linha transgénica de ratinhos C57BL /6 que expressam uma construção contendo o mínimo -426 /+ 28 de elemento regulador do promotor probasina de ratos para atingir a expressão do antigénio T de SV40 grande para epitélio prostático [21]. O modelo TRAMP é um modelo de cancro da próstata amplamente utilizado, uma vez que mimetiza o cancro da próstata humano intimamente. a progressão do tumor de próstata espontâneo no TRAMP começa em 8 a 12 semanas de idade, e 100% dos ratinhos desenvolvem cancro da próstata com a idade de 20 semanas. Posteriormente, metástase pode ocorrer em locais distantes como os tumores progridem [20], [28], [29].

Figura 3 mostra a análise imuno-histoquímica do representante tipo e TRAMP próstata selvagem do rato de ratos de 22 semanas de idade. Os tecidos TRAMP exibem características morfológicas típicas que estão associados com lesões PIN e coloração positiva de SV40-tag nuclear [23] (Figura 3A B). A nossa análise da miosina expressão da isoforma de IC nestes tecidos revelou um marcadamente aumentada presença de miosina IC isoforma A em células associadas com lesões PIN característicos de ratinhos TRAMP, quando em comparação com células de tecido tipo próstata selvagem em que miosina IC isoforma A é dificilmente detectável (figura 3C D). Em contraste, tanto normal e mancha tecidos TRAMP próstata positivo para isoforma B (Figura 3 E F).

Imagem representativa da análise imunohistoquímica de SV40-TAG (A B), miosina IC isoforma A (C D) e isoforma B (e ) expressão F nas glândulas da próstata de 22 semanas de idade do tipo selvagem (coluna da esquerda) e TRAMP (coluna da direita) camundongos. As lâminas foram contrastadas com hematoxilina. As imagens foram tiradas com ampliação de 20x. As alterações histológicas da próstata do rato TRAMP que estão associadas a lesões de PIN são óbvias (coluna da esquerda, B, D, F). Como esperado, SV40-tag imunocoloração é negativo no tipo selvagem da próstata (A) e fortemente nuclear na próstata TRAMP (B). A miosina IC isoforma A mostra a imunocoloração muito fraca no tecido da próstata tipo selvagem (C), mas forte, predominantemente coloração citoplasmática na próstata TRAMP com lesões PIN (D). Miosina IC isoforma B mostra forte coloração em ambos, tipo selvagem e TRAMP, tecido da próstata (E F).

Para confirmar a presença de miosina IC isoforma A em tecidos associados com câncer de próstata, analisamos vários tecidos TRAMP próstata tumorais que foram compostas tanto de lateral e ventral (LV) ou de dorsal, mais tarde, e de próstata ventral (DLV). Como mostrado na Figura 4, a miosina IC isoforma A níveis de proteína foram significativamente mais elevados em tecidos de tumor da próstata de ratinhos TRAMP, quando comparado com os tecidos da próstata de tipo selvagem que apresentam apenas miosina dificilmente detectável IC isoforma A níveis de expressão (Figura 4A B e [18] ). Além disso, analisou-se os tecidos tumorais de metástases local distante, ou seja, do pulmão e tumores do fígado. Semelhante para os tecidos da próstata, tumores no fígado e pulmão mostraram um aumento significativo na miosina IC isoforma A expressão da proteína quando comparado com os níveis de expressão em tecidos do pulmão e fígado normais do tipo selvagem [Figura 4A B e [18]]. Um exame adicional da miosina IC isoforma A expressão por qRT-PCR confirmou que o aumento da expressão de proteínas na próstata TRAMP e metástases distantes do sítio se correlaciona com um aumento significativo de miosina IC isoforma A expressão de ARNm nestes tecidos (Figura 4c).

extractos de tecido da próstata consistindo de dorsal, lateral e ventral (DLV) ou lateral e ventral (LV) da próstata a partir de 22 semanas de TRAMP idade ou idade correspondentes murganhos de tipo selvagem foram analisadas para a proteína e a expressão do mRNA assim como os extractos de tecido de pulmão e fígado metástases de TRAMP e tecidos combinados de ratinhos de tipo selvagem. A) imunotransfer�cias representativos de extratos de tecidos de rato que foram analisadas utilizando os anticorpos indicados. marcadores relevantes de peso molecular estão indicados à esquerda em kD. B) Histograma apresentando a intensidade média de densitométrica isoforma A expressão de actina normalizada. C) quantitativo em tempo real A análise de PCR de mRNAs níveis de miosina IC expressão da isoforma Um normalizadas para GAPDH. Os resultados são apresentados como médias ± desvio-padrão; n = 3-6 (número de tecidos testados cada um a partir de um animal diferente). * P . 0,01 em comparação com o tecido normal

Discussão

Uma análise da miosina IC isoforma A expressão no tecido da próstata e metástases local distante em ratinhos TRAMP ou ratinhos de tipo selvagem etários combinados mostraram que miosina IC isoforma a é significativamente maior expresso em tumores da próstata relativamente a tecidos da próstata, do pulmão, do fígado ou murinos normais. Esta é, a nosso conhecimento, o primeiro relatório que documenta uma mudança de um miosina IC expressão isoforma em relação ao câncer. As possíveis consequências biológicas e fisiológicas da superexpressão de miosina IC isoforma A em tecidos tumorais estão atualmente sob investigação em nosso laboratório.

Além de estabelecer uma ligação entre a miosina IC isoforma A expressão e câncer, nossos dados sugerem que miosina aberrante IC isoforma a muda de expressão pode ser directamente ligada ao transcrição mudanças associadas com a ocorrência de câncer de próstata. Esta hipótese é apoiada por várias observações. A nossa análise anterior da miosina IC isoforma A expressão em amostras de tecido de rato [18] revelou que esta isoforma específica mostra expressão elevada apenas em rim, glândula supra-renal, pâncreas, e um subconjunto de tecidos adiposos. Mostramos agora uma expressão significativamente aumentada na próstata, pulmão, e tecidos tumorais do cancro da próstata a partir de fígado de rato a TRAMP quando comparado com os tecidos de tipo selvagem.

O modelo TRAMP do cancro da próstata é baseado na expressão específico da próstata de o SV40-tag oncoproteína [21]. O antigénio T grande de SV40 actua através de várias vias, incluindo a inactivação de proteínas supressoras de tumor p53 e Rb, bem como a activação de transcrição de um número de proteínas envolvidas na oncogénese [22]. Porque SV40-tag é um universal em vez de um oncogene específicos de câncer de próstata que tem sido amplamente utilizado como um modelo de muitos outros tipos de câncer [30], que poderia ter sido possível que as mudanças na miosina IC isoforma A expressão foi induzida através das acções de SV40-tag independentemente do tipo de câncer. No entanto, a nossa análise mostrou que a isoforma A expressão não foi alterada na linha celular As4.1 que foi estabelecida a partir do fluido ascítico de um ratinho transgénico seis meses de idade com um tumor renal intraparenquimatosa que foi induzida pelo transgene tumorigénese alvo através de SV40-tag fundido para o promotor de renina [25]. Além disso, encontramos miosina IC isoforma A expressão alterada nas linhas de células TRAMP-C2 que TRAMP-C1 e, embora provenientes de ratinhos TRAMP, não expressam SV40-tag [26]. Além disso, encontramos também aumentou isoforma A expressão na SV40-tag linhas celulares de cancro humano da próstata independentes de PC-3, DU 145, e 22Rv1 mas não na linha de células de próstata humana não-cancro RWPE-1 ou em qualquer um dos outros metais não linhas celulares de cancro -prostate. Tomados em conjunto, estes dados sugerem fortemente que a miosina IC isoforma uma expressão mudanças são concorrentes com alteração específica por câncer de próstata em perfis de expressão celulares em vez de mudanças de expressão específicos-SV40-Tag.

Enquanto o padrão de miosina IA isoforma A expressão no cancro do rato próstata humana e precisa ser analisada com mais profundidade, nossos resultados aqui, que mostram uma superexpressão em células cancerosas linhas de próstata de rato e humanos e no câncer de próstata associado tecidos de murino, sugerem fortemente que especificamente miosina IC isoforma a poderia ser um possível marcador de diagnóstico para a detecção de câncer de próstata.

Reconhecimentos

Agradecemos Ms. Ellen Karasik pelo seu excelente assistência técnica com análise imuno-histoquímica. Nós gostaríamos de agradecer ao Dr. Wade Sigurdson e Dr. Joan Baizer para assistência com imagens microscópicas.