personalizado
Abstract
As mutações no
KRAS
oncogene são reconhecidos biomarcadores que predizem a falta de resposta ao receptor do factor de crescimento anti-epidérmico (EGFR) terapias de anticorpos. No entanto, alguns pacientes com
KRAS
tumores do tipo selvagem ainda não responderem, de forma que outras mutações jusante em
BRAF, PIK3CA
e
ARN
deve ser investigada. Aqui usamos seqüenciamento direto para analisar o status de mutação para 676 pacientes em
KRAS
(códons 12, 13 e 61),
BRAF
(exão 11 e exon 15),
PIK3CA
(exão 9 e exão 20) e
ARN
(codons12, 13 e 61). associações Características clínico-patológicos foram analisados em conjunto com a sobrevida global (OS) de pacientes com câncer colorretal metastático (CCRm). Encontramos 35,9% (242/674) tumores abrigava um
KRAS
mutação, 6,96% (47/675) abrigava um
BRAF
mutação, 9,9% (62/625) abrigava um
PIK3CA
mutação e 4,19% (26/621) abrigava um
ARN
mutação.
KRAS
mutação coexistiu com
BRAF
,
PIK3CA
e
ARN
mutação,
PIK3CA
mutação exon9 apareceram mais frequentemente em
KRAS
tumores mutantes (p = 0,027), enquanto
ARN
mutação quase existiam em
KRAS
selvagens-tipos (P 0,001). pacientes do sexo feminino e mais antigo grupo abrigava um maior
KRAS
mutação (P = 0,018 e P = 0,031, respectivamente);
BRAF
(V600E) mutação apresentaram uma maior freqüência no câncer de cólon e tumores de diferenciação pobres (P = 0,020 e P = 0,030, respectivamente); tumores proximais apareceu um maior
PIK3CA
mutação (P 0,001) e tumores metastáticos distantes compartilhavam uma maior
ARN
mutação (P = 0,010). No entanto, neste estudo há resultado significativa foi encontrada entre OS e de mutação genética em grupo mCRC. Para o nosso conhecimento, o primeiro estudo retrospectivo em grande escala sobre o perfil genético abrangente, que associado com a seleção do tratamento-EGFR anti MoAbs da população do Leste Asiático CRC, apareceu uma imagem específica distribuição dos genótipos, e os resultados forneceram uma melhor compreensão entre as características clínicas e mutações genéticas em pacientes com CCR
Citation:. Shen Y, Wang J, Han X, Yang H, Wang S, Lin D, et al. (2013) Effectors de Fator de Crescimento Epidérmico Receptor Pathway: A caracterização genética de
KRAS
,
BRAF
,
PIK3CA
,
de ARN
mutações no câncer colorretal características e medicina personalizada. PLoS ONE 8 (12): e81628. doi: 10.1371 /journal.pone.0081628
editor: Anthony WI. Lo, da Universidade Chinesa de Hong Kong, Hong Kong
Recebido: 14 Agosto, 2013; Aceito: 23 de outubro de 2013; Publicação: 10 de dezembro de 2013
Direitos de autor: © 2013 Shen et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Este estudo foi apoiado em parte por doações do Fundo especial de Investigação do público Indústria do Bem-Estar da Saúde (200902002-1), Nacional de Ciência e Tecnologia Projeto major (2008ZX09312, 2012ZX09303012), Pesquisa Nacional de alta Tecnologia e do Programa de Desenvolvimento da China (2011AA02A110) (http: //www.863.gov.cn/); Pequim Municipal de Ciência e Tecnologia da Comissão (Z121107005112005, Z121102009212055), fundos especiais para Autoridade Central de Saúde (B2009B124) e grande programa de pesquisa do Instituto de Câncer e Hospital da Academia Chinesa de Ciências Médicas (LC2012A18). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
o câncer colorretal (CRC) ainda causa maioria dos mortalidade no mundo [1]. Em tumores CCRm, observou-se excessivamente mau prognóstico. Felizmente, o rápido desenvolvimento de agentes biológicos aparece um futuro promissor no tratamento. Cetuximab ou panitumumab, o anticorpo monoclonal (MoAb) orientada para o receptor do factor de crescimento epidérmico (EGFR), foi implementada na prática clínica, e emergiu como um agente ou quimioterapia adjuvante abordagem única eficaz para o tratamento mCRC [2]. Estes MoAbs bloqueia a sinalização intracelular a jusante de EGFR, que inclui duas principais vias de sinalização, eixo RAS-RAF-MAPK, que principalmente envolvidos na proliferação celular, e o fosfatidilinositol 3-quinase (PI3K) -PTEN-AKT, mediadores chave de sobrevivência, e motilidade-invasão [3].
Apesar de ensaios clínicos anteriores indicaram que os pacientes que realizam
KRAS
mutações nos códons 12 e 13 não respondem à terapia alvo-EGFR [4] , [5], [6], [7], e o estado de tipo selvagem parece ser uma condição resposta, alguns pacientes de tipo selvagem ainda não respondem à terapia com anticorpo monoclonal anti-EGFR [8], e o mecanismo permanece obscuro. É possível que as mutações no efectores a jusante da via de sinalização de EGFR, tal como o
BRAF
,
PIK3CA
e
NRAS
, pode induzir um efeito negativo sobre a resposta em anti-EGFR alvo de tratamento [9], [10], [11].
Até o momento, a caracterização genética de tumores individuais afetam a seleção da terapia e resposta ao tratamento têm sido comprovada na prática clínica, no entanto, os dados principais sobre a freqüência de oncogenes mutações foram apresentados nas populações ocidentais e poucos dados estão disponíveis para os chineses. Desde status de mutação genética altera com diferenças étnicas [12], nós projetamos este estudo para investigar o papel específico da etnia de mutações no desenvolvimento e progressão da CRC.
KRAS
,
BRAF
,
PIK3CA
e
ARN
mutações em tumores primários de pacientes com CCR chineses foram detectados e seus potenciais correlações com fatores clínico-patológicos foram analisados . Além disso, foram coletados os dados de sobrevivência de pacientes do subgrupo CCRm, a fim de obter uma visão adequada entre mutação genética e estado de sobrevivência. Nós pretende que estes dados poderiam beneficiar a concepção de futuros ensaios clínicos e terapia individualizada em pacientes com CCR.
Materiais e Métodos
Os pacientes
Foram investigados 676 pacientes consecutivos que se submeteram à cirurgia para o cancro colorectal no cancer Institute /Hospital da Academia chinesa de Ciências Médicas (Pequim, China) entre agosto de 2010 e dezembro de 2011, todos os pacientes foram realizadas ressecção primária em nosso hospital, e nenhum paciente tinha recebido a quimioterapia antes da cirurgia. Cada paciente foi contactado para fornecer, tecidos (FFPE) CRC embebidos em parafina fixadas em formalina disponíveis. consentimento informado por escrito foi obtido de pacientes individuais, e do protocolo experimental foi aprovado pelo Institutional Review Board (IRB) no Instituto do Câncer /Hospital da Academia Chinesa de Ciências Médicas e Peking Union Medical College. diagnóstico CRC foi confirmada por hematoxilina e eosina (HE) e análise histológica. A sobrevida global foi definida como o período desde o início do CRC diagnosticado até a morte por qualquer causa ou último follow-up. dados demográficos e clinicopatológicas dos pacientes são apresentados na Tabela 1.
Extracção de DNA e análise da mutação
Antes da extracção do ADN genómico, todas as amostras de CRC foram identificados por dois patologistas em ordem para assegurar a existência das células malignas representativos em cada amostra, os blocos de tecido foram cortadas em secções de 5 | iM, em seguida, foi realizada a microdissecação garantir a cada amostra de tecido testadas continham 80% células cancerosas. O DNA foi extraído por o QIAamp DNA Mini Kit Sangue (Qiagen, Hilden, Alemanha) de acordo com as instruções do fabricante e armazenou-se a -80 ° C até à sua utilização.
detectados os pontos críticos de mutação em
KRAS
(códons 12 e 13),
BRAF
(exon15),
PIK3CA
(exão 9 e exão 20) e
ARN
(códon 61), onde a maioria das mutações ocorrem nestes genes [13], [14], além disso, tipos raros de mutantes para
KRAS
(códon 61),
BRAF
(exão 11) e
ARN
(códons 12 e 13) também foram incluídos. O programa para a amplificação PCR em
KRAS
,
BRAF
,
ARN
e
PIK3CA
exon20 foi a seguinte: 1 min de desnaturação inicial a 95 ° C, 35 ciclos de amplificação consistindo em 30 s a 94 ° C, 40 s a 57 ° C, e 30 s a 72 ° C, com um alongamento final adicional a 72 ° C durante 7 min.
PIK3CA
exão 9 amplificação foi levada a cabo com um touchdown programa de PCR: 94 ° C (2 min); 3 ciclos de 94 ° C (30 segundos), 64 ° C (30 segundos), 70 ° C (30 segundos); 3 ciclos de 94 ° C (30 segundos), 61 ° C (30 segundos), 70 ° C (30 segundos); 3 ciclos de 94 ° C (30 segundos), 58 ° C (30 segundos), 70 ° C (30 segundos); 32 ciclos de 94 ° C para (30 seg), 57 ° C (30 segundos), 70 ° C (40 segundos); 1 ciclo de 70 ° C (5 min). Ao realizar o PCR, um controlo não-molde foi incluído em cada lote. Após a reação de PCR, os produtos foram purificados e submetidos a sequenciação directa (ABI 3500 × L Genetic Analyzer; Applied Biosystems, Carlsbad, CA, EUA).
Análise Estatística
A análise estatística foi realizada pelo software estatístico SPSS 17.0 (SPSS, Inc., Chicago, IL, EUA). O Qui-quadrado (χ
2) teste foi utilizado para comparar a proporção de mutações genéticas entre os grupos com diferentes fatores clínico-patológicas. A análise de regressão logística múltipla foi feito para investigar os efeitos da co-variáveis sobre mutações de genes, utilizando um passo a passo para trás (razão de probabilidade) método com odds ratio (OR) calculado, e as variáveis que mostrou associação estatisticamente significativa com mutações genéticas foram submetidos à análise de regressão final. Análise de sobrevivência foi feito com a função de sobrevivência de Kaplan-Meier com o método de teste de log-rank. O nível de significância de dois lados foi fixado em
P
. 0,05
Resultados
KRAS
Mutation
KRAS
estado de mutação não pode ser atribuído a 2 de 676 (0,30%) amostras, 35,9% (242/674) abrigava um
KRAS
mutação, 25,7% (173/674) em codon12, 6,8% (46/674) em codon13, e 2,1% (14/672) em codon61. Além disso, um paciente abrigava um duplo
KRAS
mutação em ambos os codon12 e 13 (GGT GTT, GGC AGC). A ordem correspondente para
KRAS
codon12 frequência de mutação foi G12D, G12V, G12a, G12C, G12S e G12R; em
KRAS
codon13, a mutação mais frequente foi G13D, seguido por G13C e G13S. A principal subtipo mutação no codon61 foi Q61H e Q61L, Q61R também foram encontrados neste estudo (Figura 1).
KRAS
mutação apareceu mais frequentemente em mulheres do que homens (41,3% vs 32,3%, P = 0,02), e os pacientes acima de 60 anos também mostrou uma maior taxa de
KRAS
mutação (39,9% vs 32,0%, P = 0,03). Nós não encontrar outras associações significativas entre
KRAS
mutação e as características clinicopatológicas dos pacientes (Tabela 1)
Painel A: mutações KRAS (codons12 13:. N = 674; codon61: n = 672). Painel B: mutações BRAF (exon11: n = 676; exon15: n = 675). Os dados são apresentados em percentagem (número de amostras total).
BRAF
Mutation
O status de
BRAF
mutação foi detectada em 99,8% (675/676) das amostras, 6,96% (47/675) abrigava um
BRAF
mutação, 4,4% (30/675) em exon15 e 2,5% (17/676) em exon11. A mutação V600E no exon15 era o subtipo mais frequente (1,8%, 12/675), e seguido por mutação V600M e outros tipos. Em exon11, as mutações distribuído amplamente, e R461K G465E eram relativamente mais comum nestes mutações (Figura 1).
BRAF
e
KRAS
mutações não eram mutuamente exclusivas, 4,55% (11/242) de
KRAS
tumores mutantes abrigava um
BRAF
mutação (de que 7/242 [2,89%] exon15 e 4/242 [1,66%] exão 11 mutações). No entanto,
BRAF
(V600E) só existia na
KRAS
tipos selvagens (0,0% vs 2,78% [12/431], P = 0,005). Neste grupo, V600E mutação mostrou uma forte associação com o sítio do tumor primário, tumor no cólon apareceu com mais frequência para abrigar uma mutação V600E (9/285 [3,2%] no cólon vs 3/390 [0,8%] no reto; P = 0,020 ), além disso, com a diferenciação do tumor a piorar, uma taxa de mutação V600E maior emergiu (5/87 [5,7%] em mau diferenciação vs 7/555 [1,3%] na diferenciação moderada; P = 0,030). Nenhuma outra associação significativa foi encontrada entre o
BRAF
mutação e as características dos pacientes (Tabela 1).
PIK3CA
Mutation
PIK3CA
estado de mutação não pode ser atribuído a 7,54% (51/676) das amostras, 9,9% (62/625) abrigava um
PIK3CA
mutação, 7,0% (45/643) em exon9 e 2,67% (17 /636) em exon20. O E545K em exon9 apareceu com mais frequência do que qualquer outro subtipo mutação, seguido por E542K, E545G, Q546E e outros. Por outro lado, quase todas as mutações em exon20 foi H1047R, apenas uma amostra foi mutação H1047Y, o espectro destas mutações foi mostrado na Figura 2. Nós também detectou uma amostra nutria uma mutação dupla em exon9 (L540V e Q546E), além de, esta amostra também tinha um
KRAS
mutação (G13D). Houve uma forte associação significativa entre o
PIK3CA
exon9 e
KRAS
mutações (23/230 [10,0%] em
KRAS mutante
vs 22/412 [5,3%] em
KRAS
tipos selvagens, p = 0,027), ao passo que essa associação não foi encontrada em
PIK3CA
exon20 com
KRAS
mutação (P = 0,673).
BRAF
e
PIK3CA
mutações não eram mutuamente exclusivas, 10% (4/40) de
BRAF
mutação coexiste com
PIK3CA
mutação (dos quais 3/40 [7,5%] exão 9 e 1/40 [2,5%] exon20). Para a análise de características clínico-patológico, os pacientes com tumor localizado no reto tinha um significativamente menor
PIK3CA
taxa de mutação do que outros sites no cólon e zona de transição retossigmóide (6,1% vs 15,1%, P 0,001) e tumores proximais apareceu um maior
PIK3CA
taxa de mutação (19,8% vs 7,4%, P 0,001). Nenhuma outra associação significativa foi encontrada nesta análise (Tabela 1)
Painel A: mutações PIK3CA (exon9: n = 643; exon20: n = 636).. Painel B: mutações de ARN (codons12 13: n = 630; codon61: n = 643). Os dados são apresentados em percentagem (número de amostras total).
ARN
Mutation
Detectamos
ARN
mutação em 92,0% ( 621/676) das amostras, e 4,19% (26/621) abrigava um
ARN
mutação. Embora
ARN
é estreitamente para
KRAS
que também incluído no gene Ras [13], ao contrário de
KRAS
, a maioria
ARN
mutação ocorreu em codon61 ( 2,02%, 13/643), em vez de em codon12 ou 13 (1,75%, 11/630). O subtipo mutação mais frequentemente em codon61 foi Q61R e G12D em codon12 /13 (Figura 2). Além disso, uma G15W e uma mutação G60E também foram detectadas nestas amostras. Além disso, nós ainda descobriram que
ARN
mutação apareceu uma forte associação significativa com o
KRAS
tipos selvagens (1/227 [0,44%] em
KRAS mutante
vs 25/394 [6,3%] no
KRAS
tipos selvagens, P 0,001). Curiosamente,
ARN
codon61 mutação única abrigado no
KRAS
tipos selvagens (0,0% vs 3,2% [13/410], P = 0,006), enquanto que
ARN
codon12 e 13 não compartilhar esta associação (P = 0,063). Apenas uma amostra abrigava um
BRAF
mutação (V600E) com um
ARN
mutação (G15W) e 6,78% (4/59)
PIK3CA
mutação abrigava um
ARN
mutação (dos quais 2/59 [3,39%] em códons 12 e 13, 2/61 [3,28%] em codon61). Além disso,
ARN
mutação ocorreram com maior frequência em tumores metástases à distância (12,2% vs 3,3%, P = 0,010), e estágio do tumor diferentes mostrou um
ARN
taxa de mutação diferente (P = 0,030) . (Tabela 1).
Na análise de regressão logística multivariada, foram selecionados sexo, idade, local do tumor primário, a diferenciação do tumor, estágio do tumor e metástases à distância como co-variáveis, e
KRAS
mutantes apareceram mais frequentemente em pacientes com idade superior a 60 (P = 0,023), bem como em pacientes do sexo feminino (p = 0,016).
BRAF
mutações não mostrou associação significativa com características (dados não mostrados), enquanto
BRAF
(V600E) mutantes compartilhada associação significativa com a diferenciação do tumor (P = 0,016). Quanto a
PIK3CA
mutações, câncer de cólon apareceu uma maior taxa de mutação do que o cancro do recto (P 0,001), no entanto,
ARN
mutações mostrou mais frequentemente em câncer de reto (P = 0,031), embora nenhuma associação significativa foi encontrada na análise univariada (P = 0,09). Além disso, uma forte associação significativa ainda existia entre
ARN
mutantes e metástases à distância na análise multivariada (Tabela 2).
Análise de mutação genética em CCRm Pacientes
Cinquenta e cinco dos 676 pacientes foram confirmados como mCRC, e todas estas 55 amostras foram coletadas antes da quimioterapia. Nós investigamos ainda mais a distribuição mutantes e de associação características clínico-patológico neste grupo. 27,3% (15/55) abrigava um
KRAS
mutação, dos quais 93,3% (14/15) em codon12 e 6,7% (1/15) em codon13, respectivamente. O
BRAF
taxa de mutação foi de 10,9% (6/55), 66,7% (4/6) em exon15 e 33,3% (2/6) em exon11.
PIK3CA
mutação foi detectada em 18,0% (9/50) de tumores, 66,7% (09/06) foi detectada em exon9 e 33,3% (09/03) em exon20. 12,24% (6/49) tumores foram detectados como
ARN
mutantes, dos quais 50% (3/6) em codons12 e 13, 33,3% (2/6) no codon61, além disso, uma amostra nutria uma mutação G15W. A análise estatística indicou que
KRAS
mutação foi significativamente mais elevada no estágio mais profunda invasão (07/05 [71,4%] em T4 vs 10/48 [20,8%] em T3; OU 9,500, IC de 95% 1,599-56,426 ; P = 0,013), e tumor com baixa diferenciação mostrou um
ARN
maior taxa de mutação de diferenciação moderada (5/19 [26,3%] vs 1/30 [3,3%], ou 10.357, 95% CI 1.103 -97,266; P = 0,027). Nós não encontrou qualquer outra associação significativa entre a mutação do gene (análise de subgrupo incluído) e características clínico-patológicas (dados não mostrados).
Análise da sobrevivência global nos mCRC pacientes
A sobrevida global dos pacientes neste subgrupo foi analisada com o método de Kaplan-Meier, neste pequeno subgrupo relativo (n = 55), a informação de sobrevivência foi recolhido com sucesso em apenas 45 pacientes, dos quais 37 tinham recebido quimioterapia após a cirurgia, seja com fluorouracil infusão, leucovorina e irinotecano (FOLFIRI) ou fluorouracil infusão, leucovorina e oxaliplatina (FOLFOX4). No entanto, o pequeno tamanho da amostra relativa não apresentou nenhum resultado significativo entre a mutação do gene e OS, incluindo a análise de subconjuntos de genes (dados não mostrados).
Discussão
Durante as últimas décadas, grandes quantidades de dados da pesquisa surgiu de base molecular [15], a investigação de drogas e uso [3], os efeitos de perfis genéticos [16] estudos levaram à pesquisa próspera na identificação de vários subgrupos moleculares e terapia-alvo no cancro colorectal. Após a descoberta de que mutante
KRAS
tumores eram resistentes a anticorpos anti-EGFR, os pacientes com câncer colorretal metastático agora são recomendados para detectar a
KRAS
codons12 e 13 estado de mutação antes da terapia MoAbs [8] [17], [18]. No entanto, mesmo em
KRAS
tumores do tipo selvagem, até 65% dos pacientes ainda eram resistentes a anticorpos monoclonais anti-EGFR [8]. Além disso, embora a detecção de
KRAS
estado de mutação antes da terapia MoAbs é amplamente aceito, há pouco consenso sobre o seu papel previsto e prognóstico, por estudos publicados forneceu resultados diferentes na relação entre
KRAS
mutação e resultados clínicos em CRC, e os principais efetores em via de sinalização a jusante da
KRAS
, tais como
BRAF
,
PIK3CA
e
ARN
foram já estudada em muitos ensaios clínicos, que mostraram a capacidade de apresentar-se como potenciais biomarcadores preditivos ou prognósticos [14], [19].
para nosso conhecimento, este estudo investigou a distribuição do tipo de mutação genética primeira vez na CRC chinês população e envolver não só
KRAS
, mas também
BRAF
,
PIK3CA
,
ARN
juntos para análise abrangente entre a mutação genética e características clínico-patológicas, além disso, a sobrevivência global de cancro colorrectal metastático. Estudos anteriores geralmente focada em
KRAS
,
BRAF
,
PIK3CA
[20], [21], [22], mas não incluem
ARN
mutação, ou o tamanho amostra do estudo era pequena demais para tirar conclusões confirmadas [20]. Muitos estudos não poderia recolher amostras adequadas suficientes para descrever um contorno completo relativo para pacientes com CCR chineses no perfil genético, e nossa investigação teve como objetivo apresentar a mutação do gene chave mediada da CRC, em certa medida, representando a população do Leste Asiático.
gene KRAS
codifica uma pequena proteína G, que actua como um transdutor chave na via EGFR, mutações em
KRAS
gene de chumbo à sinalização através da via constitutiva de EGFR e MAPK a jusante activo e
PIK3CA
vias dependentes [18], [23]. Estudos anteriores analisaram
KRAS
distribuição mutação de população ocidental, que indicou que G12D foi o subtipo mutação mais frequente em codon12, seguido por G12V, G12C, G12S, G12a e G12R [24]. No entanto, no presente estudo, a ordem correspondente para
KRAS
codon12 frequência de mutação foi G12D, G12V, G12a, G12C, G12S e G12R. Quanto codon13, a diferença permaneceu na distribuição subtipo (G13 /D /C /R na população ocidental vs G13 /D /C /s no presente estudo). Além de ganhar mais informações e expandindo o reconhecimento do
KRAS
mutação, o tamanho da amostra da nossa série nos permitiu investigar a mutação codon61 rara, uma vez que os tumores mutantes com
KRAS
codon61 levou a significativamente mais baixa taxa de resposta do que os tipos selvagens (0,0% vs 35,7%, P = 0,0055) [14], enquanto que a ocorrência de mutação (2,1%) era ainda mais elevada do que alguns codon12 e 13 mutações, que, em seguida, sugeriu que a detecção codon61 deve ser tomado em consideração durante a prática clínica. Este estudo mostrou uma 35,9%
KRAS
taxa de mutação, que foi semelhante aos estudos anteriores [4], [9], [14], [22] e, em pacientes com mais de 60 apareceram com mais freqüência para abrigar um
KRAS
mutação. Enquanto isso, em pacientes com CCRm,
KRAS
mutação foi significativamente mais elevada no estágio mais profunda invasão (OR 9,500, IC de 95% 1,599-56,426; P = 0,013), o que foi consistente com Li HT e colaboradores [25] relataram que
KRAS
mutação teve uma forte associação com Dukes ‘encenação, com a mais alta taxa de mutação em Dukes’ tumores D paragem. Os nossos dados moleculares fornecida uma avaliação da possibilidade de progressão da doença. Em seguida, os pacientes com metástases distantes rápida parecia mais provável que seja inicial resistente a MoAbs anti-EGFR, porque
KRAS
mutação mantida durante todo o CRC desenvolvimento, progressão e metástase, com uma concordância elevada (95%) apresentando no metástases primários e afins [26] – [27]
gene BRAF
é um membro da família de genes da RAF, que codifica para uma proteína quinase serina-treonina, actua como um efector a jusante. de activado KRAS. Estudos anteriores relataram que
KRAS Comprar e
BRAF
mutações foram mutuamente exclusivos em mCRC, e
BRAF
mutação que ocorre em aproximadamente 5% -10% dos tumores [14], [28 ], [29]. No entanto, neste estudo, descobrimos que
KRAS Comprar e
BRAF
mutações não eram mutuamente exclusivas, 4,55% (11/242) de
KRAS
tumores mutantes nutria uma
BRAF
mutação, nossos dados foram apoiados por Mao C e colegas [20], embora eles ganharam um nível extremamente elevado
BRAF
incidência mutação (25,4%, 15/59), para estudos relatados de
BRAF
mutações geralmente apresentou uma frequência de mutação superior na população ocidental (8,5% -13,9%) [29] – [30] do que os chineses (1,1% -7,0%) [25], [31]. Em nosso estudo, a mutação BRAF (6,96%) foi consistente com os resultados anteriores, e menor frequência de mutação BRAF pode atribuir à população pacientes estudados. No entanto, a diferença de frequência de mutação também indica que as variações geográficas e étnicos desempenhar um papel na distribuição de mutação genética. Nos estudos relatados, a maioria dos dados foram coletados a partir de apenas
BRAF
tipo de mutação V600E, outros tipos, tais como V600M não foram incluídos [14], [29], enquanto nós também confirmou este ponto de
BRAF
(V600E) só existia na
KRAS
tipos selvagens (0,0% vs 2,78% [12/431], P = 0,005). No entanto,
BRAF
mutação associada com os resultados clínicos pobres foram comprovadas em vários estudos [10], [14], [29], aqui nós relatamos um
BRAF
taxa de mutação para 4,4% (30 /675) em exon15 e 2,5% (17/676) em exon11, que foram ambos superior ao
KRAS
codon61 (2,1%) mutação. Como De Roock W e colegas [14] recomendou
BRAF
devem ser testados posteriormente depois de
KRAS
, devemos ambos
BRAF
exon15and 11 necessidade de ser tomadas em consideração, para selecionar pacientes do subgrupo melhor adequadas. Além disso, V600E mutação foi significativamente maior no câncer de cólon do que o cancro do recto (OR 4,035, 95% CI 1,062-15,330; P = 0,041) e tumor diferenciação pobre abrigava uma mutação V600E maior (P = 0,030). Estes dados indicam que o tratamento de câncer colorretal deve ser considerado a partir de um ponto mais profundo, para o câncer de cólon e reto requerendo tratamento diferente em estágio diferente.
Foi confirmada a associação entre
KRAS Comprar e
PIK3CA
mutações no CRC, que era comparável com estudos anteriores [14], [20], [25], [32], e apenas exon9 (exon20 não incluído) compartilhou uma forte associação com a
KRAS
mutação [14]. Isto foi consistente com os resultados que o ganho de função por exon9 mutações (o domínio helicoidal) foi altamente dependente da RAS-GTP de ligação, especialmente em E542K e E545K, enquanto exon20 mutações (o domínio cinase) activas foi provavelmente na ausência de RAS -GTP de ligação [33]. O
PIK3CA
frequência de mutação varia entre 13,6% -18,0% na população ocidental [34] – [35], enquanto nós relataram uma frequência de mutação relativamente baixo (9,9%). população estudada pode levar a esta diferença, principalmente, para outros estudos que com base na população chinesa também apresentaram menor frequência de mutação (4,9% -8,2%) [20], [36]. Na análise de regressão logística,
PIK3CA
mutação apareceu com mais freqüência no câncer de cólon do que reto, ao mesmo tempo, que foi apoiada por um estudo recente [37]. Estudos anteriores indicavam que
PIK3CA
mutação existência implícitas prognóstico negativo, ou um menor sobrevida mediana livre de progressão (PFS) [38], ou um sistema operacional médio mais curto [39] – [40]. No entanto, uma vez que o
PIK3CA
efeito mutação parecia ser consideradas em conjunto, o efeito separada de cada subtipo apareceu claro, por vários estudos tinham mostrou que exon9 e mutação exon20 levado a resultados diferentes [14], [41]. O estudo consórcio europeu grande indicado não apenas exon20 mutação foi associada a pior evolução clínica [14], e foi apoiado por outros dados de pesquisa [16], [42]. Mas por causa de mutação exon20 foi relativamente baixa em comparação com exon9 (2,96% vs 9,96%) [14], e em nosso estudo (2,67% vs 7,0%). Os dados apresentados devem ser considerados como hipótese relacionada clínica e confirmação necessário, com base em mais de perfis genéticos e os ensaios clínicos de investigação.
O gene RAS (KRAS, ARN, HRAS) codifica uma série de GTP /GDP interruptores relacionados que transmitir sinais extracelulares, resultando na regulação do crescimento e sobrevivência das células [43]. Como um membro da família RAS,
ARN
compartilhada relações estreitas com
KRAS
[13], enquanto que ao contrário de
KRAS
mutação ocupa uma porcentagem tão grande no cancro colorectal,
de ARN
mutações eram raras. Irahara N e colaboradores [44] relataram uma incidência de mutação 2,2% (5/225) e 2,64% (17/644) taxa de mutação em outro estudo [14], enquanto nós detectado 4,19% (26/621) tumores nutria uma
ARN
mutação. A maior incidência de mutação ARN apresentou uma característica específica para a população chinesa. Como os dados raros foi relatada em pacientes chineses para estado de mutação ARN, nosso estudo pode fornecer alguma contribuição original. No entanto, investigações futuras são necessárias para desenhar uma imagem melhor nesta área.
ARN
mutações não eram mutuamente exclusivas com
BRAF
e
PIK3CA
mutação, embora outro estudo não compartilhar este [44].
ARN
mutação coexistiu com
KRAS
do tipo selvagem (P 0,001), da nota, a mutação codon61 apareceu apenas em
KRAS
tumores do tipo selvagem (p = 0,006) , e codon12 e 13 tinham uma taxa de mutação significativamente maior nos tumores metastáticos distantes (P = 0,016). Estes dados podem ajudar a explicar parcialmente a resistência anti-EGFR MoAbs em
KRAS
pacientes do tipo selvagem, como
ARN
mutações foram significativamente associados com a taxa de controle da doença e menor taxa de resposta ao MoAbs [14] , [45], e nós recomendado
ARN
detecção de mutações devem ser levados em consideração antes do tratamento MoAbs, especialmente em
KRAS
tumores do tipo selvagem. No entanto, considerando a incidência mutação baixa, a magnitude do
ARN
efeito mutação ainda estava confuso, tamanho da amostra maior ou investigação pacientes pré-selecionados parecia fundamental da concepção de futuro.
Houve várias limitações nesta retrospectiva estudar, incluindo o número relativamente pequeno (n = 45) de pacientes na análise de sobrevivência, então a informação limitada não poderia apoiar as conclusões confirmados no presente estudo. Além disso, outros fatores potencialmente negativos como a perda de expressão de fosfatase e tensina homólogo (PTEN) devem estar envolvidos, efeitos, portanto, essenciais destes biomarcadores na prática clínica ficou mais uma validação. Além disso, como o estado epigenético ou instabilidade de microssatélites (MSI) desempenha um papel significativo em tumores CRC, esses recursos devem ser envolvidos em análise. Além disso, a expressão do gene nos effectors-chave, localizações tumorais diferentes podem fornecer informações para melhor entendimento no CRC, seja na carcinogênese ou progressão tumoral e estes devem ser levados em consideração em estudos futuros. Como método de detecção de alto rendimento tem sido implementado na triagem de variantes genéticas ou sequenciamento, diferentes tipos de alternâncias de genes têm sido investigadas exaustivamente no cancro colorectal [46], esses estudos têm fornecido potenciais genes que necessitam de mais investigações.
Em um estudo randomizado recente [47], os pacientes foram pré-selecionados por apenas
KRAS
codon12, 13 e 61 do tipo selvagem tumores, no entanto, o tratamento com panitumumab com irinotecan não melhorou a sobrevida global em comparação com o irinotecano sozinho, então refinamento de seleção molecular foi necessário considerar o bem-estar dos pacientes. Outra trilha controlado por placebo, multicêntrico, randomizado testou um novo inibidor multiquinase (regorafenib) [48], embora o estudo obteve um resultado significativo no prolongamento OS mediana (6,4 vs 5,0 meses, a taxa de risco 0 · 77; 95% CI 0 · 64-0