Sumário

A expressão da p53 parece estar correlacionada com o prognóstico em pacientes com doença maligna, mas o seu papel no carcinoma gástrico tem permanecido controversa. Recentemente, relatou que JWA, um fator-ADP-ribosilação como 6 interagindo proteína 5 (ARL6ip5), foi tanto prognóstico para a sobrevida global e preditivo para o tratamento à base de platina de câncer gástrico. Neste estudo, teve como objetivo investigar a expressão da p53 como um marcador de prognóstico e preditivo no câncer gástrico ressecáveis, sozinho e em combinação com JWA. A expressão de p53 foi examinada em três grandes grupos de pacientes (total n = 1.155) de câncer gástrico. Alta expressão da p53 foi significativamente correlacionada com os parâmetros clínico-patológicas desfavoráveis ​​e diminuição da sobrevida global do paciente. Além disso, os pacientes com alta expressão de p53 em tumores adquiriu benefício de sobrevivência notável de adjuvante de primeira linha baseada em platina quimioterapia. A sinergia entre p53 e JWA em predizer o resultado do paciente foi demonstrada, ao passo que não foi observada significativamente elevado valor preditivo relativa quimioterapia. Assim, a expressão da p53 é um fator prognóstico e preditivo potente para câncer gástrico ressecável com quimioterapia à base de platina adjuvante. Um efeito combinado de p53 com JWa como eficientes indicadores de prognóstico foi encontrado pela primeira vez

Citation:. Liu X, Wang S, Xia X, Y Chen, Zhou Y, Wu X, et al. (2012) Papel sinérgica entre p53 e JWA: prognósticos e preditivos Biomarkers no câncer gástrico. PLoS ONE 7 (12): e52348. doi: 10.1371 /journal.pone.0052348

editor: DunFa Peng, Vanderbilt University Medical Center, Estados Unidos da América

Recebido: 03 de agosto de 2012; Aceito: 12 de novembro de 2012; Publicação: 21 de dezembro de 2012

Direitos de autor: © 2012 Liu et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este estudo foi apoiado em parte pelo projecto financiado pela Prioridade Academic Program Development (PAPD) das Instituições de Ensino Superior Jiangsu (https://jsycw.ec.js.edu.cn); a National Science Foundation Natural da China (30930080 e 81110027) (https://www.nsfc.gov.cn); a Fundação de Centro de Câncer da Universidade Médica de Nanjing (08ZLKF08) (https://202.195.178.127/zlsys). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer gástrico afeta cerca de um milhão de pessoas por ano, sendo a segunda principal causa de mortalidade relacionada ao câncer em todo o mundo, com uma taxa de sobrevida global em cinco anos inferior a 30% [1]. O mau resultado manteve-se praticamente inalterada ao longo das últimas décadas, apesar das melhorias na cirurgia, quimioterapia e radioterapia [2]. diferenças marcantes no prognóstico entre os pacientes após a cirurgia padrão existir, indicando biomarcadores específicos são urgentemente necessários [3]. Além disso, a seleção dos pacientes que serão beneficiados com a quimioterapia é uma questão importante como uma fração grande é unnessesarily tratada e só tem efeitos colaterais graves [4]. Assim, marcadores moleculares eficientes são urgentemente necessárias para evitar undertreatment super ou.

A proteína p53 (codificada pelo gene humano

TP53

) é possivelmente o mais conhecido de todos os supressores de tumor, e caracterizada pela capacidade para induzir a paragem do ciclo celular, a reparação do ADN, senescência, e a apoptose [5]. Mutação ou inativação funcional do p53 é uma característica quase universal do câncer humano, desempenhando um papel crucial na tumorigênese desde p53 mutante pode adquirir novas propriedades oncogênicas [6] – [9]. Além disso, ao contrário da proteína p53 de tipo selvagem que é degradado rapidamente, formas mutantes têm uma meia-vida prolongada, que favorecem armazenamento intranucleares, tornar-se imuno-histoquimicamente detectável [10] – [12]. A acumulação de proteína p53 no caso do cancro gástrico tem sido associada a prognóstico e predição de tratamento [13], [14]. No entanto, o seu papel relacionado e mecanismo até agora permanecem controversos [15], [16].

Nossas descobertas recentes implicado que JWA, também conhecido como ARL6ip5, semelhante com p53 em alguns aspectos, é essencial para a sobrevivência da célula e eficiente reparação do ADN após lesões oxidativas do ADN, assim como a apoptose de células de cancro induzido quimicamente [17], [18]. Além disso, JWA e XRCC1, uma outra proteína de reparo do DNA, pode ser candidato prognóstico e biomarcadores preditivos para pacientes com câncer gástrico [19]. Além disso, SNPs do

gene JWA

estão associados ao aumento predisposição para carcinoma gástrico em uma população chinesa [20]. Assim, nós somos consideravelmente interessados ​​se JWA funcionaria como um cooperador com p53 para melhorar a potência de previsão no câncer gástrico.

Aqui, o nosso objectivo de elucidar o significado de translação e identificar os padrões de p53 expressão em três grandes grupos independentes de pacientes com câncer gástrico e examinar o possível papel prognóstico e preditivo deste marcador. Mais intrigante, uma hipótese seria validado sobre se p53 e JWA poderia ser combinados como um romance preditor com mais precisão na avaliação de sobrevivência.

Materiais e Métodos

Pacientes e amostras

Três grupos de pacientes retrospectiva independente foram estudados. A coorte de treinamento e testes de coorte foram coletadas em Hospital de Câncer de Nantong, Nantong City, na parte leste da província de Jiangsu e coorte de validação foi recrutado no Hospital das Yixing Pessoas, Yixing City, na parte sul da província de Jiangsu, China. Os tecidos foram obtidos a partir das respectivas divisões patologia. Os critérios de inclusão foram carcinoma gástrico tratado com gastrectomia radical com ou sem quimioterapia adjuvante. Foram excluídos pacientes com câncer gástrico anterior ou câncer não-gástrica ativa. Além disso, aqueles que receberam quimioterapia ou radioterapia pré-operatória foram excluídos. O consentimento informado foi obtido de cada doente antes da aquisição dos tecidos e antes da cirurgia foi levada a cabo. aprovação institucional foi adquirida a partir da Ética Conselho de Nanjing University Medical revisão antes deste estudo.

pacientes tratados com cirurgia sozinha

A coorte de treinamento incluiu 103 pacientes que só foram submetidos a gastrectomia radical no Hospital do Câncer Nantong a partir de 1

st Maio de 1990 a 1

st de junho de 1995. no entanto, 20 amostras foram omitidas devido à falta de dados e uma amostra foi perdida durante a recuperação antigênica ou sem células tumorais presentes no núcleo, então 82 pares de tecidos de pacientes eram finalmente avaliadas para a expressão da p53.

o grupo teste consistiu em todos os 640 casos cirúrgicos do Hospital de Câncer de Nantong a partir de 1

st Dezembro de 2000 a 1

st Abril de 2005 e coorte de validação incluiu todos os 1.022 cirúrgica casos no Hospital de Yixing Pessoas de 1

st Janeiro de 1999 a 31

st de dezembro de 2006. Estes pacientes foram tratados com cirurgia ou apenas com quimioterapia adjuvante pós-operatório (para detalhes, ver Fig. S1). As distribuições das características demográficas e as variáveis ​​clínico-patológicas selecionados de pacientes entre os dois distritos (Nantong e Yixing) foram descritos anteriormente [19]. Devido à falta de dados de sobrevivência, a apenas 578 e 998 destes pacientes foram incluídos. Além disso, devido núcleos perdidos ou células tumorais insuficientes no tecido, 485 e 588 núcleos de tumor foram analisadas para a expressão da p53 no teste e validação de coorte, respectivamente.

Os doentes tratados com quimioterapia adjuvante

na coorte de formação, nenhum dos pacientes recebeu qualquer forma de terapia adjuvante. Dos 485 pacientes utilizados para análise no grupo de testes, 111 pacientes (22,9%) foram tratados com quimioterapia adjuvante após a ressecção curativa. Os regimes de quimioterapia combinada incluídos com fluorouracilo, leucovorina, e oxaliplatina (FLO) (6 casos); monoterapia com mitomicina C (46 casos); derivados fluorouracil (47 casos); e outros tratamentos (12 casos). Dos 588 pacientes na coorte de validação, o regime para 223 pacientes (37,9%) com quimioterapia pós-operatória incluiu quimioterapia combinada com FLO (87 casos); quimioterapia combinada com f luorouracilo, leucovorina, e Platinol (FLP) (79 casos); quimioterapia combinada com fluorouracilo e paclitaxel (FP) (11 casos); quimioterapia combinada com etoposídeo, leucovorina, fluorouracil e cisplatina (ELFP) (28 casos); e outros tratamentos (18cases). Em relação aos pacientes com câncer gástrico operados com quimioterapia, as distribuições das características demográficas e as variáveis ​​clínico-patológicas selecionados de pacientes entre o grupo FLO eo grupo FLP foram semelhantes (todas

P Art 0,05), exceto o tipo histológico (

P

= 0,001, Tabela S1). Além disso, 7 patologicamente confirmada câncer gástrico e respectivos frescos congelados tecidos da mucosa gástrica não-cancerosas de pacientes recentes no Hospital do Câncer Nantong foram obtidos para análise de Western blot.

A sobrevida global (OS) foi o ponto final primário do esta análise. O tempo de sobrevida foi determinada a partir da data da cirurgia até a data da morte ou para o último follow-up. Data da morte para cada caso foi obtido a partir de registros de pacientes ou as famílias dos pacientes através de chamadas telefónicas e de acompanhamento ainda mais duas vezes verificada pelo departamento de assuntos civis local e departamento de segurança pública. foi obtido informações clínico-patológico detalhado. critérios de Lauren foram usados ​​para classificar os tumores em tipo intestinal ou tipo difuso [21] e encenado acordo com o tumor, nódulo, metástase (TNM) orientações [22].

Construção de Tissue Microarray (TMA) e imuno-histoquímica

parafina-embedded material de tecido arquivada do tumor e tecido gástrico normal adjacente foi usado para a construção TMA. TMA foram preparados como publicado anteriormente [19]. Em breve, duplicar 1.0 mm de diâmetro núcleos de tecido de cada amostra foram perfurados a partir do bloco tumor parafina e correspondentes tecidos não tumorais na coorte de treinamento ou de núcleos de biópsias de tumores primários em teste e validação coortes. Como um controlo de tecido, as biópsias de tecidos normais epitélio gástrico foram inseridos nos quatro ângulos e o centro de cada lâmina.

Um protocolo padrão foi utilizado para a imunocoloração da TMA. O processo detalhado foi descrito anteriormente [19]. O IHC foi realizada usando anticorpo monoclonal DO7 (1:80; Dako, Carpinteria, CA), que detecta o tipo selvagem e as formas mutantes de p53-proteína, juntamente com Elivision ™ Kits Super HRP (Bio-Maixin, Fujian, China) , aplicando diferentes métodos de detecção e de recuperação de antigénio. A omissão do anticorpo primário serviram como controlo negativo. As pontuações de coloração dos controles de tecido em cada slide microarray foram pré-avaliados como um controle da imunocoloração qualidade.

Avaliação da imuno-histoquímica

Em primeiro lugar, a coloração de p53 no tecido foram marcados de forma independente por dois patologistas cegos aos dados clínicos, através da aplicação de uma pontuação semi-quantitativa imunorreactividade (IRS) na coorte de formação. Os critérios de pontuação para IRS foram relatados em outros lugares [23]. A intensidade da imunocoloração foi mostrado na Fig. S2. A concordância para a pontuação coloração IRS de p53 entre os dois patologistas foi de 74 (90%) em 82 tumores do conjunto de treinamento; e as poucas discrepâncias foram resolvidas por consenso usando um microscópio multihead. A variabilidade na coloração de p53 foi de 4 (5%) nos núcleos duplicadas de 82 tumores. Estes casos foram coradas por todo-corrediça IHC e ainda classificadas

.

O valor óptimo de corte de IRS é obtida por análise de receptor-operador characteristic (ROC), e a área sob a curva (AUC) a diferentes valores de corte de p53 IRS para 1, 3 e 5 anos de tempo de sobrevivência global foi calculado. O valor ideal de pontos de corte de p53 IRS em coorte distrito de Nantong (coorte treinamento combinado e testes de coorte) foi de 4 devido ao valor preditivo deste ponto de corte para a morte era o melhor (Fig. S3). Sob estas condições, amostras com IRS 0-4 e 5-12 IRS foi classificado como de baixa e alta expressão de p53 em tumores, respectivamente. Depois de estabelecer os critérios de avaliação de imuno-histoquímica na coorte distrito de Nantong, a expressão da p53 na coorte distrito de Yixing (coorte de validação) foi marcado pelos mesmos patologistas com o exatamente o mesmo procedimento.

Western Blot

Western blot foi realizada tal como anteriormente descrito [19]. foram utilizados para o anticorpo primário anticorpo monoclonal de murganho anti-p53 (1:1000;; Dako, Carpinteria, CA) e anticorpo monoclonal de murganho anti-actina-β (Beyotime Biotecnologia, Nantong, China 1:2000). bandas imunorreactivas foram detectadas com um kit de detecção de mancha ocidental Phototope-HRP (Cell Signaling Technology Inc, Beverly, MA, EUA). Para a análise de densitometria, bandas de proteína p53 sobre as transferências foram medidos por software Image J. (versão 1.44, Wayne Rasband, National Institutes of Health, EUA), após a normalização para o nível de β-actina correspondente.

Análise Estatística

A associação entre a expressão da p53 e parâmetros clínico-patológicas foi avaliada pelo teste exato de Fisher. A expressão diferencial de p53 em tumores primários e os seus não-tumores correspondentes foram avaliados pelo teste de Wilcoxon (agrupados) e correlação Spearman rank-fim (escores brutos). A correlação entre a expressão da p53 e JWA foi estabelecida por Spearman correlação de postos de ordem (escores brutos) e exato de Fisher (agrupadas). Probabilidade de diferenças no sistema operacional como uma função do tempo foi determinada por utilização do método de Kaplan-Meier, com um teste de log-rank para a significância. A análise de regressão Cox univariada ou multivariada foi realizada para estimar as razões bruto de risco (HR), o HRS ajustados e seus intervalos de confiança de 95% (IC), com o ajuste para possíveis fatores de confusão. Em seguida, analisamos o valor preditivo dos parâmetros utilizando ROC análise da curva tempo-dependente de dados censurados e AUC calculado das curvas ROC. Foram avaliados os desempenhos de diferentes pontuações traçando (t, AUC [t]) para diferentes valores de tempo de seguimento (t). Todas as análises estatísticas foram realizadas pelo programa Statistical Analysis System (versão 9.1.3; SAS Institute, Cary, NC), software estatístico STATA (versão 10.1; StataCorp, College Station, TX) e software R (versão 2.10.1; O Fundação R para Statistical Computing). Um valor de p 0,05 foi considerado estatisticamente significativo

Resultados

O aumento da expressão da p53 em Câncer Gástrico Versus tecidos normais adjacentes

Sete pares de amostras de cancro gástrico humano. , incluindo tecidos de cancro gástrico e mucosa gástrica primárias normais combinados foram seleccionados para testar a expressão de proteína p53 por Western blot. elevada expressão de p53 ocorreu em 6 de 7 tumores gástricos em comparação com a mucosa gástrica emparelhados normais (Fig. 1A). coloração imuno-histoquímica de microarray tecido gástrico (TMA) foi usado para confirmar ainda mais a expressão da p53 em 82 pacientes com câncer gástrico na coorte de treinamento. Foi mostrado que a p53 foi localizada principalmente no núcleo (Fig. 1B). A distribuição das diferenças de IRS para a expressão de p53 em tumores e tumores não-emparelhados foi mostrado na Fig. 1C. Além disso, a expressão da p53 foi significativamente aumentada em 65 dos 82 (79,2%) dos casos de câncer gástrico em comparação com os tecidos normais pareados gástricas (

P Art 0,001, teste de Wilcoxon, Fig. 1C). Em todos os três grupos independentes de pacientes tratados apenas com cirurgia só, a expressão da p53 foi negativamente correlacionada com JWA nos tecidos cancerosos (

P Art 0,001 para todas as correlações, Tabela 1).

(A) os níveis de proteína p53 em tecidos de cancro e 7 emparelhados tecidos normais não cancerosas de doentes com cancro gástrico foram analisados ​​por transferência de Western. O nível de cada proteína foi normalizada contra β-actina, e os níveis de proteína em tecidos de cancro indicada como uma razão para emparelhados tecidos normais não cancerosas. Nota: N, tecido normal não-canceroso; T, o tecido do tumor. (B) coloração imuno-histoquímica Representante para p53 no TMA. T, tecido canceroso gástrica; N, emparelhado tecido gástrico não-cancerosas. Painel superior: barra de escala, 250 mm; painel inferior: barra de escala, 50 mm. (C) A distribuição da diferença de coloração p53 (Δ IRS IRS = t-IRS N).

valores

P foram calculados pelo teste de Wilcoxon. IRS, pontuação imunorreatividade.

correlação entre a expressão da p53 e Recursos clínicopatológicos em pacientes tratados com cirurgia sozinha

Em todos os três grupos, que testemunhou que a expressão da p53 em tecidos cancerosos foi significativamente correlacionada com metástases em linfonodos (N-categoria). O aumento da expressão da p53 estava intimamente associado com maior estágio TNM na formação e grupos de teste, mas sem significado na coorte de validação. Além disso, o aumento da expressão da p53 foi principalmente relacionado a outras características clínico-patológicas, como a profundidade da invasão (T-categoria), metástases à distância (M-categoria), diâmetro do tumor e tipo histológico no respectivo grupo. Curiosamente, em todos os pacientes tratados apenas com cirurgia (n = 817), encontramos mais pacientes do tipo intestinal mostrou baixa, enquanto mais pacientes do tipo difuso mostrou alta expressão de p53 (

P Art 0,001, dados não mostrados ). A expressão de p53 não teve correlação com a idade e sexo (Tabela 1).

Correlação de expressão p53 e OS em pacientes tratados com cirurgia sozinha

Na coorte de treinamento, 82 amostras de tumores primários adequados para análise mostrou uma correlação negativa estatisticamente significativa entre a expressão da p53 e sobrevida global em 5 anos usando curvas de sobrevida de Kaplan-Meier (

P Art 0,001). Estes resultados foram validados em duas coortes independentes e maiores de pacientes com câncer gástrico com um mínimo de cinco anos de acompanhamento (n = 374 e n = 365, respectivamente) (Fig. 2A-C). Outros preditores negativos significativos para a sobrevivência por análise univariada nas três coortes independentes foram metástase linfática (N-categoria,

P Art 0,01 para todos, Tabela S2) e estágio TNM clínico (

P

≤.001 para todos, Tabela S2).

(a-C) As curvas de Kaplan-Meier que descrevem a sobrevivência geral de acordo com o padrão de expressão de p53. curvas (D-F) de Kaplan-Meier que descrevem sobrevida global de acordo com o padrão de p53 /JWA expressão.

valores

P foram calculados pelo teste log-rank.

A análise de regressão de Cox multivariada indicou que a baixa expressão p53 era um fator prognóstico positivo independente para o câncer gástrico em todas as três coortes (

P Art 0,001 para todos, Tabela 2). Para melhor avaliar o valor prognóstico da expressão da p53, foi realizada uma análise ROC dependente do tempo para os dados censurados, o que indica que combinação de pontuação clínica de risco (estágio TNM, tipo histológico e diâmetro do tumor) e p53 contribuiu muito mais do que os parâmetros clínicos sozinho em ambos os testes coortes (Fig. 3) formação e. Por exemplo, no grupo de teste, a AUC no ano 5 foi 0,707 (Cl 95% = 0,653-0,761) para a pontuação clínica risco, enquanto que ela foi significativamente aumentada para 0,856 (Cl 95% = 0,818-0,894) quando combinado com o risco de p53 Ponto. No entanto, este efeito não foi significativo na coorte de validação, devido ao relativamente maior AUC (cerca de 0,8) de preditores clínicos (Fig. S4).

(A) dependente do tempo análise ROC na coorte de formação. (B) ROC dependente do tempo de análise no grupo de teste. AUC = área sob a curva.

correlação entre a expressão da p53 e OS em Pacientes com Quimioterapia Adjuvante

No teste e validação coortes, OS foi analisada entre os pacientes que receberam quimioterapia adjuvante versus aqueles que não o fizeram. Os dados mostraram nenhuma diferença na OS entre a cirurgia único grupo e qualquer regime de quimioterapia adjuvante pós-operatória (dados não mostrados), exceto no grupo que recebeu fluorouracilo leucovorin-oxaliplatina (FLO) (n = 87, teste log-rank,

P

= 0,032, Fig. 4). A análise de regressão multivariada de Cox incluindo seis variáveis ​​(idade, sexo, estágio TNM, tipos histológicos, diâmetro do tumor e quimioterapia) foi realizada para indicar o benefício da quimioterapia em OS. Houve um benefício estatisticamente significativo para aqueles que receberam quimioterapia FLO após a operação ao longo do sozinha grupo de cirurgia (HR = 0,55; IC95% = 0,37-0,82, dados não mostrados). Notavelmente, este efeito só foi encontrada em pacientes com alta expressão de p53, onde adjuvante FLO obviamente aumento OS, em comparação com a cirurgia sozinho (HR = 0,56; IC95% = 0,35-0,89, Tabela S3; teste log-rank,

P

= 0,014, Fig. 4).

valores

P foram calculados pelo teste log-rank. Nota: S, cirurgia só; FLO, fluorouracil-leucovorin-oxaliplatina.

Também analisamos o significado de outro regime de quimioterapia à base de platina, fluorouracil-leucovorin-cisplatina (FLP) (n = 79) em câncer gástrico ressecável. Os resultados não apresentaram uma diferença de sobrevivência significativa (-rank teste log,

P

= 0,134, Fig. S5), enquanto os pacientes com baixa expressão p53 receber um regime de FLP, mesmo apresentado uma sobrevida pior em comparação com aqueles cirurgia recebendo somente (

P

= 0,003, Fig. S5). Além disso, pacientes submetidos a tratamento FLP com expressão alta p53 tinha nenhuma discrepância sobrevivência significativa em comparação com aqueles com cirurgia sozinha (

P

= 0,648, Fig. S5). Além disso análise multivariada elucidado que maior risco de mortalidade foi observada em pacientes com baixa expressão da p53 que recebem tratamento FLP comparação com a cirurgia somente (HR = 1,91; IC95% = 1,08-3,36, Tabela S4).

Synergetic Efeito da p53 com JWA Expressão no oS em pacientes tratados com cirurgia ou apenas quimioterapia adjuvante

os pacientes com cirurgia sozinha foi estratificado em três grupos distintos com base na coloração para p53 e p53 JWA: altura com JWA baixa, p53 baixo com JWA alta e ambos alto ou de baixo. Foi demonstrado que pacientes com p53 baixa e JWA alta teve um melhor resultado da sobrevivência nestes três grupos (

P Art 0,001, teste log-rank; A Fig. 2D-F). A análise de regressão de Cox multivariada demonstraram que a expressão combinada de baixa e alta JWA p53 foi o factor de prognóstico positivo independente para o cancro gástrico em todos os três grupos (

P

0,001 para todos, Tabela 2). Para avaliar ainda mais o valor prognóstico do p53 mais expressão JWA, foi realizada outra análise ROC dependente do tempo, o que indicou que a combinação do risco clínico marcar e p53 mais JWA contribuiu mais do que a cooperação da pontuação de risco clínicos com apenas p53 em ambos treinamento e coortes de teste (Fig. 3). Por exemplo, na coorte de formação, a AUC no ano 5 foi 0,568 (IC95% = 0,400-0,737) para o escore de risco clínico além de escore de risco de p53, ao passo que foi significativamente aumentada para 0,865 (IC 95% = 0,786-0,944), quando foi usada combinação do escore de risco clínico com p53 além de escore de risco JWA. No entanto, este efeito foi novamente não aparente na coorte de validação devido ao motivo mencionado acima (Fig. S4).

Com base na contribuição de nível de expressão da p53 para o resultado da quimioterapia, estratificamos tais pacientes em coordenação com JWA como seguinte forma: grupo de tratamento FLO com alta expressão p53 foi dividido em p53 alta com JWA baixa e p53 alta com JWA alta; e grupo de tratamento FLP com baixa expressão p53 também foi classificada em p53 baixo com JWA baixa e p53 baixo com JWA alta. OS foi reavaliada entre estes subgrupos. No entanto, há disparidade de sobrevivência evidente foi apresentado no padrão sinérgico com JWA (Fig. S6).

Discussão

O câncer gástrico é uma doença heterogênea em que o resultado varia mesmo em pacientes com clínica semelhante e patológica características. Mesmo com a cirurgia em estágios iniciais, o prognóstico pode ser desanimador, e quimioterapia adjuvante é eficaz apenas em subgrupos de pacientes. marcadores moleculares novas são necessários, como sistemas de teste tradicional para o câncer gástrico são insuficientes para resultados prevendo [24]. Neste estudo, nós gravamos e demonstrou que a alta expressão de p53 foi significativamente correlacionada com os parâmetros clínico-patológicas desfavoráveis ​​e diminuição da sobrevida global do paciente. Além disso, os pacientes com alta expressão de p53 em tumores adquiriu benefício de sobrevivência notável de quimioterapia adjuvante baseada em platina de primeira linha (FLO ou FLP). A sinergia entre p53 e JWA em predizer o resultado do paciente foi demonstrada, ao passo que não se observou qualquer valor preditivo elevado óbvia relativa a quimioterapia.

No presente estudo, encontramos evidentemente um aumento da expressão da proteína p53 em tecidos de câncer gástrico contra combinado normais mucosa, sugerindo um status potencialmente importante de p53 na carcinogênese gástrica. Alegadamente, o

p53

gene está mutado em quase 50% de todos os tumores humanos incluindo cancro gástrico [25] e a proteína mutada permanece dentro das células para um tempo mais longo, permitindo a detecção por imuno-histoquímica [26], [27 ]. Portanto, é geralmente aceite que a coloração positiva representa principalmente as formas mutantes de p53, ao passo que a proteína p53 de tipo selvagem é degradada mais rapidamente e aparece coloração fraca ou negativa [10], [26]. Nossos dados foram consistentes com estudos de outros investigadores, que revelou que a expressão da p53 positivo foi associada com características desfavoráveis ​​clínico-patológicas e um mau prognóstico de pacientes com câncer gástrico que tenham sido submetidos a gastrectomia curativa [28] – [30]. É importante notar que existem algumas diferenças nas características clínico-patológicas entre Nantong e Yixing coortes. Desde Hospital do Câncer Nantong é um hospital especial o cancro ao Hospital de Yixing People é uma abrangente, os pacientes no primeiros são muitas vezes em estágio mais avançado em relação a este último. Assim, pacientes em Nantong coorte mostrou características clínico-patológicas piores. Além disso, a p53 e expressão JWA só foram detectados em tecidos aqui, mas não no sangue ou no soro de doentes com cancro gástrico, devido a que não são segregadas proteínas. Curiosamente, um estudo anterior mostrou uma forte correlação entre auto-anticorpos alta p53 no soro de pacientes com adenocarcinoma gástrico e mau prognóstico, metástases em linfonodos e baixa diferenciação [31]. Além disso, foi demonstrado que a expressão de p53 em tecidos de cancro gástrico correlacionou-se com anticorpos do soro de p53 [32]. Nós não temos soros recolhidos para uma análise similar, mas isso seria muito interessante como um teste de sangue é mais simples e provavelmente mais reprodutível que immonohistochemistry. Quanto JWA, um teste de soro ainda está pendente e precisa ser demonstrada no futuro.

Uma pergunta fascinante e importante nos atraindo mais é por isso que pudesse alta expressão de p53 jogo papéis precisamente opostas sobre o efeito prognóstico e preditivo. Este fenômeno pode ser atribuído a diferentes formas de p53 e suas propriedades distintas na biologia do cancro e resistência ao tratamento. É amplamente conhecido que as proteínas p53 mutantes são altamente expressa em muitos tipos de cancro e contribui para a transformação maligna, a proliferação, e metástase, em parte, pela inibição da p53 de tipo selvagem, bem como outros membros da família p53 [6], [33]. modelos de ratinho rolamento knock-in mutações de p53 mostraram que as proteínas p53 mutantes pode conduzir a formação de tumor, invasão e metástases através da inibição negativa dominante de p53 de tipo selvagem juntamente com o ganho-de-função ou actividades ‘neomorphic’ que podem inibir ou activar a função de outras proteínas [34], [35]. Da mesma forma, em nosso estudo, a alta expressão de p53 em tumores gástricos correlacionadas com metástases em linfonodos, maior estágio TNM e outras características clínico-patológicas desfavoráveis, levando a um fenótipo mais agressivo com um prognóstico pior quando não tratada. Em contraste, o efeito preditivo positivo da expressão de p53 em alta a sobrevivência em ambos os doentes tratados com platina podem apontar para um papel duplo de p53 em quimio-resistência. Actualmente, um grande obstáculo na quimioterapia de platina é a reparação do ADN danificado-platina que resulta no aumento da resistência, a apoptose reduzida e, finalmente, a falha do tratamento. P53 de tipo selvagem pode, parcialmente desempenhar esse papel durante este processo através de paragem do ciclo celular e após a reparação de danos induzidos por agentes químicos [36] – [39]. Por outro lado, as proteínas p53 mutantes são incapazes de funcionar na reparação de danos do ADN como a sua contraparte de tipo selvagem em que os doentes se tornam mais sensíveis a substâncias químicas [36], [40], [41]. No entanto, o mecanismo detalhado da p53 mutante no tratamento de platina precisa ser mais investigada. Deve notar-se que os pacientes receberam mais benefício de sobrevivência de FLO a partir de FLP, que pode ser parcialmente devido a que FLO reduz a toxicidade, em comparação com FLP como observado anteriormente [19].

JWA é uma resposta ao stress típico do gene, assim como um supressor de tumores [18], [42]. In vitro e estudos in vivo confirmaram que a perda de JWA suprimida diferenciação celular e aumento da migração celular e metástase [42] – [44]. Nossos últimos resultados manifesta baixa expressão JWA em tumores gástricos correlacionadas com indicadores clínico-patológicas desfavoráveis ​​mas melhor quimioterapia resultado [19]. No presente estudo, descobrimos que JWA melhorou o valor prognóstico da p53, o que sugere que a perda de JWA combinada com a mutação p53 pode aumentar a agressividade do tumor ea metástase, que provavelmente porque JWA é também um membro da via de reparo de DNA e possivelmente desempenham um papel mútua na carcinogênese gástrica. Curiosamente, mesmo que ambos os marcadores foram separadamente preditivo para o tratamento de platina, a combinação não melhorou o valor preditivo, mas este resultado é dificultada pelo pequeno grupo de doentes em subgrupos. Um número maior de pacientes que receberam regimes de quimioterapia à base de platina devem ser incluídas em nosso estudo futuro para validar ainda mais nossos resultados. Além disso, foi demonstrado nenhum efeito regulador directo entre p53 e JWA (dados não mostrados), talvez eles agem em diferentes vias de reparação de [17], [18], [45] – existe [48] e indirecta relação entre eles, em determinadas situações. Além disso, p53 e JWA podem sinergicamente regular as mesmas moléculas ou vias de sinalização que precisa ser elucidada em estudos posteriores.

Em resumo, revelou um valor combinado de p53 tumoral com JWa fatores prognósticos como eficientes pela primeira vez , para o melhor de nosso conhecimento. Apesar de um co-ação definitiva destas duas proteínas ainda está para ser provado, pode fornecer os potenciais preditores para quimioterapia adjuvante com um regime à base de platina.

Informações de Apoio

Figura S1. diagrama

Consort para o estudo de tissue microarray

doi:. 10.1371 /journal.pone.0052348.s001

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Figura S2.

Imagens representativas de imuno coloração p53 no cancro gástrico humano. A, coloração negativa; B, coloração positiva fraca; C, coloração positiva moderada; D, forte coloração positiva (A-D: barra de escala, 25 um)

doi:. 10.1371 /journal.pone.0052348.s002

(TIF)

Figura S3.