Abstract
tecnologia de sequenciamento de última geração permite a análise simultânea de múltiplos genes de susceptibilidade para genética do câncer clínicos. Neste estudo, os testes genéticos em multiplex foi conduzida de uma família chinesa com múltiplos casos de cancro para determinar as variações de genes de predisposição para o cancro. A família compreende uma mãe e suas cinco filhas, das quais a mãe e a filha mais velha têm câncer ea filha secundário morreu de câncer. Foi realizado o teste genético multiplex de 90 genes de susceptibilidade ao câncer usando o DNA do sangue periférico da mãe e todas as cinco filhas.
WRN
mutação frameshift é considerado um potencial patogênico variação de acordo com as diretrizes da American College of Medical Genetics. Um romance
WRN
mutação frameshift (p.N1370Tfs * 23) foi identificado nos três pacientes com câncer e na filha mais nova afetados. Outras mutações germinativas não-sinônimas raros também foram detectados em
DICER
e
ELAC2
. mutações funcionais no
WRN
causar a síndrome de Werner, uma doença autossômica recessiva humana caracterizada por envelhecimento prematuro e associado à instabilidade genética e aumento do risco de câncer. Nossos resultados sugerem que o
WRN
mutação frameshift é importante para a vigilância dos outros membros desta família, especialmente a filha mais nova, mas a patogenicidade do romance
WRN
frameshift mutation precisa ser investigado mais distante. Dada a sua ampla utilização na triagem genética clínica, testes genéticos multiplex é uma ferramenta promissora em vigilância clínica cancro
Citation:. Yang L, Wang G, Zhao X, Ye S, Shen P, Wang W, et al. (2015) A Novel
WRN
Frameshift Mutation Identificado por Multiplex testes genéticos em uma família com múltiplos casos de câncer. PLoS ONE 10 (8): e0133020. doi: 10.1371 /journal.pone.0133020
editor: Peyman Björklund, Universidade de Uppsala, na Suécia
Recebido: 18 de setembro de 2014; Aceito: 23 de junho de 2015; Publicação: 04 de agosto de 2015
Direitos de autor: © 2015 Yang et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Dados Disponibilidade: Todos os dados de sequenciação (fastq) foram depositados no banco de dados SRA do Centro Nacional de Informações sobre Biotecnologia (NCBI, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/sra) com os seguintes números de acesso: SRR1563024, SRR1563027, SRR1563036, SRR1563037, SRR1563039 , e SRR1563041. A Tabela 2 mostra os pacientes individuais e os seus números de acesso SRA correspondentes
Financiamento:. Compatível com o Programa de Pesquisa e Desenvolvimento de Alta Tecnologia Nacional da China (Programa 863, No. 2012AA02A205), a National Science Foundation Natural da China (Sem . J20121214), o apoio financeiro do Departamento de Ciências da Província de Zhejiang Tecnologia (No. 2011C23088), o Science Foundation Medical Research de Bureau da Província de Zhejiang (Saúde No. 2012KYB070), o National S Projeto principal T (No. 2012ZX10002017), o projeto apoiado pela Fundação para Grupos de pesquisa inovadores da National Science Foundation Natural da China (No. 81.121.002) e do Fundo especial de Investigação para Pública Indústria do Bem-Estar da Saúde (nº 201202007)
Conflito de interesses.: os autores declararam que não existem interesses conflitantes.
Introdução
Ao longo dos últimos 30 anos, genes altamente penetrantes que conferem predisposição ao câncer foram identificados em famílias câncer-propensos. Estes genes seguem padrões de herança mendeliana. Estudos têm mutações ligadas com sucesso com várias condições, por exemplo,
BRCA1
e
BRCA2
na síndrome hereditária peito-cancro do ovário, genes de reparo de DNA na síndrome de Lynch,
P53
na síndrome de Li-Fraumeni, e
APC
na polipose adenomatosa familiar [1-3]. Testes para mutações germinativas de genes de predisposição de câncer altamente penetrantes fornece informações genéticas valiosas sobre os pacientes e suas famílias e podem ser usados na vigilância de câncer e monitoramento de pacientes.
A tecnologia da próxima geração de sequenciamento (NGS) permite que todo o genoma sequenciamento (WGS), a sequenciação de todo o exome (WES), bem como a sequenciação específica de regiões específicas de interesse, como o teste genético multiplex para identificar variantes genômicas raras. testes genéticos multiplex utilizando NGS permite triagem eficiente e rentável de um painel de genes de susceptibilidade ao câncer. Resumidamente, os fragmentos de ADN alvo foram enriquecidas com um painel de genes do cancro e sequenciado por NGS. NGS produz uma grande quantidade de dados de sequência para o mapeamento, alinhamento e filtragem para obter variantes genéticas. Para definir a patogenicidade de variantes, avaliamos todas as mutações identificadas de acordo com as diretrizes da American College of Medical Genetics (ACMG) [4].
Neste estudo, foram analisados três pacientes com câncer de uma família. A mãe e segunda filha tinha adenocarcinoma de pulmão, e a filha mais velha tem câncer endometrial. testes genéticos multiplex de 90 genes de predisposição câncer revelados
mutações frameshift nos três pacientes WRN
. O teste também foi realizado nas outras três filhas, revelando que a filha mais nova também tem o mesmo
WRN
mutação frameshift. Os resultados acima mencionados sugerem que o
WRN
frameshift mutação poderia ser de importância na vigilância do cancro para a filha mais nova.
Métodos
declaração Ética
A aprovação ética para este estudo foi concedido pelo Comitê de Ética da Primeira Affiliated Hospital, Faculdade de Medicina, Universidade de Zhejiang. Os pacientes e suas famílias receberam aconselhamento genético. Obtivemos consentimento informado por escrito dos pacientes incluídos neste estudo
Sujeitos e amostras
Analisamos uma família, que incluiu uma mãe com cancro do pulmão e cinco filhas.; a filha mais velha tem câncer endometrial, e a segunda filha morreu de câncer de pulmão. Também comparamos os dados de sequenciamento de 300 controles pareados saudáveis não relacionados para excluir variações de nucleotídeo único comuns [5]. O sangue total foi coletado de todos os seis membros da família. O DNA genômico, extraído com métodos padrão, foi usada para testes genéticos multiplex e validação pelo seqüenciamento Sanger.
A investigação clínica
tecido de câncer endometrial cirurgicamente ressecado e uma amostra de biópsia obtida por Centesis pulmonar percutânea foram submetidos a avaliação patológica para estabelecer o diagnóstico histológico. Os seguintes parâmetros foram estudados: os dados clínicos e de diagnóstico (idade, sexo e características clínicas), os resultados de ultra-som Doppler e tomografia computadorizada (TC). Os exames de acompanhamento também foram realizadas.
preparação biblioteca de DNA
Cada amostra de DNA foi quantificado por eletroforese em gel de agarose e espectrofotometria NanoDrop (Thermo Scientific, Waltham, MA, EUA). As bibliotecas foram preparadas utilizando o protocolo padrão Ilumina. Em resumo, 3 ug de ADN genómico foi fragmentado por nebulização. DNA fragmentado, com saliências single A foram ligados na extremidade 3 ‘de adaptadores Illumina, e foram selecionados 350-400bp produtos. Os produtos seleccionado de tamanho foram amplificados por PCR, e cada amostra foi marcado com um índice único durante o procedimento. O produto final foi validado usando o Agilent Bioanalyzer (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, EUA).
enriquecimento painel gene Câncer e sequenciamento
O DNA amplificado foi capturado com um painel de linha germinativa sequenciamento contendo 90 genes de susceptibilidade ao câncer (S1 Tabela) com base em MyGenostics GenCap enriquecimento Technologies (MyGenostics, Baltimore, MD, EUA). A lista gene continha 75 genes transferidos da Gene Census Câncer (www.sanger.ac.uk/genetics/CGP/Census/) e 15 genes extras, como
AXIN2
e
BARD1
, que tenham sido mostrado para ser genes de risco do cancro [6-11]. As sondas biotiniladas foram concebidos para telha ao longo das regiões de exão e as fronteiras exão-intrão dos genes alvo. O experimento de captura foi realizada de acordo com o protocolo do fabricante. Em resumo, 1 ug de DNA da biblioteca de sequenciação foi misturado com Tampão BL e 90 GenCap tumor painel de sondas de genes (MyGenostics) e aqueceu-se a 95 ° C durante 7 minutos e depois a 65 ° C durante 2 min num termociclador. HY tampão (23 ul; MyGenostics), pré-aquecida a 65 ° C, foi adicionado à mistura e depois foi mantida a 65 ° C com o calor ciclizador térmico na tampa durante 22 horas para hibridização. grânulos MYONE (50 uL; Life Technology, Carlsbad, CA, EUA) foram lavadas três vezes em 500 mL de 1 × tampão de ligação e foram ressuspensas em 80 ul de tampão de ligação 1 ×. Por conseguinte, de 64 uL de 2 x tampão de ligação foi adicionada à mistura de híbrido, que foi então transferido para um tubo com 80 uL de pérolas MYONE. A mistura foi rodada durante 1 h num agitador rotativo. As pérolas foram então lavadas uma vez com tampão de WB1 à temperatura ambiente durante 15 minutos e três vezes com tampão de WB3 a 65 ° C durante 15 min. O ADN ligado foi eluído com tampão de Eluição e amplificado utilizando o seguinte programa: 98 ° C durante 30 s (1 ciclo); 98 ° C durante 25 s, 65 ° C durante 30 s, e 72 ° C durante 30 segundos (15 ciclos); e 72 ° C durante 5 min (1 ciclo). O produto de PCR foi purificado utilizando esferas de SPRI (Beckman Coulter Genomics, Danvers, MA, EUA), de acordo com o protocolo do fabricante. As bibliotecas de enriquecimento foram sequenciados em um sequenciador 2000 Illumina HiSeq para a sequenciação-end emparelhado de 100 pb lê.
A análise dos dados e interpretação variante
Depois de HiSeq 2000 sequenciamento, de alta qualidade lê foram recuperados a partir de matéria lê através da filtragem de baixa qualidade lê e sequências de adaptador usando o pacote Solexa QA eo programa cutadapt (https://code.google.com/p/cutadapt/), respectivamente. SOAPaligner (https://soap.genomics.org.cn/soapsnp.html) foi usada para alinhar as sequências de leitura limpas para o genoma humano de referência hg19. Os resultados da sequenciação estão resumidos na Tabela 1.
Após os duplicados de PCR foram removidos por software Picard (https://picard.sourceforge.net/), os SNPs foram inicialmente identificados utilizando o programa SOAPsnp. A lê foram subsequentemente rectificados para o genoma de referência utilizando BWA (https://bio-bwa.sourceforge.net/), e os indels foram identificados utilizando o programa GATK (https://www.broadinstitute.org/gsa/wiki/index.php /Home_Page). Os SNPs e Indels identificados foram anotados usando o programa exome-assistente (https://122.228.158.106/exomeassistant). MagicViewer foi utilizado para visualizar o alinhamento curto ler e validar os SNPs candidatos e Indels. As variantes foram inicialmente filtrados se apareceu na base de dados do projecto 1,000 Genomes, na base de dados ESP6500 com um limiar menor frequência alélica de 0,05, na base de dados dbSNP, e 300 na base de dados na casa asiática Genoma [5]. As variantes restantes foram adicionalmente rastreados usando o Catálogo do Somatic Mutações em Câncer (COSMIC) banco de dados.
Para definir a patogenicidade das variantes, avaliamos todas as variantes e Indels identificados de acordo com as diretrizes ACMG [4]. As variantes foram definidos como potencialmente patogénico se produziu um codão de truncagem, um codão de iniciação, ou um efeito de emenda do dador /aceitador, ou se o efeito sobre a função da proteína relacionada com o fenótipo da doença é relatada na literatura. Caso contrário, o missense, em silêncio, e variantes intrônicas foram definidos como variantes de significado incerto (USV). A USV foram ainda avaliados por três algoritmos, ou seja, PROVEAN, peneire e PolyPhen-2, para prever os efeitos sobre a função da proteína [12-15].
Todos os dados de sequenciamento (FASTQ) foram depositados na SRA banco de dados do Centro Nacional de Informações sobre Biotecnologia (NCBI, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/sra) com os seguintes números de acesso: SRR1563024, SRR1563027, SRR1563036, SRR1563037, SRR1563039 e SRR1563041. A Tabela 2 mostra os pacientes individuais e os seus números de acesso SRA correspondentes.
projeto Primer, amplificação por PCR e seqüenciamento Sanger
As regiões pouco cobertas de NGS foram amplificados e verificada por meio de sequenciamento Sanger. As variantes identificadas pelo sequenciamento genético multiplex também foram validados com o seqüenciamento Sanger. Em resumo, os iniciadores foram concebidos utilizando o software Primer3 [16]. As sequências dos iniciadores de validação são apresentados na Tabela S2. variantes identificadas, incluindo
WRN
(c.4108DelA),
DICER1
(c.A3334G), e
ELAC2
(c.A248G), foram amplificados em duplicado da genômica DNA dos seis membros da família usando DNA polimerase FirePol Hot (Solis biodyne, Tartu, Estónia). Seqüenciamento Sanger foi realizada utilizando o Kit Big Dye Terminator v1.1 Cycle Sequencing (Applied Biosystems, Carlsbad, CA, EUA) e ABI Prism 3130 Genetic Analyzer (Applied Biosystems).
Resultados
Clinical características
o probando é uma mulher de 55 anos de idade (Fig 1, II: 1), que é o mais velho de cinco irmãos. Ela experimentou o sangramento vaginal, e seu menorrhea tinha parado com a idade de 48 anos. ultrassonografia transvaginal mostrou uma massa patológica de 8 mm sobre o lado direito da cavidade uterina. A ressonância magnética (MRI) da cavidade pélvica sugeriu câncer endometrial, e uma seção de congelados da massa foi consistente com câncer endometrial. Histerectomia foi realizada, eo resultado de patologia pós-operatória confirmou os resultados de MRI. O paciente foi submetido a radioterapia após a cirurgia. Ela exibiu nenhum sintoma de recorrência do tumor ou metástase 6 meses após a cirurgia e continua com check-ups de acompanhamento a cada 6 meses.
O pedigree de indivíduos com câncer é representado por círculos pretos (adenocarcinoma de pulmão) e um em grade círculo (cancro endometrial). Uma linha através de um símbolo indica que a pessoa está morta. O estado de mutação do
WRN
,
DICER1
, e
ELAC2
é apresentado em cada indivíduo que passou por sequenciamento genético multiplex. Um sinal de adição representa um tipo mutante, e um sinal negativo representa um tipo selvagem
A irmã do proband, um fazendeiro e não-fumante de 50 anos de idade (Fig 1, II, 2)., estava em boa saúde até que ela experimentou uma tosse wracking, produção de expectoração e angústia no peito em 2012. ela foi submetida a uma tomografia computadorizada na Primeira Affiliated Hospital, Faculdade de Medicina da Universidade de Zhejiang. O exame revelou múltiplas massas de vários tamanhos, distribuídos por todo o pulmão e intensificou difundir permeação linfática. biópsia percutânea guiada por tomografia computadorizada do pulmão e exame histopatológico demonstrou adenocarcinoma de pulmão. O tumor grau IV era inoperável; Assim, ela aceitou a terapia sistemática, que incluiu quimioterapia e medicamentos tradicionais chineses. O paciente faleceu em fevereiro de 2014, a idade de 52 anos
A mãe do proband, um fazendeiro e não-fumante de 80 anos de idade (Fig 1, I, 1)., Estava em boa saúde. Em seu exame físico, realizado em 2013, a radiografia de tórax revelou a 5 cm phyma no pulmão direito inferior. Nenhum outro sintoma foram registados. Para posterior diagnóstico e tratamento, ela sofreu uma abrangente check-up, que incluía um tórax e tomografia computadorizada do abdômen, cabeça MRI, e emissão de osso tomografia computadorizada no Primeiro Hospital Filiado. Os resultados mostraram metástases ósseas nas quarta e quinta vértebra lumbalis. biópsia percutânea guiada por tomografia computadorizada do pulmão foi executada, e exame histopatológico demonstrou adenocarcinoma de pulmão. O paciente não era um candidato adequado para o tratamento cirúrgico. Ela desistiu de tratamento por causa da idade avançada e restrições financeiras. No exame de acompanhamento realizada 6 meses após o diagnóstico, ela permanece viva, mas sua tosse e dor óssea pioraram. três irmãs mais novas do probandos ainda são saudáveis. Seu pai tinha morrido de um acidente há 30 anos.
WRN
mutação frameshift
O romance identificado
WRN
mutação frameshift c.4108DelA (p. N1370Tfs * 23) foi compartilhado entre a mãe (I: 1), probando (II: 1), segunda irmã (II: 2), e mais jovem irmã afetado (II: 5); No entanto, ela está ausente nas duas outras irmãs (não afectadas II: 3 e II: 4), como determinado por um teste genético multiplex (Tabela 2). O
WRN
mutação resultou num desvio de enquadramento que introduziu um codão de terminação a 23 aminoácidos a jusante da mutação no exão 34, que é previsto para produzir uma
WRN
proteína truncada. Nós rastreados ainda mais o
WRN
mutação em uma coorte de 300 entradas em casa no banco de dados asiática Genoma. O c.4108DelA (N1370Tfs * 23) mutação nunca foi encontrada em pessoas saudáveis. A mutação frameshift de
WRN
é definido como potencialmente patogênicos, de acordo com as orientações ACMG. Não foi observada apresentação típica da síndrome de Werner porque os deletérios
WRN
mutações são heterozigotos nos membros identificados desta família.
Identificação de outras mutações germinativas
O missense mutação c .A3334G (p.N1112D) de
DICER1
foi identificado em ambos os pacientes com câncer de pulmão, ou seja, a mãe afetado (I: 1) e a segunda filha (II: 2); No entanto, não foi encontrada em outros membros da família (Tabela 2). O
ELAC2
mutação c.A248G (p.Y83C) foi encontrado em todos os seis membros da família (Tabela 2).
DICER1
e
ELAC2
mutações foram definidos como USV acordo com as diretrizes ACMG. Para explorar ainda mais o efeito das mutações germinativas mencionados anteriormente sobre a função da proteína, analisamos tais mutações usando o PROVEAN ferramentas de previsão, peneire e PolyPhen-2.
ELAC2
(p.Y83C) foi previsto para ser prejudicial por PROVEAN, danificando pelo SIFT e, provavelmente, prejudicial por PolyPhen-2.
DICER1
(N1112D) foi definida como neutro, tolerada e benigna por PROVEAN, peneire e PolyPhen-2, respectivamente. A Tabela 3 apresenta as pontuações de previsão.
Validação de mutações germinativas de
WRN
,
DICER1
, e
ELAC2
Foi realizado seqüenciamento Sanger sobre as mutações germinativas identificados em
WRN
,
DICER1
, e
ELAC2
. Os resultados do seqüenciamento Sanger foram consistentes com os dos testes genéticos multiplex (Fig 2).
(A) a validação sequenciamento Sanger da
WRN
mutação frameshift em cada indivíduo. Os NGS alinhados dados de
WRN
mutação da mãe (I: 1). O
WRN
mutação frameshift apresentou uma deleção 1 pb em CHR8: 31.024.663. As bases após A são mostrados em vermelho, ea mutação pontual A → C na CHR8: 31024666 é mostrado em azul. O
WRN
mutação frameshift c.4108DelA (p.N1370Tfs * 23) foi validada pelo seqüenciamento Sanger na mãe (I: 1), o proband (II: 1), a segunda filha (II: 2) e a filha mais nova (II: 5); No entanto, ele estava ausente nas outras duas filhas (II: 3 e II: 4). (B) O
DICER1
mutação missense c.A3334G (p.N1112D) foi validada pelo seqüenciamento Sanger na mãe (I: 1) e a segunda filha (II: 2), mas foi ausente no outros membros desta família. (C) O
ELAC2
mutação c.A248G (p.Y83C) foi validada pelo seqüenciamento Sanger em todos os membros desta família.
Discussão
Multiplex testes genéticos combina a captura de genes seletiva e sequenciamento paralelo em massa. É eficiente facilita a análise genética simultânea de um grande número de genes candidatos. Em comparação com o rastreio por passos tradicional de gene-por-gene usando a sequenciação de Sanger, qPCR, ou espectrometria de massa de nucleótidos, a diminuição significativa no custo de sequenciação de ADN faz multiplex genética testando uma abordagem eficiente e economicamente vantajosa. testes genéticos multiplex tem sido aplicada em genética do câncer clínicos desde 2012 [17, 18]. estudos publicados recentes têm robustamente comprovada a aplicação clínica dos testes genéticos multiplex na avaliação de risco do câncer hereditário [19-21]. Neste estudo, identificamos uma novela
WRN
mutação frameshift em três pacientes com câncer e um membro da família afetado usando testes multiplex.
WRN
, um membro da recombinase Q família de helicases, desempenha um papel importante na função de reparação do ADN, incluindo a protecção do genoma de recombinação anormal durante a segregação cromossoma na mitose e manter a estabilidade genómica [22]. Deficiências em
WRN
causar a síndrome de Werner, que é uma doença autossômica recessiva rara, caracterizada pelo envelhecimento precoce e suscetibilidade ao câncer [23-26]. Todas as mutações identificadas no
WRN
estão previstas para truncar o
WRN
proteína, com uma perda de sinal de localização nuclear (NLS) na região C-terminal (aa 1370-1375); Além disso, o mutante
WRN
proteína não pode ser transportado para o núcleo [27]. importação nuclear prejudicada é provavelmente um fator importante que contribui para a patologia molecular da síndrome de Werner. Neste estudo, identificamos uma mutação frameshift heterozigotos (p.N1370Tfs * 23) no NLS do
WRN
domínio C-terminal. Análise in vitro confirmou que linhas celulares de
WRN
indivíduos heterozigotos contêm reduzida
WRN
expressão de proteínas e atividade helicase reduzida [28].
WRN
atividade helicase é obrigado a reparar o DNA vertente inter-ligações cruzadas (CIET) em células, e
WRN
coopera com
BRCA1
452-1079 em resposta celular para DNA ICLs [29]. Embora o
WRN
efeito heterozigoto resultante da haploinsuficiência é suposto ser associada a
WRN
patogênese, essa hipótese precisa ser investigado.
DICER1
, um importante gene supressor de tumor, é uma endoribonuclease que é importante na geração e microARNs curto RNAs interferentes [30]. Portadores do
DICER1
mutação germinativa foram encontrados para estar em risco para a síndrome de predisposição tumor pleiotrópico [31-33]. Curiosamente, tanto a mãe como a segunda filha tinha câncer de pulmão, o que comumente se apresenta com variações genéticas em
DICER1
. A tendência sugere que
DICER1
pode desempenhar um papel importante na carcinogênese de pulmão. Outros estudos funcionais podem esclarecer o mecanismo de
DICER1
no câncer de pulmão. O identificada
ELAC2
variante c.248A G ocorre dentro de três nucleotídeos de uma junção de processamento (intron1 /exon2) e pode afetar emenda do gene. A região codificante de
ELAC2
consiste de 826 aminoácidos de uma hidrolase de metal de dependência, e deste gene é o gene de susceptibilidade para cancro da próstata hereditário familiar [34]. Outros estudos também descobriram que o genótipo de
ELAC2
está associada a um alto risco de câncer de próstata esporádico [35, 36].
Multiplex testes genéticos de 90 genes de predisposição câncer iria produzir variantes genéticas significado clínico incerto, que são referidos resultados como acidentais (IF). Para
DICER1
e
ELAC2
, não podemos avaliar diretamente se as mutações missense identificados prejudicar a função da proteína resultante. Embora tenhamos usado ferramentas computacionais como PROVEAN, peneire e PolyPhen-2 para prever se as mudanças aminoácidos identificados pode ser funcionalmente significativa, foi utilizado nenhum ensaio funcional direta. A ACMG recomendações recentemente publicado por relatar IF obtido a partir WGS e WES em testes clínicos e de investigação [37]. Usamos diretrizes ACMG para definir as mutações do
DICER1
e
ELAC2
como se neste estudo. recomendações ACMG devem ser seguidas para testes genéticos multiplex em oncologia clínica. O consentimento informado é muito importante em testes genéticos baseados no NGS utilizados em oncologia clínica. A Sociedade Americana de Oncologia Clínica (ASCO) delineou os elementos básicos de consentimento informado para testes genéticos utilizados para avaliar o risco de câncer. Além disso, informações sobre a privacidade e segurança dos dados, o licenciamento laboratório de testes, a disponibilidade de aconselhamento genético ou câncer de avaliação de risco genético e qualquer possibilidade de uso futuro de amostras de ADN devem ser incorporados no consentimento informado [38, 39].
testes genéticos Multiplex identificados com sucesso variações raras em genes de susceptibilidade ao câncer neste estudo. No entanto, estimativas de penetrância de tais variantes permanecem incertas. Nosso estudo tem algumas limitações. Os 90 genes do cancro foram selecionados de literatura publicada; No entanto, um painel de genes múltiplos ideal para uso oncologia clínica continua a ser definida. Sem um ensaio funcional directa, o impacto clínico de variações raras identificadas não pode ser previsto; portanto, pode não ser apropriado usar os resultados para orientar o manejo do paciente. Além disso, o resultado da filha mais nova com o
WRN
mutação frameshift requer acompanhamento. Embora mais estudos aprofundados são necessários para guiar a prática clínica, o nosso estudo mostra um indicador precoce para a correlação clínica dos testes genéticos multiplex e destaca vantagens e desvantagens de análise genômica em larga escala na avaliação de câncer de risco.
Informações de Apoio
Tabela S1. genes de risco de câncer a partir do gene Census cancro
doi: 10.1371. /journal.pone.0133020.s001
(XLSX)
S2 Table. As sequências dos iniciadores para validação por seqüenciamento Sanger
doi: 10.1371. /journal.pone.0133020.s002
(XLSX)
Reconhecimentos
Gostaríamos de agradecer aos pacientes e seus famílias para a sua cooperação no estudo. Agradecemos também o Dr. Jian Wu por sua contribuição na realização da análise de experiências e dados.