Abstract
Fundo
metilado Septin 9 (SEPT9) é um biomarcador sensível para o cancro colorectal (CRC) do sangue periférico. No entanto, não foram descritos sua relação com a localização do câncer, baseado em guaiac exame de sangue oculto nas fezes (gFOBT) e antígeno carcinoembrionário (CEA).
Metodologia /principais conclusões
As amostras de plasma foram coletadas para análise SEPT9 de pacientes sem evidência de doença (NED) (n = 92) antes de colonoscopia e CRC (n = 92) antes do tratamento cirúrgico. DNA foi isolado e usando Epi proColon kit 2.0 convertido pelo bissulfito. determinação qualitativa foi realizada por meio de ensaio de RT-PCR Epi proColon 2.0. As amostras para análise gFOBT e CEA foram recolhidas a partir de NED (n = 17 e 27, respectivamente) e CRC (n = 22 e 27, respectivamente). teste SEPT9 foi positiva em 15,2% (14/92) do NED e 95,6% (88/92) do CRC, incluindo 100% (67/67) a partir da fase II para o estágio IV CRC e 84% (21/25) de estágio I CRC quando uma amostra foi chamado positivo se 1 de 3 PCR replica foi positiva. Numa segunda análise (2 de 3 de PCR replica) especificidade melhorada para 99% (91/92) dos ANE, com uma sensibilidade de 79.3% (73/92) de positivos SEPT9 em CRC. gFOBT foi positiva em 29,4% (5/17) do NED e 68,2% (15/22) do CRC e elevados níveis de CEA foram detectados em 14,8% (4/27) do NED e 51,8% (14/27) do CRC. Ambos SEPT9 (84,8%) e CEA (85,2%) mostraram maior especificidade do que gFOBT (70,6%). SEPT9 foi positiva em 96,4% (54/56) de câncer de cólon do lado esquerdo casos (LSCC) e 94,4% (34/36) de câncer de cólon do lado direito casos (RSCC). gFOBT foi positivo em 83,3% (10/12) dos casos com LSCC e 50% (5/10) dos casos com RSCC, CEA elevado foi detectado 60% (9/15) de LSCC e 41,7% (5/12) de RSCC.
Conclusões /Significado
o alto grau de sensibilidade e especificidade de SEPT9 no plasma torna um método melhor para detectar CRC de gFOBT e CEA, mesmo para o mais difícil de detectar RSCC.
Citation: Tóth K, Sipos F, Kalmar A, Patai AV, Wichmann B, Stoehr R, et al. (2012) Detecção de metilado SEPT9 no plasma é um método de rastreio fiável para a esquerda e cancros do cólon do lado direito. PLoS ONE 7 (9): e46000. doi: 10.1371 /journal.pone.0046000
editor: Libing Song, Sun Yat-sen University Cancer Center, China
Recebido: 03 de abril de 2012; Aceito: 27 de agosto de 2012; Publicação: 25 de setembro de 2012
Direitos de autor: © Tóth et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Este estudo foi suportada por Epigenomics AG (Berlim, Alemanha). O patrocinador tem fornecido parcialmente os reagentes para o estudo, realizado a formação técnica e apoio. A coleta de dados, a decisão de publicar e preparação do manuscrito foram realizados pelos autores
Conflito de interesses:. Este estudo foi apoiado por Epigenomics AG (Berlim, Alemanha). O patrocinador tem fornecido parcialmente os reagentes para o estudo, realizado a formação técnica e apoio. Os autores declaram que não são empregados e não consultoras no financiador. Os autores não têm parte em patentes, produtos em desenvolvimento ou produtos comercializados. Isto não altera a adesão dos autores para todas as políticas de PLoS One sobre os dados e materiais de compartilhamento.
Introdução
O câncer colorretal (CCR) é a terceira neoplasia maligna mais comum em todo o mundo, com mais de 1,2 milhões de novos casos e 808,700 mortes no ano de 2008 [1]. As taxas de incidência são mais elevadas na Europa, Austrália, Nova Zelândia e América do Norte e CRC afeta significativamente mais machos do que fêmeas. Se for detectado numa fase precoce, CRC é curável na maioria dos casos.
Todos os métodos de rastreio actualmente utilizados, tais como teste de sangue oculto nas fezes, CT colonography, sigmoidoscopia flexível e colonoscopia têm limitações [2] . O fecal de sangue oculto sensível é um método de custo não-invasivo e de baixo com sensibilidade limitada para CRC [2] e só reduz o risco relativo de mortalidade CRC por 15-25% [3]. O fecal de sangue oculto baseada guaiac padrão (gFOBT) detecta apenas 33-75% do CRC [2]. O teste específico da hemoglobina humana mais caro imunoquímico fecal (FIT) detecta CRC com uma sensibilidade de cerca de 60-85% [4]. Colonografia por tomografia computadorizada é menos invasiva do que a colonoscopia e possui uma sensibilidade para a detecção de CRC ou adenomas de 10 mm ou mais de diâmetro de cerca de 90%. As desvantagens do CT colonography são a necessidade de preparo intestinal, conhecimentos especializados, o uso de raios-X e de custo mais elevado [5]. Em um estudo controlado, multicêntrico, randomizado, sigmoidoscopia reduzida CRC incidência em 23% ea mortalidade em 31% e reduziu a incidência de câncer de cólon distal (reto e cólon sigmóide) em 50% [6]. As limitações deste método diagnóstico são a necessidade de preparo intestinal, o custo relativamente elevado, e a incapacidade de detectar lesões do cólon proximal. O “método padrão-ouro” da colonoscopia tem mais de 95% de especificidade para CRC. estudos de caso-controle têm demonstrado redução da CRC incidência de 53-72% e redução da mortalidade de 31% [7], [8]. Embora tenha uma maior especificidade, existem várias limitações, tais como a necessidade de preparação do intestino, especialização, custo, capacidade de invasão, disponibilidade, baixa taxa de adesão, e complicações graves ocasionais. Uma vez que os métodos convencionais para triagem CRC são ineficazes ou invasivo, é necessário um método mais paciente-friendly e sucessivas.
Enquanto vários, marcadores tumorais à base de soro minimamente invasivas para CRC estão disponíveis, a sua especificidade e sensibilidade são não suficiente. antigénio carcinoembrionário (CEA) tem sido demonstrado que possuem uma sensibilidade de 43,9% na% de especificidade 95 [9]. Chen
et ai., Achou uma sensibilidade de 40,9% e especificidade de 86,6% para o CEA em CRC e quando combinado com a survivina de anticorpos a sensibilidade aumenta para 51,3% e a especificidade de 89,9% [10]. Mesmo assim, o CEA não é recomendado para o rastreio, mas pode ser utilizado para controlo da resposta à terapia cirúrgica ou sistémica [11].
DNA circulante é encontrada no soro do sangue periférico humano no aumento das concentrações em várias doenças, tais como [12] ou doenças neoplásicas reumáticas [13]. ADN metilado também tem sido encontrada em soro humano e Lofton-Dia
et ai.
Testados três desses marcadores em amostras de plasma humano a partir de controlos saudáveis e pacientes com CRC [14]. Fora destes candidatos, Septin 9 (SEPT9) provou ser o mais específico. Posteriormente, um novo teste específico para o cancro colorectal à base de sangue, o teste metilado Septin 9 (SEPT9), foi desenvolvido. Vários estudos de caso-controle foram realizadas para validar a SEPT9 biomarcador [15] – [18] e com base nestas constatações; SEPT9 é apropriado como um biomarcador, minimamente invasivo para o cancro colorectal. Warren
et al
. detectou a metilação SEPT9 de acordo com o estágio clínico, localização do tumor e grau histológico dos cancros do cólon usando um protocolo modificado [19].
Ele continua a ser determinado se SEPT9 é um método de rastreio fiável tanto para esquerda e para a direita tumores do cólon lados. Do tipo plano neoplasias são mais comuns no lado direito do cólon, enquanto lesões do tipo polipóide são mais comuns no lado esquerdo. Além disso, o cancro do cólon lados direito é mais provável de ser detectado numa fase avançada [20]. Ambos os factores anatómicos e genéticos diferente resultar em especificidade e sensibilidade de acordo com a localização (esquerda ou direita) do tumor do cólon. Portanto, o desenvolvimento de um teste específico para o cancro colorectal minimamente invasivo triagem com sensibilidade independente da localização do tumor seria de grande importância clínica.
Neste estudo analisamos a sensibilidade e especificidade SEPT9 tanto para esquerda e para a direita em frente e verso câncer colorretal. Além disso, nós também comparou SEPT9 a um método de rotina fecal-base de rastreio (gFOBT) e um marcador de tumor com base em sangue (CEA), já que nenhum estudo tinha ainda sido realizada.
Materiais e Métodos
ética Declaração
O estudo foi aprovado pelas autoridades do comitê de ética e do governo local. consentimento informado por escrito foi obtido de todos os pacientes. Foram realizadas entrevistas detalhadas para história clínica e exame físico. (Comité Regional e Institucional da Ciência e Ética em Pesquisa, TUKEB Nr: 116/2008)
desenho do estudo, pacientes e Lower Gastrointestinal Endoscopy
Um total de 93 pacientes com câncer colorretal (CRC. ) e 94 controles saudáveis (sem evidência de doença; NED) foram incluídos no estudo. Os critérios de exclusão foram os seguintes: inflamatória sistêmica, doenças de má absorção, condições médicas agudas e outras doenças malignas. Ver Tabela 1 e Tabela S1 para os dados demográficos detalhados. CRC pacientes foram divididos em dois grupos dependendo da localização do cancro em relação à flexão do baço do cólon: do lado esquerdo (n = 36) e CRC do lado direito (n = 57). Todos os indivíduos (controles saudáveis e pacientes com câncer colorretal) foram submetidos à endoscopia inferior, durante o qual as biópsias foram tomadas para exame histológico. No caso de CRC, os pacientes foram estratificados pela aparência anatómica do tumor e, em seguida, caracterizado por histopatologia. Nenhum dos pacientes com câncer tratados com quimioterapia, radioterapia, ou intervenção cirúrgica antes da endoscopia. A endoscopia em todos os casos foi realizada utilizando um videocolonoscope (CF-Q160, Olympus, Hamburgo). Amostras de sangue periférico foram tomadas antes de colonoscopia utilizando tubos de 9,5 ml de EDTA (Vacutainer, Becton Dickinson, New Jersey, EUA). Para fins de validação, 2 × 9,5 ml de amostras de sangue periférico foram tomadas a partir de 40 pacientes (16 NED e 24 CRC). preparação do plasma foi realizada a partir de todas as amostras de sangue periférico por centrifugação repetida durante 12 min a 1.350 amostras RCF e de plasma foram armazenadas a -80 ° C até ser necessário. Veja a Figura 1 para o desenho do estudo.
94 NED e 93 amostras de plasma CRC foram recolhidos. Quarenta amostras de pacientes (16 NED e 24 CRC) foram medidos duas vezes para fins de validação SEPT9. 2 NED e amostras de 1 CRC rendeu tanto Septin 9 resultados positivos e negativos; portanto, eles foram excluídos do estudo. Além disso amostras para FOBT e CEA foram coletados retrospectivamente. CRC = câncer colorretal; NED = sem evidência de doença (controle saudável); SEPT9 = Septin 9.
Extração de DNA e qualitativa Análise por PCR de SEPT9
extração de DNA a partir de amostras de plasma e de conversão de bissulfito foram realizadas utilizando Epi proColon teste 2.0 (Epigenomics AG, Berlim, Alemanha) de acordo com as instruções do fabricante. os resultados da conversão de bissulfito a desaminação de nucleótidos de citosina não metilados que são, eventualmente, convertidos aos nucleótidos uracilo. Após amplificação por PCR, as citosinas não metiladas são substituídos por nucleótidos timina, enquanto as citosinas metiladas permanecem como as citosinas. A subsequente PCR em tempo real detectada as sequências de CpG metilados no interior da transcrição do gene V2 Septin 9 e o ADN total convertidos-bissulfito de uma região do gene da beta-actina (ACTB). A sonda de detecção metilado Septin 9-específica fluorescente, bloqueador específico sequência não metilado bisulfite-convertidos e primers desenhados em regiões carentes dinucleótidos CpG foram utilizados para reações de PCR. Cada amostra foi testada em triplicado durante a análise por PCR com o LightCycler 480 (Roche Diagnostics, Basileia, Suíça) instrumento. Em todas as corridas independentes, foram usadas Epi proColon Controlo Negativo e Epi proColon controlo positivo.
limites de validação foram usadas para ensaios de PCR em tempo real de acordo com as instruções do fabricante. Por conseguinte, para Septin 9 PCR a travessia ponto (CP) para o controlo positivo foi a menos de 40,5 e o controlo negativo não tinha CP. Para ACTB PCR, o controlo positivo foi inferior a 30,3 CP e do controlo negativo foi inferior a 37,1 CP. Os limites de validade de PCR foram diferentes para as amostras dos pacientes. Nos casos positivos, Septin 9 PCR CP foi inferior a 50 e CP ACTB PCR foi inferior a 33,7, enquanto que as Septin 9 casos negativo não apresentou PB na Septin 9 PCR e PCR ACTB CP era inferior a 33,7. Todas as curvas de amplificação foram regularmente em forma; caso contrário, eles foram excluídos por medidas inválidos.
Para ser comparável aos estudos anteriores usando SEPT9 (deVos
et al
. [16]), analisamos primeiro os dados usando uma regra de 1/3 no que uma amostra foi declarada positiva se uma PCR de três repetições tive uma curva válida (1/3 método de análise). Assim, uma amostra foi considerada positiva para Septin 9, se pelo menos um dos três Septin 9 PCRs foram positivas e uma amostra foi considerado como sendo negativo para Septin 9 se todos os 3 das repetições Septin 9 PCR foram negativos. Além disso, nós também analisamos os dados usando uma regra de 2/3, em que para ser chamado positiva 2 dos 3 repetições de PCR deve ter curvas válidos, seguindo as instruções de uso do fabricante. (2/3 método de análise). Aplicação desta regra resulta em maior especificidade em uma menor sensibilidade de detecção.
Fecal Occult teste baseado em Guaiac (gFOBT)
Todas as amostras fecais para gFOBT (Tela Hema, Immunostics. Inc., nova Jersey) foram tomadas, pelo menos, 2 dias antes da preparação do intestino por pacientes. O teste foi feito no Laboratório Central da Universidade de Semmelweis. O nível de detecção de sangue fezes foi de 0,6 mg Hg /g de fezes.
Carcinoembrionário Antigen (CEA)
Todas as amostras de sangue para o teste CEA (Cobas, Roche Diagnostics) foram tomados pelo menos 2 dias antes da preparação do intestino. O teste foi feito no Laboratório Central da Universidade de Semmelweis. A faixa de medição do
in vitro
teste é 0.2-1,000 ng /ml de CEA. Um nível sérico de CEA mais elevada do que 4,3 ng /mL foi considerada como sendo na gama patológica (CEA elevado).
Análise estatística
A sensibilidade e especificidade foram calculados utilizando um teste de classificação binária. A sensibilidade foi medida como uma proporção de casos verdadeiros positivos para o número de casos verdadeiros positivos e falsos negativos. No caso de especificidade, o número de casos verdadeiros negativos foi dividido pelo número acumulado de todos os verdadeiros resultados positivos falsos e negativos. Qui-quadrado foram utilizados para estimar e testar a associação entre indivíduos saudáveis e em casos de câncer e entre os diferentes lados do cólon em amostras de tumor. Estatisticamente significativa (P 0,05) foram visualizadas diferenças na base dos resíduos de Pearson. Lá resultados foram resumidos em uma trama associação gráfica utilizando a linguagem de programação R.
Resultados
SEPT9 Sensitive qualitativa PCR
Nosso estudo incluiu 94 controles saudáveis e 93 pacientes com cancro colo-rectal ( 57 de do lado esquerdo e 36 do lado direito). Quarenta amostras de pacientes (16 NED e 24 amostras CRC) foram medidos duas vezes para fins de validação, dos quais apenas três apresentaram resultados contraditórios. As amostras de dois indivíduos Ned e um paciente CRC Septin produziu os 9 resultados positivos e negativos; portanto, eles foram excluídos do estudo. Portanto, 92 NED e 92 CRC (56 do lado esquerdo e 36 do lado direito) foram finalmente incluídos nas análises.
Encontramos Septin 9 metilação em 15,2% (14/92) dos controles saudáveis e 95,6% (88/92) dos pacientes de CRC (Tabela 2) usando 1/3 método de análise. Assim, a especificidade e sensibilidade de Septin 9 para CRC foi de 84,8% (intervalo de confiança de 95% 75,8% a 91,4%) e 95,6% (intervalo de confiança de 95% 89,2% a 98,8%), respectivamente (Tabela 3). CRC amostras foram então divididas em cancros dos lados esquerdo e do lado direito, e no decurso desta comparação não significativa (p = 0,65) foram encontradas diferenças entre os dois grupos. Septin 9 foi metilado em 96,4% (54/56) do CRC do lado esquerdo e 94,4% (34/36) do CRC do lado direito. Apenas 4/92 (4,3%) de casos de CRC foram Septin 9 negativa, 2 (2/56, 3.6%) a partir do lado esquerdo e dois (2/36, 5.5%) a partir do lado direito (Tabela 2). Todos os casos de CRC de estágio clínico II ou superior foram detectados por Septin 9 (Tabela 4, Figura 2)
A, B:. Gráfico de barras e enredo associação de nível de metilação SEPT9 nos casos de câncer colorretal e saudáveis. C, D: Carta de barra e enredo associação de SEPT9 metilação em amostras cancerosas e cancerosas do lado direito saudáveis, do lado esquerdo. CRC = câncer colorretal; SEPT9 = Septin 9.
Usando o método 2/3 análise, observou-se 99% de especificidade (IC 95% 94,1-100), com 91/92 de amostras NED chamado negativo e 79,3% de sensibilidade (IC 95% 69,6-87,1) com 73/92 das amostras CRC chamado positivo (Tabela 3). Usando a detecção 2/3 análise do lado esquerdo (48/56; 85,7%) e do lado direito (25/36; 69,4%) tumores mostrou alguma diferença. No entanto, devido à menor sensibilidade, fase I casos CRC mostrou apenas 60% de positividade e da fase II até o estágio IV encontramos uma tendência decrescente de Septin 9 metilação (Tabela 2, 4).
Análise de Teste de sangue Oculto
sangue oculto baseada Guaiac foi detectado nas fezes de 29,4% (5/17) dos indivíduos saudáveis e em 68,2% (15/22) dos pacientes com CCR. Assim, a especificidade e sensibilidade de gFOBT para CRC foi de 70,6% (95% de intervalos de confiança de 44% para 89,7%) e 68,2% (intervalo de confiança de 95% 45,1% a 86,1%, respectivamente. Um quase de forma significativa (p = 0,09) mais elevada proporção do lado esquerdo CRC (83,3%; 10/12) mostrou gFOBT positividade em relação ao do lado direito CRC (50%; 10/05) (Tabela 2, 3)
Análise de carcinoembrionário Serum Antigen Nível
no caso da CEA, foram definidos dois grupos:. um com níveis séricos de CEA elevados e outro com níveis normais Em nosso estudo, 14,8% (4/27) dos indivíduos saudáveis tinham níveis elevados de CEA, enquanto única de 51,8% (14/27) das amostras apresentaram níveis elevados de CRC. Assim, a especificidade e sensibilidade de CEA para CRC foi 85,2% (intervalo de confiança de 95% 66,3% a 95,8%) e 51,8% (intervalo de confiança de 95% 31,9% para 71,3%), respectivamente. não houve diferença significativa (p = 0,34) entre a proporção de casos de CRC do lado esquerdo (15/09, 60%) e do lado direito casos CRC (5/12, 41,6%) com elevado níveis séricos CEA (Tabelas 2, 3).
Discussão
CRC triagem para identificar tumores em estágios iniciais reduz a mortalidade da doença. No entanto, os métodos de rastreio altamente sensíveis e específicos (isto é, colonoscopia e CT enterografia) são invasivos e cumprimento pelo doente é baixa. Por outro lado, outros métodos que não são tão invasivo (isto é, FOBT e CEA) têm baixa sensibilidade e especificidade. Portanto, é necessário um método de rastreio adequados, com capacidade de invasão mínima.
Neste estudo, comparou-se a sensibilidade e especificidade do metilado Septin 9 como um biomarcador colorectal no soro tanto para nível sérico gFOBT e CEA. Foi realizada a análise de gFOBT testando retrospectivamente para ambos os controles saudáveis e pacientes com CCR. A sensibilidade 68,2% dos gFOBT para CRC em nosso estudo se correlaciona com os resultados publicados anteriormente [3] ea especificidade do gFOBT para CRC atingiu 70,6%. Enquanto este método tem sido utilizado para o rastreio de CRC durante várias décadas, tem pouca sensibilidade devido à sua não-especificidade para a hemorragia gastrointestinal. Tem sido mostrado para reduzir tanto CRC incidência e mortalidade por 15-33%. No entanto, uma vez que o teste não é suficiente, de modo que testes repetidos é necessária, e no caso de positividade, colonoscopia é recomendada. Infelizmente, o número de pacientes recusam notáveis tanto a gFOBT repetido e a colonoscopia sugerido [21]. Em nosso estudo, a detecção de sangue oculto nas fezes foi realizada apenas uma vez para cada caso e gFOBT mostrou 29,4% (5/17) positividade no grupo saudável. No entanto, a colonoscopia subseqüente não encontrou qualquer sinal de neoplasia ou pólipos nestes casos. No entanto sangramento oculto nas fezes pode ser causada por hemorragia GI superior, hemorróidas, inflamação local do cólon, ou a falha na dieta. A análise de correlação de gFOBT e SEPT9 nas mesmas amostras saudáveis mostraram especificidade de 70,6% (12/17 negativo) para gFOBT e 76,5% (13/17 negativo) para SEPT9. Para CRC, todos os pacientes foram SEPT9 positivo (100%; 22/22). Enquanto que apenas 68,2% (15/22) foram positivos por gFOBT
Em comparação com gFOBT, encontramos o ensaio CEA foi mais preciso para a detecção de CRC, com 85,2% de especificidade, mas também foi menos sensível (51,8%). CEA é o marcador de tumor no soro mais amplamente utilizado para a monitorização de CRC. Este antigénio é expresso na superfície das células epiteliais do cólon e, no caso de malignidade, o CEA é expressa na superfície de células inteiras e excretada em altos níveis na corrente sanguínea [22]. Elevada CEA pré-operatória está associada à menor sobrevida após a ressecção cirúrgica do CRC. Monitoramento da CEA no pós-operatório pode ajudar a identificar pacientes com metástase, embora a sua sensibilidade para a metástase pulmonar é menor do que para metástase hepática [23]. A principal utilização de CEA é no seguimento de CRC após o tratamento cirúrgico ou quimioterapia. Em nosso estudo, apenas 51,8% (14/27) dos pacientes com CCR apresentaram níveis elevados de CEA. A partir da comparação de CEA e Septin 9 nos mesmos pacientes, a especificidade do ensaio CEA era 85,2% (23/27), maior do que a especificidade Septin 9 (70,4%; 19/27); No entanto Septin 9 era muito mais sensível (100%; 27/27) em amostras de cancro do que o CEA (51,8%; 14/27). CEA, portanto, o soro não é como um método confiável para triagem CRC como Septin 9 [24].
Septinas ter sido originalmente detectado em levedura mutante ciclo de divisão celular, mas recentemente tornou-se conhecido que as proteínas Septin desempenhar um papel em vários funções celulares. Eles têm sido implicados na neoplasia, neurológicas e doenças infecciosas [25]. Estudos anteriores utilizaram a primeira geração Septin 9 kit de detecção (Epi proColon 1.0) e encontrou Septin 9 positividade em 9% dos indivíduos saudáveis e 73% dos pacientes com CCR [14] – [17]. Em nosso estudo, nova geração exame de sangue Septin 9, o Epi proColon 2.0 foi usado. As vantagens de Epi proColon kit 2.0 são menos etapas de manuseio, menor tempo de resultar e aumento do desempenho clínico em comparação com o teste de primeira geração [26]. No presente estudo, analisamos primeiro os dados usando a alta sensibilidade (1/3 método de análise), como descrito anteriormente [16]. No estudo atual apenas 4 dos 92 (4,3%) casos de CRC mostrou SEPT9 negatividade, todos eles fase I CRC, e o teste teve sensibilidade de 95,6% para CRC. A sua especificidade (84,8%) foi semelhante à encontrada para o CEA (Tabela 3). Setenta e oito dos 92 (84,8%) indivíduos saudáveis foram negativas para assuntos Septin 9. saudáveis que foram positivas para Septin 9 não mostrou qualquer sinal de doença do cólon no momento da colonoscopia. No entanto, ele continua a ser visto se eles vão desenvolver qualquer doença no futuro. Septin 9 foi suficientemente sensível para detectar CRC fase inicial também. Para a fase I CRC, 95,6% foram identificados pela Septin 9 metilação, e todas as amostras II CRC palco mostrou resultados positivos. Em caso de gFOBT e CEA, o número da amostra era demasiado baixo, impedindo qualquer análise por etapa CRC.
Usando uma maior especificidade regra alternativa (2/3 análise), de acordo com a sugestão do fabricante, observou-se uma especificidade de 98,9%. Apenas 1% (1/92) do grupo NED foi SEPT9 positiva, de modo que este método é mais adequado para detectar as amostras NED correctamente como saudáveis em comparação com 1/3 de análise. Aplicando esta regra para os casos de CRC, 73 amostras ou 79,3% apresentaram SEPT9 positividade, um nível de sensibilidade que supera gFOBT e CEA para a detecção de CRC. A selecção de uma maior sensibilidade ou superior algoritmo de especificidade podem ser conduzidos por diferentes objectivos dos programas de rastreio.
Neste estudo, nós também comparou a sensibilidade do metilado Septin 9 como um biomarcador de soro tanto para esquerda e para a direita sided CRC ao nível sérico gFOBT e CEA. Estudos recentes demonstraram diferenças nos padrões moleculares de carcinogénese colorectal com base em factores tais como a idade, o sexo, e a localização do tumor [27] – [30]. O elevado número de cancros do cólon do lado esquerdo diagnóstico pode ser devido a factores anatómicos tais como o diâmetro do lúmen do cólon inferior. Ghazi
et al., Achou que do lado esquerdo CRC tendem a ter uma fase T menor e maior estádio N. No entanto, eles não encontraram nenhuma diferença significativa no número de linfonodos comprometidos entre os locais do cólon. Além disso, do lado direito CRC tem um prognóstico pior do que do lado esquerdo [31] e Weiss
et al., Achou uma taxa de mortalidade mais elevada em lados direito de fase III CRC [32]. Enquanto os tumores do lado direito exibir níveis de expressão do gene elevados de controlo do ciclo celular e os genes de sinalização Wnt, cancros do cólon do lado esquerdo mostram reduzida expressão de genes supressores de tumores e a citoqueratina 20 e a expressão elevada de COX-1 e os genes que promovem a expansão do estroma [33] , [34]. Além disso, a diferença de tumorigênese entre os cancros do cólon esquerdo e do lado direito pode ser causada por fatores epigenéticos, como mostrado por diferenças na metilação. Em relação à metilação do DNA, sabe-se que alguns do lado direito (CIMP) cancros do cólon têm alterações mais frequentes, em comparação com os cancros do lado esquerdo. cancros do cólon do lado esquerdo pode exibir um fenótipo mutante, enquanto os tumores do lado direito exibir como fenótipo hypermethylator [35] – [37]
No seu conjunto, é de importância clínica significativa que os métodos de triagem para CRC são confiáveis. tanto para esquerda e para a CRC do lado direito.
detecção CRC por gFOBT no contexto do lado esquerdo e direito do cólon foi avaliado em estudos anteriores. Steele
et al., Achou gFOBT a ser menos sensíveis tanto para o cancro rectal e cancro do lado direito do cólon [38]. Em nosso estudo, (83%) casos de CRC mais do lado esquerdo foram detectados por gFOBT que CRCs do lado direito (50%), bem. A razão para a detecção de mais à esquerda lados CRC pode ser explicado pela localização da doença e, devido a fezes de consistência, sangue, provenientes de cânceres do lado esquerdo pode aparecer mais cedo nas fezes. CEA mostrou menos diferença na detecção entre esquerda (60%) e tumores do lado direito (42%) do que gFOBT. Não foi detectada qualquer diferença no Septin 9 positividade entre esquerda (96%) e CRC do lado direito (94%), de modo a sensibilidade para a detecção de câncer foi independente da localização do tumor. Além disso, Septin 9 foi de longe o marcador mais sensível para a detecção de tumores do lado direito.
Em conclusão, enquanto CRC rastreio pode, potencialmente, reduzir a mortalidade por câncer colorretal, os testes atuais CRC rastreio tem sensibilidade e especificidade insatisfatórias ou são altamente invasivo. Desde lado esquerdo CRC é mais comumente detectada do que do lado direito CRC por ambos detecção de colonoscopia e sangue nas fezes, estes métodos de rastreio estão associados à redução da mortalidade de CRC que surgem no lado esquerdo do cólon, mas não a partir do lado direito [39] , [40]. Por isso, tanto a melhoria da adesão do paciente e desenvolvimento de métodos mais sensíveis para o CRC do lado direito são necessários. métodos baseados sanguíneos periféricos podem aumentar a adesão do paciente. Nosso relatório avalia as possíveis diferenças de baseada em sangue SEPT9, gFOBT e CEA entre CRCs esquerda e do lado direito. SEPT9 é um biomarcador sensível para a detecção de CRC com a sensibilidade de 100% para a fase de CRC II-IV. Este marcador foi mais sensível e específico do que gFOBT e CEA e não mostrou diferenças entre os cancros do cólon esquerdo e direito lados. Por isso, o marcador Septin 9 pode ser um teste seguro e útil para o rastreio CRC.
Informações de Apoio
Tabela S1. resultados
individuais de gFOBT, CEA e SEPT9 para todos os patinets; NED = nenhuma evidência da doença; CRC câncer = colorectl; FOBT = fecal de sangue oculto; CEA = antígeno carcinoembrionário; SEPT9 = Septin 9.
doi: 10.1371 /journal.pone.0046000.s001
(DOC)
Reconhecimentos
Agradecemos a Unidade de Endoscopia da Universidade Semmelweis, o Departamento de cirurgia e do Instituto de Patologia da Universidade Erlangen Friedrich-Alexander por sua assistência técnica. Agradecemos também a Anita Nagy para a coleta de sangue periférico e preparação plasma. Além disso, agradecemos László Herszényi, Mark Juhász, László Konya, Emese Mihály, Pál Miheller, Katalin Müllner, Anna Maria Németh, Antal Péter, Hajnal Székely, Richard Szmola (todos da Unidade de Endoscopia da Universidade Semmelweis) por seu trabalho com a colonoscopia e recolha de biópsia. Agradecemos Ibolya Kocsis, o Laboratório Central, e do Departamento de Patologia 1º e Cancer Research Experimental da Universidade de Semmelweis por seu trabalho.