Abstract

suscetibilidade ao câncer de próstata foi associado anteriormente com truncando variantes da linha germinativa no gene

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(tumor proteína p53 apoptose regulada induzir proteína 1). Por duas mutações aparentemente recorrentes (p.Q22fs e p.S32X) uma notável OR de 5,1 foi relatado para o risco de câncer de próstata. Uma vez que estes resultados não foram validados até agora, nós genotipados p.Q22fs e p.S32X em duas séries alemão com um total de 1.207 casos de câncer de próstata e 1.495 controles. As variantes truncar não foram significativamente associados com câncer de próstata em nenhum dos dois grupos, nem na análise combinada [odds ratio (OR) = 1,16; 95% de intervalo de confiança (IC 95%) = 0,62-2,15; p = 0,66]. Os transportadores não apresentaram diferenças significativas na história familiar de câncer de próstata, a idade no momento do diagnóstico, escala de Gleason ou PSA ao diagnóstico quando comparados com os casos de câncer de próstata não-portadoras. O tamanho da amostra grande da coorte combinada rejeita um efeito de alto risco superior a 2,2 e indica um papel limitado do

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na predisposição ao câncer de próstata

Citation:. Luedeke M, Coinac I, Linnert CM, Bogdanova N, Rinckleb AE, Schrader M, et al. (2012) Prostate Cancer Risk não é alterada pela

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da linhagem germinativa Mutações em uma Série de Casos e Controles alemão. PLoS ONE 7 (3): e34128. doi: 10.1371 /journal.pone.0034128

editor: Paolo Peterlongo, IFOM, Fondazione Istituto FIRC di Oncologia Molecolare, Itália |

Recebido: 18 Janeiro, 2012; Aceito: 22 de fevereiro de 2012; Publicado: 23 Março 2012 |

Direitos de autor: © 2012 Luedeke et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. The Prostate Projeto Genética do câncer, em Ulm tem sido apoiada por um subcontrato National Cancer Institute intitulado “Prostate Cancer Susceptibilidade: O estudo ICPCG” – concessão # CA089600 – https://cancer.gov/. AM tem sido apoiado pela irmandade Hannelore Munke, uma bolsa de investigação interna da Faculdade de Medicina de Hannover. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer de próstata (AEP) é o tumor mais frequente e a terceira principal causa de morte relacionada com câncer em homens no mundo ocidental industrial [1]. Na etiologia da prca é assumido um grau considerável de hereditariedade para ser envolvido [2]. Até à data, mais de 30 polimorfismos de nucleotídeo único moderadamente associada ao risco foram identificados no genoma estudos de associação ampla, que explicam uma fração menor de herdabilidade [3]. Em contraste, genes de alto risco que poderiam ser responsáveis ​​pela maioria do agrupamento familiar observou ainda são desconhecidos.

Há uma evidência crescente de que os genes envolvidos na resposta danos no DNA desempenham um papel predisponente à AEP [4]. Isso inclui processos de reparação do ADN, bem mecanismos relacionados, como vias apoptóticas. TP53AIP1 (proteína p53 tumor regulada indutora de apoptose de proteínas 1) desempenha um papel chave na sinalização apoptótica dependente supressor de tumor p53. TP53AIP1 é localizada na membrana mitocondrial e medeia a apoptose através do citocromo

c

liberação [5]. A expressão de

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é acionado mediante graves danos por fosforilação de p53 em Ser46 [6].

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foi encontrado para ser transformado no tecido PRCA em um estudo recente [7]. Os dois identificados truncando mutações p.Q22fs e p.S32X acabou por ser recorrentes variantes da linha germinal e foram fortemente associada com PRCA risco (OR de 5,1), sugerindo

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como um gene de susceptibilidade promissor. No presente estudo nós avaliamos o efeito do risco destes dois

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mutações em duas coortes alemãs independentes PRCA.

Resultados

Foram observadas Ambas as variantes de truncagem nas nossas coortes. Enquanto os p.Q22fs alelos frameshift estava presente em 1,8% dos casos e 1,6% controles, o p.S32X mutação nonsense parecia ser comparativamente rara (operadoras de 0,1% em ambos os casos e controles). No geral, p.Q22fs e p.S32X não foram associados com o risco de câncer de próstata, nem na série combinada de Ulm e Hannover, nem em cada amostra individual (Tabela 1). Não se observou qualquer evidência contra a homogeneidade entre as séries Ulm e Hannover (p = 0,39). Acumulação nos casos de câncer de próstata familiares pode indicar um efeito de alto risco mediada pelas variantes. Esta hipótese foi testada na série Ulm, que continha um conjunto de casos de AEP com história familiar positiva. No entanto, nenhum enriquecimento das mutações foi observada em casos familiares (6 de 377 (1,6%)) quando comparado com os casos esporádicos (7 em 325 (2,1%)). Por fim, os subgrupos clínicos de casos foram definidos a fim de elucidar as tendências de formas tumor agressivo. Os portadores da mutação não apresentaram diferença significativa de não-portadores de gravidade do câncer de próstata, como determinado pela idade de início, pontuação de Gleason, ou o nível de PSA tratamento prévio (Tabela 2).

Discussão

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tem sido sugerido como um gene de susceptibilidade PRCA, uma vez que duas mutações germinativas recorrentes (p.Q22fs e p.S32X) foram encontrados consideravelmente sobre-representados entre os pacientes AEP dentro de um estudo caso-controle anterior [7]. Para efeitos de confirmação, temos genotipados p.Q22fs e p.S32X em aproximadamente 1.200 casos de câncer de próstata e 1.500 controles, mas não conseguimos replicar uma associação destas variantes com risco de AEP.

As discrepâncias entre a presente e para o estudo inicial poderia ser explicada por vários fatores, incluindo origens étnicas variáveis, diferentes tamanhos de amostra e divergentes critérios de inclusão. diferenças específicas da população tornaram-se evidentes no caso de p.S32X, como esta variante foi encontrada em probandos raramente alemãs, e, portanto, não pode ser avaliada para a associação de doença. A diferença mais evidente entre as amostras de estudo é a frequência de p.Q22fs variantes, que apareceram muito mais baixo no grupo de controlo Wang e colaboradores, em comparação com os controlos (0,3% versus 1,6%, respectivamente). Notável, Wang et al. recrutaram saudável, idade controles pareados, que poderia ser mais poderoso para detectar associações com o risco de câncer de próstata, apesar de sua dobra de 4.5 menor tamanho da amostra. Em contraste, os controles não selecionados para nossas comparações podem conter misclassified casos de câncer de próstata em níveis de prevalência da população, de modo que os verdadeiros efeitos da doença iria aparecer um pouco subestimado. No entanto, estimativas de potência sugerem que a perda de energia, escolhendo população controla, em vez de “controlos super” seria pequeno para uma doença com uma incidência de cerca de 10%, e que esta perda pode ser eficazmente compensado por aumentos modestos no tamanho da amostra [ ,,,0],8]. O fato de que observamos frequências portadoras praticamente iguais em ambos os casos e controles fortemente argumenta contra uma associação de p.Q22fs com PRCA. Com base nos tamanhos de amostra inscrito aqui, um intervalo de confiança resultante exclui qualquer efeito maior do que 2,2 risco para p.Q22fs e p.S32X.

Em análises de subgrupo temos considerado predisponentes papéis de

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mutações em especial para familiares e para PRCA agressivo. Sem acumulação de p.Q22fs e p.S32X foi observada em casos familiares, rejeitando a hipótese de uma alta penetrância dessas mutações. Finalmente, a falta de genótipo correlação /fenótipo com relação aos parâmetros clínicos argumenta contra a susceptibilidade a formas mais graves da AEP para os portadores da mutação.

Além de truncar mutações analisadas no presente estudo, uma substituição missense (p. A7V) em

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anteriormente foi estudado na série Hannover. Da mesma forma, a variante p.A7V também não tinha mostrado um aumento da frequência nos casos de câncer de próstata [9]. Conclui-se que há pouco apoio neste momento a considerar a

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como um gene de suscetibilidade ao câncer de próstata.

Materiais e Métodos

probandos

Duas séries de casos e controles foram reunidas para este estudo, recrutados nas universidades de Ulm e Hannover, Alemanha. Todos os probandos era de origem caucasiana. O estudo foi aprovado pela Instituição Review Board of Ulm (Ethikkommission der Universität Ulm – voto número 87/97) e da Instituição Review Board de Hannover (Ethikkommission der Medizinischen Hochschule Hannover – voto número 3894/05). Consentimento informado por escrito, de acordo com a instituição Review Boards, foi obtido.

A partir do Projeto de Genética do Câncer de Próstata de Ulm um número total de 377 familiares e 325 casos esporádicos foram incluídos. O regime de recrutamento desses doentes está descrito noutro local [10]. A idade média do diagnóstico foi de 63 anos (intervalo 40-84 anos) ea maioria foi tratada por prostatectomia radical. Para associação testes foram utilizados 995 controles populacionais de Ulm.

O estudo de câncer de próstata Hannover (HaPCS) consiste em uma série de base hospitalar de 505 pacientes não selecionados com PRCA que foram tratados com braquiterapia, entre Outubro de 2000 e Setembro de 2007, Hannover Medical School [9]. Todos os pacientes tinham adenocarcinoma comprovada por biópsia da próstata. Indicação para a braquiterapia permanente foi clinicamente localizado de baixo risco no início PRCA (cT2a ou menos com um nível sérico de PSA 10 ng /ml e uma escala de Gleason 7). A média de idade no momento do diagnóstico foi de 67 anos (intervalo 42-82 anos). Para efeito de comparação, 504 amostras de ADN genómico foram coletadas de doadores de sangue adultos machos em Hannover Medical School, entre 2006 e 2007.

A genotipagem

O DNA genômico, extraído de linfócitos do sangue periférico, serviu como modelo para genotipagem . A coorte de Ulm foi digitado para p.Q22fs com o método (HRM) derretendo alta resolução. Em resumo: A PCR foi realizada com AmpliTaq Gold Mastermix (Applied Biosystems, Foster City, EUA). Após amplificação por PCR de 1,0 mL de EVA-verde (Biotium, Hayward, EUA) foi adicionado a cada amostra e a curva de dissociação foi medida num rápido em tempo real do sistema de 96 poços de PCR 7900HT (Applied Biosystems, Foster City, EUA). dados de gestão de recursos humanos foi analisado com o v1.1 software alta resolução Melt (Applied Biosystems, Foster City, EUA). A variante S32X foi digitado utilizando um SNP Genotyping Assay personalizado (Applied Biosystems, Foster City, EUA), juntamente com TaqMan Genotipagem Mastermix (Applied Biosystems, Foster City, EUA) num volume total de 5 mL em um Real- rápida de 384 poços 7900HT Time System PCR (Applied Biosystems, Foster City, EUA). Para os controlos positivos usamos plasmídeos correspondentes aos p.Q22fs truncar alélicas ou p.S32X, respectivamente, e o alelo normal. alelo normal e plasmídeos mutantes foram misturados 1:01, a fim de imitar genótipos heterozigóticos. Genotipagem da série Hannover foi realizada com polimorfismo de fragmentos de restrição análises usando

Bgl

I para p.Q22fs e

Bfa

I para p.S32X, após a amplificação PCR. As sequências dos iniciadores e sonda, assim condições de PCR serão dados a pedido. As amostras que foram identificadas para cumprir os p.Q22fs ou variante p.S32X por qualquer um dos métodos de rastreio utilizados foram verificadas por seqüenciamento Sanger.

Análise estatística

As associações entre genótipos e estado da doença foram avaliados com SAS 9.2 (SAS, Cary, EUA). Odds ratio e intervalos exatos 95% de confiança é dado, juntamente com os valores de p pelo teste exato de Fisher. Para a homogeneidade análise conjunta das odds ratio, onde verificados pelo teste de Breslow-Day e odds ratio combinado foi calculada com o teste de Mantel-Haenszel. O teste T não pareado foi utilizado para comparação dos parâmetros clínicos nos portadores da mutação e não portadores e foi calculado com StatView 5.01 (SAS, Cary, EUA).

Reconhecimentos

Manuel Luedeke é participante da Escola Internacional de Pós-graduação em Medicina Molecular Ulm.