Abstract

stathmin é um marcador de prognóstico em muitos tipos de cancro, incluindo o cancro endometrial. Estudos pré-clínicos, predominantemente no cancro da mama, têm sugerido que stathmin pode ainda ser um marcador preditivo de resposta ao paclitaxel. O primeiro avaliou a resposta ao paclitaxel em linhas celulares de cancro do endométrio antes e depois stathmin knock-down. Posteriormente foi investigada a resposta clínica ao paclitaxel quimioterapia contendo no cancro endometrial metastática em relação ao nível de proteína stathmin em tumores. stathmin nível foi também determinada em lesões metastáticas, analisando mudanças no estado de biomarcador na progressão da doença. Knock-down de stathmin melhorou a sensibilidade ao paclitaxel em linhas de células de carcinoma de endométrio com a sensibilidade naturalmente mais elevado e mais baixo para paclitaxel. Em amostras clínicas, elevado nível stathmin foi demonstrada estar associada com fraca resposta a paclitaxel contendo a quimioterapia e a sobrevivência a doença específica apenas reduzido em doentes tratados com essa combinação. nível stathmin aumentou significativamente de primário para lesões metastáticas. Este estudo sugere, apoiada por ambos os dados pré-clínicos e clínicos, que stathmin poderia ser um biomarcador preditivo de resposta ao tratamento paclitaxel em câncer endometrial. Re-avaliação do nível de stathmin em lesões metastáticas antes do início do tratamento pode ser relevante. Além disso, a validação de um ensaio clínico randomizado será importante

Citation:. Werner HMJ, Trovik J, Halle MK, Wik E, Akslen LA, Birkeland E, et al. (2014) stathmin nível de proteína, um potencial marcador preditivo para taxano resposta ao tratamento no câncer de endométrio. PLoS ONE 9 (2): e90141. doi: 10.1371 /journal.pone.0090141

editor: Rui Medeiros, IPO, Inst Porto Oncology, Portugal |

Recebido: 11 de outubro de 2013; Aceito: 21 de janeiro de 2014; Publicação: 25 de fevereiro de 2014

Direitos de autor: © 2014 Werner et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Helse Vest , do Conselho de Investigação da Noruega (803100, 805797) e The Cancer Society norueguês (Harald Andersens legat) apoiou este estudo. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:. Os autores relatam os seguintes conflitos: The University of Bergen /Universidade Haukeland Hospital /Dana Instituto Farber cancer /Harvard através de BTO (Bergen Teknologioverføring AS): Alguns aspectos relativos à STMN1 como marcador de prognóstico e preditivo para câncer endometrial estão sujeitos a pendência direitos de propriedade intelectual (US 12 /962.946). Isto não altera os autores aderência às políticas PLoS ONE em dados e materiais de compartilhamento.

Introdução

Stathmin1 (STMN1 a seguir indicado como ‘stathmin’) é um jovem de 18 kD citosólica fosfoproteína, conhecido a desempenhar um papel importante no ciclo celular. Stathmin é expressa em todos os tecidos. É um regulador crítico da dinâmica dos microtúbulos através das suas propriedades de microtúbulos desestabilizando, incluindo tanto a prevenção de polimerização e promoção activa da despolimerização de microtúbulos [1] – [4]. A fosforilação de stathmin em quatro resíduos de serina no início da fase mitótica atenua as suas actividades de desestabilização, permitindo que as células para formar um fuso mitótico; desfosforilação, em seguida, realiza-se antes da saída da mitose [1], [4]. Stathmin também está envolvida no transporte intracelular, a motilidade celular, a polaridade, a manutenção da forma da célula e regulação da apoptose [1].

Um biomarcador é definida como uma “característica que é objectivamente medida e avaliada como um indicador do normal processos biológicos, processos patogênicos ou respostas farmacológicas à uma intervenção terapêutica específica [5]. Os biomarcadores podem ser divididos em vários tipos, tais como prognóstico; ligada ao prognóstico de um paciente independente do tratamento, e biomarcadores preditivos; que identificam sub-populações de pacientes com maior probabilidade de (não) responder a um tratamento de [5]. Assim, os biomarcadores preditivos confiáveis ​​são de suma importância para um melhor tratamento e individualizado

stathmin é regulada em muitos tumores sólidos, incluindo o cancro endometrial [1], [6] – [14]., E sua regulação positiva tem sido associado com variáveis ​​clínico-patológicas de doença agressiva, tais como aumento do risco de metástases em linfonodos [9], [15] e baixa sobrevida [6], [9], [10], [12], [13], [16], stathmins confirmando papel como biomarcador de prognóstico.

Atualmente, alguns marcadores preditivos são conhecidos em cancros humanos e menos ainda são clinicamente aplicada. No cancro endometrial marcadores preditivos clinicamente validados estão ainda disponíveis [17]. Ambas as terapias direcionadas e agentes quimioterápicos convencionais são eficazes apenas em um subgrupo de pacientes [18], [19], não é, portanto, uma necessidade urgente de identificar marcadores preditivos clinicamente úteis. Exemplos incorporados na clínica incluem

KRAS

estado mutacional indicando resposta ao cetuximab e panitumumab no cancro colorectal [18], [20], [21], ALK re-arranjo no cancro do pulmão de células não pequenas predizer resposta a crizotinibe [18], [20], [22] e HER2 /neu amplificação ou a sobre-expressão no cancro da mama para a elegibilidade para o tratamento trastuzumab [18], [20], [23].

Os taxanos são um grupo de agentes quimioterapêuticos frequentemente utilizados no tratamento de carcinoma do endométrio. Estudos pré-clínicos em cancro da mama e da próstata e do retinoblastoma [24] – [28], dar indicações pré-clínicos que stathmin pode ser um marcador preditivo para resposta a taxanos nestes tipos de cancro. Altos níveis de stathmin diminuiu a sensibilidade de linhas de células de cancro da mama ao paclitaxel e vincristina [24] e knock-down de stathmin por siARN aumentou a sensibilidade ao paclitaxel em ambos da mama [25] e as células da próstata [27]. Este impacto do nível de proteína stathmin na resposta ao tratamento foi limitado a agentes anti-microtúbulos. Infelizmente, nenhum destes estudos tomaram este conhecimento para um próximo nível, integrando os resultados com os dados clínicos. No cancro endometrial ao nosso conhecimento há estudos pré-clínicos, nem clínicos, têm explorado uma associação entre nível stathmin e resposta a paclitaxel contendo quimioterapia. Neste relatório, nós demonstramos em linhas celulares de carcinoma do endométrio, que a redução dos níveis de stathmin por stathmin knock-down resulta na melhoria da resposta ao paclitaxel. Também mostramos pela primeira vez com o melhor de nosso conhecimento, esse nível de proteína stathmin está associada com a resposta ao paclitaxel contendo terapia em amostras clínicas de pacientes com carcinoma endometrial metastática.

Materiais e Métodos

as linhas celulares

Duas linhas celulares de cancro do endométrio foram selecionados devido à diferença no seu perfil de sensibilidade ao paclitaxel; Ishikawa (Sigma, sensível) e Hec1B (American Type Culture Collection, redução sensível). A Enciclopédia de dados (LECC) linha celular de cancro confirma a diferença de sensibilidade [29]. As linhas foram obtidas em 2009 e verificação de autenticidade de curto tandem repeat (STR) profiling foi realizada em 2012 [30], [31]. As linhas celulares foram mantidas sob as condições recomendadas pelos fornecedores.

transfecção celular

As células foram cultivadas a 50-70% de confluência antes da transfecção por transdução lentiviral (biossistemas Open, GIPZ lentiviral shRNAmir) . foi usado em MOI 2,5 Um gene GIPZ lentivírus shRNA meta estabelecida de 3 (V3LHS_383505 V3LHS_411977;; V2LHS_62940). Um controlo GIPZ lentiviral shRNAmir não silenciamento (BV17110_2.80 × 10 8) foi utilizado como controlo. As células foram seleccionadas com puromicina (1 jag /ml) após a transfecção.

Drogas

O paclitaxel e carboplatina foram adquiridos da Sigma.

experiências linha celular

as linhas de células foram tratadas com paclitaxel em concentrações crescentes (gama de 1-500 nM) durante 24 h. Como clinicamente taxanos são muitas vezes combinados com derivados de platina em cancro do endométrio, também células tratadas com uma combinação de paclitaxel (em concentrações crescentes (gama de 1-500 nM) e carboplatina (concentração fixa de 200 mm) durante 24 h para observar qualquer tratamento sinérgico efeitos. As células foram subsequentemente fixadas, quer em 2% de formaldeído para avaliação microscópica de apoptose; usada num ensaio de proliferação (MTS) ou processadas para imunotransferência As experiências foram realizadas pelo menos em triplicado

para a avaliação da apoptose, em.. menos 150 células foram contadas em três áreas diferentes em placas de 96 poços. Para os ensaios de proliferação, as experiências foram realizadas em triplicado em placas de 96 poços. Os ensaios foram realizados com CellTiter 96® AQ

ueous Uma solução de células Ensaio de Proliferação (Promega) seguindo as instruções do fabricante. a absorvância foi registada a 490 nm utilizando um leitor de placas de ELISA (TECAN Magellan Sunrise).

imunoblots foram realizadas de acordo com um protocolo padrão. Em resumo, as células foram semeadas e tratadas em placas de 6 poços e colhidas em tampão de lise após 24 horas de tratamento com paclitaxel. As proteínas (25 ^ g) foram separadas por SDS /PAGE e transferidas para uma membrana de nitrocelulose (Biorad, Noruega). Stathmin e /ou (clivados) PARP foram detectadas utilizando PARP clivada (Asp214) (D64E10) (# 5625Cell Signaling), diluída 1:1000 e stathmin (# 3352, Cell Signaling), diluída 1:1000; β-actina serviu como um controle de carga (anticorpo anti-actina β (CA-15) (ab6276) Abcam), diluída 1:10000. Foram utilizados anticorpos secundários conjugados de fosfatase alcalina (Anti-IgG de coelho (Sigma Aldrich A3687): Anti-IgG de ratinho (Sigma Aldrich A3562)). e substrato chemoluminiscence (lumiphos 34150 WB, Thermo Scientific) para detecção

série Paciente

Os pacientes diagnosticados e tratados para o câncer endometrial no Hospital Universitário Haukeland, Bergen, Noruega, são depois de assinar o consentimento informado de forma prospectiva e consecutivamente incluídos em um banco de dados (configuração de base populacional) a partir de 2001, evitando viés de seleção e assegurando recolha de dados ideal para todos os pacientes, como relatado anteriormente [14]. Os pacientes foram tratados no entanto seguindo orientações de rotina e as amostras clínicas investigadas, portanto, consistem de tecido de arquivo coletados prospectivamente. dados clínico-patológicos recolhidas incluem, entre outros FIGO 2009 Fase, subtipo histológico, grau, tratamento primário e adjuvante, e acompanhamento, incluindo o tratamento para a doença metastática. Para efeitos do presente estudo, os pacientes que receberam paclitaxel contendo quimioterapia (como rotina em nosso hospital uma combinação de paclitaxel e carboplatina) após o tratamento cirúrgico para qualquer doença residual ou metástase antes de Abril de 2011, foram estudados para a resposta ao tratamento de acordo com os critérios RECIST [ ,,,0],32], com a última entrada de acompanhamento de julho de 2013. de um total de 607 pacientes no banco de dados, dos quais 121 tinham ou seja recorrente sistêmica ou doença residual, 57 tinham dados de resposta de acordo com os critérios RECIST disponível; 33 dos quais foram tratados com paclitaxel contendo quimioterapia. Definimos boa resposta como resposta completa ou parcial (critérios RECIST), ea resposta pobre como doença estática ou a progressão da doença (critérios RECIST). Além disso, olhou para a sobrevivência específica da doença em relação ao nível stathmin para todos os pacientes com câncer de endométrio e, especificamente, para os doentes tratados para a doença metastática. O tempo médio de acompanhamento em nossa coorte foi de 34 meses (intervalo de 0-105 meses).

microarray de tecido (TMA) construção

TMA de foram geradas como descrito anteriormente e validado em diversos estudos [33 ]. A área de maior agressividade do tumor foi identificado em todos os slides hematoxilina /eosina para garantir a representatividade do tumor e três (tumor primário) ou cilindros de tecido um (metástase) (0,6 mm de diâmetro cada) foram montados em um bloco receptor usando uma custom made instrumento de precisão ( instrumentos Beecher, silver spring, Maryland, EUA). Formalina parafina fixo (FFPE) tecido embebido tumor primário estava disponível em TMAs de 603 pacientes para avaliação do nível de stathmin. A partir de 77 pacientes com metástases, tecido metastático adicional estava disponível em TMA para a investigação de nível stathmin em comparação com o tumor primário correspondente. Muito poucos casos tiveram lesões metastáticas avaliáveis ​​adicionais, obtidos antes do paclitaxel quimioterapia contendo, para avaliação dos níveis stathmin, com dados de resposta disponíveis de acordo com os critérios RECIST e um perfil de tratamento prévio semelhante (n = 3) para permitir análises estatísticas significativas de resposta em relativamente ao estatuto de biomarcador em lesões metastáticas.

imunohistoquímica

5 mm de espessura foram TMA desparafinados com xileno /etanol. A recuperação antigênica foi feito por microondas no TRS pH 6 (S1699 Dako alvo Retrieval Solution) por 20 minutos. As lâminas foram bloqueadas para a peroxidase (Dako S2023) durante 8 minutos e incubadas durante 60 minutos com stathmin (Cell signaling # 3352), diluída 1:50. EnVision + sistema, foi usado anticorpo secundário HRP (Dako K4011), seguido de DAB + cromogénio (DAKO K4011) como sistema de detecção. As lâminas foram contrastadas com hematoxilina (Dako, S2020).

A coloração avaliação

Cego para as características do paciente e os resultados, as lâminas foram marcados por dois autores (HMJW e JT) usando microscopia de luz padrão, como descrito anteriormente [34], [35]. O valor kappa, como uma medida de reprodutibilidade, foi de 0,73 em um conjunto separado de 68 lâminas marcados individualmente por HMJW e JT. nível de proteína de alta foi definida como o quartil superior, marcar 9, em linha com publicações anteriores [15]. Em caso de metástases múltiplas com variação do nível stathmin, a lesão com mais alto nível definiu a pontuação final para lesões metastáticas.

Estatísticas

As análises estatísticas foram realizadas utilizando PASW18 Estatística (Predictive Analysis Software, SPSS Inc. de Chicago, EUA). As variáveis ​​categóricas foram avaliadas por meio do χ2-teste Pearson ou exato de Fisher, quando aplicável. Frente e verso, valores de p 0,05 foram considerados significativos. análises univariadas de tempo de tratamento primário de morte devido a carcinoma endometrial (sobrevida específica da doença) foram realizados utilizando o método de Kaplan-Meier. O método de riscos proporcionais de Cox foi utilizado para a análise de sobrevida multivariada (proporcionalidade pressuposto verificada pelo gráfico log log menos).

declaração Ética

consentimento

Todos os pacientes assinaram informados antes da inclusão no estudo. O estudo foi aprovado pelo Data Inspecção norueguês (961.478-2), os Serviços Sociais dados científicos norueguesas (15501) e do Conselho de Revisão Institucional local (Comissões Regionais de Medicina e Saúde de Ética em Pesquisa; REKIII nr 052.01)

resultados

resposta ao paclitaxel em linhas celulares de cancro endometrial

a resposta ao paclitaxel varia entre linhas celulares de cancro do endométrio [29], [36], [37]. Mostramos células Ishikawa são sensíveis ao tratamento com paclitaxel com uma elevada percentagem de células apoptóticas após 24 h de tratamento (contagem microscópica e ensaio de proliferação), em oposição às células Hec1B (Fig. 1A e 1B). O tratamento de combinação de carboplatina e paclitaxel não resultou no efeito sinérgico tratamento (não mostrado)

A:. avaliação microscópica de apoptose em Ishikawa e células do tipo selvagem Hec1B após o tratamento com paclitaxel nas seguintes dosagens: 0 nM, 5 nM, 10 nM, 50 nM, 100 nM, 250 nM e 500 nM. Os resultados são representativos de 5 experiências independentes. erros padrão da média são indicados. a actividade metabólica celular avaliada com um ensaio de proliferação (MTS, Promega), em células do tipo selvagem de Ishikawa e Hec1B após o tratamento com paclitaxel nas seguintes dosagens:: B 0 nM, 1 nM, 10 nM, 50 nM, 100 nM, 250 nM e 500 nM. Os resultados são representativos de 3 (Ishikawa) e 2 (Hec1B) experiências independentes.

stathmin knock-down por transfecção viral

A microscopia de fluorescência mostraram uma taxa de transfecção de 70-80% em o início das experiências, com níveis stathmin marcadamente reduzidas nos knock-down linhas celulares stathmin relação ao controle knock-down e linhas de células de tipo selvagem (Fig 2a e 3a.)

a:. Immunoblot após transfecção as células com um lentivírus stathmin shRNAmir ( ‘KD stmn’) ou um controlo não silenciamento ( ‘não sil’), bem como a linha celular parental (de tipo selvagem; “WT”). As membranas foram coradas durante stathmin, e β-actina de controlo de carga. B: A linha de células do tipo selvagem Ishikawa, não-silenciamento e stathmin knock-down após o tratamento com paclitaxel durante 24 h nas seguintes dosagens: 0 nM, 5 nM, 10 nM, 50 nM, 100 nM, 250 nM e 500 nM. O nível de fragmentação das células é indicado em uma peça inserta, tal como um proxy de progressão do processo de apoptose. diamantes; Do tipo selvagem, triângulos; não silenciamento e cruzes; stathmin knock-down células. C: Immunoblot de Ishikawa de tipo selvagem, controlo (não-silenciamento) e stathmin knock-down linhas de células após o tratamento com paclitaxel durante 24 h nas seguintes dosagens: 0 nM, 100 nM e 250 nM. A membrana foi corada para PARP clivada e stathmin, com β-actina servindo como controle de carga. D: Esquerda: Ishikawa do tipo selvagem ( ‘WT’) na linha celular e Direita: Ishikawa stathmin knock-down ( ‘Stmn kd’) na linha celular. As imagens microscópicas de células após o tratamento durante 24 h com 0 nM (linha superior) ou 500 nM (linha de fundo) paclitaxel também demonstrando aumento da taxa de fragmentação para os stathmin células knock-down Ishikawa (painel inferior direito) em comparação com o tipo selvagem (inferior esquerdo painel)

a:. Immunoblot depois que as células transfecção com um lentivírus stathmin shRNAmir ( ‘stmn kd’) ou um controlo não silenciamento ( “não sil ‘), bem como a linha celular parental (selvagem -tipo; ‘WT’). As membranas foram coradas durante stathmin, e β-actina de controlo de carga. B: linha de células do tipo selvagem Hec1B, não silenciamento e stathmin knock-down linhas, após o tratamento com paclitaxel por 24 h nas seguintes dosagens: 0 nm, de 5 nm a 10 nm, 50 nm, 100 nm, 250 nm e 500 nM. C: Esquerda: Hec1B do tipo selvagem ( ‘WT’) na linha celular e Direita: Hec1B stathmin knock-down ( ‘Stmn kd’) na linha celular. Mostrando imagens microscópicas de células após o tratamento durante 24 h com 0 nM (linha superior) ou 500 nM (linha de fundo) paclitaxel demonstrando aumento da morte celular para os stathmin células Hec1B knock-down (painel inferior direito) em comparação com Hec1B do tipo selvagem (à esquerda painel inferior).

Em ambas as linhas stathmin knock-down celulares (Ishikawa e Hec1B), foi observada uma melhor resposta ao tratamento paclitaxel (Fig. 2b e 3b). células Hec1B mostram um aumento da taxa de apoptose estatisticamente significativa após stathmin knock-down. Possivelmente devido à maior sensibilidade intrínseca ao paclitaxel em células de Ishikawa, knock-down não resultou em um grande aumento similar na morte celular. No entanto, observamos uma clara aumento da taxa de fragmentação nos stathmin trataram células de Ishikawa knock-down oposição às células de controlo, que podem ser consideradas como um sinal de uma maior ativação da via apoptótica (insira Fig. 2b). Usando immunoblot, tentámos para validar ainda mais esta ativação da via de clivagem demonstrando PARP apoptótica aumentada a uma concentração paclitaxel menor para Ishikawa após stathmin knock-down em relação aos controles (Fig. 2c). imagens microscópicas de Ishikawa e Hec1B do tipo selvagem e células stathmin knock-down Após 24 h de tratamento com paclitaxel com 0 nM (controlo) e de 500 nm são apresentados nas Figuras 2d e 3c. Testou-se o efeito de stathmin knock-down na sensibilidade à monoterapia com carboplatina e combinações de tratamento de paclitaxel-carboplatina sem observar um aumento da sensibilidade ou efeitos sinérgicos (não mostrado).

nível alto stathmin prevê a resposta pobre a paclitaxel em amostras clínicas

em seguida, investigaram amostras de tumores de pacientes para ver se uma associação semelhante entre o nível stathmin e resposta ao tratamento pôde ser observado. stathmin coloração era predominantemente citoplasmática, como relatado na literatura [15], [38]. imagens representativas de imuno-histoquímica com fraca (normal) e coloração forte (alta) stathmin são mostrados na Figura 4a. Excluindo os doentes metastáticos que recebem tratamento anti-hormonal somente, pacientes com doença metastática que receberam paclitaxel quimioterapia contendo tinha características clínico-patológicas semelhantes aos pacientes tratados de forma diferente. Incluindo os pacientes tratados com drogas anti-hormonais única, os doentes idosos predominantemente frágeis, as características clinicopatológicas ainda permaneceu semelhante, exceto que este subgrupo foi significativamente mais velhos (Tabela 1). Pacientes com níveis normais stathmin respondeu claramente muito melhores (critérios RECIST) para o tratamento de pacientes com alto nível stathmin (Fig. 4b). nível stathmin não prever a resposta a outros regimes de quimioterapia ou modalidades de tratamento

A:. Pictures representante da fraca coloração imuno-histoquímica stathmin (em cima) e forte (alta ou patológica) coloração stathmin (parte inferior) no carcinoma endometrial. Bares (canto inferior direito) medida 40 mm. B: A resposta clínica ao paclitaxel para todos os pacientes com carcinoma de endométrio com doença avaliável de acordo com os critérios RECIST e separadas para normal versus alto nível stathmin. resposta pobre (RECIST: doença estática ou a progressão da doença), indicado no azul, boa resposta (RECIST: resposta completa ou parcial), indicado no vermelho. C:. Comparação de alto nível de proteína (patológica) stathmin em lesões primários e metastáticos

Aproximando-se de um ângulo diferente, em geral, os pacientes com alto nível de stathmin mostrou uma sobrevida específica da doença reduzida, em linha com papel stathmins como um biomarcador de prognóstico (Fig. 5a). No entanto, dentro do subgrupo de pacientes com doença metastática tratados com paclitaxel contendo quimioterapia, sobrevivência específica da doença foi significativamente inferior nos pacientes com elevado em comparação com stathmin normal (p = 0,03, Fig. 5b). Em pacientes que receberam outros tratamentos para a doença metastática, o prognóstico não estava relacionado com o nível stathmin (p = 0,76, Fig. 5c. Para descartar confusão por importantes variáveis ​​de prognóstico clínico-patológicos conhecidos, foi realizada uma análise de sobrevida multivariada para ambos os subgrupos de olhar para o efeito de nível stathmin na sobrevivência após o tratamento para a doença metastática, corrigido para o estágio FIGO e subtipo histológico. stathmin nível de proteína permaneceu um preditor independente de sobrevida específica da doença no subgrupo de pacientes que receberam paclitaxel quimioterapia contendo (n = 38, HR 2.3, CI 1.1 -5.2), ajustado para o estágio FIGO e subtipo histológico, mas não no subgrupo receber outras terapias (n = 43, HR 1.1, CI 0,4-2,7)

a:. Todos os doentes com dados completos (n = . 476) Número de eventos específicos da doença entre parênteses B:. Todos os pacientes com doença metastática que receberam tratamento com paclitaxel (n = 38) Número de eventos específicos da doença entre parênteses C:.. Todos os pacientes com doença metastática que receberam tratamentos diferentes (n = 43). Número de eventos específicos da doença entre parênteses.

estatuto biomarcador Discordant em lesões primários e metastáticos

A porcentagem de pacientes com alto nível de stathmin foi significativamente maior em metástases em comparação com lesões primárias com patológica (elevados) níveis observado em 18% do último (n = 84 de 477 lesões primárias com coloração stathmin disponível), em comparação com 37% em amostras metastáticos (n = 29 de 79) (Fig. 4c).

nas amostras de metástases primária emparelhados, 35% das lesões metastáticas mostrou alto nível stathmin. Observou-se uma discordância de 26% entre as lesões metastáticas e suas primárias. Em 16%, houve uma mudança de nível elevado em metástases e em 10% para o nível normal.

Discussão

stathmin nível de proteína tem mostrado ser um marcador de prognóstico da doença agressiva em muitos cancros , incluindo o cancro do endométrio, onde o alto nível stathmin no tumor primário identifica pacientes com alto risco de recorrência metástases de doenças e de nódulos linfáticos [6], [9], [10], [12], [13], [15], [16 ]. A identificação e desenvolvimento de biomarcadores preditivos são de extrema importância para aumentar a eficácia do tratamento e reduzir os efeitos colaterais desnecessários, não só em terapias-alvo, mas também em regimes de quimioterapia, como para ambas as contagens que apenas uma subpopulação irá responder bem, especialmente na presença de metástases, mas, actualmente com ferramentas muito limitados disponíveis para prever esses pacientes [39], [40]. Nenhum dos fatores clínico-patológicos importantes, como o estágio FIGO ou subtipo histológico, são actualmente conhecidos para ajudar a distinguir potenciais respondedores de não-respondedores ao paclitaxel quimioterapia contendo no contexto metastático. Estudar grande série de base populacional, com anotação clínica de alta qualidade, como nossa série, combinada com experimentos pré-clínicos são uma ferramenta útil e eficiente tempo para explorar potenciais biomarcadores preditivos, que podem posteriormente ser testadas em ensaios clínicos.

consonância com anteriores

in vitro

resultados no cancro da mama, mostramos em linhas celulares de cancro do endométrio que, independente do nível stathmin original, sensibilidade ao paclitaxel aumentou e, assim, a apoptose acelerada após a bem sucedida stathmin knock-down. Isto foi demonstrado por contagem microscópica direta e em células de Ishikawa também justificados por immunoblotting com foco na clivagem PARP. clivagem de PARP é um indicador de apoptose estabelecida, distinguindo-se de outros mecanismos de morte celular, tais como a necrose. O aumento da formação de corpos apoptóticos observado por microscopia nos knock-down linhas celulares stathmin se encaixa com o aumento da apoptose [41], [42].

No nosso coletados prospectivamente, analisados ​​retrospectivamente série de pacientes, também demonstrou uma notável diferença em resposta a paclitaxel quimioterapia contendo comparando pacientes com o normal para aqueles com alto nível stathmin, também quando corrigidos para as mais importantes variáveis ​​de prognóstico clínico-patológicas. Mesmo quando está a explorar uma grande série, tais clínica com pacientes com câncer do endométrio como o nosso, coletados ao longo de mais de 10 anos, com acompanhamento adequado e RECIST [32] documentação compatível de resposta, em última análise, apenas um número menor de pacientes tinham sido tratados com o tratamento de interesse, sublinhando a dificuldade de recebimento de série com o número de pacientes adequados para estudos de marcadores específicos; mas ao mesmo tempo a importância de explorar esses grandes séries de base populacional coletados prospectivamente de biomarcadores preditivos sugeridos em estudos pré-clínicos, e explorar o potencial validade clínica antes da fase de ensaio clínico. A correlação estatisticamente significativa entre nível elevado stathmin e resposta paclitaxel pobres de acordo com os critérios RECIST em amostras clínicas e o fato de que o nível stathmin tem um valor prognóstico independente em pacientes que receberam paclitaxel para a doença metastática, não apresentar em pacientes que não fazer, em análises de sobrevivência, suporta a probabilidade de que o nível de nível stathmin pode atuar não apenas como um marcador de prognóstico, mas também como um marcador preditivo de resposta ao tratamento paclitaxel em carcinomas do endométrio.

ao contrário de estudos anteriores que olham stathmin como um potencial marcador preditivo, predominantemente em

in vitro

estudos do cancro da mama, neste estudo, fomos capazes de testar e confirmar a associação em amostras clínicas dos pacientes tratados com o medicamento de interesse; usando dados de uma série de pacientes coletados prospectivamente bem anotada. Tanto o suporte de testes pré-clínicos e clínicos que a sensibilidade influências nível stathmin ao paclitaxel. Temos explorado e excluir-se que este efeito pode ser generalizado para outros agentes quimioterápicos, como a carboplatina, também usado frequentemente em câncer endometrial.

recomendações de relatórios de estudos de prognóstico diretrizes marcadores tumorais (Observação) foram desenvolvidos com o objetivo de melhorar a qualidade metodológica e relatórios de transparência em tais estudos [43]. O presente estudo foi realizado de acordo com estas diretrizes para melhorar a qualidade e validade geral de seus resultados.

taxanos, originalmente isolado da casca do teixo, pertencem à família de agentes quimioterápicos anti-microtúbulos , com paclitaxel como o protótipo. Simplificando, taxanos ligam-se a p-tubulina, causando microtúbulos para resistir a despolimerização, inibir a progressão do ciclo celular e promover a paragem da mitose e a morte das células [44]. A carboplatina, em contraste, é um dos agentes à base de platina, que interage com o DNA, e interferindo com a reparação do ADN. Como stathmin é um regulador crítico da dinâmica dos microtúbulos, tomado em consideração o modo de acção das drogas, o efeito positivo de stathmin knock-down em resposta paclitaxel e a ausência de que a sensibilidade carboplatina, também é biologicamente plausível.

mostram uma maior proporção de elevado nível em stathmin metastático (37%) em comparação com lesões primárias (18%). Discrepância no estado stathmin foi observado em um quarto de amostras pareadas, em paralelo achados por exemplo cancro da mama, onde discrepâncias entre lesões primários e metastáticos são mostrados em 14-55% e 0-40% para receptores hormonais e HER2, respectivamente [45] – [47]. No cancro endometrial, poucos estudos discutem diferenças de status marcador entre lesões primários e metastáticos [38], [48], [49]. heterogeneidade intratumoral é bem descrito no cancro e um fator de confusão em potencial em muitos estudos, independentemente do uso de lâminas de tecidos completo ou TMA. variação inter-observador é improvável que seja a única explicação para essas diferenças descritas. Além disso, um estado estudo recente que avaliou mutação, um método considerado menos subjectiva de pontuação imunoistoquímica, em múltiplas lesões metastáticas a partir de um paciente com carcinoma de células renais, suporte que detectadas alterações de biomarcadores do primário para as lesões metastáticas são reais e pode estar relacionada com e relevante para a progressão do tumor [39]. As mudanças no estado de biomarcador do ensino primário para as lesões metastáticas apoiar a necessidade de biópsias repetidas em lesões metastáticas, para se relacionar melhor resposta terapêutica aos potenciais biomarcadores preditivos, mas também para só oferecem terapias com efeito positivo provável quando biomarcadores preditivos estão disponíveis [47], [50 ], [51]. Para o câncer de mama, a Sociedade Americana de Oncologia Clínica (ASCO) aconselhou em 2007 que já para o status de receptores hormonais, o teste deve ser considerada a ser repetida na doença metastática, se os resultados foram de influenciar a gestão do paciente [52].

Conclusão

Estes resultados, incluindo dados pré-clínicos e, pela primeira vez dados de amostras clínicas, sustentam que stathmin pode ser um biomarcador preditivo para a resposta ao tratamento paclitaxel em câncer endometrial. No entanto, são necessários estudos confirmatórios, de preferência a partir de ensaios clínicos randomizados. A discordância biomarcador na progressão do tumor está em linha com outros estudos sobre tumor biomarcador heterogeneidade e apoia a necessidade de biópsia repetida na doença metastática.

Reconhecimentos

Britt Edvardsen, Ellen Valen, Gerd Lillian Hallseth,