Abstract
Os objetivos deste estudo foram avaliar simultaneamente a expressão Y-box de ligação proteína-1 (YB-1) no tecido retal não-neoplásica e tecido do cancro retal, e recolher acompanhamento clínico dados -up para pacientes individuais. Além disso, teve como objetivo investigar as funções de desenvolvimento e valor prognóstico da YB-1 no cancro rectal. Realizamos estudos de imuno-histoquímica para examinar YB-1 expressão em amostras de tecido de 80 pacientes com câncer retal, 30 pacientes com adenoma tubular rectal, e 30 pacientes com retite. A média YB-1 pontos histológicos para o cancro rectal, adenoma tubular retal e retite amostras de tecido foram 205,5, 164,3 e 137,7, respectivamente. Menor tempo livre de doença e sobrevida global foram encontrados em pacientes com câncer retal que tiveram maior expressão YB-1 do que naqueles com menor expressão (38,2 meses versus 52,4 meses, p = 0,013; e 44,4 meses versus 57,3 meses, P = 0,008, respectivamente). Nossos resultados indicam que YB-1 expressão é superior em tecido de cancro rectal do que em adenoma tubular retal e retite tecido e que pode ser um fator prognóstico independente para o cancro rectal
Citation:. Zhang Y, Zhao PW, Feng L, Xie G, Wang AQ, Yang YH, et ai. (2015) o nível de expressão e Valor prognóstico da Y-Box Binding Protein-1 em cancro retal. PLoS ONE 10 (3): e0119385. doi: 10.1371 /journal.pone.0119385
Editor do Academic: Hiromu Suzuki, Sapporo Medical University, JAPÃO
Recebido: 15 de outubro de 2014; Aceito: 30 de janeiro de 2015; Publicação: 19 de março de 2015
Direitos de autor: © 2015 Zhang et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
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financiamento:.. os autores não receberam qualquer financiamento específico para este trabalho
CONFLITO dE iNTERESSES:. os autores declaram que não há interesses concorrentes existem
Introdução
câncer retal é um dos tumores malignos mais comuns do sistema digestivo. A introdução da radioquimioterapia adjuvante para o tratamento de taxas de sobrevivência melhorada de cancro rectal, mas uma elevada taxa de mortalidade ainda está associado com a malignidade. Os principais fatores que afetam o prognóstico de pacientes com câncer retal incluem estágio do tumor, a distância entre o tumor e ânus, ea margem de ressecção circunferencial [1-2]. Como os pacientes similares podem receber o mesmo tratamento ainda vir a ter resultados diferentes, nós supomos que há outros fatores que contribuem.
Y-box de ligação proteína-1 (YB-1) é o mais evolutivamente conservada de ligação de ácido nucleico proteína conhecida [3]. Ele está envolvido na regulação da transcrição e da tradução, a reparação do ADN, splicing alternativo de ARNm, ARN de reparação, a proliferação celular, apoptose, e resistência a drogas [4-7]. Um número crescente de estudos têm demonstrado uma associação entre YB-1 e vários tipos de câncer. Por exemplo, esta proteína pode conduzir a transição G1-S em células tumorais através da via para promover a proliferação CDC6 [8]. YB-1 pode actuar como um regulador negativo do gene supressor tumoral p53 e o repressor do promotor p53 [9]. YB-1 podem formar complexos com proteína de activação 2 e p53. subsequente ligação ao elemento de resposta RE-1 da metaloproteinase de matriz elemento potenciador 2 (MMP2) gene activa a transcrição da
MMP2
, promovendo, assim, a metástase do tumor [10]. PIK3CA, receptor do factor de crescimento epidérmico (EGFR), e factor de transição epitelial-mesenquimal são modulados por YB-1 para promover o crescimento e a sobrevivência de células de cancro da mama [11-13]. YB-1 também tem sido associada com a resistência das células tumorais a agentes terapêuticos [14-15].
Vários estudos ilustrado que YB-1 está associada a sobre-expressão com um mau prognóstico para pacientes com tumores malignos, tais como a cabeça e pescoço cancro [16], linfoma não-Hodgkin [17], o cancro da mama [18], osteossarcoma [19], o cancro do pulmão de não pequenas células [20], câncer gástrico [21], e carcinoma de células escamosas do esôfago [22]. Atualmente, existem poucos relatos sobre se a expressão YB-1 afeta o prognóstico de pacientes com câncer retal. Estudos anteriores demonstraram que a inflamação desempenha um papel extremamente importante na iniciação e progressão do cancro, incluindo o cancro colorectal [23]. Os objetivos deste estudo foram avaliar a expressão de YB-1 em tecido retal não-neoplásica e tecido de câncer retal e avaliar a relação entre YB-1 expressão e o prognóstico dos pacientes com câncer retal.
materiais e Métodos
as amostras de tecido e dados clínicos
o estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética médica do Hospital Central Mianyang. Todos os tecidos foram obtidos com o consentimento dos pacientes, e consentimento informado por escrito dos doadores ou o parente mais próximo foi obtido para o uso das amostras de tecidos para fins de pesquisa. Para este estudo, 140, amostras de tecido embebidos em parafina fixadas em formalina foram obtidos entre 2008 e 2009, do Departamento de Patologia do Hospital Central de Mianyang. Os espécimes foram coletados de 140 pacientes, incluindo 80 com câncer retal, 30 com adenoma tubular rectal, e 30 com retite. Todos os pacientes com câncer retal foram submetidos a cirurgia, e após a cirurgia, 69 destes pacientes receberam adjuvante quimioradioterapia (dose de radiação DT: 50 Gy /25 frações; 5-fluorouracil [5-FU] baseados em regime de quimioterapia). O tempo médio de acompanhamento foi de 46,8 meses (intervalo: 7-75 meses). Oito pacientes com câncer retal foram perdidos para follow-up e, portanto, os dados clínicos foram coletados durante 72 pacientes.
Imunohistoquímica
A análise imunohistoquímica foi realizada como descrito anteriormente [24]. Quatro micrômetros de espessura fixado em formalina, as secções de tecido embebidas em parafina foram desparafinizadas, re-hidratadas em um gradiente de álcool, e submetido a um tampão de recuperação de epítopo induzida pelo calor consistindo em Tris-EDTA a pH 7,4. As lâminas foram então fervidas durante 3 minutos numa panela de pressão e, em seguida, arrefeceu-se em tampão para recuperar os epitopos. As lamelas foram embebidas em 3% H
2O
2 durante 8 minutos e, em seguida, lavou-se com água. Eles foram, em seguida, incubadas numa diluição 1: 200 de um anticorpo de coelho policlonal criado contra humano YB-1 (Cell Signaling Technology, Inc., Boston, MA, EUA) durante 1 h à temperatura ambiente. A seguir à incubação com o anticorpo secundário de cabra anti-coelho, peroxidase de rábano polímero marcado com enzima biotina a partir do kit Dako ChemMate Detecção EnVision (Dako Diagnostics Co., Ltd., Shanghai, China) foi adicionado. O cromogénio foi 3,3′-diaminobenzidina (Dako Diagnostics Co. Ltd.). Finalmente, as secções foram contrastadas com hematoxilina. lâminas de tecido de cancro da mama foram usadas como controlo positivo para a coloração YB-1. Um slide que não foi tratada com o anticorpo primário foi usado como controlo negativo. YB-1 imunopositividade foi analisado semi-quantitativamente. Este método, desenvolvido por McCarty et al., É nomeado o YB-1 escore histológico (algoritmo HSCORE) [25]. O algoritmo HSCORE representa a intensidade de coloração e a percentagem de células que são coradas para cada nível de intensidade de coloração. Os HSCOREs foram obtidos utilizando o seguinte algoritmo: algoritmo HSCORE = Σ (I × PC), onde I e PC representam a intensidade de coloração e a percentagem de células que foram coradas para cada nível de intensidade de coloração, respectivamente. As intensidades foram classificados de zero (sem coloração) a três (de coloração muito forte). Todas as lâminas foram examinadas e marcou de forma independente por três patologistas que foram cegados tanto aos dados clínicos e patológicos. YB-1 imunopositividade foi definida como a presença de qualquer coloração específica no citoplasma e /ou núcleo.
A análise estatística
Foi realizada análise estatística usando SPSS software estatístico (IBM Corp., Armonk, Nova Iorque, EUA). A expressão diferencial de YB-1 em amostras de tecido de pacientes com retite rectal, adenoma tubular, rectal, cancro rectal e foram analisados utilizando ANOVA testes estatísticos. ANOVA ou
t
-Testes foram utilizados para analisar a correlação entre os parâmetros clínico e YB-1 expressão. Um modelo de regressão de riscos proporcionais de Cox foi usado em uma análise multivariada do impacto de fatores prognósticos na sobrevida. P valores . 0,05 foram considerados estatisticamente significativa em todos os testes
Resultados
difusa YB-1 expressão no câncer retal e não neoplásicas tecidos retais
células do cancro retal exibiram YB-1 coloração no citoplasma (fig. 1-3). Em tecido retal não-cancerosas, observou-se um fraco nível de YB-1 coloração. A coloração nuclear foi raramente observada em qualquer uma das amostras de tecido. Os médios YB-1 HSCOREs para o cancro rectal, adenoma tubular e retite amostras de tecido foram 205,5, 164,3 e 137,7, respectivamente. YB-1 Os níveis de expressão eram mais elevados em tecidos de pacientes com cancro rectal do que em tecido rectal, não neoplásico (P = 0,000; Tabela 1). No entanto, YB-1 expressão não exibir qualquer correlação evidente com a idade do paciente (P = 0,153), sexo (P = 0,657), estágio do câncer (P = 0,245), ou quimioradioterapia adjuvante (P = 0,761). As características clínicas desses pacientes são apresentados na Tabela 2.
A análise de sobrevida de YB-1 expressão no câncer de reto
Superior YB-1 expressão (algoritmo HSCORE ≥ 200) foi associada a menor sobrevida livre de doença (DFS) e sobrevida global (OS) (fig. 4-5). A média DFS foi de 38,2 meses, em 50/72 pacientes com câncer retal, que foi menor do que a de pacientes com menor YB-1 expressão (algoritmo HSCORE 200). O DFS média de pacientes com menor YB-1 expressão era de 52,4 meses (p = 0,013). Uma análise do OS revelaram resultados semelhantes. O tempo OS significativo de pacientes com maior YB-1 expressão (algoritmo HSCORE ≥ 200) foi de 44,4 meses versus 57,3 meses (p = 0,008) para pacientes com menor expressão YB-1 (YB-1 algoritmo HSCORE 200).
A influência das características clínicas e patológicas sobre o cancro rectal foi analisada em uma análise multivariada pelo modelo de riscos proporcionais de Cox. Os resultados indicaram que estágio clínico, quimioradioterapia adjuvante, e YB-1 expressão correlacionada com DFS e OS e que eles podem ser fatores prognósticos independentes que afetam os tempos de sobrevivência de pacientes com câncer retal (Tabela 3).
Discussão
Muitas proteínas são relatados para ser associado com o prognóstico dos pacientes com câncer retal incluindo vasohibin-1 [26] e miR-25 [27]. Poucos estudos têm-se centrado sobre a associação entre YB-1 e cancro rectal, utilizando uma abordagem imuno-histoquímica. A sobre-regulação de YB-1 foi observada em vários tumores do sistema digestivo. Por exemplo, YB-1 é sobre-expressa no citoplasma de células de carcinoma de células escamosas esofágica [22]. maior expressão de YB-1 é também observada no citoplasma das células de cancro gástrico, mas coloração nuclear é raramente observada [21]. No nosso estudo, observou-se expressão YB-1 no citoplasma das células de três tecidos diferentes. O algoritmo HSCORE de tecido de câncer retal foi significativamente maior do que aqueles para os tecidos retais não neoplásicas, sugerindo que
YB-1