Abstract

Fundo

Embora o câncer de pulmão de pequenas células não-estágio inicial (NSCLC) é considerada uma doença potencialmente curável após ressecção total, os doentes têm um amplo espectro de sobrevivência de acordo com a fase (IB, II, III-a). Dentro de cada fase, os perfis de expressão genética podem identificar pacientes com maior risco de recorrência. Nossa hipótese é que a expressão do mRNA alterada em nove genes poderia ajudar a prever a evolução da doença: reparo de excisão cruzada complementar 1 (ERCC1), mielóide dedo de zinco 1 (MZF1) e TWIST1 (que regulam a expressão de N-caderina), subunidade ribonucleótido-redutase M1 (RRM1 ), tiorredoxina-1 (TRX1), tirosil-DNA fosfodiesterase (Tdp1), fator nuclear de células T ativadas (NFAT), BRCA1, e o homólogo humano da levedura de germinação desinibida por benzimidazole (BubR1).

Metodologia e achados Principais

Foi realizada em tempo real da polimerase quantitativa reação em cadeia (RT-qPCR) em amostras de tecido de câncer de pulmão congeladas de 126 pacientes com NSCLC quimioterapia pela primeira vez que haviam sido submetidos a ressecção cirúrgica e avaliaram a associação entre os níveis de expressão de genes e sobrevivência. Para a validação, foram utilizados espécimes embebidos em parafina de 58 outros pacientes com NSCLC. Observou-se uma forte correlação inter-gene entre os níveis de todos os genes, exceto NFAT expressão. Um modelo de riscos proporcionais de Cox indicaram que, juntamente com o estágio da doença, a expressão do mRNA BRCA1 significativamente correlacionada com a sobrevida global (hazard ratio [HR], 1,98 [95% de intervalo de confiança (IC), 1,11-6]; P = 0,02). Na coorte independente de 58 pacientes, a expressão do mRNA BRCA1 também significativamente correlacionada com a sobrevivência (HR, [95% CI, 1,01-5,92] 2,4; P = 0,04).

Conclusões

A superexpressão de mRNA BRCA1 foi fortemente associada com pior sobrevida em pacientes com NSCLC, bem como a validação deste achado em um conjunto de dados independentes criados reforçada esta associação. Uma vez que a expressão de ARNm de BRCA1 anteriormente tem sido associada a sensibilidade diferencial à cisplatina e antimicrotúbulos drogas, a expressão de ARNm de BRCA1 pode fornecer informação adicional para personalizar a quimioterapia baseada em antimicrotúbulo adjuvante, especialmente na fase IB, em que o papel da quimioterapia adjuvante não foi claramente demonstrada.

Citation: Rosell R, Skrzypski M, Jassem E, Taron M, Bartolucci R, Sanchez JJ, et al. (2007) BRCA1: fator prognóstico Novel em recessionada Non-Small-Cell Lung Cancer. PLoS ONE 2 (11): E1129. doi: 10.1371 /journal.pone.0001129

Editor do Academic: William Pao, Memorial Sloan-Kettering Cancer Center, Estados Unidos da América

Recebido: 20 de junho de 2007; Aceito: 01 de agosto de 2007; Publicação: 07 de novembro de 2007

Direitos de autor: © 2007 Rosell et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. A pesquisa aqui relatado foi financiado pelo Cancer Group Espanhol pulmão e da Universidade médica de Gdansk. Ele foi parcialmente financiado pelo Ministério da Saúde espanhol conceder FIS 05/1621. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

em 2006, na Europa, havia uma estimativa de 386,300 casos de câncer de pulmão, com uma incidência substancialmente mais elevada nos homens do que nas mulheres [1]. Entre o cancro do pulmão de pequenas células não-completamente ressecado (NSCLC) pacientes, 40% da fase I, 66% da fase II e 75% dos pacientes estádio IIIA morrem dentro de cinco anos de ressecção [2], e os benefícios da quimioterapia adjuvante tem não foi demonstrada no estádio IB. Em estudo randomizado a ANITA, a sobrevida em 5 anos para pacientes com doença em estágio IB foi de 62% no grupo de quimioterapia e 64% no grupo de controlo; taxas correspondentes foram de 52% e 39% para os pacientes fase II e 42% e 26% para o estágio IIIA [3]. Além de estágio da doença, vários estudos examinaram os perfis de expressão gênica em NSCLC, identificar subtipos moleculares associados com a evolução dos doentes [4], [5], [6], [7]. assinaturas de expressão de genes que vão de cinco a 64 genes foram identificados [6], [7], e comparações entre os estudos revelaram significativa, embora de acordo padrões predizer os resultados incompletos, [4]. Além disso, a capacidade para interpretar o significado dos genes individuais nestas assinaturas continua a ser um desafio [8]. As assinaturas de expressão de genes identificados genes relacionados principalmente a metástase do cancro [6], mas não descrevem os genes envolvidos em vias de reparação do ADN.

estudos pré-clínicos demonstraram que a deficiência em qualquer um dos mais de 30 genes envolvidos na excisão de nucleotídeos reparação (NER) via confere marcada hipersensibilidade a cisplatina [9]. Hipótese de que níveis elevados de genes NER poderia ser não apenas marcadores prognósticos preditivos mas também, optamos por analisar os seguintes genes, com base em relatórios anteriores do seu valor preditivo: reparo de excisão-cross complementando 1 (ERCC1) [10], BRCA1 [11 ], homólogo humano de levedura de germinação desinibida por benzimidazole (BubR1) [12], [13], [14], mielóide dedo de zinco 1 (MZF1) [15], [16], [17], subunidade ribonucleótido-redutase M1 (RRM1 ) [18], [19], [20], tiorredoxina-1 (TRX1) [21], [22], a fosfodiesterase-tirosil ADN (Tdp1) [23], [24], [25]. Além disso, nós examinamos torção [26], [27] e do factor nuclear das células T activadas (NFAT) [28], [29], os quais estão envolvidos no processo de invasão de metástases. (Mais detalhes sobre os nove genes examinados podem ser encontrados em S1 texto.)

Nenhum desses nove genes foram identificados em perfis de expressão genética associados com o desfecho do paciente NSCLC [4], [5], [6] , [7], com a excepção de TRX1, o qual foi identificado por análise de proteómica e associada com a sobrevivência pobre [21]. A fim de lançar luz sobre o valor prognóstico destes genes, examinamos a sua expressão por PCR em tempo real da transcriptase reversa quantitativa (RT-PCR) em 126 pacientes completamente ressecados que não receberam quimioterapia adjuvante e correlacionados os resultados com a sobrevivência.

Métodos

os pacientes

amostras de NSCLC foram obtidas de 126 pacientes consecutivos submetidos a ressecção pulmonar curativa na Universidade médica de Gdansk (Gdansk, Polónia) entre 2000 e 2004, após obtenção de autorização do conselho de revisão institucional da Universidade médica de Gdansk e assinaram o consentimento informado do paciente. Os pacientes eram 98 homens e 28 mulheres, com idade de diagnóstico variando de 37 a 77 anos (idade média, 64 anos). Setenta e um pacientes tinham doença em estágio I, 33 estágio II, e 22 de estágio IIIA. Vinte e sete doentes tinham pouco diferenciadas, moderadamente diferenciado 74, e 9 NSCLC bem diferenciado; os restantes 16 pacientes eram não especificado. Oitenta pacientes eram fumantes, 39 ex-fumantes, e os restantes sete nunca fumaram. Cento e vinte e dois pacientes foram submetidos a lobectomia pulmonar formal ou mais, com ipsilateral linfa mediastinal nó dissecção sistemática; os quatro pacientes restantes foram submetidos a segmentectomia devido à reserva pulmonar pobre. Estágios foram determinados após avaliação patológica de espécimes ressecados acordo com o Sistema Internacional de Estadiamento do Câncer de pulmão [30] (Tabela S1). Nenhum dos pacientes recebeu quimioterapia adjuvante.

Nós validado o valor prognóstico BRCA1 em 58 pacientes em estágio IB-IIB NSCLC que foram submetidos a ressecção cirúrgica na Azienda Ospedaliera Santa Maria (Terni, Itália) entre fevereiro de 1997 e dezembro de 2003 , depois de obter a aprovação do conselho de revisão institucional da Azienda Ospedaliera Santa Maria e assinaram o consentimento informado do paciente. As características dos pacientes são apresentados na Tabela S1.

A expressão gênica análise

amostras tumorais de 126 pacientes foram obtidos durante a cirurgia como blocos de 1cm3 e snap-congelados em nitrogênio líquido. Os tecidos foram armazenados em -80 ° C até o RNA total foi extraído com kits AllPrep (Qiagen, Valencia, CA). Apenas as amostras de tumor, que contenham mais de 60% de tecido de tumor num troço microscópica eram elegíveis para continuar o processamento. A concentração de ARN foi avaliada em nano-gota ™ e a qualidade do RNA obtido foi testado em gel de agarose. O ADNc da primeira cadeia foi sintetizado a partir de 1 ug de ARN total utilizando o Kit High-Capacity cDNA Archive (Applied Biosystems, Foster City, CA). Os nove genes examinados são mostrados na Tabela 1. Reacções RT-PCR quantitativa de cada gene foram realizadas num ABI Prism 7900 Sequence Detection System HT (Applied Biosystems).

valores de expressão de genes relativos foram calculados pela o método ΔΔCt utilizando o Sistema de Detecção de Sequência (SDS) 2.1 software (Applied Biosystems). O método ΔΔCt dá a quantidade de gene alvo normalizado a um gene de referência endógena (ribossomais 18S ARN) e em relação a uma amostra do calibrador (referência para todas as amostras;. Comercialmente disponível normal pulmão e fígado de ARN humano (Stratagene, La Jolla, CA), iniciadores para os nove genes estão listados na Tabela S2.

ERCC1, RRM1 e expressão do gene BRCA1, foi avaliada em amostras cirúrgicas embebidos em parafina fixados com formalina dos 58 pacientes na coorte de validação. Usando a técnica de captura de laser microdissecação ( palma Microlaser, Oberlensheim, Alemanha) assegurado um mínimo de 80% de tecido de tumor. Depois de o tecido norma desparafinização amostra utilizando xileno e álcoois, as amostras foram submetidas a lise num tampão de Tris-cloreto, EDTA, sulfato de dodecil de sódio (SDS) e proteinase K contendo tampão. o ARN foi, em seguida, extraiu-se com álcool de fenol-clorofórmio-isoamilo, seguido por precipitação com isopropanol na presença de glicogénio e acetato de sódio. o ARN foi ressuspenso em água com DEPC (Ambion Inc., Austin TX, EUA) e tratou-se com ADNase I (Ambion Inc.) para evitar a contaminação do ADN. O ADNc foi sintetizado utilizando a enzima retrotranscriptase M-MLV. ADNc molde foi adicionado ao Taqman Universal Master Mix (Applied Biosystems) numa reacção de 12,5 ul com os iniciadores e sonda específicos para cada gene. Os conjuntos de sondas e de iniciadores eram idênticos aos utilizados nos espécimes congelados; o gene de referência endógena foi β-actina. Quantificação da expressão do gene foi realizada utilizando o Prism 7900HT Sistema de Detecção de Sequência ABI (Applied Biosystems).

Análise estatística

Os valores e faixas medianas foram obtidos para as variáveis ​​quantitativas e expressão do gene mRNA. As variáveis ​​qualitativas foram resumidas por meio de frequências absolutas e percentuais. O teste de Kruskal-Wallis foi utilizado para verificar a normalidade. As diferenças nos níveis de expressão de ARNm medianos entre os tipos histológicos foram avaliadas pelo teste U de Mann-Whitney. coeficiente de correlação de Spearman (rho) foi utilizado para medir as correlações entre os níveis de expressão do gene. Fizemos um

a priori

decisão de classificar mRNA níveis de expressão genética como alto ou baixo, usando o método do valor mínimo P modificado por Lausen e Schumacher [31]. O método de Bonferroni foi utilizado para a correcção do efeito de múltiplas comparações, os valores de P e empíricos para cada gene foram confirmadas por meio de testes de permutação 5000. Quando nenhum ponto de corte ideal foi encontrado, foi utilizada a mediana da amostra para a análise de tempo para a recaída e sobrevivência. Tempo para a recaída e sobrevivência foram calculadas usando as estimativas de Kaplan-Meier e as diferenças entre as curvas foram testadas usando o teste log-rank. Para escolher um subconjunto apropriado de genes para a associação a qualquer variável clínica (histologia, estágio e grau), foi realizada uma análise de regressão de Cox para a frente e para trás. Para todos os cálculos, os testes realizados foram em frente e verso, a significância foi fixado em 5%, eo poder foi de 80%. As análises foram realizadas utilizando Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) para Windows versão 14 (SPSS Inc, Chicago, IL) e S-Plus 6.1 para Windows.

Resultados

Os valores médios de cada gene para todo o grupo de amostras são apresentados na Tabela S3. A amplificação do gene não foi bem sucedida numa minoria de amostras para cada transcrito analisados. Houve diferenças significativas na expressão de acordo com a histologia para todos os genes, exceto NFAT, com níveis mais elevados observados em carcinomas de células escamosas do que em adenocarcinomas (Tabela 2). Não houve diferença na expressão de genes de acordo com a fase (Tabela S4). Observou-se uma forte correlação entre os níveis de diferentes genes de expressão, por exemplo, entre os níveis de TRX e RRM1 (rho = 0,52; P = 0,0003) e entre ERCC1 e BRCA1 (rho = 0,62; P = 0,0001) (Tabela 3)

Com um acompanhamento médio de 29,7 meses (variação, 1.7-65.9 meses),-evento gratuito global ea sobrevida média não foram alcançados. Quando livre de eventos e sobrevida média foi analisada de acordo com os níveis dos nove genes de expressão, TRX e BRCA1 mostraram diferenças significativas. sobrevida livre de eventos em 21 pacientes com baixos níveis de TRX não foi alcançado, enquanto ele foi de 32 meses (IC 95%,) para os restantes 93 pacientes com níveis elevados (P = 0,02). Para 77 doentes com baixos níveis de BRCA1, sobrevida livre de eventos não tiver sido atingido, enquanto que foi 22 meses (CI de 95%, 14.9-29 meses) para as pessoas com níveis elevados (p = 0,04) (Tabela S5, a Fig. 1 ). As curvas de sobrevivência livre de eventos de acordo com a expressão dos outros sete genes são mostrados na Figura S1. A sobrevivência média para 24 pacientes com baixos níveis de TRX não tiver sido atingido, enquanto que foi de 39 meses para os restantes 101 pacientes com níveis elevados (p = 0,03). Para 83 doentes com baixos níveis de BRCA1, sobrevivência média não tiver sido atingido, enquanto que foi de 29 meses (CI de 95%, 22.2-35.7 meses) para aqueles com níveis elevados (p = 0,04) (Tabela 4, Fig. 1). As curvas de sobrevivência médio de acordo com a expressão dos outros sete genes são mostrados na Figura S2. No entanto, quando os doentes só estágio I foram examinados, sobrevida livre de eventos foi significativamente diferente de acordo com os níveis de MZF1 e BRCA1 (Tabela S6, Fig. S3) de expressão, ea sobrevida média foi significativamente diferente de acordo com os níveis de ERCC1, MZF1, torção de expressão e BRCA1 (Tabela S7, a Fig. S4).

livre de eventos (a, B) e a sobrevivência mediana (C, D) de acordo com a expressão de TRX (a, C) e de BRCA1 (B, D) .

O modelo de riscos proporcionais de Cox selecionado IIIA estágio patológico e expressão BRCA1 como fatores prognósticos independentes para a sobrevivência. A taxa de risco (HR) foi de 7,91 (IC 95%, 2,27-27,54; P = 0,001) para a fase III e 1,98 (95% CI, 1,11-6); P = 0,02) para a expressão BRCA1 (Tabela S8).

Validação de BRCA1

O acompanhamento médio dos 58 pacientes na coorte de validação foi de 40 meses. De acordo com o modelo de riscos proporcionais de Cox, o HR para pacientes com níveis elevados de BRCA1 foi de 2,4 (IC 95%, 1,01-5,92; P = 0,04). Não houve pacientes estágio IIIA nesta coorte.

Discussão

Gene assinaturas de expressão foram mostrados para prever o resultado no estágio ressecado I NSCLC [5], [6], no entanto, o uso de micromatrizes é limitada devido à necessidade de tecido fresco congelado. RT-QPCR envolvendo um pequeno número de genes oferece uma alternativa prática, permitindo a quantificação exacta e reprodutível de resultados para o ARN obtido a partir de pequenas quantidades de amostras embebidas em parafina. Os resultados de RT-QPCR realizada em cinco [7] e oito [32] genes correlacionados com resultados de NSCLC [7] e adenocarcinoma de pulmão [32] pacientes. Nós examinamos a expressão de ERCC1, BRCA1, BubR1, MZF1, RRM1, TRX1 e Tdp1, envolvida em vias de reparo de DNA e de Twist and NFAT, relacionada com a formação de metástases. No modelo multivariada, apenas BRCA1 e estágio IIIA foram identificados como fatores de risco independentes. Em uma coorte de validação independente de 58 pacientes estágio IB-IIB NSCLC, BRCA1 foi confirmado como o único marcador prognóstico independente.

Os pacientes cujos tumores tinham alta expressão BRCA1 apresentaram sobrevida significativamente pior e deve ser candidatos à quimioterapia adjuvante.

In vitro

estudos têm mostrado que o BRCA1 pode regular a sensibilidade diferencial de diferentes classes de agentes de quimioterapia [33]. A ausência de resultados BRCA1 em alta sensibilidade ao cisplatino, enquanto que a sua presença aumenta a sensibilidade a agentes antimicrotúbulos [33]. Portanto, acreditamos que os pacientes com os mais altos níveis de expressão deve receber antimicrotúbulo, a quimioterapia não baseada em platina. Temos realizado um estudo piloto da quimioterapia adjuvante personalizado com base nos níveis de mRNA BRCA1 em 88 fases completamente ressecado II-III pacientes com NSCLC, onde aqueles com os maiores níveis de expressão recebeu adjuvante docetaxel e aqueles com níveis mais baixos receberam quimioterapia baseada em cisplatina. A análise interina mostra que a sobrevida livre de eventos é semelhante em ambos os grupos. Estes resultados suportam nossas descobertas anteriores em pacientes no estágio II-III-A que receberam neoadjuvante gemcitabina /cisplatina, onde aqueles com os níveis mais elevados de BRCA1 tiveram uma sobrevida sombrio de 12 meses [11].

Não há diferenças nos níveis de qualquer expressão dos nove genes foram observadas de acordo com o tamanho do tumor ou fase ( 4 x 4 cm). No entanto, de todos os nove genes examinados, apenas BRCA1 mostrou uma tendência para influenciar a sobrevivência de acordo com o tamanho do tumor. Na fase I NSCLC pacientes, a sobrevida foi inversamente correlacionada com o tamanho do tumor [34]. No presente estudo, a análise de sobrevida univariada mostrou que, além de BRCA1, ERCC1 e MZF1 influenciou significativamente a sobrevida na fase I (Tabela S7, Fig. S4). Estes resultados destacam o papel potencial da ERCC1 e MZF1, que são altamente correlacionadas com BRCA1, como fortes marcadores prognósticos na fase I NSCLC. Não inesperadamente, no entanto, atendendo à elevada correlação entre os níveis destes três genes de expressão (Tabela 3), quando todos os três genes foram combinados, foi observada nenhuma melhoria sobre o valor prognóstico da sozinho BRCA1.

Embora o mecanismos pelos quais alguns dos nove genes examinados afectar o prognóstico do paciente não é muito claro, sobre-expressão de ERCC1 e RRM1 parece ser impulsionado-oncogene [35], [36], [37], [38], [39]. metilação BRCA1 e revogação de ARNm de BRCA1 foi encontrado nos cancros esporádicos da mama [40] mas muito raramente em NSCLC [41]. Em alguns cancros mamários esporádicos, o mau resultado associado com metilação BRCA1 e baixos níveis de expressão poderiam ser explicados por amplificação MYC [42].

Outros estudos, utilizando o anticorpo monoclonal 8F1 [43] relataram que a presença de proteína ERCC1 é um marcador de prognóstico de sobrevivência no início de NSCLC e um preditor de desfecho à quimioterapia adjuvante baseada em cisplatina; No entanto, num estudo prévio em cancro gástrico [44], não ficou claro se a fraca resposta clínica de pacientes cujos tumores tinham alto de pré-tratamento os níveis de mRNA de ERCC1 resultou da resistência de células de tumor à quimioterapia com cisplatina ou a partir de uma biologia tumoral mais agressivo. Além disso, em fibroblastos humanos normais ERCC1-positivos e as células de pacientes com mutações hereditárias em ERCC1, ERCC1 não é o principal antigénio reconhecido pelo anticorpo 8F1 em imunocoloração [45]. Além disso, em outro estudo, a situação proteína ERCC1 não se correlacionam com a sobrevivência em estágio IV NSCLC [46], enquanto que em um julgamento de cisplatina personalizada com base na expressão de mRNA ERCC1, taxa de resposta foi de 39% no grupo controle e de 50% no personalizado braço (P = 0,02) [47].

Em resumo, nosso estudo indica que, em primeiro lugar, BRCA1 está intimamente relacionado com ERCC1, RRM1 e outros genes como MZF1, mas destaca-se como o marcador de prognóstico mais importante da recaída . Nossa hipótese é que os pacientes com níveis elevados de BRCA1 irão beneficiar baseada em cisplatina quimioterapia antimicrotúbulo à base, mas não. Em segundo lugar, altos níveis desses transcrições conferir um maior risco de recidiva, em contraste com o que foi relatado por outros investigadores, que destaca a necessidade de mais pesquisas nesta área para elucidar o papel preditivo destes genes relacionados com o NER e personalizar correctamente tratamento (Fig. S5). Embora a população em nosso estudo foi desviada para fumantes do sexo masculino com carcinoma de células escamosas, nossos resultados justificam mais investigação para confirmar sua aplicabilidade a outros subgrupos histológicos de NSCLC, A fim de lançar mais luz sobre estas questões, estamos planejando para examinar BRCA1, ERCC1 , MZF1 e RRM1 expressão em 200 espécimes de tumor a partir do estudo ANITA [3] e em 620 pacientes incluídos no estudo espanhol Lung Cancer Group NATCH de neoadjuvante vs quimioterapia adjuvante vs cirurgia sozinha.

Informações de Apoio

Figura S1.

Evento sobrevida livre de acordo com a expressão de ERCC1 (A), MZF1 (B), Twist (C), RRM1 (D), Tdp1 (E), NFAT (F), e BubR1 (G)

doi: 10.1371 /journal.pone.0001129.s001

(0.09 MB TIF)

Figura S2.

sobrevivência mediana de acordo com a expressão de ERCC1 (A), MZF1 (B), de torção (C), RRM1 (D), Tdp1 (E), NFAT (F), e BubR1 (L)

doi: 10.1371 /journal.pone.0001129.s002

(0.09 MB TIF)

Figura S3. curvas de sobrevida

Event-grátis para pacientes em estágio I de acordo com os níveis dos nove genes examinados

doi expressão gênica: 10.1371 /journal.pone.0001129.s003

(0,10 MB TIF)

Figura S4.

curvas de sobrevivência média para pacientes em estágio I de acordo com os níveis dos nove genes examinados

doi expressão gênica: 10.1371 /journal.pone.0001129.s004

(0.10 MB TIF)

Figura S5.

resultados contraditórios levando a estratégias opostas de personalização de quimioterapia adjuvante. Olaussen et ai (NEJM 2006; 355: 983-991) relatam que a falta de ERCC1protein implica um maior risco de recidiva e uma maior sensibilidade para a quimioterapia com cisplatina. (Sensibilidade cisplatina com base na falta de expressão ERCC1 tem sido demonstrada em estudos pré-clínicos e clínicos.) Os nossos resultados indicam que um maior risco de recidiva está relacionada com níveis elevados de vários transcritos, incluindo ERCC1. Estes pacientes podem ser resistentes à cisplatina e sensível a taxanos ou outras drogas antimicrotúbulos

DOI: 10.1371 /journal.pone.0001129.s005

(0.13 MB TIF)

Tabela S1.

características dos pacientes de coorte principais (N = 126) e para a coorte de validação (N = 58)

doi: 10.1371 /journal.pone.0001129.s006

(0.04 MB DOC)

Tabela S2.

Primers e sondas para os nove genes examinados

doi: 10.1371 /journal.pone.0001129.s007

(0,03 MB DOC)

Tabela S3.

valores gene Relativa expressão

DOI: 10.1371 /journal.pone.0001129.s008

(0,03 MB DOC)

Tabela S4. expressão

Gene de acordo com o estágio da doença

doi: 10.1371 /journal.pone.0001129.s009

(0.04 MB DOC)

Tabela S5.

Evento sobrevida livre de acordo com os níveis de genes de expressão

DOI: 10.1371 /journal.pone.0001129.s010

(0.06 MB DOC)

Tabela S6.

Evento livre de sobrevida em pacientes estágio I de acordo com os níveis de genes de expressão

DOI: 10.1371 /journal.pone.0001129.s011

(0.06 MB DOC)

Tabela S7.

A sobrevida média para pacientes em estágio I de acordo com os níveis de expressão de genes

doi: 10.1371 /journal.pone.0001129.s012

(0.06 MB DOC)

Tabela S8. modelo

multivariada Cox para a sobrevivência, mostrando um maior risco de morte para pacientes com níveis elevados de BRCA1 e para aqueles com doença em estágio IIIA

doi: 10.1371 /journal.pone.0001129.s013

(0,03 MB DOC )

texto S1.

Mais detalhes sobre os nove genes examinados

doi: 10.1371 /journal.pone.0001129.s014

(0.09 MB DOC)