Abstract

Fundo

O papiloma vírus humano (HPV ) Chefe associado e os cancros do pescoço (HNCS) geraram quantidade significativa de interesse de pesquisa nos últimos tempos. Devido à alta incidência de HNCS e falta de dados suficientes sobre HPV de alto risco (HR-HPV) da região Norte -East da Índia, este estudo foi concebido para investigar a infecção hr-HPV, seus tipos e sua associação com hábitos de vida como o tabaco, o consumo de álcool etc.

Métodos

Um total de cento e seis amostras de biópsia de tumor HNC primária foram coletados. Estas amostras foram analisadas para DNA hr-HPV (13 tipos de HPV) com captura híbrida 2 (HC2) Ensaio e genotipagem foi realizada por E6 nested multiplex PCR (nmPCR).

Resultados

A presença de HR-HPV foi confirmada em 31,13% (n = 33) e 24,52% (n = 26) dos pacientes HNC por nested PCR multiplex (nmPCR) e ensaio de HC2 respectivamente. Entre os casos hr-HPV positivos, dos treze tipos de HPV HR analisados, apenas dois genótipos prevalentes, HPV-16 (81,81%), seguido por HPV-18 (18,18%) foram encontradas. foi observada associação significativa entre a infecção hr-HPV ao consumo de álcool (p 0,001) e fumo de mascar (p = 0,02) em casos HNC. Em comparação com HPV-18 a infecção do HPV-16 foi encontrado para ser significativamente associados com o tabaco de mascar (p = 0,02) hábito.

Conclusões

Nosso estudo demonstrou que mascar tabaco e consumo de álcool pode agir como fatores de risco para a infecção hr-HPV em HNCS da região do Nordeste da Índia. Este foi o primeiro estudo a partir de Nordeste da Índia, que também avaliou a aplicabilidade clínica de ensaio HC2 em amostras de pacientes HNC. Sugerimos que o álcool, tabaco e HR- ato infecção por HPV de forma sinérgica ou complementar um ao outro no processo de desenvolvimento HNC e progressão na população do presente estudo

Citation:. Kumar R, Rai AK, Das D, Das R , Kumar RS, Sarma A, et al. (2015) Álcool e tabaco aumenta o risco de Alto Risco de Infecção por HPV em cabeça e pescoço pacientes com câncer: Estudo de North-East Region of India. PLoS ONE 10 (10): e0140700. doi: 10.1371 /journal.pone.0140700

editor: Jeffrey S. Chang, Institutos Nacionais de Pesquisa em Saúde, TAIWAN

Recebido: 24 de maio de 2015; Aceito: 28 de setembro de 2015; Publicação: 16 de outubro de 2015

Direitos de autor: © 2015 Kumar et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão dentro do papel

Financiamento:. o apoio foi fornecido pelo Departamento de Biotecnologia do Ministério da Ciência e Tecnologia, Índia (Grant No. BT /04 /NE /TBP /2010 e Grant No. BT /Med /NE-SFC /2009) recebido pela AR e AKR, respectivamente [https://www.dbtindia.nic.in/]

Conflito de interesses:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

O Chefe e contas de incidência de câncer de pescoço (HNC) por cerca de 25-30% de todos os casos de câncer na Índia [1]. HNC é uma doença multifatorial e multifásico que afeta sítios anatômicos como o lábio, cavidade oral, nariz e seios paranasais, nasofaringe, orofaringe, cavidade oral, faringe, laringe etc [2]. Os fatores de risco cruciais são o tabaco, consumo de álcool, betel de mascar noz, mudança de comportamento sexual, etc., que são responsáveis ​​pela maior parte da carga de HNC. Em pacientes HNC de 50 anos e acima de idade, associações com os principais factores de risco acima são mais predominantes. tabagismo e agentes cancerígenos relacionados ao álcool desempenham um papel importante no desenvolvimento de HNC provavelmente através de imunossupressão [3-6]. No compartimento extracelular e intracelular, fumaça de cigarro gera material particulado, extratos gasosos e solutos de água. Principais componentes mutagénicos e carcinogénicos classificados de cigarro estão a nicotina, alcatrão, amônia, monóxido de carbono, dióxido de carbono, formaldeído, acroleína, acetona, benzopyrenes, hidroxiquinona, óxidos de azoto e cádmio. Alcatrão e nicotina da fumaça de cigarro afetam a resposta imune inata e aumentar a susceptibilidade a infecções [7, 8]. O consumo de álcool também é considerado como um dos fatores de risco que podem contribuir para a carcinogênese. A Agência Internacional de Investigação do Cancro da Organização Mundial de Saúde classificou o álcool como um carcinogéneo do Grupo 1 [9]. Papilomavírus Humano (HPV) foi defendida primeira vez por Syrjänen et al (1983) como um fator de risco, especialmente para orofaríngea e câncer oral [10]. No subconjunto de casos HNC, associação HPV têm sido reconhecidos em faixa etária mais jovem ( 50 anos) pacientes sem hábito de consumo de tabaco e álcool [11, 12]. O ADN genómico de HPV foi detectada na maior parte por um método baseado em PCR e estudos têm mostrado que até 60% dos casos HNC pode ser HPV positivo [13, 14]. A associação causal entre HPV e câncer de cabeça e pescoço permanece contraditória devido a evidências conflitantes [15, 16]. associação HPV com HNC assumiu importância devido aos resultados que o HPV casos HNC positivas têm bom prognóstico em comparação com os casos negativos HPV [17-21]. As possíveis vias de transmissão do HPV em HNC pode ser um comportamento sexual oral em adultos e transmissão perinatal nos filhos recém-nascidos. Em particular, a cavidade oral, da faringe e da laringe, as células epiteliais são mais susceptíveis a infecção por HPV [2, 22-26]. tipos de HPV são classificados como de alto risco (HPV-16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73 e 82) e de baixo risco (HPV-26, 30, 34, 53, 66, 67, 69, 70, 73, 82, 85) com base no seu potencial cancerígeno. HPV-16 e HPV-18 tipo de alto risco têm sido considerados como os principais genótipos contributivas em HNC [27, 28].

Os reguladores do ciclo celular mestre, p53, p16 e pRb são importantes genes supressores de tumor ter significativa papel na via reguladora do ciclo celular e cancro [29]. Estes genes desempenham um papel importante na manutenção da integridade genômica e ciclo celular, e controle da apoptose [30, 31]. O Risk HPV alta (HR-HPV) tipos 16 e 18 exercem principalmente o seu potencial cancerígeno através da expressão de E6 e E7 oncoproteína. A activação do oncogene E6 leva a degradação de p53 através da sua interacção com a ubiquitina-ligase E3 E6AP [31, 32]. A E7 activo degrada a proteína supressora de tumores de retinoblastoma (pRb), devido a que E2F factor de transcrição é estimulada e resulta em sobre-expressão de p16 INK4A, um inibidor de quinase dependente da ciclina [31, 32]. Ao contornar os guardiões mestre mencionados acima de ciclo celular, genes de HPV assumir o controle sobre a proliferação celular que leva a divisão celular descontrolada.

taxa de incidência A região Nordeste (NE) da Índia tem alta idade ajustada (AAR) por 1, 00.000 pessoas para HNCS na Índia [33]. Entre todos os registros de câncer de população com base (RCBP), o distrito Kamrup Urbano (KUD) da região NE da Índia ficou em segundo lugar (AAR-156,3) nas fêmeas e quarta (AAR-185.2) no sexo masculino para todos os locais de câncer incidência. O AAR para sites HNC líderes no KUD RCBP é a seguinte: língua 9,4 (masculino), 3,2 (feminino); boca 7,7 (masculino), 7,6 (fêmeas); hipo faringe 7,7 (masculino) e 7,6 (fêmeas); laringe 8,2 (masculino). relacionadas com o tabaco cancros (TRC) foram responsáveis ​​por 40%, mas 50% em homens enquanto no feminino foi 30%, mas 40% de todos os casos HNC em KUD RCBP [33]. A população da região NE representa etnia original, estilo de vida distintivo e hábitos alimentares que podem desempenhar papel importante na interação complexa de fatores ambientais e genéticos que podem estar associados a alta incidência de HNC nesta região. Há falta de dados suficientes sobre o estado hr-HPV nos casos HNC de NE Índia. O objetivo deste estudo foi investigar a prevalência da infecção hr-HPV e sua associação com a mastigação betal quid, fumo, tabaco, consumo de álcool e características clínico-patológicas de pacientes. No presente estudo, E6 nested PCR multiplex foi utilizado para a detecção sensível e específica do tipo de infecções por HPV baseada na amplificação do oncogene viral E6 /E7, conforme descrito anteriormente [28, 34]. A captura híbrida 2 (HC2) teste, que é FDA-EUA aprovados e recomendados pela OMS para detecção de HPV em amostras clínicas de lesões intra-epiteliais cervicais (SNIC) foram aplicadas pela primeira vez para a detecção hr-HPV em amostras HNC de NE Índia .

Materiais e Métodos

pacientes Características

Um total de 106 pacientes HNC foram incluídos neste estudo (masculino 73; feminino 33). amostras de tecidos tumorais foram obtidos a partir da unidade de Cirurgia de Cabeça e Pescoço de oncologia do Dr. Bhubaneswar Borooah Cancer Institute (BBCI), Regional Cancer Center, Guwahati, na Índia. Os casos HNC histologicamente confirmados foram inscritos durante o período de outubro de 2011 a setembro de 2013. As informações demográficas e estilo de vida foram coletadas através de um questionário pré-concebidas através de entrevista pessoal. As informações coletadas sobre variáveis ​​demográficas incluíram idade, sexo, etnia, educação, status sócio-econômico, fatores de estilo de vida de álcool, tabagismo, mascar noz de betel e outros hábitos alimentares. O Comité Misto americana sobre o estadiamento TNM do Câncer foi usado para teste e diagnóstico. Os pacientes foram informados sobre o estudo e consentimento escrito foi obtido antes da coleta dos espécimes. Este estudo foi aprovado pelo comitê de ética institucionais do Dr. Bhubaneswar Borooah Cancer Institute (BBCI), Guwahati, Assam (Índia).

isolamento de ADN genómico de tecido tumoral

amostras de biópsia de tecido foram recolhidas em volume de 1 ml de fosfato salino tamponado (PBS) e o DNA genómico foi extraído do tecido homogeneizada utilizando QIAamp DNA Mini kit (Qiagen, Alemanha), seguindo as instruções do fabricante. A quantidade ea qualidade do DNA genômico isolado foi confirmado pela Nano-espectrofotômetro (Bio-fotómetro, Eppendorf, Alemanha) e eletroforese em gel de agarose, respectivamente.

High -risco detecção do DNA do HPV por captura híbrida 2 (HC2) Assay

o ADN genómico isolado a partir de amostras de biopsia dos pacientes foram suspensas no meio de transporte da amostra (STM) (Qiagen, Alemanha) e a presença do HPV foi detectada por HC2 alto risco de HPV-Teste de DNA

™ kit (Qiagen, Alemanha) de acordo com as instruções do fabricante. Nas amostras MCT paciente, detecção quimioluminescente dos 13 tipos mais comuns hr-HPV (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 e 68) foi realizada utilizando automatizado DML 2000 sistema de Luminómetro (Digene, EUA). sinais de luz foi medida como unidades relativas de luz (RLU), com a intensidade da luz que indica a presença ou ausência de ADN alvo na amostra testada. O valor de RLU significativo para HPV de alto risco do calibrador de amostras de controlo positivo foi considerado como valor positivo de corte (CO). Pacientes espécime com RLU /CO relação de valor ≥ 1 com sonda de HPV de alto risco foi considerado “positivo” para qualquer um dos tipos hr-HPV (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56, 58,59 e 68). A ausência de ADN de HPV-h abaixo do limite de detecção foi denotado na amostra com RLU /Co 1. Quando RLU = CO confere presença de aproximadamente 5000 cópias de vírus no espécime. Dois casos confirmados de câncer do colo do útero com positividade hr-HPV também foram utilizados em cada DNA teste e transportadora como controle negativo [35, 36]. Os relatórios de ensaio foram gerados de acordo com o formato da Captura Híbrida

TM software ver. 2.0. Todas as amostras foram testadas duas vezes e amostras com resultado positivo HPV HR tanto em ensaio foram só marcou como HPV HR positivo.

E6 nested multiplex PCR (nmPCR) para o HPV genotipagem

A amostras deram resultados positivos para ADN de HPV-RH no ensaio de HC2 foram ainda analisados ​​para genotipagem de HPV. A reação E6 PCR aninhada 1

st rodada foi realizada num volume de 20 ul usando 25-100 ng de DNA genômico, tampão 1X Maxima Hot Start PCR, MgCl 1,5-2,0 mM

2 (Thermo Scientific, EUA), 250 nM de cada um dos iniciadores (Metabion, Alemanha), 250 uM de cada dNTP e 0,5 U Maxima Hot Start Taq DNA polimerase (Thermo Scientific, EUA). A condição de ciclos térmicos para 1

st rodada de E6 PCR foi como: Denaturation- 95 ° C 5 min, 38 ciclos de amplificação com Denaturation- 95 ° C- 30 seg, Annealing- 55 ° C e 45 seg, extensão- 72 ° C 90 seg, e última extensão- 72 ° C durante 7 min. A 1

st rodada produto E6 PCR (630bp) foi usado como um modelo (1 mL) para o

nd 2ª ronda da reacção aninhada para genotipagem do HPV utilizando conjunto multiplex de primers específicos do tipo de HPV. O volume de reacção e componentes eram semelhantes, como mencionado acima. O 2

nd rodada aninhados condição de PCR para genotipagem do HPV foi semelhante à 1

st rodada com mudanças apenas em Annealing- 55 ° C- 40 seg e Extensão-72 ° C e 45 seg [34]. Todos os produtos de PCR foram visualizados em gel de agarose a 2% (Amresco, EUA) corado com brometo de etídio (Amresco, EUA) em Gel Doc XR

™ System (Bio-Rad, EUA). As amostras cervicais positivos hr-HPV de carcinoma de células escamosas de DNA foi usado como controlo positivo em cada execução PCR. As sequências dos iniciadores estão descritos na Tabela 1.

Análise Estatística

Os dados foram representados como média ± SD ou em frequências (%). O teste χ² e exato de Fisher foram empregados para identificar a associação entre as características clínico-patológicas e status hr-HPV. A análise univariada foi realizada através do cálculo dos odds ratio (OR), juntamente com intervalos de confiança de 95% (IC) e P ≤ 0,05 foi considerado o nível de significância. Epi-Info versão 6 software foi utilizado para a análise estatística

Resultados

Características do

Paciente

Na população estudada (n = 106), 68,86% dos pacientes ( n = 73) eram do sexo masculino e 31,13% foram (n = 33) do sexo feminino. A idade dos pacientes variou de 25 a 80 anos (média de 53,41 anos). Mais de três quartos (80,18%) dos pacientes eram de áreas rurais, repouso (19,56%) eram de áreas urbanas e urbanas semi. hábito alimentar não-vegetarianos foi relatado por 92% dos pacientes (Tabela 2). A população do estudo foram agrupadas em qualquer dos ‘HR-HPV positivo “(n = 33) ou’ HPV negativo” (n = 73) com base na presença de ADN de HPV-hr. características demográficas dos pacientes e seus hábitos alimentares são mencionados na Tabela 2. Os fatores demográficos não foram significativamente associados com a infecção hr-HPV (p 0,05). Dos 106 casos, os sites anatômicas entre características clínico-patológicas dos pacientes eram da cavidade oral 81,13% (n = 86), orofaringe 4,71% (n = 5), hipofaringe 2,83% (n = 3), laringe 8,49% ( n = 9), em (Tabela 3). Percentagens de pacientes diagnosticados com HNCS estágio avançado foram estádio III 24,52% (n = 26), IVA- 55,66% (n = 59) e IVB 5,66% (n = 6). O carcinoma espinocelular foi predominante 85,85% (n = 91) tipo histológico no presente população de estudo.

detecção hr-HPV e sua associação com características demográficas e clínico-patológicos

O ADN de HPV de alto risco foi detectado por PCR em multiplex aninhados (nmPCR) em 31,13% (n = 33) e captura híbrida em 24,52% (n = 26) dos pacientes de HNC. A sensibilidade e preditivo positivo negativo verificou-se ser de 100% a cada; a especificidade e valor preditivo positivo (PPV) foi observado como sendo 91,19% e 78,78% respectivamente. Este teste classificados 93,29% dos casos de forma correcta e a área sob a curva foi encontrado como 89,50% (p 0,001), com IC de 95% (81,30% – 97,80%). Para confirmar os HPVs biologicamente activas, a expressão de p16 foi analisada em ambos os casos de HPV positivos e negativos de HPV, e a sobre-expressão de p16 foi encontrada em casos positivos de HPV que é um indicador indirecto para a presença do HPV (dados não mostrados). Em HC2 amostras testadas, o valor médio RLU estava na gama de 99-3466, eo valor da média de corte positivo off (CO) para HR-HPV foi de 347 (Qiagen, Alemanha) de acordo com a instrução. Os casos positivos HPV de alto risco foram genotipados para subtipos de HPV usando PCR multiplex E6 aninhados. Os detalhes de iniciadores utilizados para a PCR em multiplex E6 aninhados [29] são mencionadas na Tabela 1. A HR-HPV casos positivos foram ainda mais foi encontrado univariada analisados ​​para hábitos de vida e de associação significativa entre a positividade HR-HPV e o consumo de álcool (OR = 7,56; IC 95% 2,64-22,19, p . 0.001), como indicado na Tabela 2. As amostras de álcool bebedor têm mostrado a suportar infecção hr-HPV em comparação com os não-bebedores. Para olhar para o efeito sinérgico ou complementares entre os hábitos de tabaco e álcool, observou-se associação significativa com a positividade hr-HPV (OR = 3,09;. 95% CI 1,00-9,65, p = 0,02), mas quando os casos de fumantes e hábitos de álcool foram juntos analisados ​​e calculados descobrimos que não houve associação significativa com a positividade hr-HPV. Os chewers noz de betel também havia mostrado mais infecção hr-HPV. Entre HR-HPV casos positivos (n = 33), 39,40% (n = 13) dos pacientes eram não-tabaco e mastigadores de 60,60% (n = 20) eram mascadores tabaco. grupo fumante Não- 69,69% (n = 23) têm mais probabilidade de infecção pelo HPV-h comparado com os fumadores 30,31% (10). Os pacientes que residem em áreas rurais têm mais positividade hr-HPV 87,88% (n = 29) em comparação com semi urbana 9,09% residentes (n = 3) e 3,03% (1%) da área urbana. Não houve associação significativa entre a infecção hr-HPV e sexo, quid betel, chewers tabaco, hábito de fumar, hábito alimentar, idade e local de residência (Tabela 2).

Entre os casos hr-HPV positivos (n = 33), cavidade oral 72,72% (n = 24), laringe 6,06% (n = 2), hipofaringe 6,06% (n = 2) e orofaringe 15,15% (n = 5) tinham HR-ADN de HPV (Tabela 3). Houve associação significativa entre a infecção hr-HPV e local do tumor de orofaringe (p = 0,01). Maioria dos casos hr-HPV positivos 90,90%, (30 de 33) foram apresentados com estágio avançado III, IVA ou doença IVB. Histologicamente, casos positivos 90,90% hr-HPV eram carcinoma de células escamosas, 6,06% eram carcinoma verrucoso e 3,03% eram outros carcinomas (carcinoma adenóide cístico, células fusiformes maligno) (Tabela 3). Não houve associação significativa de TNM estágio do tumor, grau histológico e morfologia com positividade HPV HR (p 0,05). Quando os casos HNC foram analisados ​​com fatores de estilo de vida, consumo de álcool foi encontrado para ser significativamente associada com a infecção hr-HPV (p 0,001) (Tabela 2). Em seguida, analisamos o status hr-HPV na cavidade oral cancros sozinho (Tabela 4) e comparado com o tabagismo, tabaco, álcool, uso de noz de betel e descobriram que houve associação significativa de positividade e consumo de álcool hr-HPV (OR = 2,98; 95% CI. 0,95-9,43, p = 0,03). Para encontrar o efeito sinérgico ou complementar de hábitos de tabaco e álcool, a partir da análise univariada verificou-se que existe associação significativa de positividade hr-HPV com os hábitos de tabaco e álcool (OR = 2,94;. IC 95% 0,95-8,88, p = 0,05 ) (Tabela 4). Mas quando analisou o caso de fumantes e hábitos de álcool em simultâneo, nenhuma associação significativa foi encontrada com positividade hr-HPV.

Associação de HPV tipos 16 e 18 com características demográficas e clínico-patológicas

Entre os casos positivos de HR HPV, o HPV-16 esteve presente em 81,81% (n = 27) e HPV-18 em 18,18% (n = 6) dos casos. Os mastigadores tabaco tinha aumentado significativamente o risco de infecção pelo HPV-16 (p = 0,02), mas não de HPV-18. O risco de HPV-16 sendo positivo é 11,88 vezes mais em chewers, em comparação com os não-chewers com IC de 95% (1,01-317,2). No entanto, o hábito de fumar não mostra qualquer significado em comparação aos não-fumantes (Or- 0,14) com 95% IC (0,01-1,28). A positividade HPV-18 foi encontrado em 5 casos (83,33%) dos não-chewers comparação com mastigadores. HPV-16, a infecção em fumadores foi encontrada para ser mais elevada (p = 0,05) em comparação com o HPV-18 (Tabela 5), ​​Embora ADN HR-HPV foi encontrado para ser significativamente associados com o consumo de álcool (Tabela 2), mas com referência ao HPV – 16 isoladamente ou, tipo de HPV 18 sozinho, não houve tal associação encontrada com ele. A cavidade oral 70,37% (n = 19), laringe 7,41% (n = 2), hipofaringe 7,41% (n = 2) e orofaringe 14,82% (n = 4) doentes com cancro com HPV-16, como a maioria de tipo h-HPV predominante Considerando que o HPV -18 foi encontrado apenas na cavidade oral, 83,33% (n = 5) e orofaringe 16,66% (n = 1). No carcinoma de células escamosas tipo histológico, o HPV-16 foi encontrado em 25 casos (92,59%) e HPV-18 em 5 casos (83,34%) foi detectado. HPV-16 foi predominante no sexo masculino 66,66% (n = 18), bem como proporcionalmente elevada nas fêmeas 33,44% (n = 9), ao passo que o HPV-18 foi mais em machos 83,33% (n = 5) em comparação com as fêmeas 16,67% ( n = 1) casos. Betel mastigação quid, consumo de álcool, idade, sexo não mostraram qualquer associação significativa com a presença de HPV-16, 18 tipos (p 0,05). (Tabela 5)

Discussão

O vírus do papiloma humano (HPV) tem sido identificada como um fator etiológico no subconjunto de cabeça e pescoço câncer de câncer de orofaringe, especialmente [37]. A maioria dos pacientes com carcinoma de HPV positivos orofaringe associadas foram relatados para ser mais jovem em idade e em sua maioria não tinha história de tabaco /álcool use [38]. Alguns grupos de pesquisa têm defendido que os casos HNC negativo positivos e HPV HPV deve ser considerado como duas entidades patológicas, clínicas distintas e os regimes de tratamento precisa ser concebido em conformidade [37-39]. As capacidades de proliferação e de fracções de hipoxia tumor foi significativamente diminuída em células tumorais positivas de HPV após irradiação em comparação com as células negativas para HPV [40]. Foi demonstrado que os pacientes HNC localmente avançado HPV positivos mostraram significativamente maior resposta patológica completa em comparação com casos negativos HPV submetidos a um regime de quimioterapia [41]. Numerosos estudos têm relatado a detecção de DNA do HPV em CECP com taxas variáveis, as técnicas de detecção incluído hibridação in situ e hibridação Southern blot (métodos de sensibilidade inferiores) ou PCR (métodos de alta sensibilidade) [42]. Além disso, os métodos usados ​​para a amostragem e armazenamento também variam. A falta de procedimento padronizado e clinicamente relevante universalmente aceitável para a detecção do HPV tem levantado preocupações sobre a sua aplicação na prática clínica de rotina. Nosso estudo, pela primeira vez, avaliou a aplicabilidade do ensaio HC2 em amostras clínicas de casos HNC de NE Índia. Propomos que Captura Híbrida 2 (HC2) ensaio, que está aprovado pela Food and Drug Administration (FDA, EUA), para a detecção de HPV-RH em espécimes clínicos cervical, também pode ser utilizado para a detecção de HPV-RH em espécimes de HNC. Devido à natureza semi-quantitativa de ensaio HC2 pode ter pedido de avaliação prognóstica de hr-HPV em pacientes HNC.

Nós usamos E6 nested multiplex PCR (nmPCR) para genotipagem do HPV, e encontrou HPV-16 em 81,81 % (N = 27) e HPV-18 em 18,18% (n = 6) do (n = 33) casos positivos HR-HPV, que é 31,13% dos pacientes HNC (33/106). Nossos dados estudo é apoiada por estudos anteriores da Índia, que haviam encontrado DNA do HPV na faixa de 22% a 73% nos casos de câncer oral [43-45]. Entre (n = 33) dos casos de HPV de HR, encontramos (n = 27) do HPV 16 em que 70,37%, 14,82%, 7,41%, 7,41% e (n = 7) de HPV-18 em 83,33%, 16,66%, 0 %, e 0% de cavidade oral, orofaringe, laringe e hipofaringe pacientes de cancro, respectivamente. Nosso estudo mostra maior HPV-16, 18 taxa de infecção em comparação com estudos anteriores da Índia [43-46]. Descobrimos que a localização de cancro orofaríngea em comparação com outros locais de tumor mostrou risco significativo de infecção por HPV de alto risco. Nossos dados é suportada pelo estudo anterior, em que foi encontrado para ter associação de câncer de orofaringe com a infecção por HPV de alto risco [47]. Epidemiologia do carcinoma HPV positivo orofaringe de células escamosas (OPSCC) são distintos dos HPV negativos e são caracterizados por idade mais jovem e fortemente associada ao comportamento sexual. HPV associado câncer de orofaringe (HPV-OPC) está crescendo em incidência e tem características clínicas, patológicas, moleculares e epidemiológicas distintas [38]. A diferença nas nossas observações com outros estudos pode ser atribuída a diferentes metodologias, variação étnico, locais de tumor etc [48]. Nossos dados mostram que mascar noz de betel, o tabagismo pode não ter associação significativa com a infecção hr-HPV. A positividade hr-HPV nos casos HNC era pequeno, que possam confundir o papel de noz de betel, fumando como fatores de risco para a infecção por HPV. Foi demonstrado por Ang et al (2010) que a progressão do câncer de orofaringe positivo HPV pode não estar fortemente associado com o tabagismo [47]. Mas outros estudos mostraram associação do tabaco com a infecção pelo HPV [49].

Observamos em nossos dados que chewers tabaco têm significativamente maior de infecção hr-HPV, posando de mascar tabaco como um fator de risco para a infecção pelo HPV HR. A concentração de nicotina e a sua duração de exposição à célula podem alterar o antigénio mediada por vias de sinalização [50]. A alteração do antigénio mediada por eventos de sinalização nas células do sistema imunológico pode ser o mecanismo pelo qual a nicotina ou outros constituintes do cigarro inibir a resposta de célula para a infecção viral /bacteriana [50]. Sugerimos que o tabaco associado carcinógenos podem induzir alterações em eventos genéticos que podem levar a alterações moleculares, tornando o indivíduo suscetível à infecção hr-HPV.

No presente estudo infecção hr-HPV foi encontrado para ser significativamente associada com o consumo de álcool nos casos HNC. Oh et al (2014) demonstraram recentemente que a carga hr-HPV e consumo de álcool podem ter um efeito sinérgico sobre a infecção hr-HPV e sua persistência no cancro do colo do útero [51]. Outro estudo recente mostrou que a ingestão de álcool foi associado a riscos significativamente aumentados para a infecção por HPV em homens [52]. Esta apoia a nossa observação de que a ingestão de álcool, pode actuar como um factor de risco para a infecção por HPV.

etanol, um dos principais constituintes de bebidas alcoólicas, é oxidado em acetaldeído por desidrogenase de álcool (ADH). O acetaldeído é metabolizado em acetato por aldeído desidrogenases (ALDH). Má higiene oral e tabagismo pode alterar a flora bacteriana oral, o que pode levar ao aumento da produção de acetaldeído [53]. Em modelos animais, acetaldeído foi provado como cancerígenas e mutagénicas [54]. Fatores genéticos, tais como ADH /polimorfismo ALDH2, a falta de ALDH2 ou baixos níveis de expressão de ALDH2 e hábitos de consumo de álcool foi relatada a ser associado com maior risco de câncer de cabeça e pescoço [55, 56].

O álcool pode também modificar a resposta imune inata em forma dependente da dose, que pode resultar numa resposta inflamatória alterada a infecção [57]. Desde resposta imune desempenha papel importante na infecção pelo HPV, o consumo de álcool pode ajudar na evasão da resposta imune para a infecção pelo HPV. componentes de imunidade sistêmicas como nível sérico de citocinas foram encontrados para ser aumentado em casos de infecção persistente por HPV [58].

Nosso estudo fornece evidências sobre aumento da vulnerabilidade para a infecção hr-HPV em chewers tabaco e bebedores de álcool principalmente em pacientes com câncer de cavidade oral. Nossa observação é bem suportado por estudos anteriores HNC da Índia e em todo o mundo [14]. A partir do número total de casos em que o tabaco de mascar e tabagismo foram analisados ​​com o HPV, as associações não foram significativas (Tabela 2), como parte importante da população eram HPV casos positivos e negativos HPV eram menos. Mas quando os hábitos de mastigação foram tomadas ao longo de casos positivos para HPV sozinho, foi encontrada associação significativa (Tabela 4), provando que mascar tabaco e consumo de álcool agem como fatores de risco para a infecção pelo HPV. Mais número de cancros orofaríngeos em nosso estudo poderia ter trazido uma melhor avaliação de álcool e tabaco associação com hr-HPV relacionados ao câncer. Nós focado principalmente na detecção de DNA do HPV HR, empregando metodologia mais recente, como ensaio HC2 e E6-nmPCR que são menos usados ​​em HNC. O consumo de álcool e tabaco de mascar /fumar são hábitos generalizadas na população indígena do Nordeste. Nós sentimos que a sensibilização de massa através de programas de sensibilização triagem cum sobre fatores de risco HNC pode ajudar na redução da incidência HNC na população NE no futuro.

Nós concluímos de nossa dados do estudo atual que a infecção hr-HPV pode ser mais prevalente em chewers tabaco, consumidores de álcool e agem como fatores de risco para infecção por HPV em casos HNC do Nordeste da Índia. Captura Híbrida 2 (HC2) ensaio devido ao seu alto valor preditivo negativo, especificidade e sensibilidade pode ser aplicado para a detecção do HPV HR em amostras clínicas HNC.

Reconhecimentos

Nós reconhecemos a cooperação dos pacientes cabeça e pescoço que participaram do estudo. Agradecemos também Madhumita Dey e Anindita Dutta pelas sugestões valiosas e edição do manuscrito.