Abstract
O tabagismo é um fator de risco estabelecido para cânceres de esôfago. Sim proteína-1 associado (YAP1), o factor de transcrição chave da via Hipopótamo mamíferos, tem sido relatada como sendo um factor oncogénico para muitos cancros. No presente estudo, nós achamos administração de nicotina pode induzir a translocação nuclear e activação de YAP1 em CICAc. Consistentemente, foi observada translocação nuclear e activação de YAP1 por knockdown de CHRNA3, que é um regulador negativo da sinalização de nicotina em brônquico e as células cancerosas esofágicas. administração de nicotina ou o esgotamento CHRNA3 aumentou substancialmente proliferação e migração em células de câncer de esôfago. Curiosamente, descobrimos que YAP1 interage fisicamente com os nAChRs, e os nAChRs-sinalização dissocia YAP1 a partir do seu complexo de regulação negativa composto com α-catenina, β-catenina e 14-3-3 no citoplasma, levando a sobre-regulação e a translocação nuclear de YAP1. Este processo provavelmente requer a activação de PKC, PKC como inibidor específico enzastaurina pode bloquear nicotina induziu activação YAP1. Além disso, encontramos sinalização nicotina também inibe a interacção de YAP1 com P63, o que contribui para o efeito inibitório da nicotina sobre a apoptose. Usando a análise imuno-histoquímica observamos regulação positiva de YAP1 em uma parcela significativa de amostras de câncer de esôfago. Consistentemente, encontramos uma associação significativa entre YAP1 regulação positiva e tabagismo nas amostras de câncer de esôfago clínicos. Juntos, estes resultados sugerem que nAChRs ativados a nicotina via de sinalização que ativa ainda YAP1 desempenha um papel importante no desenvolvimento do câncer de esôfago, e este mecanismo pode ser de uma importância geral para a carcinogênese de cancros relacionados com o tabagismo.
citação: Zhao Y, Zhou W, Xue L, Zhang W, Zhan Q (2014) a nicotina ativa YAP1 através nAChRs Mediated Sinalização na esofágico cancro de células escamosas (CCEE). PLoS ONE 9 (3): e90836. doi: 10.1371 /journal.pone.0090836
editor: Xin-Yuan Guan, The University of Hong Kong, China
Recebido: 09 de janeiro de 2014; Aceito: 06 de fevereiro de 2014; Publicação: 12 de março de 2014
Direitos de autor: © 2014 Zhao et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Este estudo foi apoiado pelos fundos do Programa de Pesquisa 973 National Key Fundamental da China (2009CB521801) ea National Science Foundation Natural da China (81.021.061). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
cigarro está associada com um risco aumentado de ambos carcinoma de células escamosas e adenocarcinoma do esófago [1] – [3]. Descobertas recentes sugerem que a nicotina e os seus derivados, tais como NNN (N-nitrosonornicotina) e NNK ((4-metilnitrosamino) -1- (3-piridil) -1-butanona) pode dirigir activar os receptores nicotínicos da acetilcolina (nAChRs) para estimular o crescimento e angiogénese e suprimir a apoptose induzida por drogas das células do cancro [4]. receptores de acetilcolina nicotínicos (nAChR) são uma família de canais de iões portão de ligandos que funcionam como os principais reguladores da sinalização nicotínico e acetilcolinérgicos nas células. a-nAChR e β-nAChRs são os nAChRs mais comuns. expressões desequilibrada dos diferentes subtipos de nAChR em que as células contribuem para a patogénese de doenças tais como o cancro [4]. Os nAChRs são também conhecidos para regular a adesão celular e migração através das suas interacções com rapsyn e herparansulphate proteogly pode tais como agrina [5] -. [7]
A sobre-expressão e aumento de localização nuclear do factor de transcrição via hipopótamo YAP1have sido observada em vários tipos de cancros humanos, incluindo cânceres de fígado, câncer de cólon, câncer de ovário, câncer de pulmão e câncer de próstata [8]. E amplificações de locus do gene YAP1 são observados em ependimomas intracranianos, carcinomas de células escamosas orais e meduloblastomas [8]. YAP1 foi relatado para ser o gene do câncer de condução no carcinoma hepatocelular humano (HCC) e câncer de mama 11q22 amplicons [9], [10]. Além disso, YAP1 estava determinado a ser um marcador prognóstico independente para sobrevida global de carcinoma hepatocelular e carcinoma de células escamosas do esôfago [11], [12].
Dasgupta et al. nicotina relatou pode induzir a regulação de XIAP e Survivin (BIRC5) em Non-Small Cell Lung Cancer para inibir a apoptose induzida por drogas quimioterápicas [13]. E nicotina é conhecido por induzir a expressão de CTGF (factor de crescimento do tecido conjuntivo) em fibroblastos gengivais e em células do ligamento periodontal, que contribui para a patogénese da fibrose periodontal [14]. Notavelmente, survivina e CTGF são dois dos genes a jusante conservadas regulados pelo factor de transcrição YAP1 da via Hipopótamo [8], [15]. Recentemente, Yu et al. regulação da via relatado Hipopótamo-YAP por sinalização do receptor acoplado à proteína G [15]. E β2-nAChR foram relatados para estar fisicamente associadas com a proteína G, αG indutor regulada por proteína de neurites para crescimento 1, e G canal activado por proteínas K (+) 1, indicando uma possível ligação entre os nAChRs de sinalização e vias de proteína G celulares [ ,,,0],16]. Além disso, foi relatado YAP1 ser regulada positivamente em cancros esofágicos e é determinado como um oncogene no cancro esofágico [11], [17]. Assim, buscou-se explorar a possível conexão entre a exposição à nicotina e ativação YAP1 em câncer de esôfago neste estudo.
Métodos
Tissue espécimes
Nossas amostras de tecido CICAc de 83 pacientes com carcinoma epidermóide de esôfago patológica estágio T3 foram recolhidos. Os pacientes foram recrutados consecutivamente na Academia Chinesa de Ciências Médicas Hospital do Câncer (Pequim, China). No recrutamento, foi obtido consentimento informado de cada sujeito. As autorizações foram em forma escrita, cada paciente foi informado de assinar o consentimento para o uso de suas amostras de tecido adquiridas de uma cirurgia para a investigação científica antes de as amostras foram colhidas. Nós preservado tabela de consentimento na nossa base de dados médicos, ea comissão de ética /IRB de Cancer Institute da Academia Chinesa de Ciências Médicas aprovou o processo de aprovação e do estudo.
Cultura de Células e Transfecção e administração de drogas
linhas celulares CICAc humano foram cultivadas em meio RPMI 1640 suplementado com soro fetal bovino a 10%, a 37 ° C sob 5% de CO2 e humidade saturada. linhagens de células de câncer de esôfago KYSE510, KYSE30 foram fornecidos generosamente pelo Dr. Yutaka Shimada (Universidade de Kyoto). Para as transfecções transientes de plasmídeo e siRNA, as células foram cultivadas em placas de 60 mm em 50-90% de confluência e transfectadas com 200 p mol de siRNA usando Lipofectamine 2000 (Invitrogen). Três discrição siRNAs alvejado a CHRNA3 foram projetados e encomendado a partir de Invitrogen, TureClone plasmídeo de tGFP-CHRNA3 foi comprado de OriGene. As células foram transfectadas com o plasmídeo tGFP-CHRNA3 ou CHRNA3 siRNA usando Lipofectamine 2000 (Invitrogen) de acordo com as instruções do fabricante. Meio fresco foi adicionado 6 horas após a transfecção. Para a administração de nicotina, as células foram incubadas em meio contendo 80 nM de nicotina durante 48 horas ou mais. Para administração enzastaurina, Enzastaruin foi adicionado ao meio na concentração de 500