Abstract

Fundo

fator de crescimento transformador

(TGF) -β

via de sinalização, pode atuar como um supressor tumoral e como promotor de tumor em câncer pancreático, dependendo do estágio do tumor e contexto celular. via de TGF-β tem sido objecto de investigação intensiva como um alvo terapêutico potencial no tratamento do cancro. Trabalhamos com a hipótese de uma correlação entre a expressão TGF-βR2 /SMAD4 no tumor, plasma nível ligando TGF-β1, variação genética em

TGF-B

via e prognóstico de câncer pancreático.

Método

Foram examinados βR2 TGF-e SMAD4 expressão da proteína em biópsia ou amostras cirúrgicas de 91 pacientes com adenocarcinoma ductal pancreático (PDAC), utilizando imuno-histoquímica. nível de plasma do TGF-β1 foi medida em 644 pacientes com PDAC utilizando ELISA. Vinte e oito polimorfismos de nucleotídeo único (SNP) do

TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, TGF-βR1, TGF-βR2

, e

SMAD4

genes foram determinados em 1636 pacientes com PDAC usando o método Sequenom. Correlação entre a expressão da proteína no tumor, nível de plasma TGF-β1 e genótipos com sobrevida global (OS) foi avaliada com modelos de regressão proporcional de Cox.

Resultados

O nível de expressão de TGF-βR2 e SMAD4 como um marcador independente não foi associada a OS. No entanto, os pacientes com ambos coloração nuclear de baixa de TGF-βR2 e coloração nuclear alta de SMAD4 pode ter melhor sobrevida (

P

= 0,06). A média eo nível mediano de TGF-β1 foi 15,44 (DP: 10,99) e 12,61 (intervalo interquartil: 8,31-19,04) ng /ml, respectivamente. Pacientes com doença avançada e na gama quartil superior do nível de TGF-β1 tinha reduzido significativamente a sobrevida do que aqueles com níveis baixos (

P

= 0,02). A associação significativa da

foi observada SMAD4

rs113545983 SNP com a sobrevida global (

P Art 0,0001).

Conclusão

Nossos dados fornece informação de base valiosa Quanto à via de TGF-β em cancro do pâncreas, que pode ser utilizada em ensaios clínicos de terapia-alvo. nível de plasma de alta TGF-β1,

SMAD4

SNP ou proteína tumoral TGF-βR2 /SMAD4 expressão pode sugerir uma dependência desta via em pacientes com cancro do pâncreas avançado

Citation:. Javle M, Li Y, Tan D, Dong X, Chang P, Kar S, et al. (2014) Biomarkers de TGF-β via de sinalização e prognóstico do cancro do pâncreas. PLoS ONE 9 (1): e85942. doi: 10.1371 /journal.pone.0085942

editor: John Souglakos, University Hospital Geral de Heraklion e Laboratório de Tumor Cell Biology, Faculdade de Medicina da Universidade de Creta, Grécia |

Recebidas: August 12, de 2013; Aceito: 04 de dezembro de 2013; Publicação: 20 de janeiro de 2014

Direitos de autor: © 2014 Javle et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado por uma bolsa da Imclone Corporação /Eli Lilly e por fundos dos doadores, uma recolha de fundos a partir de pacientes com câncer de pâncreas ou de suas famílias. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

Conflito de interesses:. Esta pesquisa foi parcialmente financiada pela Imclone Inc (agora Eli Lilly). Os autores confirmam que este patrocínio financiamento não altera a sua adesão a todas as políticas de PLoS One sobre os dados e materiais de compartilhamento.

Introdução

fator de crescimento transformador β (TGF-β) desempenha um papel vital papel na paragem do ciclo celular, apoptose, homeostase, a cicatrização de feridas e de regulação imunitária. No caso dos cancros, a sinalização de TGF-β desempenha um duplo papel dependente do contexto, tanto como um supressor do tumor em estágios iniciais da doença e como um promotor de tumores em cancros estabelecidos [1]. Existem três isoformas TGF-p, TGF-β1, 2 e 3. Destes, o TGF-β1 é o mais abundante nos seres humanos. sinalização de TGF-β ocorre em várias etapas, começando com a activação e libertação de TGF-β1 seguido por ligação a três receptores de elevada afinidade (TGF-βR1, 2 e 3). receptores de TGF-βR1 e TGF-βR2 dimerizar após ligação a TGF-β na superfície da célula [2]. Estes receptores, quando sequencialmente activada fosforila uma família de factores de transcrição, os SMADs. Um estudo recente exome sequenciamento indicou que

TGF-βR2

é um dos 16 genes mais comumente mutado no cancro pancreático [3]. Smad2 e Smad3 são ativados por TGF-βR1 e se ligam ao parceiro comum SMAD4. SMAD6 e SMAD7 SMADs são inibidores que bloqueiam a fosforilação de Smad2 ou Smad3. O complexo SMAD activado a translocação para o núcleo regula a transcrição de diversos genes de TGF-p-dependente que pode ter um papel dependente do contexto, tumor-supressor ou progressiva. Além disso TGF-β ‘canónica’ via de sinalização, existem uma variedade de vias de sinalização intracelular que são activados por TGF-β independentemente da activação ou Smad2 Smad3 [4]. sinalização de TGF-β é activado em vários cancros humanos, conhecida e é, portanto, uma área de investigação activa [5].

via de TGF-β é uma das vias de sinalização 12 centrais envolvidos no cancro [6] pancreático. A mutação em pelo menos um dos genes da via de TGF-β ocorre em 100% dos tumores pancreáticos. LOH em 18q gene onde está localizado SMAD4 ocorre em 90% de cancros do pâncreas enquanto que as deleções de genes e a perda de expressão da proteína ocorre em 50% [7], [8]. Perda de SMAD4 (DPC4) foi usado para determinar a origem do pâncreas em casos de metástases de primário desconhecido. Acredita-se que a sinalização de TGF-β comprometido pode contribuir para a progressão do tumor, em vez de a sua iniciação [4]. No entanto, o real papel da SMAD4 no câncer de pâncreas ainda é considerado como controverso. Por exemplo, Biankin

et al

demonstraram que a expressão SMAD4 representaram um pior prognóstico em caso de doença cirurgicamente ressecável; pacientes com SMAD4 superexpressão não beneficiar de ressecção cirúrgica em seu estudo [9]. Por outro lado, os dados da autópsia rápidas sugerem que a perda SMAD4 está associada com doença disseminada [10]. Existem dados limitados sobre receptor TGF-β e expressão SMAD4 ou o seu significado prognóstico em pacientes com câncer pancreático avançado. Além disso, não há dados sobre o nível plasmático TGF-β1 em câncer pancreático e sua correlação com o prognóstico.

Variações genéticas dos genes da via TGF-beta foram relatados na mama, ovário, cólon, não-pequenas células pulmão e cancros do cólon e pode prever a suscetibilidade ao câncer ou ter significado prognóstico [11] – [15]. No entanto, não há dados para o nosso conhecimento em relação ao mesmo em câncer pancreático. Nossa hipótese é que a activação da via TGF-β é comum em câncer de pâncreas e variações genéticas da via, o nível de TGF-β1 de plasma e tumor TGF-βR2 ou expressão SMAD4 estão associados com a evolução clínica do câncer de pâncreas. A identificação de uma coorte casos de câncer de pâncreas em que a via é activado pode potencialmente levar a seleção de pacientes para a terapia de TGF-β-alvo.

Métodos

população de pacientes e Biospecimens

Todos os pacientes com adenocarcinoma patologicamente confirmada pancreático ductal (PDAC) e que assinou um consentimento informado para a revisão de prontuários e foram incluídos estudos correlatos para a investigação. O Conselho de Revisão Institucional do MD Anderson Cancer Center aprovou o estudo. Clínica informação sobre data do diagnóstico do paciente, data de morte ou último acompanhamento, estado ressecção do tumor, estágio do tumor clínica e nível de antígeno de carboidrato soro 19-9 (CA19-9) no momento do diagnóstico foi recuperado a partir de pacientes de registros médicos. As amostras de tecido, DNA de plasma e tumor foram recuperados de Bancos de Tecidos MD Anderson.

Imunohistoquímica

A imuno-histoquímica foi realizada em formalina parafina fixo (FFPE) seções incorporado. Os anticorpos primários contra TGF-βR2 (Novus Biologicals, LLC, Littleton, CO) e SMAD4 (Proteintech Group, Inc. Chicago, IL) foram usadas em 1:350 e 1:450 diluições, respectivamente. O complexo anticorpo foi detectado utilizando o estojo de ABC (Vector Laboratories, Burlingame, CA). coloração nuclear e citoplasma foi gravada para ambos os marcadores. A intensidade da coloração foi pontuada como 0 para negativo, para uma fraco, para o Intermediário 2, 3 e para a coloração forte. A percentagem de células com coloração positiva foram marcados como 0 para nenhum, um para 1-50%, e 2 para 50%. A pontuação final coloração foi o produto das pontuações de intensidade e percentuais. Cada lâmina foi avaliada por dois investigadores (Drs. Dongfeng Tan e Yanan Li) e dados consistentes de ambos os avaliadores foram usados ​​na análise estatística final.

nível plasmático de TGF-β1

nível de Plasma de TGF-β1 foi medida através da monitorização imunitária do núcleo Laboratório de MD Anderson usando o MSD® 96 poços MULTI-ARRAY®Human kit de TGF-β1 Ensaio (Meso Scale Discovery Rockville, MD). Todas as amostras foram analisadas em duplicado e cada ensaio tinha um positivo e um controlo negativo. A variância das amostras em duplicado foi inferior a 10%. Todos os pacientes envolvidos neste ensaio foram recrutados para um estudo de caso-controle no MD Anderson Cancer Center [16], [17]. As amostras de sangue foram colhidas antes do tratamento do cancro ou no momento do diagnóstico em 95% dos casos. As amostras de plasma foram armazenadas a -80 ° C sem descongelar antes da utilização neste ensaio.

A genotipagem

O DNA foi extraído a partir de linfócitos periféricos na maioria das amostras, e a partir de FFPE em 27 amostras. A genotipagem utilizado o método Sequenom como previamente descrito [18]. Um total de 28 SNPs do

TGF-β1

,

TGF-β2

,

TGF-β3

,

TGF-βR1

,

TGF-βR2

e

SMAD4

genes foram selecionados com foco na SNPs potencialmente funcionais, ou seja, SNPs na região codificadora (nonsynonymous ou sinónimo), região não traduzida (UTR), região promotor e locais de emenda, ou ins /del e quadro-shift SNPs. SNPs foram identificados a partir do banco de dados do NCBI SNP e banco de dados Cancer SNP500 ou através de revisão da literatura e análise funcional usando o software F-SNP (https://compbio.cs.queensu.ca/F-SNP/). Cerca de 10% das amostras foram analisadas em duplicado e dados inconsistentes foram excluídos da análise estatística final.

Análise Estatística

IHC níveis de TGF-p1 de pontuação e de plasma foram apresentados como média ± desvio padrão . A diferença média entre os grupos foi comparado pelo teste t de Student. As associações de estes marcadores e OS foram analisados ​​utilizando Kaplan Meier, teste log-rank e riscos proporcionais de Cox modelos com ajuste para sexo, raça, idade, estágio do tumor, e os níveis de CA19-9. Estes marcadores foram também analisados ​​como variáveis ​​categóricas utilizando a mediana ou quartis como valores de corte.

A distribuição dos genótipos foi examinado por Hardy-Weinberg com o teste do qui-quadrado do goodness-of-fit. Genótipo e do alelo freqüência dos SNPs foram determinados por contagem directa do gene. Os genótipos homozigotos e heterozigotos foram combinados, se a frequência do homozigoto foi muito baixa ou se ambos os genótipos teve a mesma tendência de efeito [por exemplo, menor sobrevida global (OS) em comparação com o grupo de referência]. A associação entre o genótipo e OS foi estimada utilizando a trama de Kaplan-Meier e teste log-rank. taxas de risco (HR) e intervalo de confiança de 95% (IC) foram estimados usando os modelos de riscos proporcionais de regressão multivariada de Cox. Todos os testes estatísticos software SPSS utilizado (SPSS Inc, Chicago, IL).

P valor

de 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. resultado positivo falso associada a múltiplos testes foi controlada pela correção Bonfferoni.

Resultados

A população do estudo foi identificado a partir de um estudo de caso-controle sobre o câncer de pâncreas realizados na Universidade do Texas MD Anderson Cancer Center de 1999 a 2012 [16], [17]. Foram identificados três grupos de pacientes: 1) 120 pacientes tiveram biópsia adequada ou amostras cirúrgicas para a imuno-histoquímica; 2) 644 pacientes tiveram amostras de sangue coletadas para a medição de plasma TGF-β1; e 3) 1636 pacientes tiveram amostras de DNA adequados disponíveis para a genotipagem. As características demográficas e clínicas dos três populações do estudo estão descritos na Tabela 1. A idade, sexo e distribuições raciais /étnicas dos pacientes eram representativas da população de pacientes MD Anderson. A idade média é de 60,6, 61,4 e 62,1 anos para os doentes incluídos no IHC, ELISA e genotipagem estudo, respectivamente. Homens consistia de 72,5%, 61,5% e 59,0% das três populações de estudo. Mais de 85% dos sujeitos do estudo eram brancos não-hispânicos. Quase 74% dos pacientes do grupo IHC tinha doença metastática e, portanto, as amostras de tecido utilizados para IHC eram amostras de biópsia na maior parte [Fase II: 8 (8,8%); Fase III: 16 (17,6%); Estágio IV: 67 (73,6%)]. Informações sobre o grau do tumor estava disponível em 60 amostras dos quais, 20 foram moderadamente diferenciado e 40 foram mal tumores diferenciados.

Protein Expression

Um total de 91 amostras foram coradas para TGF- βR2 e SMAD4. Avaliação quantitativa foi realizada em 88 amostras de TGF-βR2 e 81 amostras para SMAD4 (Fig. 1). A coloração nuclear e citoplasma foi observado, respectivamente, em 81 (92%) e 87 (99%) amostras de TGF-βR2 e em 47 (58%) e 72 (89%) amostras de SMAD4 (Fig. 1). A pontuação total de IHQ para qualquer marcador não foi associada com OS (dados não mostrados). Os pacientes com uma pontuação de coloração nuclear superior para TGF-βR2 tinha um sistema operacional relativamente mais curto do que aqueles com uma pontuação mais baixa (tempo de sobrevida média [MST] 12,0 contra 8,6 meses, a Tabela 2), mas essa diferença não foi estatisticamente significativa. coloração nuclear de SMAD4 estava presente com maior frequência (16/20, 80%) tumores em pouco diferenciados do que em tumores moderadamente diferenciados (19/40, 47,5%) (

P

= 0,016, χ

2 de teste ). Além disso, quando TGF-βR2 e expressão nuclear SMAD4 foi analisada em combinação, observamos que os pacientes com baixa expressão de TGF-βR2 e alta expressão de SMAD4 tinha um sistema operacional muito mais tempo do que outros (Fig. 2), embora essa diferença não foi estatisticamente significativa após o ajuste para outros preditores clínicos (Tabela 2)

a:. expressão nuclear positiva de TGF-βR2 em um adenocarcinoma ductal moderadamente diferenciado do pâncreas (Ampliação: 10 × 40). B: expressão nuclear positiva de SMAD4 no adenocarcinoma ductal moderadamente diferenciado do pâncreas (Ampliação: 10 × 40).

A coloração nuclear marcar 0-1 é definida como baixa para TGF-βR2 e uma pontuação 0 como baixa para SMAD4. linha vermelha: TGF-βR2 é alta e SMAD4 é baixa (HL); linha preta: tanto de alta (HH); linha verde: ambos são de baixo (LL); linha roxa: TGF-βR2 é baixa e SMAD4 é alta (LH). Os tempos de sobrevivência médios são 7,8, 8,6, 11,3 e 15,6 meses para os grupos HL, HH, LL e LH, respectivamente. Log-rank valores p do teste e os resultados da análise de regressão de Cox são apresentados na Tabela 2. Assim, a proporção de TGF-R2 /SMAD4 pode ser prognóstico, com valores baixos correspondente com um aumento da sobrevivência.

nível Plasma TGF-β1

nível de plasma do TGF-β1 foi medida em 644 pacientes. A média e o nível médio do TGF-β1 foi 15,44 (DP 10,99) e 12,61 (gama interquartil: 8,31-19,04) ng /ml, respectivamente. O nível de TGF-β1 era relativamente mais elevada em pacientes com tumor localizado do que aqueles com tumores avançados. A média ± DP de nível de TGF-β1 foi de 17,2 ± 14,3, 13,9 ± 8,7 e 15,5 ± 10,0 ng /ml, em pacientes com tumores localizados, localmente avançados e metastáticos, respectivamente (

P

= 0,02, ANOVA). No entanto, o nível de TGF-β1 não foi associada com OS em pacientes com tumor localizado (Tabela 3) ou em toda a população estudada (MST = 12,9 e 11,1 meses para aqueles nos quartis mais baixos em comparação com aqueles na gama de quartil superior,

P

= 0,78, teste de log-rank). No entanto, os pacientes com doença localmente avançado ou metastático e na gama de quartil superior do nível de TGF-β1 tinham reduzido significativamente a sobrevivência do que os seus homólogos (Tabela 3). TGF-β1 permaneceu como um preditor significativo em um modelo de regressão de Cox com ajuste para a demografia e outros fatores clínicos.

A genotipagem

A genotipagem foi realizada em 1636 pacientes. A freqüência do alelo menor relatados e significado funcional potencial do 28 SNPs testados é descrito na Tabela 4. No alelo variante foi detectada por nove SNPs. Entre os seis SNPs comuns com menor frequência alélica superior a 5%, seguido de três a Hardy Weinberg (EHW) e três desviado do EHW (Tabela 2). A distribuição dos genótipos e tempo de sobrevivência global pelo genótipo dos 19 SNPs informativos são apresentados na Tabela 5. A associação significativa da

foi observada SMAD4

rs113545983 SNP com OS (Painel A, Fig. 3), e a associação foi mais forte em doentes com doença avançada (Painéis C e D, Fig. 3) do que aqueles com doença localizada (painel B, Fig. 3). O alelo G mutante do SNP rs113545983 permaneceu como um preditor significativo para a morte no modelo de regressão Cox após o ajuste para estágio e status de ressecção entre todos os pacientes (HR: 1,54, 95% CI: 1,21-1,96,

P Art 0,001). Nenhum outro SNPs mostraram associação significativa com o OS. rs2248048 TGF-βR2 SNP teve uma fraca associação com OS sem significância estatística (

P

= 0,09, teste logarítmico)

Linha azul:. genótipo AA; linha verde: AG /genótipo GG. genótipo AA foi associado com um aumento da sobrevivência em toda a população estudada. Na análise de subgrupo, essa diferença de sobrevivência foi mais relevante para estágio avançado da doença. Os valores de P por teste de log-rank são 0,0001, 0,369, 0,007 e 0,031 para os painéis A, B, C e D, respectivamente

Discussão

o nosso objetivo no presente estudo foi investigar biomarcadores da via TGF-β que poderia ter valor prognóstico e do valor potencial preditivo para terapia-alvo com inibidores. Nós interrogado o biorrepositório tumor no MD Anderson Cancer Center e examinou material de arquivo, incluindo DNA, plasma e amostras de tecido tumoral de SNPs, nível plasmático TGF-β1 e expressão da proteína TGF-βR2 e SMAD4. Observou-se que pacientes com baixa expressão de TGF-βR2 e alta expressão de SMAD4 em seus tumores tinham um sistema operacional significativamente mais do que outros subgrupos do nosso estudo. Notamos também que pacientes com doença avançada e nível de plasma de alta TGF-β1 tinha reduzido significativamente a sobrevida do que aqueles com um menor nível de TGF-β1. Finalmente, nós detectamos uma associação significativa de

SMAD4

SNP rs113545983 com a sobrevida do paciente. Estas observações fornecem a informação de linha de base valiosas sobre a via de sinalização de TGF-β em cancro do pâncreas, o qual pode ser utilizado no futuro alvo ensaios clínicos de terapia. A via de sinalização de TGF-β inclui os ligandos e os receptores; e as interacções ligando-receptor para conduzir a transdução de sinal através de SMADs. análise anterior IHC mostrou a presença de ligando a TGF-β1, TGF-β2 e TGF-β3 em células cancerosas PDAC e a presença de TGF-β2 foi associado com tumor estádio avançado [19]. ARNm de TGF-βR2 foi expresso na maioria das células cancerosas e aumentar os níveis de TGF-βR2 foi sugerido ter um papel na regulação do crescimento de células de cancro pancreático humano [20].

TGF-β2R

e

gene SMAD4

foi mutado em 4% e 50% do PDAC humano, respectivamente [21]. A falta de expressão SMAD4 no tumor tem sido associada com a doença mais agressivo [22]. Existem dados muito limitados que investigam o valor prognóstico de proteínas da via de TGF-β em pacientes com câncer pancreático avançado. Embora nós não encontramos uma correlação significativa entre SMAD4 e expressão TGF-βR2 individualmente com prognóstico, observou-se que TGF-β2R e SMAD4 expressão da proteína foi detectada em 81% e 47% dos tumores e pacientes com baixa expressão de TGF-βR2 e alta expressão de SMAD4 teve um OS significativamente mais do que outros subgrupos do nosso estudo. Hua et al, relataram resultados semelhantes em um estudo retrospectivo menor de pacientes com câncer pancreático avançado [23]. Um estudo prévio da nossa instituição sugeriu que a perda SMAD4 correlaciona-se com um resultado adverso em pacientes com localmente avançado do câncer de pâncreas receber gemcitabina, oxaliplatina e cetuximab [24]. Como mencionado anteriormente, a perda SMAD4 foi associada a disseminação da doença em casos localmente avançados e metastáticos de câncer de pâncreas por Iacobuzio-Donahue, et al em uma série de autópsias [10]. Por outro lado, uma meta-análise baseada em literatura e de biomarcadores em câncer pancreático operado não apoiou o valor prognóstico da SMAD4 na doença cirurgicamente resectable [25]. Estes resultados são consistentes com um papel dependente do estágio da via TGF-β.

Além disso, verificou-se que os pacientes com doença avançada e nível de plasma de alta TGF-β1 tinha reduzido significativamente a sobrevida do que aqueles com menor TGF- nível β1. Esta associação não foi observada em pacientes com doença localizada. Um estudo anterior mostrou que a falta de expressão TGF-β1 em tecidos tumorais foi associada com a sobrevivência pós-operatória aumentou [19]. A razão para a associação entre o elevado nível de plasma TGF-β1 e baixa sobrevida no estágio avançado da doença (e não com doença em estágio inicial) não é clara. No entanto, estes resultados são consistentes com os dados pré-clínicos que sugerem que a perda da resposta inibidora de crescimento de sinalização de TGF-β varia directamente com a fase malignas do tumor e as formas mais agressivas na verdade mudar para autócrina e /ou parácrina crescimento estimulado por TGF- β. Os tumores também podem secretar TGF-β1 conduzindo a imunidade anti-tumor alteradas [26], [27]. Para nosso conhecimento, não existem dados anteriores que investigam o papel prognóstico do nível plasmático TGF-β1 em câncer pancreático. Os estudos prévios na mama, da próstata, da bexiga e cancro esofágico indicam uma correlação entre nível elevado de TGF-β1 plasma e prognóstico pobre [28] – [31]. Coerência com esses relatórios e o tamanho da amostra relativamente grande de nosso estudo contribui para a força de nossos achados. Por causa dos desafios no acesso aos tecidos-alvo em pacientes com doença avançada, os biomarcadores de plasma para a via de TGF-β1 pode ter um maior valor clínico.

variações genéticas da via de TGF-β têm sido associados a prognóstico e sobrevivência no cancro do pulmão por um outro estudo realizado na nossa instituição. Nos doentes em quimioterapia à base de platina; BMP2: rs235756 e Smad3: rs4776342 foram significativamente associados com a sobrevivência [15]. Há, no entanto, não há estudos em câncer de pâncreas correlacionando variações genômicas desta via com o prognóstico. Observamos uma associação significativa entre o

SMAD4

rs113545983 SNP, um SNP sinónimo, com OS neste estudo. Os pacientes portadores do alelo variante teve OS significativamente mais curtos e maior risco de morte após o ajuste para outros preditores clínicos. Este SNP é um sinónimo de SNP que não produz sequências codificadoras alteradas e substituição de aminoácido. No entanto, um estudo anterior demonstrou que um SNP sinónimo poderia resultar em um produto de proteínas com fármaco e inibidor de interacções alteradas 32. Deste modo, a consequência funcional por este SNP a ser investigada. É também possível que este SNP está em desequilíbrio de ligação com outros SNPs funcionais deste gene ou alguns genes importantes nesta localização de cromossomas. Novas investigações vão ajudar a determinar como este SNP está funcionalmente associado com o SMAD4 transdução e sobrevida em pacientes com câncer pancreático sinalização.

O estudo tem várias limitações. Devido à limitação de amostras de tecido e o SNP baixo MAF selecionada no estudo, não foi possível examinar a correlação entre os genótipos, o nível marcador plasma e marcadores de tecido. Nós só medido alguns marcadores seleccionados a partir de muitas moléculas que estão envolvidos nesta via de sinalização complexas. No entanto, os nossos dados fornecem informações valiosas sobre linha de base esta via expressão em cancro de pâncreas, a qual pode ser utilizada em ensaios clínicos de terapia-alvo. Com base nas conclusões acima, pode-se supor que a detecção de alto nível plasma TGF-β1, SMAD4SNP rs113545983 ou a razão de expressão da proteína tumor alta TGF-βR2 /SMAD4 pode sugerir uma dependência desta via em pacientes com câncer pancreático avançado e este subconjunto pode potencialmente beneficiar da terapia de TGF-β-alvo.