Abstract

câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) é a principal causa de mortalidade a nível mundial relacionada ao câncer e na maioria dos casos são diagnosticados em fases tardias da doença. Não há atualmente nenhum teste de rastreio de baixo custo para NSCLC, eo desenvolvimento de um teste de tal é um imperativo de saúde pública. Estudos recentes têm sugerido que computadorizada de tórax triagem tomografia de pacientes com alto risco de câncer de pulmão pode aumentar a sobrevida da doença, no entanto, a relação custo-eficácia de tal triagem não foi estabelecida. Nesta fase I /II Estudo biomarcador examinámos a praticabilidade da utilização de soro de miARN como biomarcadores de NSCLC utilizando RT-qPCR para examinar a expressão de 180 miARNs em soros de 30 doentes com NSCLC de tratamento naive e 20 controlos saudáveis. Curvas ROC (ROC) e a área sob a curva foram utilizados para identificar pares de miRNA diferencialmente expressos que poderão distinguir NSCLC de controles saudáveis. miARN candidatos seleccionados foram ainda validado em soros de animais de 55 doentes com NSCLC adicionais e 75 controlos saudáveis. O exame dos níveis de expressão de miRNA no soro de uma coorte multi-institucional de 50 indivíduos (30 pacientes com NSCLC e 20 controles saudáveis) identificados miRNAs diferencialmente expressos. A combinação de dois diferencialmente expressos miRNAs miR-15b e miR-27b, foi capaz de discriminar NSCLC de controles saudáveis, com sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo (VPP) e valor preditivo negativo (VPN) de 100% no conjunto de treinamento. Após mais testes em mais 130 indivíduos (55 NSCLC e 75 controles saudáveis), este par miRNA previu NSCLC com uma especificidade de 84% (IC 95% 0,73-0,91), sensibilidade de 100% (IC 95%; 0,93-1,0), VPN de 100% e VPP de 82%. Estes dados fornecem evidências de que miRNAs soro tem o potencial para ser biomarcadores sensíveis e de baixo custo para a detecção precoce do NSCLC. Testes adicionais em um estudo de fase III em biomarcador é necessário para validação destes resultados

citação:. Hennessey PT, Sanford t, Choudhary A, Mydlarz WW, ​​Castanho D, Adai AT, et ai. (2012) Serum microRNA Biomarcadores para a detecção de não-pequenas células do cancro do pulmão. PLoS ONE 7 (2): e32307. doi: 10.1371 /journal.pone.0032307

editor: Neeraj Vij, Johns Hopkins School of Medicine, Estados Unidos da América

Recebido: 01 de setembro de 2011; Aceito: 26 de janeiro de 2012; Publicado: 28 Fevereiro 2012 |

Direitos de autor: © 2012 Hennessey et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Esta pesquisa foi financiado em parte pelo Instituto Nacional de Saúde SBIR concessão # 1R43CA141786-01 e pelo Instituto Nacional de Saúde concessão # T32DC000027. Esses financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito. Esta pesquisa também foi financiada em parte pelo Asuragen, Inc. Os pesquisadores Asuragen, Inc. que participaram neste estudo não foram influenciadas pela gestão ou partes fora do seu grupo de pesquisa e teve o controle exclusivo sobre desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

Competir interesses: Dra. Elizabeth Mambo, Tiffany Sanford, Ashish Choudhary, e Alex Tamas Adai são funcionários da Asuragen, Inc. David Brown era um empregado da Asuragen no momento a pesquisa foi conduzida. Todos estes cientistas conduziu a pesquisa relatada nesta publicação como parte de seu trabalho com Asuragen. Não há nenhum benefício financeiro direto com os pesquisadores para a publicação deste manuscrito. Asuragen realiza uma análise interna independente de manuscritos de promover a integridade científica e gerir conflitos de interesses. David Brown atualmente é empregado por miRNA Therapeutics, Inc. Ele conduziu a pesquisa apresentada neste artigo, enquanto ele era um empregado de Asuragen, Inc. Sua participação na pesquisa apresentada neste manuscrito terminou depois que ele deixou Asuragen, Inc. A gerência e proprietários de miRNA Therapeutics não teve nenhum papel na pesquisa apresentada neste manuscrito ou qualquer influência sobre a preparação dos manuscript.This não altera a adesão dos autores para todos os PLoS ONE políticas sobre a partilha de dados e materiais.

Introdução

o cancro do pulmão é a principal causa de mortalidade a nível mundial relacionada ao câncer, e foi responsável por 1,38 milhões de mortes em 2008 [1]. O tabagismo é o principal fator de risco para câncer de pulmão, e estima-se que 20,8% dos adultos americanos são fumantes ativos [2]. Atualmente não há é validado, o custo-benefício teste de triagem que fornece de forma confiável o diagnóstico de câncer de pulmão. O desenvolvimento de um tal teste é um imperativo de saúde pública desde o diagnóstico e tratamento de cancro do pulmão precoce está associada com uma sobrevivência até 92% de 5 anos [3]. Uma vez que o cancro do pulmão, normalmente, não se tornam clinicamente aparentes até atingir um estágio avançado, maior do que 75% dos cancros do pulmão são diagnosticados após a doença já está localmente avançado ou metastásico [4]. Devido à vantagem de sobrevivência substancial para a detecção precoce, tem havido grandes esforços para detectar câncer de pulmão em um estágio inicial. O Projeto de Ação adiantada do cancro do pulmão (ELCAP) [5] eo Screening Trial Lung Cancer Nacional (NLST) [4] são estudos prospectivos que rastreadas fumantes de alto risco livres de sintomas, utilizando dose baixa tomografia computadorizada (TC) e os resultados preliminares mostram aumento capacidade de detectar fase precoce, lesões potencialmente curável [3]. O NLST foi interrompido no início de novembro de 2010, após os dados preliminares revelaram uma diminuição de 20,3% nas mortes por câncer de pulmão no braço rastreio CT do julgamento [4], [6]. No entanto, a alta taxa de falsos positivos de 96,4% observado no grupo de dose baixa CT é susceptível de prejudicar a adoção de tomografia computadorizada no rastreamento populacional [6]. Além disso, as perguntas sobre o custo-efetividade da triagem baseada no CT para câncer de pulmão permanecem sem resposta [7], [8], [9], [10], [11]. Além disso, existe alguma preocupação de que a exposição repetida a tomografia computadorizada de baixa dose podem expor os pacientes a níveis potencialmente nocivos da radiação que poderia resultar em mais cancros [12]. Embora a tomografia computadorizada pode identificar lesões suspeitas de câncer de pulmão, diagnóstico tecidual é a única maneira de determinar se uma lesão do pulmão é canceroso. Uma meta-análise de estudos de rastreio do cancro do pulmão 7 avaliadas dose baixa helicoidal tomografia computadorizada como teste de triagem para câncer de pulmão e descobriram que 14-55% dos pacientes de alto risco, com ≥40 anos e ≥20 pacote história de tabagismo ano, que teve uma lesão pulmonar suspeito em um CT de triagem foram finalmente encontradas lesões pulmonares benignos depois de passar por um procedimento invasivo para o diagnóstico de tecidos [13]. Esta alta taxa de procedimentos invasivos para doença benigna ressalta a necessidade de modalidades de rastreamento adicionais que podem, potencialmente, reduzir o número de pacientes que se submetem a procedimentos invasivos desnecessariamente.

Além dos grandes estudos que investigam a eficácia da triagem CT de pulmão cancro, numerosos grupos investigam activamente a possibilidade de biomarcadores à base de sangue para o cancro do pulmão de não pequenas (NSCLC) [14]. biomarcadores circulantes são atraentes para o rastreio do cancro uma vez que são análises de sangue que são minimamente invasivo, relativamente de baixo custo e facilmente reprodutível. microRNAs (miRNAs) de soro são candidatos atraentes para serem usados ​​como biomarcadores de câncer. Soro de miARN pode ser isolado de forma fiável a partir de soro e foi demonstrado ser altamente estável, mesmo em condições adversas, tais como ciclos múltiplos de congelação-descongelação e mudanças no pH [15]. estudos promissores recentes sugerem que miRNAs plasma poderia ser um passo útil no processo de triagem para câncer de pulmão, e para decidir quais pacientes para continuar a tela por tomografia computadorizada [16], [17], [18]. Num esforço para desenvolver ensaios de biomarcadores não invasivas que podem ser usadas para a detecção precoce do cancro do pulmão, foi avaliada a expressão de miARN extraída a partir de soro obtido a partir de pré-tratamento de doentes com NSCLC e indivíduos saudáveis ​​livres de câncer, para identificar biomarcadores baseados em miARN que são capazes de distinguir entre esses grupos.

Métodos

Amostra Coleção

as amostras utilizadas neste estudo foram coletados na Universidade de Rochester Medical Center pelo Dr. Stephen Ahrendt como parte de um estudo de rastreio do cancro do pulmão e no The Johns Hopkins Hospital, como parte de um protocolo de rastreio do cancro da cabeça e pescoço. informação clínica também foi coletada para cada paciente no momento da coleta de sangue. consentimento informado por escrito foi obtido de todos os pacientes antes da inscrição nos estudos, e os estudos foram aprovados pela Universidade de Rochester Medical Center Research Assuntos Review Board e do Conselho de Johns Hopkins Hospital Institutional Review, respectivamente. Sangue de pacientes com NSCLC e doadores saudáveis ​​foi recolhido em BD Vacutainer® Mais de tubos de soro de plástico e transformados em soro. Para todos os doentes com cancro, o sangue foi recolhido no momento do diagnóstico, mas antes da ressecção do tumor ou tratamento. O soro foi imediatamente armazenado a -80 ° C até ao momento de utilização. Após o processo de coleta foi concluída, todos os registros foram de-identificada para proteger a confidencialidade do paciente. Coortes foram compilados retrospectivamente a partir destes grandes colecções de amostras de soro em um esforço para compilar idade e sexo coortes combinados com história semelhante de fumar e com tumores em estágio inicial para pacientes com câncer (Tabela 1). Os pacientes foram definidos como tendo uma história de fumar se eles tinham uma história de forma consistente fumar por pelo menos um ano. A bicaudal teste exato de Fisher foi utilizado para determinar as associações entre Todas as amostras de soro são mantidos no banco de tecidos da Divisão Hospital Johns Hopkins da cabeça e da pesquisa do cancro do pescoço, usando um aplicativo de banco de dados web fornecido pela The Johns Hopkins Hospital Departamento de Pesquisa de Oncologia Sistemas de Tecnologia da informação (RITS) (https://www.rits.onc.jhmi.edu/). Os espécimes foram enviados para Asuragen, Inc., Austin TX para o isolamento de RNA e avaliação de miRNA e análise de dados.

Extração de soro RNA

Serum RNA (0,5 ml) foi extraído por a farmacogenómica Services Group Asuragen utilizando o Kit miRvana PARIS (Ambion, Austin, TX), de acordo com as instruções do fabricante. Depois da extracção orgânica, a fase aquosa foi carregado nas colunas fornecidas no kit. O ARN foi lavado e extraiu-se de acordo com as instruções do fabricante. O ARN foi quantificado usando o NanoDrop 1000 (NanoDrop, Wilmington, DE) e armazenadas a -80 ° C. rendimentos de ARN obtidos eram tipicamente 300-500 ng /ml de soro.

miRNA quantificação por RT-qPCR

Foram utilizados ensaios de TaqMan RT-qPCR (Applied Biosystems, Carlsbad, CA) para examinar a expressão de 181 miRNAs em RNA sérico de 50 indivíduos (30 pacientes com NSCLC, e 20 indivíduos saudáveis, livres de câncer). Todos os reagentes, primers e sonda foram adquiridos da Applied Biosystems. A transcrição reversa (RT) foi realizada em 10 reacções de UL, cada um contendo 1 × tampão de RT (Invitrogen, Carlsbad, CA), 250 uM de cada dNTP (GE Healthcare, Piscataway, NJ), 2 uL TaqMan iniciador de RT (Applied Biosystems, Carlsbad, CA), 4 unidades de inibidor de RNase (Promega, Madison, WI), 10 unidades de MMLV-RT (Invitrogen, Carlsbad, CA), e ~ 1 ng de ARN por reacção. A mistura de reacção foi incubada a 16 ° C durante 30 min, 42 ° C durante 1 hora e 85 ° C durante 5 min. qPCR reacções foram realizadas utilizando o bem-384 ABI Prism 7900 Sequence sistema de detecção HT (Applied Biosystems, Carlsbad, CA). Para o rastreio de miARN, um TA e qPCR reacção por amostra foi realizada, ao passo que para os testes de verificação miARN deixar rastreio, duas reacções de RT seguido por cada uma qPCR foram realizadas para cada uma das 130 amostras utilizadas para validação. Cada qPCR foi realizada em reacções de 15 uL contendo 1 × tampão de Taq Platinum (Invitrogen, Carlsbad, CA), MgCl 5 mM de

2 (Invitrogen), 250 uM de dNTP, 2 uL TaqMan microARN mistura de ensaio iniciador /sonda (Applied Biosystems, Carlsbad, CA), 1 × ROX, (0,5 unidades de Taq Platinum (Invitrogen, Carlsbad, CA), e de cDNA 2 uL da reacção de RT.

Análise de dados

para identificar biomarcadores candidatos para distinguindo NSCLC de controlos saudáveis, calculou-se primeiro a matriz de valor ΔCt para cada amostra, subtraindo o valor do número de ciclo limiar (Ct) para um miARN a partir do valor de Ct de outro miARN na mesma amostra. a abordagem matriz ΔCt de considerar o conjunto de todos os pares diferencialmente expressos miRNA embora computacionalmente pesado, mas tem a vantagem de obviando a necessidade de invocar normalizadores explícito. para os 181 miRNAs analisados ​​por amostra, cada um vector de amostra rendeu 16290 elementos (), aqui referidos como “diffpairs” miRNA. [19 ], [20] em seguida, calculados os valores de p desiguais variância t-teste e a AUC para a curva ROC para cada um dos diffpairs. O ponto de corte para cada ΔCt foi seleccionado para maximizar a soma de sensibilidade e especificidade. Candidatos pares de miARN para verificação de outro conjunto de amostras foram ainda seleccionados com base em uma sensibilidade e especificidade de, pelo menos, 80% cada. Estes critérios produziu um total de 140 diffpairs candidato miRNA (Figura S1). O ponto de corte utilizado para cada diffpair miRNA no conjunto de treinamento foi aplicado no conjunto de dados de validação.

Resultados

A fim de identificar diferencialmente expressos miRNA em NSCLC, inicialmente selecionados soros de pacientes com NSCLC 16 e 20 dadores saudáveis ​​para a expressão de 328 miARN utilizando RT-qPCR. Para evitar a detecção falsa, primeiro eliminado todos os miRNAs que não foram detectadas após 40 ciclos de qPCR em todas as amostras, deixando apenas 181 miRNAs. Consequentemente, nós limitado rastreio suplementar de soros de 30 pacientes com NSCLC e 20 indivíduos saudáveis ​​para apenas os 181 miRNAs que foram expressas em ou abaixo de 40 ciclos. Os pacientes foram pareados por idade, sexo e história de tabagismo. A bicaudal teste exato de Fisher usados ​​para analisar os grupos. A única associação estatisticamente significativa foi entre o câncer e tabagismo (p = 0,015). Foram feitas tentativas para equilibrar a representação de carcinomas de células escamosas e adenocarcinomas. A maioria das amostras do conjunto de treinamento (66,7%) eram adenocarcinoma, enquanto que 33,3% eram carcinoma de células escamosas. As características demográficas dos 30 pacientes com NSCLC e 20 pacientes saudáveis, sem histórico de câncer são apresentados na Figura 1 e Tabela 1. Embora a faixa etária foi 20-75 anos nos controles saudáveis, apenas um doador era abaixo de 35 anos de idade.

Usando a análise de dados de pares miRNA diferencialmente expressos descrito acima, os dados do conjunto de treinamento em 181 miRNAs rendeu 16290 pares diff, dos quais 140 candidatos pares miRNA distinto NSCLC de controles saudáveis ​​com uma sensibilidade e especificidade de , pelo menos, 80% cada (ver Figura S1). Vários pares de miRNA envolvendo miRNAs-106a, miR-15b, miR-27b, miR-142-3p, miR-26b, miR-182, 126 #, let7g, deixe-7i e miR-30e-5p exibiu um valor preditivo negativo ( NPV) e um valor preditivo positivo (VPP) de 100% (Tabela 1), indicando estes miRNAs como candidatos biomarcadores putativos para diagnóstico de câncer de pulmão. Os 140 candidatos pares miRNA representou um total de 26 miRNAs únicas. Por conseguinte, a RT-qPCR dos 26 miARNs foi realizada em ARN de soro a partir de um 55 pacientes com NSCLC adicionais (60% Fase I, 24% Fase II, 12% Estádio III e 4% Estádio IV), e de 75 cancro-livre, saudável controlos. As características demográficas dos 55 pacientes com NSCLC e 75 pacientes saudáveis, sem histórico de câncer são apresentados na Figura 1 e Tabela 1. teste exato de Fisher bicaudal usados ​​para analisar os grupos. A única associação estatisticamente significativa foi entre o câncer e tabagismo (p = 0,005). A expressão diferencial do biomarcador candidato miRNA pares do conjunto de treinamento (Figura S1) foi examinado no conjunto de teste usando o mesmo ponto de corte como foi aplicado no conjunto de treinamento. Os resultados produziu 5 biomarcadores candidatos com uma sensibilidade e especificidade de, pelo menos, 75% (Tabela 2). Todos os cinco candidatos pares de miARN mostrados na Tabela 2 foram significativamente expresso diferencialmente entre NSCLC e controlos saudáveis, como indicado pelos valores de p 0,001. A expressão diferencial do miARN par de miR-15b /miR-27b é mostrado na Figura 2, tanto para o conjunto de treino e o conjunto de teste. A distribuição deste par miARN foi espalhada sobre uma gama mais vasta ( 4 CTS) nos controles saudáveis, enquanto a distribuição nas amostras foi NSCLC mais estreito com uma gama de ~ 2 STC. A área sob a curva (AUC) do receptor que opera trama characteristic (ROC) (Fig. 3) para este par de miARN era 0,98 para os dados de teste, com uma sensibilidade e especificidade de 100% no conjunto de treino (Figura S1) e uma sensibilidade de 100% (95% CI; 0,93-1,0) e a especificidade de 84% (IC de 95% 0,73-0,91) no conjunto de teste (Tabela 2 e Figura 2). A dupla miRNA segundo escalão envolvidos miR-15a e miR-27b, com uma sensibilidade de 87% e especificidade de 93% no conjunto de treinamento, enquanto a sua sensibilidade e especificidade no conjunto de teste foi de 94% e 75%, respectivamente (Tabela 2). Vários dos pares de miARN no conjunto de treino teve desempenho inferior no conjunto de teste quer com a sensibilidade e /ou especificidade inferior a 75%. O par principal candidato miRNA (miR-15b e 27b) NSCLC distinguem dos controles saudáveis ​​com um VPN de 100% e VPP de 82% no conjunto de teste (Tabela 2). Esses resultados mostram o potencial do miRNA-base de soro como triagem biomarcadores para o câncer de pulmão.

valores expressão diferencial foram calculados como a diferença dos valores Ct para os dois miRNAs. O limiar indicado pela linha horizontal foi seleccionado para maximizar a soma de sensibilidade e especificidade, tal como descrito na análise de dados. A sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo (VPP) e valor preditivo negativo (VPN) obtidos utilizando a expressão diferencial dos 2 miRNA exibido como mesas para o conjunto de treinamento (à direita) e do conjunto de teste (à esquerda).

Discussão

Nesta fase exploratória I /estudo de biomarcador II (conforme descrito pelo Detecção precoce Research Network (eDRN) (http: //edrn. nci.nih.gov)) que rastreados soro de doentes sem história de cancro, e os pacientes com NSCLC, num esforço para identificar miARNs que podem ser utilizados como biomarcadores para a detecção de cancro de pulmão fase precoce. Foram identificados um miARN par de miR-15b /miR-27b que foi capaz de distinguir entre o soro de doentes com NSCLC e controlos saudáveis ​​livres de câncer, e com um elevado grau de sensibilidade. Os resultados suportam as conclusões de estudos recentes que mostraram que circulam perfis miRNAs pode ser útil no rastreamento de NSCLC, [16], [17] no entanto, nosso estudo incluiu substancialmente mais pacientes (total de 180) do que qualquer um desses estudos anteriores. Uma desvantagem destes biomarcadores é a baixa especificidade de 84% no conjunto de teste. A relativamente alta taxa de falso positivo para estes testes poderiam ser considerado inaceitável para o rastreio da população em geral. No entanto, numa população de fumadores de alto risco para o cancro do pulmão, o rastreio desnecessário seria atenuado pela capacidade deste teste, com o seu valor preditivo negativo de 100%, para ser capaz de excluir um grande número de pacientes de irem para mais modalidades de rastreamento caros, tais como tomografia computadorizada de tórax helicoidal. Embora esses dados são convincentes, mais testes em uma grande coorte, prospectivo como um biomarcador III estudo de Fase é necessária para avaliar a utilidade clínica destes miRNA marcadores como um teste de primeira linha de triagem para NSCLC.

Os miRNAs marcadores identificados neste estudo tenham sido previamente implicado em malignidades humanas. miR-15a e miR-15b foram mostrados para ser de-regulada no cancro do pulmão humano [21]. Ambos miR-15a e miR-15b ter sido demonstrado que têm um valor de diagnóstico e prognóstico na leucemia linfocítica crónica [22], [23]. miR-27b foi encontrado para ser regulada para baixo em tecidos de câncer de pulmão em comparação com o tecido pulmonar não-cancerosas [24]. Além disso, os níveis de expressão de miR-27b têm sido correlacionados com capacidade de invasão do cancro da mama [25] e com uma regulação da angiogénese [26]. Um estudo envolvendo um total de 86 NSCLC e 57 controles revelou recentemente um painel de miRNA quatro no plasma incluindo miR-126 que distinguiu NSCLC de controles saudáveis ​​com uma sensibilidade e especificidade de 73% e 96%, respectivamente [27]. Usando sangue total, Keller e colegas de trabalho [28] mostraram que miR-126 e miR-98 estavam entre os top miRNAs que poderão distinguir NSCLC de controles saudáveis. miR-126 é altamente expresso em tecido de pulmão e está envolvido na regulação da molécula de adesão celular vascular 1 (VCAM-l) [29]. expressão aberrante de miR-126 tem sido implicado na patogénese do NSCLC [30], [31]. Neste estudo, vários pares envolvendo o miR-126 estavam entre os vários candidatos identificados no conjunto de treino (Figura S1), no entanto mediante ensaios complementares em 130 amostras adicionais, todos os pares de candidatos miARN-126 exibiram sensibilidade superior a 75% e a especificidade era menos de 75%. Outros estudos recentes por Foss e colaboradores [17] mostrou soro miR-1254 e miR-574-5p foram diferencialmente expressos entre NSCLC (N = 33) e controlos saudáveis ​​(n = 42). É importante notar que vários factores que afectam o resultado de estudos de miARN em fluidos biológicos, incluindo variações no tipo de amostra e.g. sangue total, plasma ou soro, números de amostra, desenho do estudo, coleta de amostras, isolamento do RNA, as características do paciente, número de miRNA examinado e tecnologias usadas no miRNA de perfil, por exemplo, Solexa sequenciamento, RT-qPCR ou microarrays tecnologias. Além disso, a normalização dos métodos de isolamento, a normalização e métodos de análise de dados é necessária de forma a demonstrar uma utilidade clínica evidente destes marcadores putativos.

Embora estes dados são promissores, o conjunto de teste incluía um número relativamente pequeno de amostras . Em última análise, estes biomarcadores miRNA exigem uma validação adicional em maiores coortes prospectivas, tais como um estudo de biomarcador de Fase III, a fim de validar esses resultados. Incorporando marcadores miRNA baseados no sangue em estudos espiral CT pode ajudar a explorar a utilidade de miRNAs no rastreio do cancro do pulmão. Embora esta seja uma fase exploratória I de ensaios /II, os pacientes foram selecionados principalmente de clínicas cirúrgicas, e são ponderadas para a doença fase inicial (60% Fase I, 24% Stage II, 12% Stage III e 4% Stage IV). Esta inclinação para a doença fase precoce apoia a investigação destes marcadores em um ensaio de fase III ou IV, que visa definir o desempenho destes marcadores de forma prospectiva na detecção fase inicial.

A recente divulgação do utilitário de rastreio helicoidal do tórax scans CT para a redução da mortalidade por câncer de pulmão do ensaio NLST valoriza a identificação de indivíduos de alto risco que poderiam se beneficiar de rastreio. ensaios base de soro adjuvante pode ser realizada de um modo altamente eficaz em relação ao custo de imagem, e pode ser útil para identificar populações de alto risco que podem beneficiar de TC do tórax, ou para ser usado em combinação com a imagem para identificar cancros pulmonares precoces.

Há uma grande necessidade de melhorar a triagem para câncer de pulmão devido ao grande número de pessoas afetadas a cada ano e a alta taxa de mortalidade da doença quando diagnosticada em seus estágios posteriores. Atualmente numerosos ensaios clínicos sendo realizados para testar a eficácia de novas terapias para NSCLC, no entanto, a maioria destes são ensaios de Fase II e recentemente uma série de ensaios de Fase III não conseguiram cumprir seus desfechos primários [32] Até à data, melhorou de triagem para proporcionar a detecção precoce é o caminho mais promissor para reduzir a mortalidade de NSCLC. O nosso estudo reforça ainda mais o argumento que o nível sérico de miARN têm o potencial de ser usada como um custo teste de diagnóstico eficaz, não-invasiva para NSCLC, e poderia potencialmente ser usado como uma primeira tela de linhas para ajudar a estratificar pacientes de risco para outras, mais caro ou invasiva triagem regimes.

Informações de Apoio

Figura S1. expressão

miRNA Diferencial em soros de pacientes NSCLC (câncer) e controles saudáveis ​​(normal) no conjunto de treinamento. Diff, expressão diferencial entre os dois miRNAs, calculadas como a diferença entre os valores Ct dos dois miRNAs indicados. PPV, valor preditivo positivo; NPV, valor preditivo negativo; SENS, sensibilidade; e SPEC, especificidade. O valor de corte utilizado para alcançar a especificidade indicada e sensibilidade é indicado para cada par diff miRNA

doi:. 10.1371 /journal.pone.0032307.s001

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Reconhecimentos

Somos gratos a Ana Ward e Drs. Gary Latham, Bernard Andrus, e Rolland Carlson por seus comentários críticos e ajuda na preparação deste manuscrito.