Abstract
adutos de DNA são considerados uma medida de integrar a exposição cancerígena e o passo inicial da carcinogênese. Seus níveis nos linfócitos do sangue periférico (PBLs mais acessíveis) Mirror que no tecido da bexiga. Neste estudo, analisar se a formação de adutos de DNA PBL pode ser associado com o risco de cancro da bexiga (BC), e como esta relação é modulada por polimorfismos genéticos, fatores de risco ambientais e ocupacionais para BC. Estas inter-relações complexas, incluindo os efeitos directos e indirectos de cada variável, foram avaliados utilizando a análise de equações estruturais (SEM). No âmbito de um estudo de caso /controle de base hospitalar, a população do estudo incluiu 199 casos BC e 213 controles não-cancerosas, todos os homens caucasianos. Os dados foram coletados de fumar vida, beber café, hábitos alimentares e ocupação vida, com particular referência à exposição a aminas aromáticas (AA) e hidrocarbonetos aromáticos policíclicos (HAP). Não há caminhos indiretos foram encontrados, refutando hipóteses sobre associação entre adutos de DNA de PBL e de risco BC. adutos DNA foram em vez positivamente associado com a exposição cumulativa ocupacional a AAs (p = 0,028), enquanto XRCC1 Arg 399 (p 0,006) estava relacionado com a diminuição dos níveis de adutos, mas sem impacto no risco de BC. descobertas anteriores sobre o aumento do risco BC por packyears (p 0,001), café (p 0,001), a exposição cumulativa AAs (p = 0,041) e
MnSOD
(p = 0,009) e uma diminuição do risco de
MPO
(p 0,008) também foram confirmadas por análise MEV. Nossos resultados para o primeiro tempo de fazer uma associação evidente entre a exposição cumulativa ocupacional a AAs com adutos de DNA e risco BC, fortalecendo o papel central da AAs na carcinogênese da bexiga. No entanto, a falta de uma associação entre adutos de DNA de PBL e de risco BC informa que essas medidas de instantâneo não são representativos das exposições relevantes. Isso prever novos cenários para a descoberta de biomarcadores e os novos desafios, tais como medidas repetidas em diferentes estágios de vida críticos
Citation:. Porru S, S Pavanello, Carta A, Arici C, Simeone C, Izzotti A, et al. (2014) relações complexas entre Ocupação, Meio Ambiente, adutos de DNA, polimorfismos genéticos e câncer de bexiga em um caso-controle estudo utilizando a modelagem de equações estruturais. PLoS ONE 9 (4): e94566. doi: 10.1371 /journal.pone.0094566
editor: Courtney G. Montgomery, Oklahoma Medical Research Foundation, Estados Unidos da América
Recebido: 13 de novembro de 2013; Aceito: 17 de março de 2014; Publicação: 10 de abril de 2014
Direitos de autor: © 2014 Porru et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Este trabalho foi financiado pelo Ministério da Universidade e da Pesquisa italiano e pela Universidade de Brescia. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
o tabagismo e exposições ocupacionais a aminas aromáticas (AA) e hidrocarbonetos aromáticos policíclicos (HAP) são os principais fatores de risco para o câncer de bexiga (BC) [1], [2]. Além disso cada vez mais evidências sugere uma influência significativa da predisposição genética no BC incidência [3], [4].
A formação de metabólitos reativos de AAs e PAHs ea sua ligação ao DNA para dar adutos não reparados /estáveis, todos modulado por polimorfismos genéticos das enzimas metabólicas e de reparo do DNA, são considerados eventos críticos ao longo do percurso teórico que liga a exposição ao BC [5]. “Volumosos” medição ADN aducto foi, portanto, considerada um marcador integrado de tanto a exposição a compostos aromáticos e capacidade para activar agentes cancerígenos e reparação de danos ao DNA [6], [7]. níveis significativamente mais elevados de adutos de DNA aromáticos foram encontrados em biópsias de câncer de bexiga dos fumantes [8], [9]. Além disso adutos-DNA aromático persistentes causando mutações, incluindo mutações “hot spots” no gene P53 bexiga, tem proporcionado uma visão mecanicista sólida sobre como adutos de DNA pode conduzir bexiga tumorigénese [10]. Além disso, algumas modificações no DNA induzidos por compostos aromáticos na bexiga são encontrados para espelhar aqueles nos linfócitos do sangue periférico (PBLs) [11], [12]. Esta abordou a possibilidade de medir tais biomarcadores em tecidos acessíveis, que podem ser facilmente e de forma não invasiva obtidos a partir de seres humanos.
Muitos fatores podem interferir no entanto na via teórica que liga a exposição cancerígena para o BC, como várias exposições (por exemplo, fumo de tabaco, exposição ocupacional, frutas e vegetais consumo), a sua caracterização (por exemplo, nível, rota, fiabilidade), bem como o papel de modulação (aumento, proteger ou não tendo qualquer efeito) possivelmente desempenhado pelos genes polimórficos envolvidos no metabolismo e reparação do ADN [13]. Para o melhor de nosso conhecimento, apenas poucos estudos exploraram a hipótese de que os níveis de aduto de DNA PBLs podem ser associados ou preditivos de risco BC. Os resultados de caso-controle de base de três hospitalar retrospectiva mostrou que o indicador de risco que mede a associação entre adutos de DNA e BC foi superior a 1,0 [14], [15], não diferente da unidade [17], ou inferior a 1,0 [16]. Mais precisamente, adutos de DNA foram associados ao risco de BC, mas independentemente do hábito de fumar [14], [15], enquanto outros autores [16] não encontraram qualquer associação entre o risco de BC e adutos de DNA volumosos em nunca fumantes. No caso-controle estudo prospectivo, adutos de DNA não foram associados com BC risco [17]; No geral, estes resultados contraditórios são difíceis de ser explicado a partir do ponto de vista biológico. Além disso, nenhum estudo aparentemente estimado as complexas interações entre adutos de DNA, vários polimorfismos genéticos, exposição ocupacional a AAs e PAHs e risco BC.
Nós previamente avaliadas a interação entre exposições ocupacionais e ambientais com metabólica e de reparação de ADN polimorfismos sobre o risco de BC em estudo de caso-controle de base hospitalar retrospectiva [18] – [22]
o objetivo deste estudo foi duplo: para investigar até que ponto os adutos de DNA de PBL e risco de BC foram separadamente. afectados por polimorfismos genéticos, ambientais e exposições ocupacionais; e para explorar se a formação de adutos de DNA envolvido um aumento adicional do risco de BC. Estas inter-relações complexas foram avaliados através da análise de modelagem de equações estruturais (SEM).
Sujeitos e Métodos
Assuntos
População do estudo, recolha de dados e análise estatística são descritas publicações anteriores [18] – [22]
em resumo, o projeto foi um estudo de caso-controle de base hospitalar.. Os critérios de inclusão foram ser do sexo masculino, com idade entre 20 e 80 anos, residentes na província de Brescia (norte da Itália). Os casos foram 201 recém-diagnosticados, confirmada histologicamente pacientes BC, admitiu na urologia departamentos dos dois principais hospitais de Brescia a partir de Julho de 1997 a Dezembro de 2000. Os controles foram 214 pacientes afetados por diversas doenças não neoplásicas urológicos, frequência correspondente aos casos de idade (± 5 anos), o período e hospitalar de admissão. Um consentimento informado foi obtido de cada recrutados assunto e o estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética da Spedali Civili di Brescia
.
Todos os indivíduos foram administrados um questionário durante a internação para recolher informações sobre variáveis demográficas e história da vida de fumo, café e outros consumo de líquidos, hábitos alimentares, ocupações. exposições ocupacionais a PAHs e AAs foram estimados de acordo com a metodologia descrita na publicação anterior [22]. Um índice de exposição cumulativa ao AAs e PAHs, separadamente, foi calculado como produto (i × f × l) de comprimento (l), intensidade (i) e freqüência (f) de exposição em cada trabalho, resumindo como muitos produtos como eram necessárias para ter em conta todos os trabalhos realizados. o consumo ao longo da vida de cigarros foi calculada como packyears. A média ponderada no tempo ao longo da vida de copos /dia de café foi registrada como 0 (nunca bebedores), ≤3, 4, ≥ 5 xícaras /dia. PAHs contendo comida, fruta, grandes vegetais de folha e outros consumo de vegetais foi dividido em quatro categorias (menos de uma vez /mês, menos de uma vez /semana, 1-3 vezes /semana; mais de 3 vezes /semana).
a genotipagem de GSTM1, GSTT1, GSTP1, NAT1, NAT2, SULT1A1, XRCC1-3, XPD, CYP1A2, MPO, COMT, MnSOD e NQO1 foi avaliada usando ensaio de amplificação sistema de mutação refractária e utilizando o sistema de PCR GeneAmp 9700 (Applied Biosystems, Itália). PCR foram seguidos por digestão enzimática e análise de PCR-RFLP, tal como descrito anteriormente [18] – [22]
Todas as variáveis provaram ser associada com o risco de BC em regressão logística univariada foram forçados numa regressão logística incondicional multivariável. modelo e, em seguida, escolhidas por selecção por passos para trás (com p 0,05 como critério). risco BC aumentou significativamente com packyears, os bebedores de café pesados, MnSOD (Val /Val genótipo), enquanto diminuiu com grande consumo de folhas vegetais e MPO (variante homozigotos G-463A). exposição cumulativa ao AAs não foi estatisticamente significativa, mas foi retida porque ser um fator de confusão substancial [19], [22].
extração de DNA de PBL
As amostras de sangue foram coletadas de todos os indivíduos durante a admissão hospitalar e no mesmo dia processada por centrifugação para a obtenção de linfócitos do sangue periférico (PBLs). O protocolo para a extração de DNA automatizado foi realizada de acordo com o kit Extragen (Extragen BC. Pelo talento) seguindo as instruções do fabricante, conforme descrito anteriormente [20]. Em particular 2,5 ml de buffy coat preparado de até 10 ml de sangue total foram processados para extracções de ADN. Um rendimento típico variam de 150 a 400 mcg de ADN /extração de um doador normal.
32 P-Post-rotulagem análise de adutos de DNA
As alíquotas de 5 ug de DNA foram ensaiadas para a presença de adutos-DNA volumosos por
32 P-postlabeling após enriquecimento com Nuclease P1 como descrito anteriormente [23], [24]. Resolução de aductos de ADN foi realizada por cromatografia em camada fina multidireccional (CCF), utilizando-se polietilenoimina (PEI) placas -celulose [25]. Em resumo, 5 ^ g de ADN foram digeridos enzimaticamente para 3′-mononucleótidos com 0,14 L de ADN /ug de nuclease microcócica e 1 mU /ug do ADN de fosfodiesterase baço durante 3-4 horas a 37 ° C. Após o processo de enriquecimento por nuclease P1 digestão, bases de ADN foram marcadas com 50 uCi de [gama-
32P] ATP, com uma actividade específica de 5000 Ci por mmol, utilizando 2,5 unidades de quinase de polinucleótido T4. 20 l de amostra postlabeled foram vistos sobre a origem de uma folha de celulose PEI pré-marcadas e correr para a cromatografia TLC multidirecional. Após cromatografia, folhas de TLC foram secos e auto-radiograf ia electrónica realizada utilizando um
32P Imager (InstanImager, Packard, MD, EUA). Um benzo (a) pireno padrão de referência diolepoxide-N2-DGP (National Cancer Institute Chemical As substâncias cancerígenas Repositório Padrão de Referência, Midwest Research Institute, Kansas City, MO) foi utilizada como um controlo positivo em cada experiência de marcação. níveis de adutos de DNA foram medidos como nível aduto relativa por 10
8 nucleótidos.
A análise estatística
Na montagem SEM, packyears, café e vegetal consumo,
MnSOD
,
MPO
, a exposição AA cumulativa (variáveis associadas ao risco de BC de acordo com publicações anteriores) mais
XRCC1
(ver abaixo) foram utilizadas como variáveis exógenas (correspondente a preditores em técnicas baseadas em regressão). Tanto o risco de BC e adutos poderia ser variáveis endógenas (correspondendo a variáveis de resultados), cada afetado por uma ou mais variáveis exógenas (Hipótese 1). Alternativamente, o risco de BC pode ser também influenciada indirectamente através da formação de aductos de ADN (hipótese 2). As duas hipóteses concorrentes foram convertidos em dois modelos de equações estruturais para encontrar qual o modelo equipado melhores os dados observados. equações estruturais SEM foram equipados com o método “assintótica distribuição gratuita”, porque não fazer suposição sobre a normalidade conjunta de todas as variáveis e permitiu usando as variáveis (em particular adutos, veja abaixo) como dado. O efeito de cada variável exógena foi expressa como padronizado (ou beta) coeficientes que fazem comparações com facilidade, ignorando a escala da variável independente de unidades. Os resultados de MEV foram ambos tabulados e apresentados graficamente. Foram utilizados dois bondade-de-ajuste as estatísticas de SEM: (1) o teste do qui-quadrado para “modelo contra saturado” (o modelo saturado é o modelo que se encaixa perfeitamente as covariâncias); e (2) o índice de estabilidade obtidos a partir da análise dos sistemas de equações simultâneas.
O tamanho da amostra necessária para a SEM é dependente de complexidade do modelo, o método de estimativa utilizado, e as características de distribuição de variáveis observadas [26]. A melhor opção é considerar a complexidade do modelo (isto é, o número de variáveis exógenas) e as seguintes regras gerais: rácio mínimo de 5:01 [27], [28]; proporção recomendada 10:01 [26] – [28]; 15:01 proporção recomendada para dados sem distribuição normal [29]. Com oito variáveis exógenas utilizado no modelo SEM, devemos ter 120 (= 15 × 8) indivíduos, mas eles eram realmente 412 (ver abaixo) que preencha os requisitos acima.
A análise foi realizada com o pacote estatístico STATA 12.
resultados
no presente estudo, os dados individuais completos estavam disponíveis para 199 (de 201) casos e 213 (de 214) controles, totalizando 412 (em vez de 415) assuntos.
a tabela 1 mostra as principais características dos casos e controles. Atuais e ex-fumantes eram mais comuns (chi
2 de teste (2DF) = 32,2377; p = 0,000) e ingestão de café foi maior (Wilcoxon teste rank-sum z = -3,756; p = 0,0002) nos casos do que nos controles. Não foram encontradas diferenças significativas entre casos e controles para outras variáveis demográficas e fatores de risco putativos de BC
níveis DNA adutos variou de 0,3 a 70 adutos × 10
8 nucleótidos.; a variável não seguem uma distribuição normal e quaisquer transformações não conseguiu reduzir a sua assimetria (dados não mostrados). A Tabela 2 mostra que a média, o desvio padrão, mediana, intervalo interquartil e CV% dos níveis de adutos foram semelhantes nos casos e controles. Um modelo de regressão linear multivariável com selecção por passos para trás deu
XRCC1
como a única variável significativa transportando efeito protector (dados não mostrados).
Tabela 3 mostra três grupos de resultados de SEM.
equações estruturais. Pode-se ver os coeficientes beta (com sinal de “menos”, indicando uma relação inversa) intervalos de confiança, erros padrão, testes z com valores de p, e de 95% para cada um dos dois modelos de equações estruturais. O primeiro modelo mostra que a exposição ocupacional cumulativa para AAs (beta = 0,117; p = 0,028) está associada com aumento dos níveis de DNA adutos, enquanto que
XRCC1 Arg 399
(beta = -0,129; p 0,006), com diminuição dos níveis . Calculou-se o valor de p-sábio estudo correspondente, (1- (1-alfa)
n), onde “alfa” foi 0,006 e “n” foi 6. O resultado foi 0,035464301 (bem abaixo do limiar de significância estatística), indicando que a probabilidade de erro de 0,006 não pode ser um efeito de flutuações aleatórias. O segundo modelo mostra que o tabagismo (packyears; beta = 0,256; p 0,001), café (beta = 0,166; p 0,001), a exposição cumulativa AAs ocupacional (beta = 0,084; p = 0,041) e
MnSOD
(beta = 0,119; p = 0,009) aumentou o risco BC enquanto
MPO
(beta = -0,115; p 0,008) diminuiu ele. Não há caminhos indiretos foram demonstrados (refutando a hipótese 2).
variância explicada pela instalação acima foi cerca de 4% para adutos de DNA e aproximadamente 14% para o risco de BC.
Covariance entre os dois variáveis endógenas (risco de BC e adutos) não foi significativa (p = 0,441, última linha da tabela 1). Esta descoberta demonstrou que essas variáveis não foram correlacionados entre si e que apoiou a hipótese 2, ou seja, adutos de DNA não afetar o risco de BC em nossa população.
O valor do teste do qui-quadrado para a discrepância do modelo especificado contra o modelo saturado foi de 0,00, com valor de p igual a 1,00. O índice de estabilidade foi de 0,00, indicando que a SEM satisfaz condição de estabilidade.
Utilizando a interface gráfica do SEM, os resultados mostrados na Tabela 3 foram apresentados como diagrama caminho na figura 1. Nesta figura, caixas quadradas representam variáveis , círculos indicam os desvios, setas especificar a direcção do fluxo de causalidade, uma rota de setas é um caminho, e os coeficientes beta estimados apareceu ao longo dos caminhos. O efeito de uma variável em outro é chamado direta. Não havia nenhuma evidência de efeito indirecto (uma variável que afeta outra variável que afeta um terço), o que indica que o risco de câncer de bexiga em nossa população não aumentou através da formação de adutos de DNA.
Variáveis (caixas quadradas) ; variâncias (círculos); fluxo causal (setas); e caminhos (via arrowed). Os coeficientes beta estimados apareceram ao longo dos caminhos. LEGENDA: Packyears = ao longo da vida do consumo de cigarros; Café = ao longo da vida média ponderada no tempo de copos /dia de café; AA = Ocupacional exposição cumulativa a aminas aromáticas;
reparação XRCC1
= raio-X da proteína 1-complementando cruz;
MPO
= mieloperoxidase (G-463A variante homozigoto);
MnSOD
= manganês superóxido dismutase (Val /Val genótipo).
Discussão
adutos de DNA como resultado
Desde adutos de DNA em PBLs são considerada uma medida de exposição ao agente cancerígeno, absorção, distribuição, metabolismo e reparação de ADN integrar, eles têm sido referidos como biomarcador de ‘de dose biologicamente eficaz “, ou seja uma medida da quantidade do agente cancerígeno no alvo fundamental [13]. níveis de DNA adutos Além disso cancerígena em PBLs circulam mais acessíveis espelhar os do tecido da bexiga [11], [12], que são considerados um passo inicial na carcinogênese.
No entanto, no presente estudo, de acordo com outra literatura achados, adutos de DNA volumosos detectados pelo método nuclease P1 de
32 P-post-rotulagem não foram associados com um risco aumentado BC, provavelmente porque os adutos medidos em PBL no momento do diagnóstico BC representam instantâneos que não são necessariamente representativos de exposições relevantes para o BC risco que ocorreu no passado.
níveis aduto foram vez associados com
XRCC1399Arg
operadoras que apresentaram uma redução significativa no nível de adutos de DNA, mas sem efeito sobre o risco de BC . Nossos resultados estão de acordo com o relato de estudos anteriores
XRCC1399Arg
associada com níveis mais baixos de adutos de DNA volumosos [30], [31], devido à maior atividade de reparo de DNA [32], e com duas meta-análises recentes, onde
XRCC1 Arg399Gln
polimorfismo não estava relacionado com BC risco [33], [34].
no presente estudo, assim como os estudos relatados acima [14], [15], [17], não relação entre os níveis de aduto de DNA e tabagismo foi relatado. Estudos anteriores
32 P-postlabeling relataram resultados inconsistentes sobre a associação entre os níveis de adutos no PBL e tabagismo [35] – [39]. Discrepâncias pode depender da variação interindividual marcados no metabolismo de carcinogéneos fumadores, o que resulta em diferentes níveis de ADN de aducto por graus semelhantes de exposição [40]. Além disso, a maioria dos estudos sobre o efeito do tabagismo sobre PBL níveis aduto-DNA volumosos não revelou quaisquer diferenças significativas [35], [36], [39], sugerindo que adutos em PBLs de fumantes pode resultar de outros do que fumar tabaco fontes .
Nós também encontraram uma associação entre exposição ocupacional cumulativa ao AAS e PBL níveis de adutos que, em vez não foi relatado por outros autores, muito provavelmente porque a informação sobre exposições ocupacionais era demasiado limitada para permitir a avaliação, mesmo na maior caso- controle aninhado no EPIC coorte [17].
risco aC como resultado
Nós confirmada por análise SEM o efeito protetor plausível biológica de
MPO a /a
[21] , eo efeito risco de
MnSOD Val /Val
no BC [21], [41]. O polimorfismo genético de enzimas envolvidas na resposta individual ao stress oxidativo é provavelmente envolvidos na modulação da resposta individual às exposições ambientais tais como o fumo do tabaco, bebidas de café e exposição AA [21]. Neste estudo também confirmou nossos resultados anteriores sobre a associação entre o hábito de fumar e beber café em risco BC, em que este último pode ser atribuída a confusão residual pelo ajuste inadequado para o consumo de cigarros (que é sobre-representados entre aqueles que bebem mais café /cafeína) [22]. Como mostrado na Tabela 3, o nível de significância estatística de coeficientes beta era particularmente alta para a associação entre a BC risco e, por outro lado, packyears (beta = 0,256; p 0,001) e café (beta = 0,166; p 0,001 ); bem como para a associação entre a diminuição da aducto de ADN e
XRCC1 Arg 399
(beta = -0,129; p 0,006). Apesar disso, a proporção à qual SEM contas de montagem para a dispersão dos dados (variância explicada) foi tão baixa quanto 16% para o risco de BC, e 4% para adutos de DNA. Portanto maior parte da variação dos resultados deve ser atribuída a preditores desconhecidos.
No que diz respeito à relação de exposições ocupacionais a AAs e PAHs, adutos de DNA e risco de BC a literatura é escassa e aqueles poucos estudos publicados têm encontrado apenas uma exposição associação independente de entre adutos e risco BC. Nosso estudo avaliou precisamente a história exposição ocupacional a AAs e PAHs, e observou uma correlação significativa entre a exposição ocupacional a AAs e BC, e os níveis de adutos também. Portanto exposição ocupacional a AAs é confirmado como fator de risco central para o desenvolvimento BC. Finalmente, o presente trabalho foi realizado no contexto de um projeto de estudo biologicamente plausível e orientada para a hipótese consistente com os dados disponíveis na literatura.
Além disso, a correlação encontramos entre a exposição AAs e risco de BC é biologicamente plausível, AA porque são activados no fígado e transportada por proteínas do sangue para a bexiga, onde, sob condições ácidas [42], [43] ou, enzimaticamente pela o-acetilação de arilamina N-hidroxi (predominantemente pela N- acetiltransferase 1 (NAT1) isozima ), são ainda activado para o agente cancerígeno final [44]. Este resultado também sugere que a história de exposição ocupacional coletadas através de um questionário por meio de entrevista poderia ser uma medida confiável das exposições a AAs em tais estudos.
Ao contrário de AAs, a exposição cumulativa ao PAHs não foi associada a risco BC. Evidências experimentais sugerem que os HAP estão lentamente absorvido pela maioria dos tecidos. Por exemplo, no caso da exposição cutânea, considerada a principal via na indústria [45], contas de absorção para uma pequena fracção da dose aplicada, e PAH são enzimaticamente activada e degradada neste local de entrada de dados [46] – [48] . A concentração e persistência de HPAs no pulmão é em grande parte relacionada com a inalação de PAHs contendo pó [49], [50]. A alta propensão de HPAs para atuar como agentes cancerígenos nos locais de entrada é suportado por vários estudos experimentais [51].
adutos de DNA e risco BC
Os resultados da literatura sobre a associação entre DNA adutos e risco de BC são escassos e não consistente. A forte associação direta entre eo risco de adutos de DNA BC e PBL, medido no momento do diagnóstico e detectados por P1 meios nuclease e
32 P-postlabeling, foi relatado no caso-controle dois hospitais retrospectivo baseado [14], [15 ]. A associação foi, porém, independente do hábito de fumar e foi sugerido para ser dependente de outras exposições (que os estudos não especificou) e, a partir
NAT2
como fator genético. Enquanto, em um caso-controle de base hospitalar retrospectiva entre os não fumantes adutos de DNA volumosos não foram associados com o risco de cancro da bexiga [16]. adutos de DNA Finalmente PBL (P1 nuclease e 32P-postlabeling) não foram associados com o subsequente insurgence cancro da bexiga em um estudo de caso-controle prospectivo [17]. Os resultados deste último estudo são, provavelmente, mais confiável e significativa do que os de investigações anteriores [14], [15], porque adutos de DNA foram medidos anos antes do aparecimento da doença, afastando assim a possibilidade de que os níveis de adutos mais elevados foram devido a uma condição associada a um câncer já existente.
Nós não encontrou qualquer relação entre adutos de DNA e risco BC. No entanto, não podemos excluir tal relação. Na verdade, uma limitação do presente estudo é que adutos medidos pelo método nuclease P1 de
32 P-postlabeling não são específicos porque a substância electrof�ico responsáveis não podem ser identificados. Além disso, adutos de DNA medir no momento do diagnóstico pode não ser representativo de doses cumulativas de agentes cancerígenos que podem causar câncer. exposições ambientais e ocupacionais variam tanto qualitativa como quantitativamente ao longo do tempo devido a mudanças no estilo de vida, local de residência, emprego, etc., bem como o impacto de uma determinada exposição sobre o risco de câncer não pode ser constante durante toda a vida de um indivíduo [13] . Esse fato, combinado com a consciência de que a taxa e velocidade de reparação de vários adutos de DNA são diferentes e sua permanência depende principalmente do tempo de vida de PBL, de alguns dias a algumas semanas, representa a incerteza sobre o significado de tal curto prazo biomarcador de exposição em relação ao risco de câncer. Dada a longa latência dos tumores malignos relacionados com carcinógenos – que é o tempo entre o início da exposição e o aparecimento da doença – a avaliação retrospectiva da exposição cancerígena, especialmente através de biomarcadores, representa um desafio tanto para epidemiologia e medicina clínica
Perspectives (incluindo a análise SEM)
Novas oportunidades para o biomonitoramento de substâncias cancerígenas podem derivar de medir a exposição de todas as fontes externas e internas que ocorrem ao longo da vida. Esta abordagem chamado exposome por Wild [52] é representado pelo conjunto de produtos químicos derivados de fontes externas controle genético que incluem dieta, patógenos, microbioma, tabagismo, estresse psicológico, drogas e poluição [53]. Na verdade, estas novas tecnologias estão a abrir novos cenários para a descoberta de biomarcadores, mas novos desafios, bem como, que incluem a necessidade de medições repetidas de conjuntos globais de biomarcadores para ser coletadas em diferentes estágios de vida críticos. Só desta forma pode a dinâmica de exposições e no início e efeitos tardios ser capturado.
Na medicina e ciências naturais um dado resultado é frequentemente afetado ou influenciado por mais de uma coisa ao mesmo tempo. técnicas de análise multivariada tentar estatísticamente conta para estas diferenças, ajustando uma medida de resultado Y para uma mudança de 1 unidade no X, mantendo todas as outras variáveis constantes. No entanto, pode ser que outras variáveis não são susceptíveis de permanecer constante: uma mudança em X pode produzir uma alteração no Z (efeito directo) que, por sua vez produz uma mudança em Y (efeito indirecto). Ambos os efeitos diretos e indiretos de X sobre Y deve ser considerada se nós queremos saber qual o efeito que uma mudança no X terá sobre Y. Isso pode ser feito matematicamente e estatisticamente usando apenas SEM. O procedimento decompõe uma correlação entre duas variáveis em suas partes componentes: efeitos diretos, efeitos indiretos, causas comuns (X afeta tanto Y e Z, que é associação espúria) e causas correlatas (X é uma causa de Z e X está correlacionada com Y ). O usuário é obrigado a indicar, muitas vezes usando um diagrama de caminho, o modo que ele /ela acredita que as variáveis são inter-relacionados. Via algumas regras internas complexas, SEM decide qual o modelo que melhor se adequa dados. Este método é mais adequado para analisar as inter-relações complexas porque testa relações causais em vez de meras correlações.
Em nossa opinião, a análise estatística com SEM é uma força da presente pesquisa. Outros pontos fortes do estudo são a coleção completa e confiável de diversas variáveis pessoais, ocupacionais e ambientais, os vários polimorfismos genéticos e endpoints, o número significativo de indivíduos, em comparação com outros estudos semelhantes com análise aduto [14] – [17], a qualidade da análise de DNA aduto, o tamanho da amostra necessária para o cálculo do SEM; aqui, o número real de 412 casos foi muito maior do que o tamanho máximo exigido amostra de 120 indivíduos estimados de acordo com pressupostos diferentes (ver acima: análise estatística).
Conclusões
Usando a análise SEM , uma técnica estatística que combina dados observados e pressupostos causais qualitativos e os testes se e como as variáveis são inter-relacionados através de um sistema de equações, descobrimos que adutos de DNA de PBL não foi associada a risco BC. Isto sugere que esta medida no momento do diagnóstico pode não ser representativo da dose de agentes cancerígenos que podem causar câncer. No entanto, a nova descoberta decorrentes deste estudo sustenta que a exposição cumulativa ocupacional a AAs foram em vez associado com ambos os adutos de DNA e com o risco de BC. Isto concorda com a propensão dos AAs para atuar como agentes cancerígenos de distância dos locais de entrada depois de ser transportado por proteínas do sangue para a bexiga e confirmar a exposição a AAs, determinada por aduto de DNA do sangue, como fator de risco central para o desenvolvimento BC. Além disso
XRCC1399Arg
polimorfismo tem um papel na reparação PBL DNA adutos, mas sem impacto na susceptibilidade individual ao BC. descobertas anteriores sobre a influência do tabagismo, ingestão de café,
MPO A /A
e
MnSOD Val /Val
polimorfismos no risco BC também foram confirmados por análise de SEM. Foi observado um efeito direto destas variáveis de previsão em cada variável de resultado. Nosso estudo prevê novos cenários, o que implica a necessidade de medições aduto de DNA repetidos em diferentes fases críticas de vida e técnicas de análise adequadas, por exemplo, durante a exposição ocupacional a AAs, bem como a avaliação da relação complexa entre genes e meio ambiente, por meio de SEM análise.