Abstract

O câncer de pâncreas é um dos cancros mais terríveis com um prognóstico pessimista. Apesar de muitas terapias, não houve nenhuma melhoria das taxas de sobrevivência. Neste estudo, foram avaliados os efeitos anti-câncer de kaempferol, um flavonóide com bio-atividade funcional bem conhecidos contra vários tumores malignos. Kaempferol teve efeitos anti-câncer no MiaPaCa-2, Panc-1, e SNU-213 células de cancro pancreático humano. De um modo dependente da dose, kaempferol diminuição na viabilidade destas células de cancro do pâncreas, aumentando a apoptose. Em particular, kaempferol inibiu eficazmente a actividade migratória das células de cancro do pâncreas humanos em dosagens relativamente baixas, sem qualquer toxicidade. O efeito anti-cancro do campferol foi mediada pela inibição de Src relacionada com o EGFR, ERK1 /2, e vias AKT. Estes resultados indicam colectivamente que caempferol, um ingrediente fitoquímicos relataram ter anti-viabilidade e anti-oxidantes propriedades, pode actuar como um reagente de segurança anti-migração em células de cancro pancreático humano, que fornecem o fundamento lógico para uma investigação mais aprofundada de kaempferol como um forte candidato para o potencial ensaio clínico de cancros pancreáticos malignos

Citation:. Lee J, Kim JH (2016) kaempferol Inibe o cancro do pâncreas crescimento celular e migração através do bloqueio do Caminho relacionadas-EGFR

In Vitro

. PLoS ONE 11 (5): e0155264. doi: 10.1371 /journal.pone.0155264

editor: Aldo Scarpa, Universidade de Verona, Itália

Recebido: 03 de fevereiro de 2016; Aceito: 26 de abril de 2016; Publicado em: 13 de maio de 2016

Direitos de autor: © 2016 Lee, Kim. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Data Availability:. Todos relevante os dados estão dentro do papel

Financiamento:.. Esta pesquisa foi apoiada pelo Programa de pesquisa em Ciência básica através da Fundação Nacional de pesquisa da Coreia (NRF), financiado pelo Ministério da Educação (2009-0094059)

Conflito de interesses:. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

O câncer de pâncreas é uma doença fatal. A taxa de sobrevida em 5 anos dos pacientes com câncer de pâncreas é inferior a 1% [1]. Uma das principais características do cancro do pâncreas é a propagação de início e progressão de tumores locais. Esses recursos causar complicações graves em pacientes com câncer de pâncreas. Portanto, a maioria dos pacientes têm uma morte prematura [2]. A tendência metastático de células tumorais é um obstáculo importante no tratamento de cancro pancreático. No entanto, os pesquisadores não foram para elucidar como maligno células cancerígenas pancreáticas migrar de um local do tumor primário para um órgão distante [3]. Além disso, com as drogas anti-câncer presentemente disponíveis e radioterapia têm um impacto insignificante na maioria dos pacientes com câncer pancreático. Portanto, estudos extensivos devem ser realizados para explorar os mecanismos moleculares responsáveis ​​por essas características e desenvolver estratégias adicionais para melhorar os resultados do tratamento em pacientes com câncer de pâncreas.

Os flavonóides são compostos polifenólicos que são abundantemente encontrados em várias plantas [4 ]. Eles oferecem vários benefícios à saúde devido às suas actividades anti-oxidantes e anti-inflamatórios. Estudos anteriores relataram que os flavonóides inibir vários estágios do câncer, como a proliferação e angiogênese [5]. Em particular, campferol, um flavonóide bem conhecida, tem a bio-actividade notável contra vários tumores malignos. Kaempferol é encontrado em abundância de chá, maçãs, morangos, feijão e frutas cítricas [6]. Kaempferol regula várias características das células cancerosas, tais como apoptose [7-9], ciclo celular [10,11], e inflamação [12,13]. Além disso, kaempferol também inibe a actividade de migração e invasão de células cancerosas de mama de meduloblastoma e [14,15]. Mas a sua “efeito anti-migratório em células de cancro do pâncreas é desconhecido.

do receptor do factor de crescimento epidérmico (EGFR), é um receptor tirosina-quinase que é activada quando particularmente interagiram entre o EGFR e factores de crescimento da família EGF. Vários mecanismos levam à activação anormal de EGFR observado em vários cancros,

i

.

E

., EGFR sobre-expressão, mutação, e estimulação independente de ligando-receptor. O EGFR é o receptor representante subjacente vários fenótipos de tumor, tais como a proliferação, a vantagem anti-apoptótica, migração e invasão de tumores malignos incluindo cancros pancreáticos [16-19]. EGFR regulada também é encontrada em tumores de câncer de pâncreas, que se correlacionam com um prognóstico sombrio [20].

Neste estudo, foi investigada a natureza do impacto anti-câncer do kaempferol em linhas celulares de cancro pancreático humano através do bloqueio da de EGFR-relacionadas de sinalização intracelular. Nossos resultados indicam que kaempferol pode ser um cofre inibidor contra cânceres pancreáticos malignos.

cultura celular Materiais e Métodos Comprar e reagentes

MiaPaCa-2, Panc-1, e SNU -213 linhas de células de cancro pancreático humano foram obtidos a partir da linha celular coreana Banco (KCLB, Seul, Coreia do Sul). As células foram cultivadas quer em meio DMEM (MiaPaCa-2 e Panc-1) meio suplementado com 10% de soro fetal de bovino (Gibco-BRL, Gaithersburg, MD, EUA) ou RPMI-1640 (SNU-213), 1 × 10

5 unidades /L de penicilina, and100 mg /L de estreptomicina (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA) a 37 ° C. A cultura de células foi incubada numa atmosfera humidificada contendo 5% de CO

2 tal como anteriormente descrito [21]

. As células endoteliais da veia umbilical humana (HUVECs) foram adquiridos da American Type Culture Collection (ATCC, Manassa, VA, EUA). As HUVECs foram cultivadas em meio EGM-2 Bulletkit (Lonza Biologics, Hopkinton, MA) a 37 ° C numa atmosfera humidificada contendo 5% de CO2. Todas as experiências foram realizadas utilizando células HUVEC dentro de 3-6 passagens. inibidor de EGFR (Gefitinib) e o inibidor de caspase panela (Z-VAD-FMK): estes inibidores foram adquiridos a partir de Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, EUA). Os anticorpos para fosfo-EGFR (Tyr1068), EGFR, fosfo-Src (Tyr416), Src, fosfo-AKT (Ser473), AKT, cinase regulada por sinal extracelular fosfo-(ERK) 1/2 (Thr202 /Tyr204), ERK , antigénio nuclear de células em proliferação (PCNA), e gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) foram obtidos a partir de Cell Signaling Technology (Beverly, MA, EUA). Kampferol, kampferol-3-O-glucósido, e kampferol-4′-O-glucósido (Figura 1) foram adquiridos da Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, EUA).

Medição de a viabilidade celular

a viabilidade celular foi determinada utilizando uma solução de WST-1: 2- (4-iodofenil) -3- (4-nitrofenil) -5- (2,4-dissulfofenil) -2H- tetrazólio solução ( Boehringer Mannheim, Mannheim, Alemanha). Neste ensaio, MiaPaCa-2, Panc-1, e células SNU-213 (5 × 10

3 /poço) foram semeadas em placas de 96 poços (Nunc, Roskilde, Dinamarca). As células foram mantidas num meio de cultura durante 24 h. Durante este período, eles foram tratados com várias dosagens de kaempferol. As células foram incubadas a 37 ° C durante um adicional de 72 h. Dez microlitros de WST-1 solução foi adicionada a cada poço. Após uma incubação de 10 min à temperatura ambiente, a absorvância foi medida a 450 nm utilizando um leitor de microplacas (Bio-Rad, Richmond, CA, EUA).

ensaio de migração

ensaios de migração celular foram realizados usando Transwell (Corning Suportes permeáveis ​​Costar, Lowell, MA) com um tamanho de poro de 8,0 uM. filtros de policarbonato foram pré-revestidos com fibronectina (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) utilizando um meio contendo 10 mg /L de solução salina tamponada com fosfato; o processo de pré-revestimento foi realizado durante 30 min a temperatura ambiente. A câmara inferior foi preenchida com 500 ul de meio RPMI-1640 contendo 10% de soro. Após sujeitar as células à inanição de 15 h em meio RPMI-1640 isento de soro, que suspendeu as células (5 × 10

4 células /cavidade) em 100 ul de meio isento de soro e foram carregados para cada câmara superior. Depois de manter estas células no meio acima mencionado durante 6 h a 37 ° C, foram retiradas as células na superfície superior do filtro, utilizando um cotonete. Em seguida, fixadas e coradas utilizando os filtros de solução de violeta de cristal a 1%. O corante eluída foi medida a 560 nm num leitor de ELISA (Bio-Rad).

ensaio de invasão

ensaios de invasão foi realizada utilizando o factor de crescimento reduzida Matrigel (BD Biosciences, San Diego, CA , EUA) revestidas em placas Transwell-24 de acordo com o protocolo do fornecedor. As células foram aplicadas para a câmara superior contendo meio RPMI sem soro durante 20 h, e as células que migraram para o lado de trás do filtro após 24 horas foram coradas. O corante fluido foi medida a 560 nm num leitor ELISA.

Kaempferol seleção de alvos

Para a seleção dos alvos de kaempferol, foi utilizado o banco de dados de farmacologia e plataforma de análise de sistemas Medicina Tradicional Chinesa (TCMSP) como previamente descrito [22].

análise Western blot

Para avaliar phosphoylation processo em várias moléculas, transferência de Western foi realizada como descrito anteriormente [23]. Neste método, foram tratadas células cultivadas MiaPaCa-2 e Panc-1 com kaempferol de um número fixo de vezes indicado. Em seguida, lavou-se que estas células com pré-arrefecida de tampão fosfato salino (PBS). Para os lisados ​​de células inteiras, as células foram lisadas em tampão de lise M-PER (Thermo Scientific, Bonn, Alemanha) contendo inibidores de protease e fosfatase. A quantidade total de proteína foi determinado pelo método BCA quantificação (Bio-Rad). Os lisados ​​celulares foram separados por 10% SDS-PAGE e transferidas para membrana de nitrocelulose (Amersham Bioscience, Buckinghamshire, Reino Unido). Estas membranas foram bloqueadas com 5% de albumina de soro de bovino e 2% de Tween em tampão salino Tris. Diluiu-se os anticorpos específicos para fosfo-EGFR (Tyr1068), EGFR, fosfo-Src (Tyr416), Src, fosfo-AKT (Ser473), AKT, fosfo-ERK1 /2 (Thr202 /Tyr204), ERK, e GAPDH numa tampão de bloqueio a 1: 1000 proporção. Daí em diante, que estes anticorpos incubadas durante a noite a 4 ° C. Para visualizar as bandas numa película de raios-X, utilizou-se peroxidase de rábano conjugada de burro anti-coelho ou de anticorpo secundário anti-rato de burro (Santa Cruz, CA, EUA), juntamente com o reagente de detecção de mancha de Western (Intron, Seul, Coreia do Sul). As bandas foram medidos por análise de densitometria, que foi realizada utilizando software de análise ImageJ.

Análise estatística

Os dados foram apresentados como a média ± desvio padrão (SD). O Student

t

-test foi usada para determinar os níveis de significância, os quais foram então utilizados para a comparação de duas amostras independentes. Os grupos foram comparados por análise de uma via de variância (ANOVA). Neste caso, Tukey do

post-hoc

teste foi aplicado para efeitos principais significativos (SPSS 12.0K para Windows; SPSS Inc., Chicago, IL, EUA).

Resultados

Kaempferol inibe a viabilidade celular pancreático humano através da via apoptose

Kaempferol a cerca de 10 mM induz efeito significativo anti-viabilidade em células de cancro do pâncreas através da apoptose [9]. Para verificar o efeito anti-cancro de kaempferol e seus derivados, SNU-213 células de cancro do pâncreas MiaPaCa-2, Panc-1, e foram incubadas em várias concentrações do campferol, campferol 3-O-glucósido, e campferol-4′ O-glicosídeo (0, 10, 25, e 50 uM). Em comparação com as células de controlo que foram tratados com PBS, 50 uM de kaempferol inibiu especificamente a viabilidade celular em aproximadamente 40% em células de MiaPaCa-2, 15% em células Panc-1, e 10% em células SNU-213. Em contraste, campferol 3-O-glucósido e campferol-4′-O-glucósido não tem qualquer efeito inibitório sobre MiaPaCa-2, Panc-1, e células SNU-213 sob condições idênticas (Fig S1).

Para investigar ainda mais o efeito anti-cancro específico do campferol, MiaPaCa-2, Panc-1, e células SNU-213 foram incubadas em várias concentrações do campferol (0, 0,005, 0,01, 0,05, 0,1, 0,5, 1, 10, 100, e 200 uM). A exposição a kaempferol causou nenhuma alteração significativa na viabilidade das células, desde que estava presente em dosagens relativamente baixas: até 0,5 uM em MiaPaCa-2, até 1 uM em Panc-1, e um máximo de 10 uM em células SNU-213. No entanto, as dosagens mais elevadas de kaempferol teve um efeito inibidor significativo sobre a viabilidade celular. Em comparação com as células de controlo que foram tratados com PBS, 200 uM kaempferol inibiu a viabilidade celular em cerca de 70% em células de MiaPaCa-2, 45% em células Panc-1, e 50% em células SNU-213 (Figura 2A, 2B e 2C).

(AC) SNU-213 células de cancro pancreático humano MiaPaCa-2, Panc-1, e foram incubadas com doses variadas de kaempferol durante 72 h. A viabilidade foi medida por ensaio de WST-1 (Os dados representam a percentagem ± SD e são representativos de três experiências individuais, *

P

0,05, **

P

0,01, * **

p Art 0,001). células (D) MiaPaCa-2 foram incubadas na ausência ou na presença de campferol (0, 0,1, e 10? M) e /ou z-VAD (1 uM) durante 72 h. Os lisados ​​celulares foram sujeitos a análise de immunoblot utilizando anticorpos contra total de caspase-3 clivada, caspase-3-, e GAPDH. células (E) Panc-1 foram incubadas com diferentes dosagens de campferol (0, 10, e 100 uM) durante 72 h. Os lisados ​​celulares foram sujeitos a análise de immunoblot utilizando anticorpos contra PCNA, total de caspase-3 clivada, caspase-3-, e GAPDH.

Para verificar o efeito anti-viabilidade do campferol, investigou ainda mais a caspase apoptose -3-mediada em MiaPaCa-2 pancreáticas células cancerosas que foram mais sensíveis ao tratamento kaempferol. Inicialmente certificada que 10 uM kaempferol significativamente reduzida viabilidade das células, o que foi significativamente suprimido por pré-tratamento do inibidor da pan-caspase, Z-VAD (dados não mostrados). Além disso, kaempferol induziu a clivagem de caspase-3, o qual foi eficazmente suprimida quando as células MiaPaCa-2 foram pré-tratadas com z-VAD (Figura 2D). Resultados semelhantes foram obtidos em 100 campferol uM tratada Panc-1 e células SNU-213 (Figura 2E e dados não mostrados). A abundância de PCNA também foi diminuída durante a apoptose, conforme relatado anteriormente [24]

Estes resultados indicam que o campferol pode inibir eficazmente o crescimento de células de cancro do pâncreas, desde que seja administrado em doses adequadas.; induz

in vitro

apoptose das células de câncer de pâncreas.

Kaempferol inibe a migração de células cancerosas pancreáticas humanas, mesmo em doses baixas

Para verificar ainda mais o efeito anti-câncer do kaempferol , investigaram o efeito inibitório do campferol na migração de MiaPaCa-2, Panc-1, e células SNU-213. Em comparação com as células de controlo tratadas com PBS, a migração induzida por soro de células de MiaPaCa-2 foi diminuído até aproximadamente 30% após terem sido tratadas com 1 uM campferol (Fig 3A). Depois de ser tratada com 1 uM kaempferol sob as mesmas condições, a migração de Panc-1 e células SNU-213 foram inibidas até cerca de 20% e 30%, respectivamente (Fig 3B e 3C). O tratamento com até 1 uM campferol 3-O-glucósido e campferol-4′-O-glucósido não teve nenhum efeito sobre a migração de MiaPaCa-2, Panc-1, e SNU-213 células S2 (FIG). Em seguida, investigou-se a toxicidade basal de kaempferol usando HUVEC como células normais representativos. Kaempferol tratamento (0, 0,005, 0,01, 0,2, 0,5, e 1 uM) não afectou a migração e a viabilidade de HUVECs (Fig 3D e dados não mostrados). Além disso, avaliou-se as actividades invasiva seguintes do tratamento dependente da dose do campferol na MiaPaCa-2, Panc-1, e células SNU-213. Em comparação com as células de controlo tratadas com PBS, invasão induzida por soro de MiaPaCa-2, Panc-1, e células SNU-213 foi inibida até 40%, 30%, e 40%, respectivamente, após o que foram tratadas com 1 uM kaempferol (Fig 3E, 3F e 3G). Figura 3H mostra as imagens representativas de efeito anti-invasão produzido por tratamento kaempferol 1 uM. Kaempferol especificamente inibida a migração induzida por soro e invasão das células cancerosas pancreáticas humanas a uma dosagem relativamente baixa, sem qualquer toxicidade.

(AD) MiaPaCa-2, Panc-1, SNU-213 células, e HUVECs foram incubadas com doses variáveis ​​de kaempferol durante 6 h. As atividades de migração foram avaliados utilizando o ensaio Transwell-migração (Os dados representam o percentual ± SD e são representativos de três experiências individuais, ns significa não significativo, *

p Art 0,05, **

p Art 0,01, ***

p Art 0,001). (E-G) As células SNU-213 MiaPaCa-2, Panc-1, e foram incubadas com doses variadas de kaempferol durante 20 h. As atividades invasoras foram avaliados utilizando o ensaio ensaio Transwell-invasão (dados representam o percentual ± SD e são representativos de três experiências individuais, *

p Art 0,05, **

p Art 0,01, ***

p Art 0,001). (H) Imagem representativa de ensaio de invasão Trans-well (barra de escala = 50 mm).

Kaempferol tem efeitos anti-cancro através da via de sinalização relacionados com o EGFR nas células cancerosas pancreáticas humanas

Vários alvos poderia ser pressuposto de acordo com os produtos químicos a partir de ervas medicinais que utilizam o banco de dados TCMSP pública [22]. Foram selecionados 24 alvos celulares de cancro do pâncreas de kaempferol usando o banco de dados TCMSP; eles incluídos seis receptores, incluindo o receptor do factor de crescimento epidérmico (EGFR), 16-quinases, e duas proteínas não classificadas (Fig 4A e 4B).

Vinte e quatro alvos potenciais, utilizando a base de dados TCMSP foram subdivididos em receptor (A) e quinases /categorias de proteínas (B) como suas funções.

Temos demonstrado anteriormente que a via de sinalização relacionados com o EGFR é de vital importância para a atividade migratória de células de câncer pancreático [25]. Além disso, ativada por mitógeno proteína quinase (MAPK) vias de sinalização também são críticos para a migração e invasão de várias células cancerígenas, incluindo cânceres de pâncreas [25-27]. Especialmente, kaempferol induz apoptose em duas linhas celulares de leucemia, através da via PI3K /AKT [28]. Portanto, para entender a inibição migratória vias de sinalização de tratamento kaempferol em células de cancro pancreático humano, examinamos o nível phosphoylation de EGFR, Src, AKT e ERK1 /2 depois de submeter as células cancerosas do pâncreas aos tratamentos kaempferol dependentes do tempo. O tratamento do campferol, que foi administrada exogenamente às células de cancro do pâncreas, diminuíram significativamente os níveis de EGFR phosphoylation, Src, AKT e ERK1 /2 de uma forma dependente do tempo em MiaPaCa-2 e células Panc-1 (Figura 5A). Além disso, a inibição da via de sinalização de EGFR usando inibidor farmacológico, gefinitib suprimida Src, AKT e ERK1 2 phosphoylation /de um modo dependente da dose na Panc-1 células (Fig 5B). Resultados semelhantes também foram obtidos a partir de células MiaPaCa-2 (dados não mostrados). Verificou-se ainda mais o envolvimento de EGFR via na modificação de transdução de sinal por tratamento kaempferol. Dependente da dose, tratada com campferol (0, 0,2, 0,5, e 1 uM) de migração significativamente inibida de MiaPaCa-2, Panc-1, e células SNU-213, o qual foi eficazmente suprimido por pré-tratamento de dose sub-letal de gefitinib (0,01 ^ M) em MiaPaCa-2, Panc-1, e células SNU-213, respectivamente (Figura 5C, 5D e 5E). Estes resultados indicaram que kaempferol inibe especificamente a migração induzida por soro através do bloqueio da via de sinalização relacionada com o EGFR.

MiaPaCa-2 e células (A) Panc-1 foram incubadas com campferol (1 uM), durante vários períodos de tempo , e os lisados ​​celulares foram submetidos a análise de transferência de Western utilizando anticorpos específicos para fosfo-EGFR (Tyr1068), EGFR, fosfo-Src (Tyr416), Src, fosfo-AKT (Ser473), AKT total de, fosfo-ERK1 /2 (Thr202 /Tyr204), ERK total e GAPDH. intensidades de pixel relativos de p-EGFR, p-Src, p-AKT, e P-ERK1 /2 foram medidos por para p-EGFR /EGFR, p-Src /Src, p-AKT /AKT, e P-ERK1 /2 /ERK2 usando o software Image J.. células (B) Panc-1 foram incubadas com diferentes doses de gefitinib de 60 minutos, e os lisados ​​celulares foram submetidos a análise de mancha de Western utilizando anticorpos específicos para fosfo-EGFR (Tyr1068), EGFR, fosfo-Src (Tyr416), Src, fosfo-AKT (Ser473), AKT total de, fosfo-ERK1 /2 (Thr202 /Tyr204), ERK total e GAPDH. intensidades de pixel relativos de p-EGFR, p-Src, p-AKT, e P-ERK1 /2 foram medidos por para p-EGFR /EGFR, p-Src /Src, p-AKT /AKT, e P-ERK1 /2 /ERK2 usando o software Image J.. (C-D) MiaPaCa-2, Panc-1, e células SNU-213 foram incubadas na ausência ou na presença de gefitinib (0,01 uM) durante 1 h, e ainda tratados com doses variadas de kaempferol durante 6 h. As atividades de migração foram avaliados utilizando o ensaio Transwell-migração (

p

-valor por

t

teste de Student e são representativos de três experiências individuais, asteriscos indicam uma diferença significativa em relação à ausência gefitinib e presença , *

p Art 0,05, **

p

. 0,01)

em conjunto, estes resultados indicam claramente que kaempferol eficiente inibe a atividade migratória por bloqueando o EGFR relacionados Src, AKT e ERK1 /2 via de sinalização em células de cancro pancreático humano (Fig 6).

Discussão

neste estudo, determinou-se que a atividade migratória de células de cancro pancreático humano foi significativamente inibido, mesmo em dosagens relativamente baixas de tratamento campferol. Nós também certificou que kaempferol efetivamente inibe o crescimento das células do cancro do pâncreas através da apoptose

in vitro

de uma forma dependente da dose. Além disso, foram selecionados 24 alvos do kaempferol usando o banco de dados TCMSP, e verificou que os efeitos anti-câncer de tratamento kaempferol em células de câncer pancreático foram causados ​​pelo bloqueio do EGFR relacionados Src, AKT, ERK1 /2 via de sinalização.

Embora os pesquisadores desenvolveram ferramentas state-of-the-art de diagnóstico e terapias direcionadas abrangentes para inibir o câncer de pâncreas, a taxa de sobrevida global dos pacientes ainda não melhorou [27,28]. Uma das características importantes de cancro do pâncreas é a sua actividade migratória agressivo, que é responsável para o desenvolvimento de cancro do pâncreas unrespectable, localmente avançado, ou metastático [29]. Neste relatório, kaempferol teve efeito anti-migratório significativo no pâncreas.

O efeito anti-câncer do kaempferol sobre o crescimento de células de câncer pancreático pode ser devido à sua actividade anti-oxidação e citotóxico [30,31]. Além disso, kaempferol inibe a actividade das seguintes enzimas ligadas ao crescimento celular e via de sinalização: cAMP-fosfodiesterase, tirosina cinase, ADN de topoisomerase II, topoisomerase I, e a cadeia leve da miosina-quinase [32-34]. Kaempferol tratamento também inibe a síntese dos ácidos gordos (FAS) e crescimento celular, e induz a apoptose em ambas as células de cancro da mama e da próstata. Isto indica que a indução de apoptose em várias células de cancro pode ser associada com a inibição da FAS [35,36]. De acordo com estudos anteriores, observou-se que kaempferol inibiu o crescimento celular, fazendo com que a apoptose de células cancerosas através do PCNA diminuiu e clivado via da caspase-3; esta inibição das células cancerosas foi conseguida por administração kaempferol em diferentes dosagens. Mas, o efeito de inibição foi diminuída quando as células de cancro pancreático foram submetida a um pré-tratamento de Z-VAD-FMK. Zhang et al. relatou o efeito dramático da

Ginkgo biloba

extrair kaempferol na inibição viabilidade em baixas concentrações [9]. Em nosso estudo, kaempferol mostraram inibição viabilidade moderada em doses excessivas de kaempferol em células MiaPaCa-2 e Panc-1. As diferenças entre os estudos podem reflectir as condições da linha de células [37] ou diferente fonte de campferol.

A estrutura química dos flavonóides tem sido correlacionada com a sua bio-actividade [38-40]. Das et al. mostrou que a bio-actividade é afectado pela estrutura do flavonóide no óleo de palma refinado. moléculas de flavonóides com um grupo hidroxilo em anéis A e B e a posição C3 tinha uma tendência de bio-actividade potente [41]. Em acordo, o campferol mais eficaz tem os grupos poli-hidroxilo potentes sobre A, B, e C em comparação com anéis campferol 3-O-glucósido e campferol-4′-O-glicosídeo.

pode bloquear a Kaempferol o desenvolvimento de cancro metastático por inibição da actividade de metaloproteinase de matriz-3 em altamente invasiva a linha celular de cancro da mama MDA-MB-231 [15]. tratamento Kaempferol também inibiram a migração de células MDA-MB-231 por meio do bloqueio de c-Met e AKT vias de sinalização [14]. No entanto, não existem relatos anteriores sobre os efeitos do tratamento kaempferol sobre a migração de células de cancro do pâncreas. Notavelmente, kaempferol tem o potencial para inibir eficazmente a actividade migratória das células de cancro do pâncreas humanos, sem qualquer toxicidade, mesmo em doses relativamente baixas. Além disso, doses elevadas de campferol (10 e 100 uM) inibiu mais significativamente a migração de células de cancro do pâncreas. No entanto, as dosagens máximas também afetou significativamente a migração de HUVEC.

Devido ao notável desenvolvimento da bioinformática-campos relacionados ao câncer, poderíamos selecionar 24 alvos celulares de cancro do pâncreas de kaempferol [42]. Em particular, o facto de que o receptor do factor de crescimento de hepatócitos e EGFR (HGFR) eram alvos em cancros pancreáticos para campferol foi mais inspirador. Curiosamente, não houve correlação entre os cancros pancreáticos e derivados kampferol, campferol 3-O-glucósido, e campferol-4′-O-glucósido na base de dados TCMSP. Pode ser a causa potencial de atividades ineficazes de kaempferol-3-O-glicosídeo e kaempferol-4′-O-glicosídeo na célula câncer no pâncreas, no entanto, mais estudos são necessários para entender o mecanismo fina sobre a distinção de kaempferol e seus derivados .

EGFR e HGFR são representativos receptores tirosina-quinase que são as principais causas de câncer de pâncreas agressivamente malignas [17,43,44]. Aqui, verificamos que o tratamento de kaempferol diminui eficazmente a phosphoylation de EGFR, Src, AKT, ea ERK1 2 pathway /. Gefinitib também inibiu a phosphoylation de EGFR, Src, AKT e ERK1 /2 via, e, além disso, o pré-tratamento de gefinitib diminuído o efeito do campferol na migração de células de cancro do pâncreas. Assim, que validou a informação da base de dados TCMSP que o EGFR pode ser o alvo de kaempferol em cancros pancreáticos. Além disso, a correlação entre HGFR e campferol não pode ser ignorado. estudo preciso do mecanismo devem ser realizados para compreender os efeitos anti-câncer de kaempferol em HGFR expressas pâncreas.

Neste estudo, nós mostramos que kaempferol poderia atuar como um potente inibidor das células de câncer de pâncreas fenótipo migratória , funcionando através do bloqueio dos relacionados EGFR Src, AKT e ERK1 /2 via de sinalização. Portanto, kaempferol é um reagente de câncer pancreático anti-protetora e facilmente disponíveis que podem inibir o crescimento agressivo e atividade migratória frenética dos cânceres de pâncreas.

Informações de Apoio

S1 Fig. As sensibilidades de kaempferol e seus derivados em células cancerosas viabilidade pancratic humano.

MiaPaCa-2, Panc-1, e 213 SNU-células pancreáticas humanas cancerosas foram incubadas em doses variadas de kaempferol e seus derivados campferol 3-O-glucósido e kaempferol-4′-O-glucósido durante 72 h. A viabilidade foi medida por ensaio de WST-1 (dados representam o percentual ± SD e são representativos de três experiências individuais, *

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0,05, **

P

0,01).

doi: 10.1371 /journal.pone.0155264.s001

(EPS)

S2 Fig. O efeito de diferentes doses de deriviates kaempferol sobre a migração de células de cancro pancreático humano.

Células (AC) MiaPaCa-2, Panc-1, e SNU-213 foram incubadas com doses variáveis ​​de campferol 3-O-glucósido e campferol -4′-O-glucósido durante 6 h. As atividades de migração foram avaliados utilizando o ensaio Transwell-migração (dados representam o percentual ± SD e são representativos de três experiências individuais, *

p Art 0,05)

doi:. 10.1371 /journal.pone. 0155264.s002

(EPS)

Reconhecimentos

Este trabalho (Grants No. C0301723) foi apoiada por negócios para os estabelecimentos de cooperação acadêmico-industrial financiados Coreia do Small and Medium Business Administration em 2015.