Abstract

Circulação de células tumorais enumeração (CTC) promete ser um importante preditor de resultados clínicos para uma variedade de cancros. métodos de enumeração CTC estabelecidas se baseiam principalmente em captura de afinidade de antigénios da superfície celular e têm sido criticados por subestimação de números CTC devido ao viés antigênica. Emergentes estratégias de captura de CTC normalmente distinguir estas células com base em suas características biomecânicas assumidos, que muitas vezes são validados usando células cancerosas cultivadas. Neste estudo, foi desenvolvida uma ferramenta de software para investigar as propriedades morfológicas dos CTC de pacientes com cancro da próstata resistentes à castração e células de cancro da próstata em cultura, a fim de estabelecer se o último é um modelo adequado para o ex. Nós isolado ambos os CTCs e células cancerosas cultivadas a partir de sangue total usando o sistema CellSearch® e examinadas várias características citomorfológicas. Em contraste com as células cancerosas em cultura, CTC enriquecidos pelo sistema CellSearch® foram encontrados a ter tamanho significativamente menor, relação núcleo-citoplasmática maior, e a forma mais alongada. Estes CTCs também foram encontrados para exibem significativamente maior variabilidade do que as células cancerosas cultivadas em proporção e forma perfil núcleo-citoplasma

Citation:. Parque S, Ang RR, Duffy SP, Bazov J, Chi KN, Black PC, et ai. (2014) diferenças morfológicas entre circulante células tumorais de pacientes com câncer de próstata e células cultivadas do cancro da próstata. PLoS ONE 9 (1): e85264. doi: 10.1371 /journal.pone.0085264

Autor: David T. Eddington, Universidade de Illinois em Chicago, Estados Unidos da América

Recebido: 13 Julho, 2013; Aceito: 25 de novembro de 2013; Publicação: 08 de janeiro de 2014

Direitos de autor: © 2014 Park et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiada por doações de Ciências Naturais e Engenharia Council of Canada, Canadian Institutes of Health Research, Prostate Cancer Canadá, Iniciativa Pesquisa translacional de Vancouver próstata Centro de Aceleração Descoberta e Desenvolvimento, programa de treinamento de engenheiros-em-Scrubs na UBC, Terry Instituto de Pesquisa Fox e um prêmio do Movember Plano de Ação global (GAP) Iniciativa de Biomarcadores do cancro da próstata. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

Conflito de interesses:. Os autores confirmam que o co-autor Peter Black é um membro do Conselho Editorial PLOS. Isto não altera a adesão dos autores para todas as políticas PLoS ONE em dados e materiais de compartilhamento.

Introdução

circulantes células tumorais (CTCs) têm sido implicados como potenciais sementes de metástase do câncer e são, portanto, de grande importância na pesquisa, na gestão da doença e desenvolvimento de drogas [1] – [3]. Métodos estabelecidos para capturar estas células, tais como o sistema Veridex CellSearch® (Raritan, NJ, EUA), dependem de captura por afinidade do antigénio de superfície de células epiteliais, EpCAM, seguido de marcação por fluorescência de citoqueratina intracelular (CK) [4] – [ ,,,0],6]. Enquanto identificação e contagem CTC, com base na expressão biomarcador epitelial, pode ser utilizado para prever o resultado clínico pobre [7] – [10], esta estratégia pode ser propenso à subestimação do número CTC devido a epitelial-a-mesenquimal transição [11] – [ ,,,0],14], fraca expressão destes factores em alguns tipos de tumores [14], ou alterações na expressão destes factores após quimioterapia [15]. Essas limitações podem ser particularmente relevante, dado que a aparência de mesenquimais CTCs está associada com a progressão da doença [16] e a inclusão de critérios adicionais de identificação CTC pode ser um complemento valioso para convencional enumeração CellSearch® CTC.

Além a sua expressão de antigénios de tumor, ele é amplamente aceite que CTC têm características biomecânicas distintas, incluindo tamanho maior do que os leucócitos, maior nuclear para citoplasmático (N: C) elevada, bem como a morfologia nuclear distinta [17]. Numerosos estratégias têm sido desenvolvidas para enriquecer CTC Com base nessas características [18]. CTC foram isolados utilizando centrifugação em gradiente de densidade [19] ou por tamanho, usando filtração de microporo [20] – [22]. Recentemente, tecnologias de microfluidos ter alcançado superior, a eficiência de captura do CTC e enriquecimento usando abordagens tais como cromatografia hidrodinâmica [23] – [28], filtração de microfluidos [29] – [31], e dieletroforese [32] – [35]. O desenvolvimento dessas tecnologias tipicamente usadas células cancerosas em cultura como um modelo para morfológica CTC clínicos. No entanto, enquanto que as células de cancro e algumas CTC têm características biofísicas comuns [17], pode CTC exibem características morfológicas distintas, dependendo do tipo de tumor originário [36]. Uma estratégia alternativa seria incorporar caracterização biomecânica com a estratégia enumeração CellSearch® CTC à base de antigene mais estabelecido.

Nós desenvolvemos uma ferramenta de software para analisar as propriedades citomorfológicas de células cancerosas. Realizamos esta ferramenta para examinar o paciente CTC e morfologia linha de células de câncer de modelo, seguindo o enriquecimento CellSearch®. Estes resultados proporcionam dados importantes para ajudar na identificação CTC baseado em critérios antigénio combinado e biomecânicas [36], assim como na escolha de modelos apropriados para optimização de enriquecimento CTC biomecânico.

Materiais e Métodos

Coleta de sangue Amostra

amostras de sangue de doadores saudáveis ​​e pacientes com câncer de próstata resistente à castração metastático (CRPC) foram obtidas com consentimento informado por escrito e recolhidos usando protocolos aprovados pelo Clinical bordo revisão Ética UBC (http: //pesquisa. ubc.ca/ethics/clinical-research-ethics-board). Os pacientes CRPC incluídos neste estudo variaram em idade, de 53-83 anos, e os níveis de PSA, 21,1-2200 ng /L (Tabela S1). Amostras de sangue em ambos os casos são coletados e armazenados em tubos CellSave® Vacutainer (Becton Dickinson, Raritan, NJ).

isolamento e enumeração de CTCs por CellSearch

isolamento CTCs e enumeração foram realizados usando o CellSearch® sistema como descrito anteriormente [4], [5], [37]. Resumidamente, as amostras de sangue foram colhidas em 10 ml tubos CellSave Vacutainer (Becton Dickinson) contendo anticoagulante proprietária e conservante. As amostras foram mantidas à temperatura ambiente e processados ​​dentro de 48 horas após a colheita. O sistema de captura CellSearch® células que expressam EpCAM utilizando contas magnéticas revestidas de anticorpo e, em seguida, etiquetas destas células com corantes fluorescentes, tais como DAPI, CD45, e citoqueratinas, a fim de distinguir potenciais CTC a partir de leucócitos. Após a captura imunomagnética e coloração por fluorescência, imagens de candidato CTC são obtidos em três canais de campo claro e de fluorescência (DAPI, CD45, e citoqueratinas). As imagens captadas são segmentadas em várias imagens pequenas, cada uma contendo uma única célula e reagrupados num painel em software. Finalmente, um técnico certificado identifica positivamente as CTCs, revendo o tamanho, a forma ea intensidade de fluorescência de cada célula candidato

Cultura de Células e processamento

linhas de células cancerosas humanas da próstata incluindo LNCaP (ATCC.: CRL-1740), DU145 (ATCC: HTB-81), e C4-2 (ATCC: CRL-1595) foram propagadas em cultura utilizando meio RPMI-1640 (Hyclone, Logan, UT) com 10% de soro fetal de bovino a 37 ° C com 5% de CO

2. PC3 (ATCC: CRL-1435) de células foi cultivada do mesmo modo, mas utilizando meio DMEM (Hyclone, Logan, UT) em vez disso. células cancerosas cultivadas foram incrementadas em 7,5 ml de sangue de um dador saudável em tubos Vacutainer CellSave® e processados ​​dentro de 48 horas de forma idêntica como as amostras dos pacientes.

Processamento de Imagem

Para estudar a morfologia das CTCs e as células cancerosas cultivadas, exportamos imagens de células individuais do sistema CellSearch® e analisá-los usando um programa de software foi desenvolvido utilizando o LabVIEW (Figura S1; National Instruments, Austin, TX). As imagens eram matrizes quadradas com tamanhos que variam de 80 a 200 pixels e formatado como portáteis de rede arquivos gráficos (PNG) como 8 mono bit ou 24 composições coloridas bit (Figura S1). Para área calculada em pixels, das imagens foram processadas utilizando inicialmente thresholding cluster para detectar objectos brilhantes para combinar com o auto-exposição efectuada pelo sistema CellSearch® (Figura 1A). Partículas com pixels em contacto com a borda do quadro de imagem foram removidas utilizando um filtro de rejeição de partícula fronteira para eliminar células incompletamente delimitadas por as imagens (Figura S1). imagens multi-partículas também foram eliminados usando segmentação de bacias hidrográficas. partículas de detritos foram removidos utilizando-duas iterações de um filtro de partículas erosão 3 × 3. Celular e tamanho nuclear foi determinada por contagem do número de pixels de limite acima no canal DAPI e citoqueratina respectivamente. Os resultados para o cálculo de células e o tamanho nuclear foram filtradas para remover as células com tamanhos nucleares improváveis, que definimos como a área nuclear superior a 95% da área da célula. Estas etapas de processamento rejeitado 209 732 de imagens, ou 28,5% do total. A maioria das imagens rejeitadas continha fragmentos celulares ou imagens de baixa qualidade (Figura S2). Software

Labview executa a série de operações em grandes conjuntos de dados diferentes magos fornecidos pelo sistema CellSearch®. Dois paralelos de filtragem e medidas, tais como o cálculo da área em pixels (A) e estimar a elipse de melhor ajuste (B) são realizados para melhor desempenho e resultados.

excentricidade da Forma Celular Medição

para analisar a excentricidade da forma da célula, uma elipse foi equipado com o contorno da célula. A síntese de estimar a elipse de melhor ajuste usando o software LabVIEW é mostrado na Figura 1B. Para melhorar a detecção do contorno celular, as imagens eram contrastada antes de auto-limiar. Três iterações de um filtro de erosão 3 × 3, bem como um único filtro dilatam foram realizadas para alisar as arestas das partículas. Fitting foi realizada numa imagem binária, usando o método de rastreio do contorno de pesquisa para o mais longo do perímetro da elipse no interior da imagem (Figura S1). Após a montagem da elipse os resultados foram visualmente confirmada pelo operador. Para quantificar excentricidade da forma da célula, foi calculado o factor de alongamento (EF), definida como a relação entre os eixos maior e menor da elipse de melhor ajuste.

Tamanho medição de calibragem

Para calibrar medições do tamanho das imagens CellSearch®, medimos separadamente o tamanho das células de cancro da próstata em cultura em suspensão utilizando o analisador de células baseado em fotografada CEDEX XS (Roche, Alemanha). células cancerígenas cultivadas crescidas são tripsinizadas e re-suspensos no meio de cultura. As contagens celulares foram avaliadas utilizando uma diluição da suspensão de células em azul de tripano (Gibco, Grand Island, NY) 01:01. A 10 ul de suspensão de células é carregado na corrediça inteligente (Roche, Alemanha), e, em seguida, ler para medir o diâmetro da célula. O factor de conversão de pixels para micrómetros pode ser determinada utilizando a seguinte equação,

O tamanho dos CTC a partir de amostras de doentes foi estimada por produtos do factor de conversão e a área de CTC medido a partir de imagens CellSearch®.

citoplasmática nuclear de medição da relação

o rácio citoplasmática nuclear é definida como a relação da área nuclear (a

N) para a área citoplasmática (a

C), onde a

C é considerada como a área da célula excluindo Um

N.

Amostra Seleção

CTCs analisados ​​neste estudo foram obtidos a partir de amostras de sangue de linha de base de consentindo pacientes diagnosticados com câncer de próstata resistente à castração metastático que eram sem quimioterapia anterior e inscrito em uma fase II ensaio clínico randomizado de um novo agente [38]. Foram coletadas todas as imagens que mostram DAPI + CK + CD45- eventos que foram identificadas por CellSearch® para os 83 indivíduos incluídos no estudo. Com base na probabilidade de que uma pequena fração desses eventos representados CTCs legítimos restringimos nossa análise de 19 pacientes que tiveram 40 DAPI + CK + CD45- eventos. Três destes pacientes foram posteriormente excluídos por causa da baixa qualidade das imagens. CTC enumeração foi determinada de forma independente para os restantes 16 pacientes por um técnico CellSearch® qualificado e as contagens variaram de 11 a 106 CTCs /7,5 ml, com um valor médio de 41,5 CTCs /7,5 ml. Após a exclusão de imagens inadequadas (Figura S2), porque eles não podem ser interpretados pelo nosso software, um total de 523 CTCs de pacientes com câncer de próstata foram analisados ​​juntamente com 800 células cancerosas cultivadas a partir das linhas de células de câncer de próstata quatro.

resultados e Discussão

Tamanho da célula

Analisando imagens de células processadas utilizando o sistema CellSearch® e calibrados contra microscopia padrão, foram encontradas diferenças significativas entre tamanho CTCs de cancro da próstata e cancro da próstata células em cultura (Figura 2 ). Especificamente, o diâmetro médio dos CTC capturado por CellSearch®, entre os 16 pacientes, é um pouco mais de metade das células cancerígenas em cultura, com 7,97 ± 1,81 mm para CTC e 13,38 ± 2,54 ^ M para as células cancerosas em cultura (p 0,001), respectivamente . Enquanto Coumans e colegas [21] empregou uma estratégia de filtragem micropore para o enriquecimento de ambas as linhas celulares de cancro e CTCs derivado do paciente, que caracterizou as propriedades biomecânicas da mesma EpCAM

+ CK

+ CD45

– CTC população apresentadas neste estudo. Sua análise relatou que CTCs próstata foram menores do que os de mama ou câncer colorretal, no entanto, eles estimaram que CTCs câncer de próstata foram ~ 25% maior do que o nosso relatório atual. Enquanto esta discrepância pode representar o estresse celular imposta no processamento de amostras por imunocaptura, no estudo atual, e filtração micropore, no primeiro caso, essa diferença também pode ter surgido a partir de diferentes estratégias utilizadas para medir o tamanho da célula. Coumans utilizada uma pipeta Coulter para calibração tamanho, que foi menos precisa do que a análise de imagens para pequena escala de comprimento ( 10 mm) estimativas de tamanho. Além disso, a nossa estimativa do diâmetro da célula é consistente com o volume médio de célula pequena relatado por Ligthart e colaboradores [36], bem como um outro estudo recente mostrando LNCaP área celular total é 1,6 vezes maior do que a de EpCAM

+ CK

+ CD45

– CTCs de câncer de próstata [39]. É também interessante notar que o tamanho de poro ideal usadas em estudos anteriores para captura com base filtração dos CTC foi de 8 mm, que coincide com o diâmetro de célula prevista de 7,97 ^ M [21], [22], [29], [40] . estratégias de filtração de microporo relataram tão elevada como 90% de recuperação CTC [40], mas tem a pureza da amostra relativamente pobre [41] .A semelhança em tamanho entre CRPC CTC examinados neste estudo e os leucócitos, isto pode representar uma limitação fundamental de estratégias baseadas em filtração . Esta limitação pode ser potencialmente superados por estratégias de enriquecimento que combinam CTC enriquecimento com base em uma combinação de tamanho de célula e deformabilidade [29] – [31].

O diâmetro médio dos CTC (7,97 mm) foi significativamente menor do que cultivadas células cancerosas (13,38 mm) (p 0,001)

Nós também considerou a possibilidade de os nossos critérios de seleção de pacientes (contagem 40). pode ter influenciado para um maior número de CTCs menores. Enquanto os pacientes selecionados foram quimioterapia-negativos, eles teriam participado de uma série de intervenções terapêuticas e representaria pacientes nos estágios finais da doença. Devido a estes ou outros encargos fisiológicas únicas dentro do nosso grupo de pacientes, o cuidado deve ser exercido em generalizar estes resultados para todos CRPC CTCs. No entanto, observamos nenhuma correlação entre o tamanho das células CTC e contagem de células (Tabela S1 e Figura S3) que de outra forma sugerem que a gravidade da doença afeta o tamanho da célula. Curiosamente, enquanto que outros estudos reportaram um elevado grau de heterogeneidade no tamanho das células CTC [21], [36], [42], [43], a nossa estimativa de tamanho com base na análise microscópica mostrou que a variação inter-pacientes da célula significativo tamanho era bastante pequeno, variando de 7,05 uM a 8,94 uM com uma média de 8,04 ^ m. Além disso, o critério utilizado actualmente aceite pelo sistema para validar CellSearch® CTC é que o seu tamanho tem de ser maior do que vizinhos leucócitos [17]. No entanto, esta definição de tamanho foi determinada em grande parte baseado no CTC derivadas de cancro da mama [44] – [47], que tem um diâmetro de célula médio de 13,1 uM [21]. A nossa observação de que CTCs de pacientes com CRPC são significativamente menores em tamanho (~ 8 mm) sugere que esses critérios convencionais para identificação CTC pode subestimar a verdadeira contagem CTC.

Da mesma forma, nossa observação de que o câncer de próstata EpCAM

+ CTCs são consistentemente menor do que as células cancerosas cultivadas é potencialmente importante para as estratégias de enriquecimento CTC sem rótulo emergente. Em primeiro lugar, o enriquecimento dos CTC baseando-se apenas no tamanho podem ter eficácia limitada para a captura dos CTC menores encontrados em pacientes CRPC porque eles não será tão claramente discrimináveis ​​a partir de leucócitos de pacientes. Enquanto as células cancerosas maiores são tipicamente usadas para demonstrar a eficácia de tais técnicas, tais como HELA ( 20 mm), LNCaP (18 uM), MCF-7 ( 15 mm), MDA-231 (15 um) [21 ], [48], [49], as células cancerosas em cultura, tais como células de linfoma de rato L1210 (10 uM), com diâmetro mais pequeno podem representar melhores modelos para enriquecimento CTC [31], [50], [51]. Em segundo lugar, a contribuição do nucleoplasma a rigidez celular é 10 vezes maior do que o citoplasma [52]; estratégias de enriquecimento CTC que CTCs de captura com base no tamanho e deformabilidade pode vir a ser superiores aos desse tipo com base no tamanho sozinho.

Forma celular

O uso de células cancerosas cultivadas cravado em sangue a partir saudável doadores podem modelar a separação dessas células a partir de células hematológicas que diferem no tamanho da célula mas o pré-tratamento comum destas células com tripsina, a dissociar-los a partir de frascos de cultura de tecidos, ou o processamento da amostra usando a estratégia de captura por afinidade CellSearch pode também influenciar drasticamente o a forma da célula. Através de comparação de células cultivadas tripsinizadas e CRPC CTCs, seguindo o enriquecimento CellSearch® CTC, avaliou-se essas células cultivadas são modelos adequados para CTCs derivado do paciente. Em contraste com as células cultivadas, que eram geralmente de forma redonda, CTC exibiram variabilidade forma significativa com muitas células tendo uma forma mais alongada (Figura 3). Foram quantificados a excentricidade da forma da célula utilizando o factor de elongação (EF), definida como a relação entre os eixos maior e menor da elipse de melhor ajuste. Como mostrado na Figura 4A, CTC foram significativamente mais alongado do que as células cancerosas em cultura com um EF mediano média de 1,27 em comparação 1,17 para as células cancerosas em cultura (p 0,05). Esta observação é consistente com outros estudos que relatam pleomorhpism significativa entre CTCs [21], [36], [42], [43]. Uma causa possível para a diversidade na morfologia das células são eventos apoptóticos associados ao CTC divulgação [53]. No entanto, as alterações observadas no citomorfológicas CTC pode representar alterações funcionais associados com as interacções entre o endotélio e CTC ou alongamento celular associados ao transporte vascular [54], [55]. Curiosamente, anormalidade citomorfológicos de CTCs foi correlacionada com mau resultado clínico na mama metastático, colo-rectal e cancro da próstata. [36].

CTCs eram visivelmente menor do que as células cancerosas cultivadas (A-D). células cancerosas cultivadas eram em sua maioria redonda com celular normal e as formas nucleares. O núcleo foi tipicamente centrada e rodeado por citoqueratina (E-G). CTCs exibiu formas muito variáveis, incluindo round (E), oval (F), alongada (G-J), e os clusters (L). As células não-redondas e multi-nucleadas foram, por vezes observado (G-K). A barra de escala amarela é de 5 mm de comprimento

A:. Factor de alongamento (EF) de CTCs de pacientes com câncer de próstata em comparação com células de câncer de próstata em cultura. A mediana de EF CTC era geralmente maior com a variabilidade inter- e intra-paciente significativa. B: citoplasmática Nuclear (N /C) rácios de CTCs de pacientes com câncer de próstata em comparação com células de câncer de próstata em cultura. Mediana com quartis superiores e inferiores é mostrado para cada amostra. O rácio médio N /C para CTCs foi geralmente maior com a variabilidade inter e intra-paciente significativa.

citoplasmática Nuclear Rácio

O rácio citoplasmática nuclear (N /C) é definida como a relação da área nuclear aparente e a área da célula aparente com o núcleo subtraídos. Em comparação com as células cancerosas em cultura, CTC se espera que tenham maior N /C devido ao seu tamanho de células mais pequeno e maior tamanho nuclear provavelmente devido a possíveis anomalias cromossómicas. Encontramos a mediana N /C para todas as células cancerosas cultivadas para ser 1,12 enquanto a mediana média relação N /C do CTC dos pacientes, enriquecido pelo sistema CellSearch® ser 1,43. Esta observação reforça ainda mais a eficácia potencial de enriquecimento CTC à base de deformabilidade, como o nucleoplasma contribui 10 vezes mais a rigidez células do que no citoplasma [52]. Além disso, como mostrado na Figura 4B, CTC mostrou significativamente maior variabilidade N /C do que as células cancerosas em cultura. Considerando que a relação N /C do CTC correlaciona-se com a evolução da doença pobre [36], pode-se especular que, dentro desta população heterogénea, existem subpopulações de células com maior potencial metastático. Se assim for, então talvez uma medida mais relevante do estado da doença é a contagem de uma determinada subpopulação de CTCs, em vez de a contagem de todas as CTCs como usado atualmente [9], [56].

encolhimento celular

Uma preocupação associada com a medição de tamanho de célula usando o sistema CellSearch® é se armazenar amostras de células nos tubos CellSave® modifica o tamanho da célula e do núcleo. Para investigar, nós comparamos as células cancerosas cultivadas cravado em sangue de doadores saudáveis ​​processados ​​imediatamente com as mesmas células tratados após 48 horas de armazenamento. O diâmetro das células foi encontrada para diminuir por ~ 6%, enquanto que o diâmetro nuclear foi encontrada para diminuir em ~ 10% de 0 a 48 horas (Figura 5). Este resultado dá uma estimativa da variabilidade dos parâmetros da morfologia da célula medida resultantes de tempo de armazenamento de amostras, mas não pode explicar as diferenças significativas na morfologia do CTC e as células cancerosas em cultura, ou a variabilidade dentro de cada amostra encontrado CTC.

A: O diâmetro das células de cancro da próstata em cultura diminuiu ~ 6%, em média. B:. O diâmetro nuclear de células de câncer de próstata cultivadas diminuiu ~ 10%, em média

Conclusão

Em conclusão, CTCs isolado de pacientes com câncer de próstata resistente à castração, utilizando o sistema de CellSearch® , eram mais pequenos em tamanho, mais alongada em forma, e tinha uma maior N /C, quando em comparação com as células cancerosas em cultura. CTC também mostraram significativamente maior variabilidade na forma e N /C. Enquanto o sistema só captura células EpCAM-elevada, de imagens CTC CellSearch® enumeração estão amplamente disponíveis e esta estratégia analíticos podem ser aplicados para identificar características morfológicas características de CTC CellSearch® enriquecidos. As diferenças morfológicas entre linhas de células cultivadas e CTC precisam ser considerados no projeto e teste de equipamentos que isolam CTC de uma forma livre de etiqueta com base em critérios citomorfológicas.

Informações de Apoio

Figura S1.

captura de tela do programa LabVIEW® desenvolvido para analisar imagens obtidas a partir do sistema CellSearch®. O programa adquire as imagens para cada candidato CTC. A imagem selecionada (em amarelo) é analisado para medir a área em pixels. Uma elipse é montado para esta imagem e sobreposto em cima da imagem original para a verificação. Parâmetros para etapas de processamento de imagem intermédios, bem como estatísticas para toda a coleção também são exibidos

doi:. 10.1371 /journal.pone.0085264.s001

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Figura S2.

Rejeitado imagens de fragmentos celulares desde a identificação CTC. Estas imagens de fragmentos celulares vulgarmente apareceu durante a análise da imagem e não foram incluídos na contagem de células ou de tamanho medições CTC. fragmentos CTC típicos incluem um núcleo parcialmente coberto por citoqueratina, ou um núcleo completamente separada da citoqueratina. Estes fragmentos provavelmente originado de CTCs em apoptose

doi:. 10.1371 /journal.pone.0085264.s002

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Figura S3. Tamanho da célula

contra contagem CTC. Não parecia haver nenhuma correlação entre o tamanho das células CTC e contagem de células para CTCs identificadas pelos CellSearch de pacientes com câncer de próstata resistente à castração metastático. O tamanho das células variou desde 6,9 ​​uM a 8,95 uM; enquanto o CTC contagem variou de 11 a 106.

doi: 10.1371 /journal.pone.0085264.s003

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Tabela S1.

Paciente resumo de informações. Todos os pacientes foram diagnosticados com câncer de próstata resistente à castração metastático (mCRPC). Não houve correlação significativa entre o nível de PSA e tamanho das CTCs

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