Abstract

Long intercaladas element-1 (L1) é um elemento transponível que podem mover-se dentro o genoma, levando potencialmente a genoma diversidade e função do gene modificado. Embora a actividade de L1 em ​​células somáticas é normalmente suprimida através da metilação de DNA, alguns L1 são activados em tumores, incluindo carcinoma colorrectal. No entanto, como L1-retrotransposição (L1-RTP) está envolvido em distúrbios gastrointestinais continua por ser elucidado. Nossa hipótese é que L1-RTP em células somáticas pode contribuir para o cancro associado a colite (CAC). Para resolver isso, nós empregamos um modelo experimental de CAC utilizando camundongos L1-repórter transgénicos portadores de um gene repórter L1-EGFP humano. Os ratinhos foram submetidos a ciclos repetidos de colite induzida por administração de sulfato de sódio de dextrano (DSS), em água potável com injecção de carcinogénio azoximetano (AOM). níveis L1-RTP foram medidos através de uma reacção em cadeia da polimerase quantitativa segmentação do EGFP repórter recentemente inserido em diversos tecidos e tipos de células, incluindo as amostras obtidas por microdissecação a laser e separação de células com a citometria de fluxo. os níveis de metilação do DNA do promotor L1 humana foram analisados ​​por pyrosequencing bissulfito. ratinhos exibiram níveis significativamente mais elevados de L1-RTP em tecido do cólon inteiro durante a fase aguda da colite DSS + OMA-tratados quando comparado com os ratos sem tratamento prévio de controlo. níveis L1-RTP em tecido do cólon inteiro foram positivamente correlacionados com a gravidade histológica da colite e grau de infiltração de neutrófilos para a lâmina própria (LP), mas não com o desenvolvimento de tumores no cólon. L1-RTP foi enriquecido em LP células mesenquimais em vez de células epiteliais (ECS), mielóide ou células linfóides. níveis de metilação do DNA da região promotora L1 humano mostrou uma correlação negativa com os níveis L1-RTP. L1-RTP estava ausente da maioria dos tumores encontrados nos ratos 22 semanas de idade. Em conclusão, foi demonstrado que L1-RTP foi induzida na mucosa CAC rato de acordo com a resposta inflamatória aguda; no entanto, retrotransposição parece não ter relevância direta para a iniciação do câncer induzida por colite

Citation:. Otsubo T, Okamura T, Hagiwara T, Ishizaka Y, Dohi T, Kawamura YI (2015) retrotransposição de Long Intercaladas Nucleotide Elemento -1 é associada à colite mas não tumores em um modelo murino Cancer col�icos. PLoS ONE 10 (2): e0116072. doi: 10.1371 /journal.pone.0116072

Editor do Academic: Emiko Mizoguchi, Hospital Geral de Massachusetts, United States |

Recebido: 30 de setembro de 2014; Aceito: 05 de dezembro de 2014; Publicação: 24 de fevereiro de 2015

Direitos de autor: © 2015 Otsubo et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão dentro do papel

Financiamento:. Esta pesquisa foi parcialmente apoiada por doações de programas Grants-in-Aid para Jovens cientistas; Grants-in-Aid para a Investigação Científica (C); Grants-in-Aid para a Investigação Científica em Áreas Prioritárias do Ministério da Educação, Cultura, Desporto, Ciência e Tecnologia; Cooperação internacional Bolsas de Investigação do Ministério da Saúde, Trabalho e Bem-Estar; e do Centro Nacional de Saúde Global e Medicina (21-110, 22-205, 21-129, 23-101, 25-104, 26-110); e Grant-in-Aid para a Investigação do Ministério da Saúde, Trabalho e Bem-estar do Japão (09156296)

Conflito de interesses:. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução.

Long elemento intercaladas -1 (L1) é um elemento transponível que pode mover-se dentro do genoma para induzir deleções de genes, inversões, e inserções, levando potencialmente a genoma diversidade, bem como alterar a função do gene [1,2] . L1 está presente em todos os mamíferos incluindo seres humanos, compreende cerca de 17% do genoma humano [3,4]. Embora a atividade L1 é normalmente suprimido em células somáticas através de mecanismos epigenéticos, como a metilação do DNA, algumas L1 são ativados por fatores ambientais, incluindo agentes cancerígenos e compostos pró-inflamatórios [5-8]. Importante, inserções L1 foram detectados em vários tipos de cancros humanos, incluindo cancros colorrectais [9-11]. A hipometilação das ilhas de CpG na L1 5′-UTR foram relatadas não apenas em tipos de cancro, mas também em doenças inflamatórias humanas [12,13], sugerindo um papel potencial para L1 transposição em condições inflamatórias. Esta possibilidade é particularmente importante na carcinogênese gastrointestinal, pois a inflamação crônica é um dos fatores de risco mais importantes para a malignidade gastrintestinal [14,15]. No entanto, como L1-retrotransposição (L1-RTP) está envolvido na inflamação gastrointestinal e malignidade continua por ser elucidado. Nossa hipótese é que L1-RTP em células somáticas pode contribuir para o cancro associado a colite (CAC). Para abordar esta possibilidade, que empregue um modelo experimental de CAC usando o agente cancerígeno azoximetano (AOM), juntamente com a indução da colite por dextrano sulfato de sio (DSS) na água de beber, em conjugação com um sistema de ratinho transgénico repórter L1. O mecanismo deste modelo CAC tem sido extensivamente investigado utilizando diversos tipos de murganhos manipulados de gene. Por exemplo, o TNF-receptor 1 (TNFR1) -deficient ratinhos mostraram um decréscimo no número de tumores, que eram dependentes de deficiência de TNFR1 das suas células hematopoiéticas [16]. Como um sinal a jusante de TNFR1, factor de transcrição nuclear kappa B (NF-kB) é relatado como sendo crítico no desenvolvimento associada a inflamação de cancro col�icos [17]. IL-6 também promove o crescimento do tumor, possivelmente através da ativação de quinase Janus-ativado (JAK) e do transdutor de sinal e ativador de transcrição (STAT) 3 vias [18-20].

Neste estudo, verificou-se que L1-RTP foi positivamente associado com a gravidade da colite. A activação de L1 foi correlacionada com a hipometilação de ilhas de CpG na L1 5′-UTR. No entanto, L1-RTP não foi aumentado nos tumores neste modelo sugerindo que L1-RTP não é significativamente envolvido na iniciação do tumor neste modelo CAC.

Materiais e Métodos

declaração Ética

Todos os experimentos usando camundongos foram realizados de acordo com as diretrizes institucionais para o Cuidado e Uso de Animais de laboratório em Pesquisa com a aprovação do Comitê de Cuidado e Uso do animal do Instituto de Pesquisa, Centro Nacional de Saúde global e Medicina (número de aprovação 14039). Os animais foram sacrificados com cetamina e xilazina e todo esforço foi feito para minimizar o sofrimento.

Ratos e o modelo CAC

Uma linha de ratos transgénicos albergando um gene repórter L1-EGFP humana (

HL1-EGFP

), com o nome Linha 4, foi desenvolvido em nossas instalações [5] e utilizado em todos os experimentos. Os ratinhos foram mantidos sob condições específicas isentas de agentes patogénicos durante as experiências. protocolos de modelo CAC são mostrados na Fig. 1A. injecção peritoneal semanal de azoximetano (AOM, 10 mg /kg, Sigma-Aldrich Japão) foi iniciado com 6 semanas de idade e repetido quatro vezes. Os ratos foram deixados em jejum durante 12 h antes da injecção OMA para aumentar o efeito da carcinogénese com AOM [21]. Os ratos do grupo experimental receberam 3,5% (W /V) de dextrano sulfato de sódio (DSS, Sigma-Aldrich Japão) na água de beber durante 5 dias com 7 semanas de idade, e este tratamento foi repetido quatro vezes, numa base mensal. Com 22 semanas de idade (fase de tumor), foram obtidos tecidos do cólon. tumores visíveis foram cortados a partir da mucosa e analisados ​​separadamente a partir da mucosa do fundo. Em alguns experimentos, os tecidos do cólon foram obtidas de camundongos 8 semanas de idade seguintes duas injeções de OMA e no prazo de sete dias após a interrupção do tratamento DSS (fase aguda).

(A) cronograma esquemático da AOM + DSS colite modelo do rato. As setas indicam os pontos de tempo associados com as fases inflamatórias agudas e tumorais para a colheita dos tecidos e /ou os tumores do cólon. (B) os níveis de L1-RTP foram analisados ​​com o ADN genómico extraído a partir de tecidos distais do cólon inteiros e /ou tumores. O EGFP copy /genoma foi calculado utilizando ß-actina como controlo interno. Amostras rotulados como “aguda AOM + DSS” foram obtidos durante a fase aguda no painel A, e outros foram recolhidos durante a fase de tumor. AOM + DSS indica tecido do cólon residual após a remoção de tumores visíveis. Os dados foram apresentados como média ± SD. Os valores de P foram calculados com um teste não pareado bicaudal t.

Quantificação de L1-RTP

Para o ensaio de PCR, o ADN genómico foi preparado a partir de tecidos e células usando um DNA sistema de extracção (QuickGene; Fujifilm, Tóquio, Japão). O método de detecção da frequência de L1-RTP com uma PCR para retrotranspositioned EGFP foi descrito anteriormente [22]. Para a análise de tumores, um tumor seleccionado aleatoriamente a partir de cada rato foi submetido a extracção de ADN e análise de L1-RTP.

A análise histológica e microdissecação a laser

tecidos do cólon inteiro obtido durante a fase inflamatória aguda foram enroladas e congeladas em nitrogênio líquido. As secções congeladas foram fixadas com acetona fria e coradas com hematoxilina e eosina para análise histológica. pontuações histológicas para o grau de perda de cripta e infiltração de células foram cegamente atribuído a cada cólon. perda de cripta foi avaliada como a diminuição relativa da área de células epiteliais, em comparação com o cólon naïve usando uma imagem captada analisada pelo software de imagem J (NIH, Bethesda, MD, EUA): 0-sem alteração ou menos do que 10% de diminuição a partir do cólon naïve , 1-10-30% de células epiteliais foram perdidos, 2-30-50%, 3-50-70%, 4-70-90%, 5, mais do que 90%. escores de infiltração celular: 0-nenhuma mudança de cólon naïve, de infiltração 1-focal limitado à camada mucosa, infiltração 2-focal em ambos os mucosa e submucosa camadas, mucosa 3-difusa e infiltração submucosa. A pontuação para cada rato foi determinada como a soma da pontuação cripta e a pontuação infiltração de células. infiltração de neutrófilos foi determinada pela morfologia nuclear. Em algumas experiências o ADN genómico foi obtido a partir de secções congeladas utilizando um sistema de laser microdissecação (LMD 7000, Leica Microsystems, Wetzlar, Alemanha) de acordo com as instruções do fabricante.

separação celular

células epiteliais (ECs ) foram isolados a partir do cólon e tratado com EDTA 10 mM em solução salina equilibrada de Hank (HBSS, Sigma Aldrich). lâmina própria (LP) células (LPCs) foram isolados usando um delicado MACS Dissociator (Milteny Biotech, Colónia, Alemanha) com o Kit Lamina Propria dissociação para o mouse (Milteny Biotech). LPCs foram coradas com isotiocianato de fluoresceína (FITC) -, R-ficoeritrina (PE) – ou aloficocianina (APC) marcado com anti-CD3, anti-CD11b e anti-CD11c, anti-B220, anti-Gr-1, ou anti -EpCAM anticorpos (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, EUA), e 7-aminoactinomycin D para identificar células viáveis, e as células foram classificados com um citómetro de fluxo (MoFlo, Beckman Coulter, Tóquio, Japão). Tipo de célula de triagem foi realizada com os seguintes marcadores de superfície: as células T, EpCAM

-CD3

+ CD11b

-CD11c

-; células B, incluindo células plasmáticas B220-low, EpCAM

-B220

+ CD11b

-CD11c

-; células dendríticas /macrófagos, uma mistura de EpCAM

-CD3

-CD11b

+ células, EpCAM

-CD3

-CD11c

+ células, e EpCAM

-CD3

-F4 /80

+ células; granulócitos, EpCAM

-GR-1

células de alta; células não epiteliais não hematopoiéticas, EpCAM

-CD3

-B220

-CD11b

-CD11c

-F4 /80

-GR-1

-. células

metilação do DNA ensaio

Para avaliar o estado de metilação de L1, bissulfito-pyrosequencing foi realizada com uma máquina pyrosequencing PyroMark Q24 (QIAGEN, Hilden, Alemanha), utilizando o kit de piro lINE (PyroMark Q24 CpG LINE- 1 4 x 24, Cat. no.970042, QIAGEN).

a análise estatística

a análise estatística foi realizada utilizando o programa estatístico Prism 6 (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, EUA) com os métodos indicados nas legendas das figuras. Para as análises de diferença desemparelhados Foram utilizados os testes t de Student de uma ou duas caudas. As correlações foram testados com cálculos Pearson bicaudal. Os valores de P 0,05 foram considerados significativos.

Resultados e Discussão

níveis L1-RTP aumento na fase aguda da colite

O protocolo experimental para o modelo CAC é ilustrado na Fig. 1A. Os ratinhos transgénicos que albergam um gene humano L1-EGFP repórter (

HL1-EGFP

) [5] foram usadas em todas as experiências. Neste modelo, obtivemos êxito tumores de cólon de ratos 22 semanas de idade após quatro injeções de OMA e quatro ciclos de DSS colite. Três a vinte e quatro tumores foram encontradas em cada um de dois pontos (média = 11,5, 11 ratinhos). Não tratada (naïve) ou ratinhos tratados com apenas AOM ou DSS não desenvolveram tumores do cólon. Para examinar a indução de L1-RTP, obteve-se primeiro tecido do cólon inteiro de cada grupo de ratinhos durante a fase do tumor (-22-semanas de idade) ou durante a fase aguda após a primeira administração de DSS (8 semanas de idade). Inicialmente tentativa para detectar células que expressam EGFP histologicamente ou com citometria de fluxo; No entanto, a expressão EGFP não era visível, provavelmente devido à baixa incidência de L1-RTP. Portanto, quantificada a frequência de L1-RTP com uma PCR para retrotranspositioned EGFP como descrito anteriormente [22]. Como resultado, verificou-se que L1-RTP foi significativamente aumentada durante a fase aguda no grupo de colite DSS + AOM, mas não em tumores ou na mucosa do fundo cólons portadores de tumor (Fig. 1B). Indução de L1-RTP não foi observada em ratinhos tratados apenas com AOM ou DSS. Estes resultados indicam que a indução de L1-RTP está associada a colite aguda, mas não mantida até que a fase do tumor, nem directamente envolvido na tumorigénese neste modelo de tumor associado a colite.

níveis L1-RTP correlacionar com a colite gravidade, mas não com os números de tumor

Embora L1-RTP foi induzida de forma significativa durante a fase aguda do modelo CAC, os níveis de indução mostraram grandes diferenças individuais (Fig. 1B). Portanto, examinámos ainda mais a relação de L1-RTP com a gravidade da colite. Descobrimos que escores histológicos, composta por perda de cripta e infiltração de células, foram positivamente correlacionada com a frequência de L1-RTP (Fig. 2A). Uma vez que observou-se que a inflamação grave histologicamente foi caracterizada por infiltração massiva de granulócitos com uma vasta gama de perda de células epiteliais (Fig. 2B), as amostras foram classificadas pela presença ou ausência de infiltração de granulócitos. Uma tendência para uma maior L1-RTP foi observada nos tecidos com a infiltração de granulócitos do que aqueles sem granulócitos (Fig. 2C). Embora significativa L1-RTP não foi detectada em tumores, pensamos que é possível que os tumores poderia ter crescido pela expansão clonal de células negativas L1-RTP, mas ocorrência de L1-RTP no fundo do cólon mucosa pode ter facilitado o desenvolvimento de tumores. Portanto, foi examinada a relação entre os números de tumor e a frequência de L1-RTP na mucosa fundo; no entanto, não houve correlação significativa entre estes dois fatores (Fig. 2D). Estes resultados argumentam que L1-RTP é induzida durante a colite aguda de acordo com a gravidade da inflamação; No entanto, a L1 no cólon não é mantido num estado activado a partir de inflamação aguda para o desenvolvimento de tumores do cólon depois de surtos de colite repetido. Assim, L1-RTP não parece estar directamente envolvidos na iniciação do tumor de cólon.

(A) A pontuação histológica colite e níveis L1-RTP em todo o cólon distal durante os ratos de fase aguda mostrou uma correlação positiva. (B) imagens histológicas típicas de colite com infiltração de neutrófilos (à esquerda) e sem infiltração de neutrófilos (à direita) são mostradas. A barra representa 100 m. níveis (C) A L1-RTP foram comparados entre o tecido do cólon, sem /com a infiltração de neutrófilos na própria lâmina do cólon durante as fases aguda e tumores. Os dados foram apresentados como média ± SD. O valor P foi calculado com um teste não pareado unicaudal t. O nível L1-RTP do fundo mucosa do cólon e os números de tumor visível (D) não se correlacionaram.

L1-RTP foi enriquecida na fração LP do cólon na fase aguda da colite

em seguida, queríamos identificar os tipos de células, onde L1-RTP teve lugar no cólon. Nós separados epiteliais e células não epiteliais por microdissecação da camada mucosa do cólon obtidos durante a fase aguda da inflamação. ECs foram perfurados fora, e em seguida a camada da mucosa restante foi dissecado e sujeito a extracção de ADN (Fig. 3A). Inesperadamente, L1-RTP foi enriquecido na fracção de células não epiteliais de baixa pressão (Fig. 3B). Portanto, o próximo tentativa de identificar os tipos de células com L1-RTP isolando LPCs com digestão com colagenase e separação de células por citometria de fluxo. Como resultado, L1-RTP não foi detectada em CD3

+ células T, B220

+ B células /células de plasma, CD11b

+ /CD11c

+ /F4-80

+ macrófagos /células dendriticas, ou Gr1

+ granulócitos (Fig. 3C). L1-RTP foi elevada na fracção de células, que foi negativo para os marcadores de superfície. Com base nestes resultados, as células do tipo mesenquimal (MES) são mais susceptíveis de ser responsável pelo aumento da L1-RTP durante colite de fase aguda. Por outro lado, a frequência de L1-RTP em outros tipos de células permaneceu em níveis baixos. análises mais detalhadas para identificar os tipos de células que induzem L1-RTP continua a ser investigado.

(A) fotografia representativa de uma secção após microdissecção para as células epiteliais (CE, top), lâmina própria (LP, fundo) e os tecidos restantes (incluindo submucosa e camada muscular) da seção de cólon por microdissecção a laser. (B) os níveis de L1-RTP foram analisados ​​no cólon ECs, LP, e a camada submucosa mais muscular (SM) isolado por microdissecação a partir de ratinhos na fase de colite aguda. O valor relativo de L1-RTP foi normalizada utilizando ß-actina como um controlo interno. Cada parcela indica um rato individual. Os valores de P foram calculados com um teste não pareado unicaudal t. (C) L1-RTP níveis foram examinados em ECs ou isolado classificados negativo EpCAM-gated fracções não-CE por citometria de fluxo a partir de murganhos em fase de colite aguda, como se segue: as células T (EpCAM

-CD3

+) , células B (EpCAM

-B220

+), células dendríticas macrófagos /(MO /DCs, EpCAM

-CD11b

+ /CD11c

+ /F4 /80

+) , os neutrófilos (EpCAM

-GR

-1

+) e outros tipos de células, células mesenquimais mais prováveis ​​(MES, EpCAM

-CD3

-B220

-CD11b

-CD11c

-F4 /80

-GR-1

-). Níveis de L1-RTP de frações celulares reunidas obtidas a partir de quatro ratos são mostrados.

níveis de metilação do DNA do promotor Tg-L1 foram inversamente correlacionada com os níveis L1-RTP

Desde DNA metilação do promotor L1 é conhecido por prevenir a retrotransposição, investigou-se os níveis de metilação do DNA do promotor L1 humana nos ratinhos transgénicos. Foram selecionados várias amostras do cólon de ratinhos ingénuos e ratinhos com colite aguda mais AOM, focos de criptas aberrantes induzidas por quatro injecções de OMA, ECs, e LPCs, juntamente com 2-amino-1-metil-6-fenilimidazo [4,5-b ] piridina (PhIP) ratinhos tenha sido tratada com (um controlo positivo para o repórter L1-RTP humano [8]), e medidos os níveis de metilação do DNA da ilha CpG associados com L1 humano utilizando pyrosequencing bissulfito da região 5’UTR do transgene. Como esperado, os níveis de metilação do DNA foram geralmente elevado ( 80%) em todas as amostras. No entanto, foi observada uma correlação negativa significativa estatisticamente entre os níveis de metilação do DNA e L1-RTP (Fig. 4) nestas amostras. Inesperadamente, os níveis de metilação de ratos L1-RTP ingênuos não eram o mais elevado entre estas amostras, sugerindo diversos níveis de metilação do DNA do promotor HL1 em ​​camundongos ingênuos individuais.

Foram analisados ​​os níveis de metilação do DNA do promotor L1 humano transgénico por pyrosequencing bissulfito com os iniciadores que segmentam apenas a sequência promotora L1 humano. A correlação entre os níveis de níveis de metilação de ADN promotor e L1-RTP L1 humana foram analisados ​​utilizando tecidos cólon distai inteiras com fracções AOM + colite DSS aguda (sem marcador), isolado do cólon ECS (CE) ou LP (LP) de AOM + DSS colite, focos de criptas aberrantes (ACF) induzido por OMA, toda cólon de um rato ingénua, ou o 2-amino-1-metil-6-fenilimidazo [4,5-b] piridina (PhIP) ratinhos tenha sido tratada com (um controlo positivo de humano repórter L1-RTP [8]). O valor P foi determinada por um cálculo de Pearson de duas caudas.

Este é o primeiro relatório em que L1-RTP foi demonstrado diretamente

in vivo

, induzida pela administração de uma substância cancerígena com a indução da colite. Neste estudo da CAC, que mostram que L1-RTP não é induzida em células epiteliais ou células hematopoiéticas, mas muito provavelmente em um tipo de células mesenquimais. Além disso, medimos com sucesso os níveis de metilação do DNA do promotor L1 humano neste modelo de rato, e encontrou uma correlação negativa entre L1-RTP e metilação do DNA do seu promotor. Este resultado apoia a noção de que a hipometilação do L1 está associada com L1-ativação. Por outro lado, não encontramos L1-RTP em tumores de cólon ou a sua mucosa do fundo neste modelo de cancro do cólon murino, embora uma correlação foi estabelecida entre L1-RTP e câncer em humanos como descrito em uma revisão recente [23]. Em vez disso, L1-RTP foi associada com inflamação aguda. correlação positiva dos níveis de L1-RTP com as pontuações histológicas e o grau de infiltração de células sugere uma contribuição potencial de L1-RTP para a gravidade da colite aguda. Neste sentido, L1-RTP pode estar envolvida no mecanismo de exacerbação da inflamação. A nossa especulação inicial era de que a frequência de L1-RTP seria aumentada durante o curso do desenvolvimento tumoral associada à inflamação. No entanto, nossos resultados indicam que L1-RTP tem um impacto directo limitado na tumorigênese. As possíveis razões para este resultado inesperado são os seguintes. Em primeiro lugar, a nossa

in vivo

sistema não detectar o mouse endógena L1-RTP, embora a detecção da RTP do transgene L1 humano era clara. Níveis de humano L1-RTP no cólon foram geralmente baixas, e isso a sensibilidade de detecção podem não representar exatamente a retrotransposição endógena nos ratos, o que pode afetar a frequência da CAC. No entanto, o facto de que foi detectada aumentou L1-RTP na colite aguda, mas não em tumores indica que o impacto de L1-RTP na tumorigénese é, pelo menos indirecto. Em segundo lugar, o estudo anterior relatou que L1 retrotransposição esteve presente no fígado pré-neoplásicas, mas não no adenocarcinoma de fígado posterior [24]. Os autores argumentaram que a progressão do tumor pode ter selecionado pela perda do cromossoma contendo o L1 ativa. No caso da CAC, ocorrência de perda cromossómica em tumores pode também diminuir a frequência de L1-RTP em tumores. Por último, neste sistema de modelo de rato, a expansão do tumor é limitada à camada de mucosa do cólon e tumores não prossiga para as fases avançadas como cancros humanos que mostram características malignas de invasão e metástase. Portanto, isto pode não ser um modelo adequado para a investigação do estado avançado de cancros malignos. Assim, nossos resultados indicam que o impacto da L1-RTP sobre o início do cancro do cólon é limitada neste modelo CAC; no entanto, possíveis papéis de L1-RTP em progressão tumoral e metástase permanecem indeterminados. Para avaliar o potencial envolvimento de L1-RTP no câncer estágio avançado exigiria estabelecer diferentes modelos de câncer avançado, tais como linhas celulares de tumores malignos por induzir mutações em oncogenes ou anti-oncogenes nestes ratinhos transgénicos.

Recentemente, o papel das células estromais mesenquimatosas em diversas condições inflamatórias, incluindo a colite tem sido relatada. Os reparadoras e propriedades anti-inflamatórias de células estromais mesenquimatosas foram testados numa variedade de modelos animais e têm sido aplicados em situações clínicas específicas [25]. células estaminais mesenquimais Particularmente, na AOM + DSS modelo de colite induzida, derivadas de medula óssea foram mostrados como tendo propriedades anti-cancerígenas através de factor de crescimento transformante-beta sinalização [26]. Estes resultados sugerem a possibilidade de que L1-RTP, que encontramos em células mesenquimais, podem perturbar a função das células anti-inflamatória. Outras investigações de células mesenquimais como um tipo de célula alvo de retrotransposição será interessante e pode elucidar o seu papel potencial para influenciar a gravidade da colite na fase precoce do CAC.

Reconhecimento

PL1-EGFP (PEF -06R) construir para a preparação de ratinhos transgénicos foram gentilmente cedidas pelo Dr. Eline Tjetske Luning Prak, Laboratório de Imunologia Clínica do Hospital da Universidade da Pensilvânia.