Abstract

Fundo

Nosso objetivo para investigar a prevalência e papel prognóstico do

SOX2, PIK3CA, FGFR1 Comprar e

BRF2

ganho gene em pacientes com câncer de pulmão de células cirurgicamente ressecado não pequenas (NSCLC).

Métodos

SOX2, PIK3CA, FGFR1

e

BRF2

número de cópias do gene foi avaliada por fluorescência

in situ

fluorescente (FISH) em núcleos de tecido vestida de 447 CPNPC ressecado.

resultados

O aumento do número de cópias do gene (FISH +) para

SOX2

,

PIK3CA

,

FGFR1 Comprar e

BRF2

foi observada em 23,6%, 29,2%, 16,6% e 14,9% dos casos, respectivamente. FISH + status de cada gene foi significativamente associada com história de tabagismo, carcinoma de células escamosas histologia (SCC), e aumento do número de cópias dos outros genes estudados. A análise multivariada de sobrevida global apontaram maior

número

SOX2 gene de cópia (

P

= 0,008), fase I-II (

P Art 0,001), e adenocarcinoma ou SCC histologia (

P

= 0,016), fatores prognósticos favoráveis ​​como independentes. Foi observada uma interação estatisticamente significativa entre palco e

Status SOX2

gene (

P

= 0,021), indicando que o impacto prognóstico da

SOX2

ganho gene difere entre etapas e é limitada a pacientes com doença em estágio I-II. (HR 0,44, 95% CI: 0,25-0,77;

P

= 0,004, ajustado para histologia)

Conclusões

Aumento SOX2 número de cópias do gene é um fator prognóstico independente e favorável no cirurgicamente ressecado, fase inicial NSCLC, independentemente da histologia. SOX2, PIK3CA, FGFR1 e BRF2 ganhos genes são susceptíveis de ocorrer simultaneamente, com implicações potencialmente relevantes para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas

Citation:. Toschi L, Finocchiaro G, Nguyen TT, Skokan MC, Giordano L, Gianoncelli L, et ai. (2014) O aumento da

SOX2

Número Gene cópia é Associada a

FGFR1

e

PIK3CA

Gene Ganho em Non-Small Cell Lung Cancer e prevê melhora da sobrevida em estágios iniciais da doença. PLoS ONE 9 (4): e95303. doi: 10.1371 /journal.pone.0095303

Edição: Harriet Wikman, University Medical Center Hamburg-Eppendorf, Alemanha |

Recebido: 30 de outubro de 2013; Aceito: 26 de março de 2014; Publicação: 15 de abril de 2014

Direitos de autor: © 2014 Toschi et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado pela doação privada do Sr. Gerry Scotti, Colorado Lung Cancer SPORE NCI P50CA058187, NCI CCSG P30CA046934 e subvenções NIH /NCATS Colorado CTSI KL2TR000156. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o cancro do pulmão é a principal causa de morte por câncer em todo o mundo e as taxas de sobrevivência são pobres. Nos últimos anos, progressos no conhecimento da biologia do cancro do pulmão, levou à identificação de oncogenes activados que podem ser terapeuticamente alvo de novos agentes. Entre esses são os inibidores da tirosina quinase, tais como gefitinib e erlotinib para pacientes com Receptor do Factor de Crescimento Epidérmico (

EGFR

mutações) [1] – [2] e, mais recentemente, Crizotinibe para indivíduos com linfoma anaplásico de Quinase (

ALK

) rearranjos [3]. Estes agentes têm melhorado significativamente o resultado do cancro do pulmão de não pequenas células biologicamente selecionado (NSCLC) pacientes com doença avançada, incentivando a identificação de novos alvos terapêuticos.

O SRY (sex região determinante Y) -box 2 (

SOX2

) gene, localizado no cromossoma 3q26.33, codifica para um membro da família HMG-box relacionados com SRY de factores de transcrição e tem sido implicado na regulação da pluripotência das células estaminais embrionárias [4]. Regulação positiva de

SOX2

induz a proliferação celular e crescimento independente de ancoragem no pulmão linhas celulares de carcinoma de células escamosas (SCC) e dirige tumorigênese de pulmão em camundongos [5] – [6]. A amplificação de

SOX2

tem sido associada com pulmonar CCS [5] – [8], com dados retrospectivos sugerindo uma tendência para o aumento da sobrevivência em favor de

SOX2

ganho gene em pacientes cirurgicamente ressecado [7 ] – [8]

o

gene PIK3CA

codifica para a p110α subunidade catalítica da classe IA fosfatidilinositol 3-quinases (PI3K) e foi identificado funcionar como um oncogene em tumores humanos activados. por amplificação de genes ou mutações [9]. Importante, modelos pré-clínicos mostraram que a inibição da via PI3K prejudica a sobrevivência de células NSCLC abrigar

PIK3CA

alterações genéticas [10] – [11], e numerosos testes de ensaio clínico romance PI3K, inibidores da Akt e mTOR ter entrado para o tratamento de cancros viciado-PI3K.

PIK3CA

está localizado no cromossomo 3q26.32, perto da

SOX2

lócus. Estudos Comparativos de hibridização genômica têm mostrado níveis de amplificação distintos para

SOX2

e

PIK3CA

na SCC de pulmão com 3q26 ganho [5], sugerindo que eles podem desempenhar papéis oncogénicos independentes.

o receptor do factor de crescimento do fibroblasto 1 (FGFR1), que é codificada por um gene localizado no cromossoma 8p12.1, é um membro de uma família de receptores de quatro tirosina-quinase (FGFR1-4) e tem sido amplamente estudada como um receptor-chave envolvido na embrionário desenvolvimento [12]. A amplificação de

FGFR1

foi recentemente relatada em até 22% de pulmão CEC [13], e tem sido associada a sensibilidade aos inibidores de tirosina-quinase FGFR1 em vários modelos pré-clínicos, incluindo linhas de células SCC pulmonar [13] – [ ,,,0],15], levando a ensaios clínicos destes agentes em

tumores -amplified FGFR1

.

O factor 2 relacionado-B (

BRF2

) gene, localizado no cromossoma 8p11. 23 muito perto

FGFR1

, codifica uma subunidade da polimerase III de ARN (Pol III) complexo de iniciação da transcrição, que é responsável para a transcrição de um certo número de genes de RNA não codificantes, cujos produtos estão envolvidos na síntese de proteínas, o processamento do ARN e transcrição [16]. O RNA pol III é frequentemente desregulado no cancro, e

BRF2

foi recentemente identificado como um oncogene novo em SCC pulmão activado pelo aumento do número de cópias [17]. Na verdade,

BRF2

amplificação determina um aumento da atividade RNA Pol III e proliferação celular sustentado e sobrevivência

in vitro

[17].

As alterações no número de cópias do

SOX2

,

PIK3CA

,

FGFR1

e

BRF2

genes foram estudados individualmente em um número de populações de NSCLC, particularmente no pulmão SCC, com limitada e, por vezes, dados conflitantes sobre o seu impacto prognóstico. Além disso, a prevalência de ganhos no número de cópias de mais de um gene eo seu efeito sobre a sobrevida do paciente ainda é largamente inexplorado. O presente estudo foi realizado para investigar a prevalência de

SOX2, PIK3CA, FGFR1

e

BRF2

número de cópias do gene muda em uma grande coorte, não selecionada de pacientes com NSCLC cirurgicamente ressecados, para verificar os ganhos genômicos simultâneos e para determinar se as alterações no número de cópias desses genes afetam o resultado do paciente.

pacientes e Métodos

aprovação

Ética Declaração

Institutional Review Board (IRB) (# 304/12 ) foi obtido a partir da comissão de ética Istituto Clinico Humanitas. consentimento informado por escrito foi obtido de pacientes submetidos à ativa acompanhamento em nossa instituição. IRB dispensado os requisitos para consentimento informado por escrito de pacientes que não poderiam ser alcançadas. O estudo foi conduzido de acordo com os princípios éticos estabelecidos na versão mais recente da Declaração de Helsínquia.

Os pacientes

Este estudo retrospectivo foi realizado em uma coorte relatado anteriormente de 447 pacientes caucasianos com NSCLC que recebeu uma ressecção radical de um NSCLC primária entre 2000 e 2004 pelo Istituto Clinico Humanitas (Rozzano, Itália) [18]. A tissue microarray (TMA) foi construído utilizando núcleos de 0,6 mm de diâmetro.

fluorescência

In Situ

fluorescente (FISH) Análise

O cromossomo artificial bacteriano (BAC) clones RP11- 459K06, RP11-245C23, RP11-168H08 e RP11-350N15, respectivamente contendo inserções de DNA humano de regiões homólogas ao

SOX2

,

PIK3CA

,

BFR2

e

FGFR1

, foram usadas para as sondas de enumeração de peixe, de acordo com protocolos anteriormente descritos [19] – [20]. número de cópias por célula para cada gene foi enumerada em pelo menos 50 células tumorais a partir de 2 núcleos dos tecidos por paciente por um perito citogeneticista cego para os dados do paciente. Na ausência de critérios de classificação validadas FISH para estes genes, um pré-especificado de corte de média ≥4 gene cópias /célula, previamente utilizado para definir o ganho do gene com outras técnicas de [13], ou a presença de aglomerados de genes que indicam a amplificação do gene verdade, foi criado para identificar casos com aumento do número de cópias do gene (FISH +). Exemplos de padrões de peixes são mostrados na figura 1.

Análise Estatística

Associações entre as características demográficas e clínicas e estado FISH foram estimadas usando a continuidade ajustado qui-quadrado ou o teste exato de Fisher , quando for apropriado. coeficiente de correlação de Pearson foi utilizado para testar a correlação entre o estado FISH de cada gene.

A sobrevida global (OS), calculado a partir do momento do diagnóstico até a morte do paciente ou último contato, foi avaliada utilizando o método de Kaplan-Meier. Diferenças entre os grupos foram avaliadas por meio do teste de log rank. taxas de risco com seus correspondentes intervalos de confiança de 95% (IC95%) foram calculados utilizando o modelo de regressão de riscos proporcionais de Cox. A significância estatística foi fixado em 0,05 para cada análise. Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando pacote de R.

Resultados

características do paciente

O estudo incluiu uma coorte de 447 pacientes com NSCLC cirurgicamente ressecado. Detalhes da coorte foram previamente descritos [18] e as características do paciente estão resumidos na tabela 1. Resumidamente, a maioria dos pacientes eram do sexo masculino (82,8%), ex (53,2%) ou os fumadores (36,0%), com um grau histológico ou 2 tumores (64,2%). Todos os pacientes foram submetidos a cirurgia radical e os tumores foram classificados de acordo com a classificação TNM com evidência de estágio patológico I em 37,1% dos casos, o estágio II em 22,1%, fase III em 32,7% e estágio IV em 8,1%. O último grupo incluiu pacientes com uma lesão metastática solitária, principalmente nas glândulas supra-renais cerebrais ou, passíveis de cirurgia ou radiocirurgia estereotáxica. Pacientes com estágio III da doença pN2 (n = 101) recebeu mediastino radioterapia pós-operatória. No geral, dado o período de tempo cirúrgico (2000-2004), há pacientes com tumores I-II palco recebeu tratamento sistémico pós-operatório, enquanto que apenas 18 indivíduos com doença em estágio III foram tratados com quimioterapia à base de platina adjuvante. A maioria dos pacientes foram diagnosticados com adenocarcinoma (54,6%), enquanto que 138 (30,9%) e 65 (14,5%) pacientes tiveram a SCC ou outro histologia, respectivamente. Após um seguimento médio de 60,4 meses, 244 mortes ocorreram ea sobrevida média foi de 42,5 meses. Significativamente maior sobrevida foi observada em pacientes com estágio I-II (aqui referido como “fase inicial”) tumores quando comparados àqueles com doença em estágio III-IV (

P Art 0,001). Pacientes com carcinoma epidermóide ou adenocarcinoma teve resultado semelhante e viveram mais tempo do que pacientes com outros histologia (

P Art 0,001). Não foi observada diferença na sobrevida de acordo com sexo, história de tabagismo ou grau patológico.

SOX2

e

PIK3CA

Copy Number Gain

SOX2

e

PIK3CA

estado do gene foi determinado com sucesso em 445 (99,6%) e 435 (97,3%) pacientes, respectivamente. No geral,

SOX2

aumento do número de cópias do gene foi detectado em 105 casos (23,6%), com amplificação do gene verdadeira observadas em 19 pacientes (4,3%).

PIK3CA

ganho gene foi encontrado em 29,2% dos pacientes, incluindo 21 casos (4,8%) com amplificação do gene verdade. Como esperado dada a sua proximidade física, foi observada uma associação estatisticamente significativa para o ganho de número de cópias entre

SOX2

e

PIK3CA

(coeficiente de correlação de Pearson: 0,78,

P Art 0,001 ), com resultados de FISH discordantes entre os dois genes em apenas 9,9% dos casos. Esta associação foi mantida em todos os subtipos histológicos (dados não mostrados). Conforme resumido na tabela 2, ambos

SOX2

+ e

PIK3CA

+ estatuto significativamente associado ao sexo masculino, com antecedentes tabagismo atual /e SCC histologia. Além disso,

PIK3CA

ganho gene foi mais comumente observada em tumores de grau III (

P

= 0,040). Todos os casos com

SOX2

verdadeira amplificação do gene eram SCC, para uma prevalência global de 13,8%

SOX2

tumores -amplified em pacientes com CEC histologia. Da mesma forma,

PIK3CA

verdadeira amplificação do gene foi encontrado em 12,8% dos casos com SCC, enquanto apenas 4 pacientes com tumores não-escamosas foram

PIK3CA

-amplified, incluindo 3 adenocarcinomas e um carcinoma pleomórfico.

SOX2

+ pacientes tiveram uma sobrevivência significativamente maior do que

SOX2 viajantes – indivíduos (53,7% vs 41,1% em 5 anos OS,

P

= 0,019) (Figura 2A), não havendo diferença no resultado entre os casos com ≥4 significa cópias do gene /celular e aqueles com amplificação do gene verdadeiro (

P

= 0,937). Análises de subgrupos de acordo com as características clínico-patológicas individuais, incluindo estágio, histologia, sexo, tabagismo e grau, detectou uma significativa vantagem de sobrevivência para

SOX2

+ pacientes no subgrupo de fase precoce (70,4% vs 51,8% 5 OS year,

P

= 0,004, figura 2B) e grau 3 tumores (52,3% vs 37,4% em 5 anos OS,

P

= 0,037). Em pacientes com doença em estágio III-IV, não foi detectada diferença na sobrevida entre

SOX2

+ e

SOX2 viajantes – casos (

P

= 0,993), enquanto uma tendência para uma melhor resultado em favor do

SOX2

+ indivíduos foi observado no subgrupo SCC (

P

= 0,053).

(a)

SOX2

, toda coorte. (B)

SOX2

, fase I-II. (C)

PIK3CA

, coorte todo. (D)

SOX2 /PIK3CA

, coorte todo. (E)

FGFR1

, coorte todo. (F)

BRF2

, coorte todo. Abreviaturas: OS = sobrevida global; NR = não atingido.

Os dados da sobrevivência de acordo com a

PIK3CA

estado do gene eram semelhantes às

SOX2

, provavelmente como resultado da sobreposição substancial entre o estado FISH destes dois genes. Na verdade, foi observada uma vantagem de sobrevivência estatisticamente significativa para

PIK3CA pacientes

+ quando comparado com o

PIK3CA

– pacientes em toda a população (52,2% vs. 40,9% em 5 anos OS,

P

= 0,044) (Figura 2C). A vantagem de sobrevivência para

PIK3CA

+ pacientes permaneceram estatisticamente significativa apenas no subgrupo de tumores em estágio inicial (69,5% vs 51,5% em 5 anos OS,

P

= 0,005), com uma tendência para melhora da sobrevida em pacientes com SCC (

P

= 0,064).

Nós ainda teve como objetivo explorar os padrões de sobrevivência de pacientes com discordantes

SOX2 /PIK3CA

estado do gene (n = 43). Como mostrado na figura 2D, houve resultado similar entre

SOX2- /PIK3CA

+ (n = 34) e dupla negativa (n = 297) pacientes, enquanto a sobrevivência de

SOX2 + /PIK3CA viajantes – indivíduos (N = 9) pareceu ser semelhante à do grupo duplamente positivo (n = 93) descobertas sugeriram que .Aqueles

PIK3CA

ganho de gene não foi

per se

prognosticamente relevante.

FGFR1 Comprar e

Copiar BRF2

número de ganho

Um total de 445 (99,6%) pacientes foram avaliáveis ​​para

FGFR1

de cópias do gene número, com 16,6% de peixe + pacientes, incluindo 37 casos (8,3%) com a amplificação do gene verdadeiro.

FGFR1

ganho gene foi significativamente mais comum em pacientes com CEC do que naqueles com adenocarcinoma ou outros histologia (SCC vs não-SCC: 28,3% vs 11,4%,

P Art 0,001,) enquanto qualquer associação com sexo, tabagismo, estado ou grau foi encontrado (tabela 2).

FGFR1

verdadeira amplificação do gene ocorreu em 17,4% da SCC, mas também foi observada em 3/26 (11,5%) tumores com diferenciação neuroendócrina e 2/28 (7,1%) nunca fumaram com adenocarcinoma de pulmão, incluindo uma fêmea com um concorrente

EGFR

L858R mutação.

BRF2

estado do gene foi avaliada por FISH em 435 (97,3%) pacientes e aumento do número de cópias do gene foi observada em 14,9% dos casos, incluindo 27 pacientes (6,2%) com amplificação do gene. Como mostrado na tabela 2, o ex-história de tabagismo atual /e SCC histologia foram significativamente associados com

BRF2

+ status. Provavelmente em consequência da sua localização física estreita no cromossoma 8p11-12, foi observada uma associação significativa entre o

FGFR1

e

BRF2

número de cópias do gene (coeficiente de correlação de Pearson: 0,78,

P

0,001), com apenas 5,3% dos casos com resultados PEIXES discordantes. A associação entre os dois genes foi independente de histologia (resultados não apresentados). Além disso, foram observadas associações significativas entre a cópia ganhos número de genes localizados em diferentes cromossomos (

FGFR1

ou

BRF2

com

SOX2

ou

PIK3CA

,

P Art 0,001 para cada associação), independentemente da histologia. Particularmente,

SOX2

e

PIK3CA

ganhos gene foram observadas em 55,4% e 75,7%, respectivamente, da

FGFR1 tumores

+.

O

FGFR1

+ ou

BRF2

+ pacientes sobreviveram mais tempo do que aqueles com nenhum ou baixo ganho número de cópias, embora essa diferença não alcançou significância estatística (

FGFR1

,

P

= 0,324;

BRF2

,

P

= 0,179) (figuras 2E e 2F).

FGFR1

número de cópias do gene não conseguiu mostrar um impacto prognóstico importante quando se analisa a sobrevida de acordo com as características clínico-patológicas, incluindo sexo, tabagismo, estágio, histologia e grau (dados não mostrados). Por outro lado, observou-se uma vantagem de sobrevivência significativa para

BRF2

+ pacientes com doença em estágio inicial, quando comparado com o

BRF2 viajantes – grupo (74,6% vs 54,0% em 5 anos OS,

P

= 0,040), enquanto que nenhuma relevância prognóstico foi observado para

BRF2

número de cópias do gene em outros subconjuntos de doentes (dados não mostrados). Devido à sobreposição substancial entre

FGFR1

e

BRF2

estatuto FISH, há diferenças de sobrevivência foram encontrados em toda a população ao agrupar os pacientes de acordo com ambos os genes (dados não mostrados). Da mesma forma, nenhum impacto de sobrevivência foi observada quando se combina

FGFR1

ou

BRF2

com

SOX2

ou

PIK3CA

resultados peixe em toda a população ou em comprovadas clinicamente subgrupos definidos (dados não mostrados).

Análise multivariada

Como mencionado anteriormente, fatores associados à sobrevida foram estágio, histologia,

SOX2

e

PIK3CA

o número de cópias do gene. Considerando a forte associação entre o

SOX2

e

PIK3CA

estado do gene, os dois genes foram avaliados em dois modelos distintos. Na

SOX2

modelo,

SOX2

ganho de gene, estágio inicial e adenocarcinoma /histologia SCC emergiram fatores prognósticos independentes para melhor sobrevida (HR

SOX2 + vs SOX2- 0,48, 95% CI : ,28-,83,

P

= 0,008; HR

fase I-II vs III-IV 0,49, 95% CI: 0,37-0,65;

P Art 0,001; HR

adenocarcinoma /SCC vs outro CI 0,67, 95%: 0,46-0,93;

P

= 0,016). Importante, foi observada uma interação estatisticamente significativa entre palco e

Status SOX2

gene (

P

= 0,021), indicando que o impacto prognóstico do aumento da

número SOX2

gene de cópia diferiu de acordo com o estágio do tumor e foi limitado a pacientes com doença em estágio inicial (HR 0,44, IC 95%: 0,25-0,77;

P

= 0,004, ajustado para histologia). Em contraste, no modelo multivariado considerando

PIK3CA

número de cópias do gene, palco e histologia,

PIK3CA

ganho gene não conseguiram prever uma maior sobrevida significativa (

P

= 0,135) .

o impacto de sobrevivência observada para

BRF2

ganho gene em pacientes com doença em estágio inicial não foi confirmada no modelo multivariado após correcção para histologia (

P

= 0,135), . apesar do pequeno número de

BRF2

+ casos dificultou conclusões sólidas

Discussão

Este estudo avaliou a importância prognóstica de alterações no número de cópias de quatro oncogenes associado anteriormente SCC de pulmão –

SOX2, PIK3CA, FGFR1

e

BRF2 Restaurant – em uma grande coorte de pacientes com NSCLC cirurgicamente ressecados. Pela primeira vez, nós relatam aumento

número

SOX2 gene de cópia avaliado por FISH como um fator prognóstico favorável independente em pacientes com estágios I e II NSCLC, independentemente da histologia.

SOX2, uma transcrição fator que desempenha um papel fundamental no desenvolvimento embrionário, surgiu recentemente como um alvo terapêutico atractivo no câncer de pulmão. De facto, a amplificação e /ou a sobre-expressão de

SOX2

têm sido relatados em SCC pulmão, adenocarcinoma do pulmão e, mais recentemente, o cancro do pulmão de pequenas células [5], [20] – [21]. relatórios pré-clínicos têm sido consistentes em demonstrar que SOX2 silenciamento leva à diminuição significativa do crescimento celular em modelos de câncer de pulmão, apoiando a inibição SOX2 como uma estratégia anticancerígeno promissor no neoplasias pulmonares [5], [22].

A definição de peixe + de status como clusters copia média ≥4 de genes /célula ou gene presença (verdadeiro amplificação de genes),

SOX2

ganho gene foi observada em cerca de um quarto dos CPNPC e foi significativamente associado ao sexo masculino, a exposição ao fumo do tabaco e SCC histologia , como relatado anteriormente por outros [5] – [7]. Particularmente, metade do SCC pulmonar classificado como FISH +, com amplificação do gene verdadeira ocorrendo em 13,8% dos casos, enquanto adenocarcinomas pulmonares apresentaram aumento

SOX2

número de cópias do gene em 10,7% das amostras sem casos abrigando amplificação do gene verdade. Estes resultados são praticamente em linha com outros estudos peixes em NSCLC, nos quais foram usados ​​diferentes critérios de pontuação [7] – [8].

O papel prognóstico do SOX2 foi investigado em série NSCLC retrospectiva. Apesar dos dados de uma recente meta-análise, sugerindo um impacto prognóstico favorável para a expressão SOX2 em NSCLC independente da histologia, [23] a maioria dos estudos mostrou que a superexpressão da proteína SOX2 previu a sobrevivência prolongada em SCC pulmão cirurgicamente ressecado [7] – [8], enquanto o seu impacto sobrevida no adenocarcinoma de pulmão permanece controverso [21], [24]. Dois estudos demonstraram uma associação significativa entre a expressão da proteína SOX2 avaliada por imuno-histoquímica e

SOX2

ganho gene avaliado por FISH, e sugeriu um papel prognóstico favorável para o aumento da

SOX2

número de cópias do gene em SCC pulmão, embora a significância estatística não foi alcançado [7] – [8]. Particularmente, Wilbertz et ai. detectada uma tendência de melhora da sobrevida em pacientes SCC pulmão com ≥10

SOX2

cópias /célula em comparação com tumores sem ou com amplificação de baixo nível, mas este efeito foi perdido no modelo multivariado [7].

Pela primeira vez, nós relataram uma sobrevida global estatisticamente significativamente melhorada para

SOX2

FISH + pacientes com estágios I e II NSCLC. É importante ressaltar que o efeito prognóstico favorável de

SOX2

ganho gene observado em nosso estudo, onde os pacientes não-SCC responsável por cerca de 38% do

SOX2 casos

+, foi independente da histologia e

PIK3CA

ganho de gene. Nossos resultados contrastam com os de outro estudo, onde um impacto negativo para a sobrevivência

SOX2

amplificação de baixo nível, em comparação com a falta de amplificação, foi observada em adenocarcinoma de pulmão [7]. Além disso, nossos dados indicam que o benefício de sobrevivência observada em NSCLC desmarcada fase inicial não se limitou a pacientes com amplificação do gene verdade, mas também foi estendido para aqueles com média ≥4

SOX2

cópias /célula e há grupos de genes. As discrepâncias entre nosso estudo eo de Wilbertz et al. pode ser explicada pelas diferenças de critérios de pontuação peixes e características clínicas dos pacientes. A razão para a falta de um impacto de sobrevivência para

SOX2

ganho gene em pacientes com estágio III e IV da doença em nossa coorte não é clara e deve ser investigado. Nós especulamos que

SOX2

ganho de gene é um evento precoce na tumorigênese pulmonar e que a progressão do tumor leva a anormalidades moleculares adicionais que afetam o resultado do paciente.

FGFR1 surgiu recentemente como um alvo promissor em NSCLC após o gene foi reportado como amplificado em cerca de 20% do pulmão CEC [13] – [14], [25], que conduz a ensaios clínicos de fase precoce de agentes anti-FGFR1 em

FGFR1

-amplified NSCLC. Nossos dados confirmam a associação previamente relatada entre o aumento da

FGFR1

número de cópias do gene e SCC histologia. Importante,

FGFR1

ganho de gene também foi encontrada em 11,4% dos tumores não-escamosas, incluindo a amplificação do gene verdadeiro em cerca de 7% dos pacientes de adenocarcinoma com a história nunca fumar – a mesma população com uma maior probabilidade de abrigar

EGFR

mutações ou

ALK

rearranjos – e 11% entre os tumores neuroendócrinos. Embora o pequeno número destes subgrupos impede qualquer conclusão firme, nossos dados sugerem que

FGFR1

avaliação do número de cópias do gene deve ser perseguida em pacientes selecionados com tumores não-escamosas para identificar os candidatos a agentes anti-FGFR1.

no presente estudo, observou-se que número de cópias simultâneas ganhos de

SOX2, PIK3CA, FGFR1

ou

BRF2

eram comuns. Enquanto a forte correlação entre o

SOX2

e

PIK3CA

e entre

FGFR1

e

BRF2

estado do gene foi antecipado devido à sua proximidade nos cromossomos 3q26 e 8p11 -12, respectivamente, nosso estudo é o primeiro a relatar associações estatisticamente significativas entre o número de cópias ganhos em ambas as regiões genômicas, independentemente da histologia. Em contraste, Weiss et ai. descrito que

FGFR1

e

SOX2

amplificações foram mutuamente exclusivos em SCC pulmão, embora neste estudo o ganho genômico foi investigada por matrizes de polimorfismo de nucleotídeo único e limites diferentes para alterações no número de cópias foram utilizados [ ,,,0],13]. Nossos resultados devem levantar cautela no desenvolvimento de inibidores de PI3K ou FGFR1 como agentes únicos em CPNPC com

PIK3CA

ou

FGFR1

ganho de gene, respectivamente. Na verdade, na presença de ganho genómico concomitante de inibição concomitante oncogenes múltiplo de mais de um alvo pode ser necessário para prejudicar de forma eficaz o crescimento do tumor. Este conceito é apoiado pela observação de que a inactivação de PI3K com a tecnologia de RNA de interferência, em linhas de células SCC pulmonar com amplificação 3q26, produziu apenas efeitos limitados sobre a proliferação celular, em oposição a

SOX2

knockdown [5]. Além disso, uma observação intrigante foi a coexistência de

FGFR1

verdadeira amplificação do gene e

EGFR

mutação L858R em uma mulher, nunca mais paciente fumante com adenocarcinoma de pulmão, sugerindo que alguns CPNPC poderia ser co-dependente FGFR1 e de EGFR para a sobrevivência. No geral, estes dados sugerem que em alguns tumores a avaliação de um alvo único medicamento pode não ser suficiente para prever a sensibilidade de droga, abordando a necessidade de uma compreensão mais profunda das NSCLC biologia.

O nosso estudo mostrou papel prognóstico estatisticamente significativa para

FGFR1

ou

BRF2

número de cópias do gene em pacientes com NSCLC cirurgicamente ressecados ao usar nossos critérios FISH de pontuação pré-definidas, embora uma tendência para a melhoria da sobrevivência para

FGFR1

+ ou

pode ser observado BRF2 pacientes

+ em toda a população. Outros investigadores têm explorado recentemente se

FGFR1

ganho gene afeta a sobrevivência em NSCLC com resultados inconclusivos [13], [26] – [29]. Na verdade, enquanto alguns autores relataram uma vantagem de sobrevivência para CPNPC com o aumento da

FGFR1

número de cópias do gene [28], um estudo recente mostrou que coreana

FGFR1

amplificação de alto nível afeta negativamente a sobrevivência em ressecado cirurgicamente pulmonar SCC [27]. Diferentes técnicas, métodos de pontuação e critérios de seleção de pacientes (ou seja, histologia, etnia, estágio, tratamentos perioperatórios) pode explicar as diferenças observadas entre os estudos, incentivar a avaliação do papel prognóstico do

FGFR1

número de cópias do gene em uniformemente selecionados coortes.

em conclusão, mostramos pela primeira vez que o aumento da

número de cópias SOX2

gene está associado à melhora da sobrevida na fase I cirurgicamente ressecado e os pacientes com NSCLC II, independentemente da histologia . Descobrimos também que

SOX2

ganho gene está associada a ganhos no número de cópias de outros oncogenes acionáveis, incluindo

FGFR1

e

PIK3CA

. Nossos resultados confirmam a complexidade da biologia NSCLC e incentivar a exploração de novas combinações terapêuticas.

Reconhecimentos

Agradecemos ao Patologia Citogenética de Recursos da Universidade do Colorado para a assistência técnica Molecular /Shared.