Abstract

Fundo

A cirurgia é o tratamento de escolha para pacientes com não-pequenas cancro do pulmão de células (NSCLC) estágios I-III-A. No entanto, mais de 20% destes pacientes desenvolvem recorrência e morrem devido à sua doença. A libertação de células tumorais em sangue periférico (CTC) é uma das principais causas de recorrência de cancro. Os objetivos deste estudo são identificar o valor prognóstico da presença e caracterização de CTCs no sangue periférico em pacientes submetidos à ressecção radical para NSCLC.

Pacientes e Métodos

56 pacientes submetidos a cirurgia radical para NSCLC não previamente tratados foram incluídos neste estudo prospectivo. As amostras de sangue periférico para análise CTC foram obtidos antes e um mês após a cirurgia. Além disso CTCs foram fenotipicamente caracterizadas por receptor do factor de crescimento epidérmico expressão (EGFR).

Resultados

51,8% dos pacientes avaliados foram positivos com a presença de CTCs no início do estudo. Uma diminuição da taxa de detecção de CTC foi observado nesses pacientes de um mês após a cirurgia (32,1%) (p = 0,035). O número médio de CTCs foi 3,16 por cada 10 ml (intervalo 0-84) no pré-operatório e 0,66 (intervalo 0-3) na determinação pós-operatório. expressão do EGFR foi encontrado em 89,7% dos pacientes na linha de base e em 38,9% dos pacientes de um mês após a cirurgia. A presença de CTCs após a cirurgia foi significativamente associada com recidiva precoce (p = 0,018) e uma menor sobrevida livre de doença (DFS) (p = 0,008). Na análise multivariada CTC presença após a cirurgia (HR = CI 5.750, 95%: 1,50-21,946, p = 0,010) e o estado N (HR = 0,296, IC 95%: ,091-,961, p = 0,043) foram fatores prognósticos independentes para DFS .

Conclusão

CTCs podem ser detectados e caracterizados em pacientes submetidos à ressecção radical para câncer de pulmão de células não pequenas. A sua presença pode ser usado para identificar pacientes com maior risco de recidiva precoce

Citation:. Bayarri-Lara C, Ortega FG, Cueto Ladrón de Guevara A, Puche JL, Ruiz Zafra J, de Miguel Pérez-D, et ai. (2016) circulantes Células Tumorais Identificar recorrência precoce em pacientes com não-pequenas células do pulmão com câncer submetidos Radical ressecção. PLoS ONE 11 (2): e0148659. doi: 10.1371 /journal.pone.0148659

editor: Jeffrey Chalmers, The Ohio State University, Estados Unidos

Recebido: 28 de outubro de 2015; Aceito: 21 de janeiro de 2016; Publicação: 25 de fevereiro de 2016

Direitos de autor: © 2016 Bayarri-Lara et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Data Availability:. Todos relevante os dados estão dentro do papel

Financiamento:. Este trabalho foi financiado pela Fundação de Investigación Basica Alenjando Otero (www.Fibao.es) (MJS). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análises, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declaram que não há interesses concorrentes existem

Introdução

o cancro do pulmão representa a principal causa de câncer de morte relacionada tanto para homens e mulheres, e até mesmo em estágios iniciais resultados continuam pobres [1]. Apesar do tratamento cirúrgico ideal mais de 20% dos pacientes designados como estágios iniciais por critérios convencionais deverá repetir-se e acabam por morrer de cancro do pulmão de não pequenas células recorrente (NSCLC) [2,3]. Este grupo de pacientes com pior do que o prognóstico esperado torna necessário melhorar a estratificação de risco com factores de prognóstico mais sensíveis. Estes novos factores de prognóstico deve ser o resultado de uma melhor compreensão do processo metastático, intimamente relacionada com a detecção de CTC.

A este respeito evidência crescente sugere que a recidiva precoce em doentes com NSCLC ressecados podem surgir a partir de células tumorais em circulação ( CTC) que derramado a partir do tumor primário para o sistema vascular, desde o início do processo maligno. A detecção destes CTC pode identificar pacientes com um elevado risco de recorrência e poderia ser uma indicação mais específica para o tratamento adjuvante nestes doentes [4].

valor prognóstico da CTC enumeração tem sido demonstrado em vários tipos de tumores epiteliais e uma pior sobrevivência tem sido descrita em pacientes com um número mais elevado dos CTC em mama, da próstata e o cancro colo-rectal [5-8]. No cancro do pulmão mais estudos clínicos têm-se centrado na detecção CTC em pacientes com cancro metastático como um factor de prognóstico e como um biomarcador da resposta ao tratamento [9]. Isolamento de CTCs no NSCLC fase inicial é mais desafiador e apenas alguns artigos podem ser encontrados sugerindo que os números CTCs podem ajudar a predizer o prognóstico [10-13].

Os resultados recentes sobre CTCs sugerem que a simples enumeração em um determinado momento pode não ser suficiente [14,15]. Provou-se que CTC são realmente uma população heterogénea e sabe-se que as características genéticas e fenotípicas de células tumorais são conhecidos para alterar ao longo do tempo em doentes tratados. Portanto, não só a enumeração mas também caracterização CTC deve ser realizada em diferentes momentos ao longo do seguimento. CTC caracterização pode contribuir para a identificação diferente subpopulação de CTCs com diferentes implicações possíveis no prognóstico do paciente [14]. Além disso CTC caracterização pode fornecer informação sobre características genotípicas e fenotípicas de um tumor, sem a necessidade de uma biópsia invasiva, por exemplo, a detecção de mutações do receptor do factor de crescimento epidérmico (EGFR), em doentes com NSCLC [15]. No entanto, a existência de possíveis discordância entre genótipos obtidos por biópsia do tumor e o determinado no CTC tem de ser tida em conta. Foi descrito num estudo recente que relaciona estas discordâncias com diferenças tecnológicas, bem como amostragem populações de células tumorais diferentes [16].

epitelial do receptor do factor de crescimento (EGFR) tem sido identificada em vários tumores humanos, incluindo os cancros de mama, ovário, orofaringe e esôfago, e previu pobres resultados dos pacientes [17]. As mutações que levam a sobre-expressão de EGFR ou a hiperactividade têm sido associados a um número de cancros, incluindo o cancro do pulmão. Estas mutações somáticas que envolvem EGFR vantagem para a sua activação constante, o que produz a divisão celular descontrolada [18].

Por isso, estamos interessados ​​em explorar a presença de CTCs e para determinar a expressão de EGFR em CTCs em pacientes com NSCLC. detecção e caracterização CTC pode se tornar uma ferramenta valiosa para determinar o prognóstico e servir como uma biópsia do tumor em tempo real para o tratamento do cancro individualizado

Neste contexto, realizamos este estudo com os seguintes objetivos:. (i) determinar se CTCs são detectáveis ​​em pacientes submetidos à ressecção radical para NSCLC, (ii) caracterizar fenotipicamente estes CTCs e (iii) avaliar o significado prognóstico da detecção de CTC nestes doentes em termos de recorrência e sobrevida livre de doença.

pacientes e Métodos

desenho do estudo e pacientes

Perante este cenário foi realizado um estudo de coorte longitudinal prospectivo de 56 pacientes com NSCLC submetidos a ressecção curativa no Departamento de Cirurgia Torácica, Virgen de las Hospital Universitário Nieves em Granada (Espanha), entre novembro de 2012 e janeiro de 2014. amostras de sangue periférico foram coletadas antes da operação (2-16 horas antes) e um mês após a cirurgia e foram enviados para Genyo Centre (Centro de Genômica e Oncológica Research localizada em Granada) para análise CTC. amostras de sangue de controle foram retirados de 16 voluntários saudáveis, sem história de doença maligna. O consentimento informado foi obtido de cada paciente, eo estudo foi aprovado pelo comitê de ética local. Mediano de acompanhamento para todos os pacientes foi de 16 meses (variação 3-23). Os resultados clínicos foram avaliados em termos de recorrência e sobrevida livre de doença. Os dados foram coletados por idade, sexo, tabagismo, tipo histológico, SUV (valor de absorção padronizado), valor da emissão de positrões tomografia computadorizada por tomografia (PET CT), a abordagem cirúrgica, extensão da ressecção, estágio patológico, tratamento adjuvante, sobrevivência e resposta.

Todos os 56 pacientes com NSCLC foram submetidos à ressecção pulmonar anatômica e da linfa dissecção nó sistemática com intenção curativa. A ressecção completa foi definida como demonstrando margens cirúrgicas livres de câncer, tanto grosseira e histologicamente. Nenhum destes pacientes recebeu quimioterapia de indução ou radioterapia. Outro critério de exclusão foi ou concomitante ou malignidade prévia nos últimos 5 anos e morte dentro de 30 dias de operação. Além disso, a avaliação pré-operatória incluiu anamnese, exame físico e estudos laboratoriais e radiográficos, incluindo PET CT.

As características clinicopatológicas desses 56 pacientes estão resumidos na Tabela 1.

estágio patológico foi determinado de acordo com a 7ª edição do sistema internacional tumor-nódulo-metástase (TNM). subtipos histológicos de câncer de pulmão foram atribuídos de acordo com a classificação da Organização Mundial de Saúde.

A indicação do tratamento adjuvante foi estabelecido pelo Comitê local do tumor de acordo com diretrizes da ASCO. Em caso de tratamento adjuvante iniciou-se após a segunda extracção de sangue.

O calendário de acompanhamento foi o habitualmente realizado para NSCLC ressecado e consistiu de uma primeira visita clínica um mês após a cirurgia, em seguida, uma a cada 3 meses no primeiro ano após a ressecção e, finalmente, uma a cada 6 meses a partir do segundo para o quinto ano. Pelo menos tomografia computadorizada um tórax foi realizada a cada 6 meses e um estudo de PET-CT por ano

A recidiva local foi definida como aquela que ocorre nos seguintes sites:. Pulmão ipsilateral, coto brônquico ou de linha de grampos e linfáticos regionais nó (subcarinal, peri-esofageanas, mediastino ipsilateral ou contralateral, supraclavicular, ou gânglios linfáticos hiliar).

recorrência distante incluídos metástases no pulmão contralateral, fígado, glândulas supra-renais, cérebro, ossos ou outros locais. Padrões de recorrência foram determinados por avaliação clínica, exame radiográfico e os dados suplementares de broncoscopia, biópsia e PET.

Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética do Hospital. consentimento informado por escrito foi obtido de todos os pacientes com câncer e voluntários saudáveis ​​neste estudo.

Análise Estatística

Os pacientes foram considerados CTC positivo se pelo menos um CTC foi isolado. CTCs foram avaliados tanto como variável contínua e, como variável binária (presença /ausência). As relações entre CTCs e outras variáveis ​​foram determinadas por um teste t e ANOVA (comparação de médias) quando CTC foram contínua e teste exato de Fisher quando CTC foram considerados como uma variável binária. Para comparar CTCs medidos em dois momentos diferentes foi utilizado o teste de sinais com posto Wilcoxon. A influência da CTC na sobrevida livre de doença foi medida por métodos univariados (Kaplan-Meier) e procedimentos multivariada (regressão de Cox). Na selecção de variáveis ​​a serem incluídas na regressão de Cox multivariada, foi aplicado o critério de mais do que uma mudança de 10% na estimativa coeficiente CTC [19].

enumeração e Caracterização dos CTC por CK e expressão do EGFR

Um total de 20 ml de sangue foram coletadas de cada doador em dois tubos de coleta de sangue celular Salvar conservantes (Veridex, LLC, Johnson Johnson Company) de detecção de CTC foi realizada pela seleção imunomagn�ica positivo. As amostras foram processadas de acordo com o protocolo já anteriormente estabelecido [8] (S1 texto)

Resumidamente, as amostras foram processadas por centrifugação em gradiente de densidade (Histopaque 1119;. Da Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA ). Para o enriquecimento CTC, foi utilizado o carcinoma de células kit enriquecimento e detecção com tecnologia MACS (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Alemanha). CTC foram identificados por métodos imunocitoquímicos e visualizados sob um microscópio de luz directa para efectuar a avaliação citomorfológico e imunofenotípicas combinado. células CK-positivos e EGFR-positivo foram identificadas por imuno-histoquimica (IHC) e os sinais foram detectados por detecção cromogénica e fluorescente, respectivamente [20] de células tumorais epiteliais foram identificados, enumeradas com base na sua coloração vermelha para células CK-positivo e coloração com azul de células EGFR-positivo (Fig 1).

linha A) O tumor de células T1975. foi utilizado como controlo positivo para a expressão de EGFR B) Um controlo em que as lâminas são incubadas com diluente de anticorpo, sem o anticorpo primário foi incluído. (C, D) A expressão de diferentes marcadores em pacientes com cancro do pulmão de não-pequenas através da combinação de CK manchado + células (vermelho) com EGFR (azul). específicos do EGFR imunofluorescência (IF) de células tumorais circulantes (CTCs) foi determinada com Alexa 355.

A coloração específica podem ser facilmente distinguidas devido à distribuição intracelular diferencial das moléculas analisadas ea combinação de direta e indireta IF para avaliar CK + /EGFR +.

resultados

CTCs detecção e correlação com as características clinicopatológicas

CTCs foram detectados no sangue periférico de 51,8% dos pacientes no início do estudo (CTC1) (29 de 56 pacientes) Curiosamente, observou-se que a taxa de detecção de CTCs nestes doentes foi significativamente menor de um mês após a cirurgia (CTC2) (18 pacientes, 32,1%) p = 0,034, produziu a partir do postos sinalizados de Wilcoxon teste. O número médio de CTCs foi 3,16 por 10 ml (mediana 1, variando 0-84) no pré-operatório e diminuiu para 0,66 (mediana 0; gama 0-3) após a operação (S1 Table) (p = 0,051). mudanças dinâmicas no número de CTCs Também foram determinadas observando que a maioria dos pacientes com CTCs no início do estudo apresentaram uma diminuição na contagem de CTCs (25 em 29) após a cirurgia. Por outro lado apenas 11 pacientes tiveram aumento.

A correlação entre a presença de CTCs e as características dos pacientes estão resumidos na Tabela 2.

Na análise univariada apenas o tipo de ressecção mostrou uma correlação significativa com a presença CTC após a cirurgia (P = 0,034). 4/4 pacientes foram submetidos a ressecção pneumonectomia mudou de CTC1 + para CTC2-, enquanto 7 de 25 que tinha outro tipo de ressecção alterado para CTC2-. contar CTC no segundo detecção foi correlacionada com max SUV de PET scan (β = 0,05 95%; IC95% 0,001-0,106, p = 0,046). Na análise multivariada não houve correlação significativa entre a presença de CTC ou o número e qualquer característica clinicopatológica analisados.

Caracterização de EGFR em CTCs

As CTCs também foram analisadas para o receptor do factor de crescimento epidérmico (EGFR) expressão, expressão do EGFR foi encontrada em 26 pacientes na linha de base e em 7 pacientes um mês depois. Para CTC casos positivos taxa de expressão do EGFR foi de 89,7% antes e 39% depois da cirurgia. Não houve correlação significativa entre o estado CTCs EGFR + e as características clínico-patológicas.

O significado prognóstico da detecção de CTCs

Durante o seguimento 16 pacientes mostraram evidências de recorrência do câncer (28,6%). O tempo médio para a recorrência foi de 8 meses, variando entre 2 e 17 meses após a cirurgia. Padrão de recorrência foi: distante 7, loco-regional 4 e ambos 5. Para toda coorte taxa de DFS de 1 ano foi de 76,6%. Associação entre a recorrência e fatores prognósticos mais importantes foram analisados ​​(Tabela 3). Só a presença CTC após a cirurgia foi significativamente associada com recidiva precoce, 50% dos pacientes com CTCs detectáveis ​​após a cirurgia (CTC2 +) desenvolveu uma recorrência em comparação com 18,4% para os pacientes negativos CTC2 (p = 0,018). Quanto à extensão nodal, os pacientes positivos N1-N2 apresentaram um percentual maior de recorrência do que patientes N0 althought a diferença não foi significativa (p = 0,161).

Considerando apenas os pacientes positivos CTCs, expressão do EGFR no CTCs explorou ‘t mostrar uma correlação significativa com recorrência do tumor (Tabela 4) no segundo detecção de 28,6% do EGFR + CTC2 pacientes + apresentou uma recorrência em comparação com 63,4% de EGFR-CTC2 + pacientes, mas a diferença não foi siginificant (p = 0,335) (Tabela 4 )

EGFR1 = expressão do EGFR no CTCs antes da cirurgia. EGFR2 expressão = EGFR em CTCs após a cirurgia.

Além disso CTC presença após a cirurgia (CTC2) foi associado com um DFS mais curto, com um ano de taxa de DFS de 51% em comparação com 87,7% para o grupo negativo CTC após a cirurgia (log rank p = 0,008) (Figura 2). Embora o número médio de CTC após a cirurgia foi maior para pacientes com recidiva, a diferença não foi significativa (1 célula por 10 ml vs 0,5 por 10 ml, p = 0,13).

curvas de Kaplan-Meier de livre de doença sobrevivência em função do estado CTC antes (a) e um mês após a cirurgia (B). CTC1: presença CTC antes da cirurgia. CTC2:.. Presença CTC após a cirurgia

A detecção de CTCs após a cirurgia foi significativamente correlacionada com um DFS mais curtos em pacientes submetidos à ressecção radical para Non-Small-Cell Lung Cancer

prognóstico fatores para a sobrevida livre de doença foram identificados pela análise de riscos proporcionais regressão uni Cox (Tabela 5). Fatores associados ao DFS que tinham ap ≤ 0,1 foram CTC presença após a cirurgia (CTC2) (p = 0,014) e o estado N (p = 0,07)

A Cox análise de regressão de riscos proporcionais multivariada stepwise forward, revelou que CTC presença após a cirurgia (HR, 5,75; IC 95% 1,50-21,95; p = 0,01) e status de N (HR, 3,38; 95% CI 1,04-10,9; p = 0,043) foram fator prognóstico independente para DFS (Tabela 6) .

Discussão

O valor clínico de detecção de CTCs no sangue patients’ está se tornando cada vez mais importante como pesquisa com biomarcadores de câncer [14]. O principal objetivo da detecção de CTC em estágios iniciais NSCLC é identificar pacientes com alto risco de recorrência após a cirurgia, a fim de adoptar a melhor estratégia para o tratamento e acompanhamento.

Neste estudo prospectivo, descobrimos que a presença CTC após a cirurgia está associada a recidiva precoce e uma sobrevivência livre de doença mais curto em pacientes com tratamento cirúrgico das NSCLC

em nossa análise, que envolveu 56 pacientes que se submeteram a cirurgia radical para NSCLC não tratados previamente, a taxa de detecção foi significativamente inferior mês após a cirurgia (32,14% vs. 51,79% antes da cirurgia, p = 0,034).

Existem poucos estudos que avaliam o significado prognóstico da detecção de CTCs no CPNPC ressecado e ainda menos que executar uma segunda detecção após cirurgia [10-13]. Em um estudo realizado por Hofman et al. [10], incluindo estágios I-IV pacientes operados, a taxa de detecção é semelhante ao nosso (49%). Eles executam apenas um CTCs pré-cirúrgicos de detecção empregando uma técnica baseada em isolamento por tamanho (técnica ISET), e eles descobriram que uma contagem CTC de 50 células ou mais se correlaciona com uma sobrevida livre total e doença pior. Em outro estudo em pequena escala por Rolle et al. [11] 30 pacientes com NSCLC operável foram examinadas utilizando a técnica MAINTRAC, com base no ensaio de citometria. CTCs foram determinados 2 semanas e 5 meses após a cirurgia. A contagem de CTCs foi comparado com o prognóstico e pacientes com a aumentar continuamente em mediana CTC-contagem de pós-operatório foram mostrados para estar em maior risco de recaída.

Apenas mais dois estudos prospectivos [12,13] usando o sistema CellSearch para detectar CTCs, têm relatado até agora o impacto clínico da detecção de CTCs no sangue periférico antes e após a cirurgia. No entanto, ambos não conseguiram demonstrar qualquer diferença no tanto de sobrevivência ou de reincidência. Ambos analisaram presença CTCs no sangue imediatamente após a cirurgia. grupo Sawabata’s [13] observaram que desapareceu CTC dez dias após operações. Na verdade, é bem conhecido que durante a cirurgia de um grande número de CTC pode ser derramado na corrente sanguínea mas não foi demonstrado que estas células estão envolvidas no desenvolvimento de metástases quaisquer futuras. Um certo número deles são apoptótica e muitos deles será eliminado pelo sistema imune [14]. É por isso que pensamos que para uma avaliação real da presença CTC após a cirurgia o segundo detecção deve ser realizada pelo menos 3 semanas após a operação

De fato, encontramos uma diminuição significativa na taxa de detecção de CTCs de um mês após a cirurgia.: CTC não foram detectados no sangue periférico em quase 70% dos pacientes no segundo detecção, e 25 dos 29 pacientes com presença CTC no início do estudo mostrou uma diminuição na contagem do CTC. Este achado pode ser uma das razões que explica por que a cirurgia continua a ser a melhor opção de tratamento em estágios iniciais.

A presença de CTCs de um mês após a ressecção radical pode indicar a presença de uma outra fonte de CTCs não removido por cirurgia, tais como aqueles indetectável por métodos convencionais.

de acordo com o que, em nossos pacientes do estudo com CTCs detectáveis ​​no sangue periférico de um mês após a cirurgia apresentou um pior prognóstico. A presença de CTCs após a cirurgia (CTC2) foi significativamente associada com recorrência e DFS, para que os pacientes positivos CTC2 apresentaram maior risco de recorrência (p = 0,018) e um DFS mais curto. A taxa de DFS um ano foi de 51% em pacientes positivos CTC2 em comparação com 87% para os pacientes negativos CTC2 (log rank p = 0,008). nível CTC foi maior em pacientes com recidiva, mas a diferença não foi siginificant .A mera presença de (número de 1 célula por 10 ml para os pacientes com recorrência vs 0,5 por cada 10 ml para os pacientes que não desenvolveram uma recorrência, p = 0,13 significa) pelo menos um CTCs após a cirurgia (CTC2 +) foi significativamente associada com o prognóstico do paciente em nossas análises. Nossos resultados refletem que a presença de pós-operatório CTCs (HR, 5,75; IC 95% 1,50-21,95; p = 0,01) e de status nodal (HR, 3,38; 95% CI 1,04-10,9; p = 0,043) são bons independente de prognóstico fatores para DFS na análise multivariada.

CTCs contam em amostras pós-cirúrgicas mostrou uma associação com o máximo SUV de PET scan (p = 0,046). Esta é a primeira vez que esta associação foi analisada. valor máximo Suv de PET scan tem sido associada a um pior prognóstico e que poderia estar relacionado com um maior risco de presença CTCs no pós-operatório.

Além de detecção, caracterização CTCs podem ser importantes para avaliar o prognóstico eo tipo de tratamento adjuvante ou para determinar a melhor opção de tratamento para a doença recorrente. expressão do EGFR foi detectada em 89,7% e 38,9% dos CTC isoladas a partir de amostras de sangue colhidas antes e após a cirurgia, respectivamente. No que diz respeito pelo significado prognóstico da expressão do EGFR verificou-se que 28,6% dos pacientes com EGFR + + CTC2 experimentaram uma recorrência em comparação com 63,6% para o EGFR-CTC2 +, mas a diferença não era significativa. Em nossos CTCs estudo de detecção após a cirurgia foi associada com pior prognóstico, mas EGFR caracterização não era. Provavelmente um estudo em grande escala pode determinar a influência expressão de EGFR nestes pacientes prognóstico.

Por outro lado, é de salientar que as metodologias atuais nos permitem detectar apenas a subpopulação de CTCs positivo para marcadores epiteliais, mas não subpopulações positivos para a expressão de marcadores mesenquimais e com um mesenquimais semi ou fenótipo mesenquimal. Estes fenótipos têm sido correlacionados com mau prognóstico em diferentes tipos de tumores [21] e, portanto, eles devem ser analisados ​​em estudos futuros, a fim de alcançar uma melhor compreensão do papel prognóstico de CTCs no câncer de pulmão.

Para nossa conhecimento, este estudo é o primeiro dado grande conjunto para validar CTCs como um marcador de prognóstico executar a detecção pós-cirúrgica e para avaliar não só o risco de recidiva precoce, mas também para determinar CTCs como marcadores preditivos através da sua caracterização.

Em conclusão , os nossos resultados mostram que o CTC pode ser detectada no sangue dos pacientes submetidos a cirurgia radical para NSCLC. detecção de CTC após a cirurgia poderia ser um importante marcador prognóstico contribuindo para estratificação de risco, identificando pacientes com maior risco de recidiva precoce. Mais estudos são necessários para validar esses resultados.

Informações de Apoio

Tabela S1. taxa de recuperação CTCs em pacientes com câncer de pulmão

doi:. 10.1371 /journal.pone.0148659.s001

(DOCX)

S1 texto. . Detecção e caracterização de CTCs isolado por seleção positiva imunomagn�ica

doi: 10.1371 /journal.pone.0148659.s002

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Reconhecimentos

Agradecemos aos pacientes para a sua participação no estudo.